Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tarkoitus

Tutkiakseen ennustavan roolia ja yhdistys ydinvoiman surviviinin ja DNA double-säikeen katkoksia korjaus geenejä ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC): DNA-riippuvaista proteiinikinaasi katalyyttisen alayksikön (DNA-PKcs), Ku heterodimeerinen sääntelyyn monimutkainen 70-KD alayksikkö (Ku70) ja ataksia-telangiektasiassa mutatoitunut (ATM).

Methods

proteiinin ilmentymistä ydin- surviviinin, DNA-PKcs, Ku70 ja ATM tutkittiin käyttäen immunohistokemia kasvainten 256 potilasta, joilla on kirurgisesti resekoitu NSCLC. Lisäksi olemme analysoineet korrelaation ilmaisun ydinvoiman surviviinin, DNA- PKcs, Ku70 ja ATM. Yhden ja usean analyysit tehtiin määrittämiseksi ennustetekijöitä että inuenced yleistä eloonjäämistä ja taudista vapaan eloonjäämisen NSCLC.

Tulokset

Ilmaisu ydin- surviviinin, DNA- PKcs, Ku70 ja ATM oli merkittävästi korkeampi kasvaimen kudoksissa kuin normaaleissa kudoksissa. Vuoteen dichotomizing yksilöt ilmaisevan matala tai korkea ydinvoiman surviviinin, ydin- surviviini korreloi merkitsevästi patologisen vaiheessa (P = 0,009) ja imusolmukkeesta tila (P = 0,004). Ydin- surviviini taso oli itsenäinen ennustetekijä sekä eloonjäämiseen ja taudista vapaan eloonjäämisen yhden ja usean analyysejä. Potilaat, joilla on alhainen Ku70 ja DNA- PKcs ilme oli suurempi hyöty sädehoidon kuin potilailla, joilla on korkea ilmentymisen Ku70 (P = 0,012) ja DNA-PKcs (P = 0,02). Nuclear surviviinin ilmentyminen korreloi positiivisesti DNA- PKcs (P 0,001) ja Ku70 lauseke (P 0,001).

Johtopäätökset

Nuclear surviviinista voi olla ennustetekijä yleisen eloonjäämisen potilailla, joilla resektoitiin vaiheen I-IIIA NSCLC. DNA-PKcs ja Ku70 voisi ennustaa, sädehoidon potilailla, joilla on NSCLC. Nuclear surviviini voi myös stimuloi DNA double-säikeen katkoksia korjaus sen vuorovaikutusta DNA-PKcs ja Ku70.

Citation: Hu S, Qu Y, Xu X, Xu Q, Geng J, Xu J (2013) Nuclear Surviviinispesifisiä ja sen suhteesta DNA Damage Repair Geenit ei-pienisoluinen keuhkosyöpä selvitettiin Tissue Array. PLoS ONE 8 (9): e74161. doi: 10,1371 /journal.pone.0074161

Editor: John D. Minna, Univesity Texas Southwestern Medical Center at Dallas, Yhdysvallat

vastaanotettu: 4. kesäkuuta, 2013 Hyväksytty: 29 heinäkuu 2013; Julkaistu: 16 syyskuu 2013

Copyright: © 2013 Hu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Songliu Hu tukivat sairaalan tutkimus käynnistyksen rahasto kolmannen Affiliated sairaala Harbin Medical University (JJ2010-08), ja Xiangying Xu tukivat Heilongjiangin maakunnan tieteen ja teknologian hankkeita (WB12C101). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä exsits.

Johdanto

ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) on johtava syy syövän liittyvät kuolemat ympäri maailmaa, ja yhä esiintyvyys ja huono ennuste. Koska kliinis-patologisten ominaisuuksien ei voi tarkasti ennustaa potilaiden hoitotuloksiin, ymmärtäminen biologiaa NSCLC molekyylitasolla auttaa kehittämään uusia ja tehokkaita hoitomuotoja ja ennustaminen ennuste.

Evasion apoptoottisten solujen kuolema on kriittinen kasvaimen kasvua ja on raportoitu olevan tuntomerkki syöpäsoluja [1], jotka kehittävät resistenssin syöpähoitoihin. Näin ollen, apoptoottisten reittien voi edustaa lupaavaa strategia torjua kestävyys ja herkistää syöpäsolut syöpälääkkeiden säännöt, mukaan lukien sädehoito [2]. Näistä anti-apoptoottisia tekijöitä, surviviini, 16,5 KD-proteiinin 142 aminohapon tähteet, jotka on pienin jäsen apoptoosi-inhibiittori-proteiinin (IAP) -perheen, ansaitsee paljon huomiota, koska sen yleinen yli-ilmentymisestä ihmisen kasvaimissa, ja sen näkyvä rooli säätelyssä erilaisten solukkoverkkojen, mukaan lukien ne, jotka ohjaavat kasvainsoluproliferaation ja sopeutuminen epäsuotuisan ympäristön [3]. Surviviini olemassa selvä subsellulaarisen allasta, joista tuma, sytoplasmassa ja mitokondrioiden [4] – [6]. Solunsisäisen jakelu surviviinispesifisten näyttelee selvä rooli kyky tämän molekyylin säädellä solujen jakautumista ja selviytymistä. Lokalisoinnin surviviinin sytoplasmassa pidetään soluja suojaava johtuen anti-apoptoottisen toiminnan tämän molekyylin [7]. Ydin- lokalisointi surviviini liittyy solunjakautumista, koska surviviini on alayksikköä kromosomaalisten matkustaja kompleksi (CPC) [8].

Nisäkässoluissa DNA double-säikeen katkoksia (DSB: t) ovat pääosin korjattu kautta homologinen rekombinaatio (HR) tai homologisella pää liittymällä (NHEJ) [9]. Keskeinen osa NHEJ-reitti on DNA-riippuvaisen proteiinikinaasin (DNA-PK), joka koostuu 465-KD: n katalyyttisen alayksikön DNA-riippuvaisen proteiinikinaasin (DNA-PKcs), ja heterodimeerisen sääntely monimutkainen, Ku, joka sisältää 70-KD alayksikkö (Ku70) ja 86-KD alayksikkö (Ku80) [10]. Nykyiset mallit viittaavat siihen, että heterodimeerinen Ku proteiineja nopeasti sitoutuvat kaksijuosteiseen DNA päät ja rekrytoida DNA proteiinikinaasi (DNA-PK), tuottaa DNA-PK holoentsyymikompleksi. ATM-proteiini on tunnistettu pääasiallisena aktivaattori ja Master valvoja soluvastetta DSB: ihin. ATM kinaasi näyttää olevan ensisijainen aktivaattori ja Master valvoja soluvastetta DNA DSB: ihin ja fosforyloi avaintoimijat DNA vaurioita toiminnan verkko mukaan lukien solusyklin pysähtymisen apoptoosin ja DNA korjaukseen [11].

Äskettäin osoitettiin, että surviviini pystyy herättämään molemmat tukahduttaminen apoptoosin ja stimulaation DNA: n korjaukseen. Taustalla olevien mekanismien näyttävät olevan monitahoinen ja liittyy kaspaasiriippuvaisen ja kaspaasi-riippumattomia reittejä. Joitakin raportteja vahvisti korkeampi esiintyvyys DNA-vaurioita colorectal- ja ei-pienisoluinen keuhkosyöpä solulinjat hoidon jälkeen surviviini siRNA tai transkription repressori YM155, joka perustuu havaitsemiseen fosfo-histoni γ-H2AX havaitseminen markkerina säteily- indusoi DSB [12], [13]. Samanaikainen immunosaostus analyysit paljastivat yhteisvaikutuksesta surviviinin, Ku70 ja DNA- PKcs ydin- pesäkkeitä [14]. Nämä tulokset viittaavat siihen, että tumakertymään Surviviinin liittyy DNA-DSB korjaus.

Tämän tutkimuksen tavoitteena oli tutkia mahdollisia korrelaatio ja ennusteen arvioinnissa ydinvoiman surviviinin, DNA- PKcs, Ku70 ja ATM käyttäen immunohistokemia . Tietääksemme tämä on ensimmäinen tutkimus.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat

Tutkimus hyväksynyt eettinen Review komitean Harbin Medical University, Harbin, Kiina. Kaikki potilaat edellyttäen kirjallinen lupa osallistua tutkimukseen. Tutkimus oli retrospektiivinen. Kirurginen resektio näytteet saatiin 256 keuhkosyöpäpotilaita vaiheessa IA IIIB välillä joulukuussa 2004 ja joulukuussa 2006. Ei potilasta sai ennen leikkausta kemoterapiaa ja sädehoitoa. Oli 176 urosta ja 80 naarasta, joiden keski-ikä oli 57,7 vuotta. Kasvaimet olivat lavastettu mukaan tarkistettu versio keuhkosyövän TNM lavastus julkaistiin vuonna 1997 [15]. Histopatologista diagnoosia varten suoritettiin Maailman terveysjärjestön (WHO) kriteerit. Kaikkiaan 20 (8%) potilaalla oli vaihe IA sairaus, 94 (35%) oli IB, 8 (3%) oli IIA, 50 (20%) oli IIB, 69 (27%) oli IIIA, ja 15 (6 %) oli IIIB. Histologinen luokittelu mukana 145 adenokarsinoomat, 101 okasolukarsinoomia, 5 adenosquamous karsinoomat ja 5 muunlaisia. Kaikkiaan 234 potilaalle tehtiin lobectomy, 18 potilaalle tehtiin pneumonectomy ja 4 potilaalle tehtiin segmentectomy. Leikkauksen jälkeen, 217 potilasta sai kolme-neljä sykliä adjuvanttia sisplatiini-kemoterapian. Kaikkiaan 92 potilasta sai postoperatiivinen sädehoitoa annettiin korkean jännitteen tekniikka on yhteensä annoksella 50 Gy, 2 Gy per osa annetaan ensin 5 päivänä viikossa.

rakentaminen kudossiruina

keuhkosyöpä kudoksen mikrosiru (TMA) rakennettiin seuraavasti. Lyhyesti, kudosta ryhmittelyn väline luotiin reikiä vastaanottavainen parafiiniblokkiin ja hankkia kudoksen ytimet luovuttajalta kudosnäytekappaleessa käyttäen ohutseinäisiä neulaa, jonka sisähalkaisija on 2 mm, joka pidettiin X-Y tarkkuus opas. Ydin näytteet noudetaan valitun alueen luovuttajan ja suulakepuristetaan suoraan vastaanottavainen lohkon määritellyissä array koordinaatit. Kiinteä teräslanka, joka tiiviisti sopivat putkessa, käytettiin siirtämään kudoksen ytimet osaksi vastaanottavainen lohko. Rakentamisen jälkeen array lohkon kaikki kudospaloista leikattiin mikrotomilla 4 um, ja on kiinnitetty luistin. Lohkot 256 potilasta puettu kuin kolmena täplät 2 mm diat.

immunohistokemia

kudosleikkeet parafiini ksyleenissä ja nesteytyksestä on porrastettu alkoholikonsentraatioiden käyttäen standardimenetelmiä. Leikkeet jälkeen upotettiin sitraattipuskurissa (pH 6,0), ja autoklavoitiin 121 ° C: ssa 5 min hakea antigeenisyyden. Sen jälkeen kun oli pesty fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS, 0,1 M, pH-7.4,3 kertaa 5 min), endogeeninen peroksidaasi estettiin inkuboimalla 3% vetyperoksidia 15 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Sitten näytteitä inkuboitiin surviviiniperäisen vasta-aineella (71G4B7, Cell Signaling Technology, Beverly, MA), joka oli laimennettu 1:400, DNA-PKcs-vasta-aineen (MS-423-P0, Neomarkers, Fremont, CA), joka on Ku70-vasta-ainetta ( EPR4027, Epitomics, CA), ja ATM-vasta-ainetta (Y170, Epitomics, CA), joka oli laimennettu 1:200 PBS, joka sisälsi 0,5% BSA: ta yli yön 4 ° C: ssa kosteassa kammiossa ja pestiin puskurilla poistamaan sitoutumaton vasta-aineita. Leikkeitä inkuboitiin biotinyloidun sekundaarisen vasta-aineen ja sen jälkeen peroksidaasiin konjugoidulla streptavidiinilla 30 min ajan. 3-3’diaminobenzidine tetrahydrochloride (Dako, Saksa) lisättiin visualisoida reaktion. Huuhtelun jälkeen deionisoituun veteen ja counterstaining kaupallisten hematoksyliinillä, diat olivat kuivattu ja kiinnitetty. Asianmukaiset kudosnäytteiden positiivisena kontrollina primäärienergialähteittäin vasta-ainetta samanaikaisesti värjättiin käytettäväksi positiivisina kontrolleina. Hiiren IgG1 tai kaniinin IgG: tä (Cell Signaling Technology, Beverly, MA) käytettiin negatiivisina kontrolleina samaan laimennoksia kuin vastaavan ensisijaisen vasta-aineita.

immunohistokemiallinen värjäys Arviointi

arviointi värjäytymisen Surviviinia DNA-PKcs, Ku70 ja ATM ilmentyminen suoritettiin kirkkaan kentän valomikroskoopilla itsenäisesti kaksi kokenutta patologia itsenäisesti. Nuclear surviviini, DNA-PKcs, Ku70 ja ATM-proteiinin ilmentymisen tasot luokiteltiin semikvantitatiivisesti yhdistämällä suhteessa ja intensiteetti positiivisesti värjättyä kasvainsoluja. Prosenttiosuus positiivisesti värjättyä kasvainsolujen pisteytettiin seuraavasti: 0 (ei positiivisia kasvainsoluja), 1 (1-25% positiivisia kasvainsoluja), 2 (26-50% positiivisia kasvainsoluja), 3 (51-75% positiivinen kasvain solut), ja 4 (76-100% positiivisia kasvainsoluja). Värjäytymisvoimakkuus pisteytettiin seuraavasti: 0 (ei värjäys); 1 (heikko värjäytyminen); 2 (kohtalainen värjäytyminen) ja 3 (voimakas värjäytyminen). Värjäytymisintensiteettiä pisteet kerrottuna prosenttiosuus positiivista värjäytymistä käytettiin määrittelemään ekspressiotasoja. Keskimääräinen pisteet kolmesta kudosleikkeiden merkittiin tilastollisia analyysejä. Myöhemmin mediaani kaikkien pisteiden käytettiin rajakohta luokitteluasteikot ilmentymisen 4 proteiineja, mikä keuhkosyöpäpotilaita luokiteltiin kahteen ryhmään: matala ilme ja korkea ilmaisun ryhmiä. Lisäksi tapauksissa ristiriitaisuuksia tarkistettiin samanaikaisesti kahden alkuperäisen patologit ja vanhempi patologi kunnes päästiin.

Tilastollinen analyysi

assosiaatioita IHC parametrien, sekä IHC /kliinisiä-patologinen parametrit analysoitiin käyttämällä Chi-neliö testi, Fisherin eksakti testi ja Pearsonin listalla korrelaatio. Kokonaiselinaika (OS), tautivapaan elinajan (DFS) ja paikallisen uusiutumisen-elinaika (LRS) saatiin mukaan Kaplan-Meier-menetelmällä. Pysyvyys taudin ja esiintyminen pahenemisvaiheiden olivat loppupisteet DFS, esiintyminen paikallisen uusiutumisen oli päätepiste LRS, ja kuolema mistä tahansa syystä pidettiin tapahtuma laskemiseksi OS. Vertailut väliin ennustetekijöiden muuttujan suoritettiin käyttäen Log-rank-testiä. Coxin suhteellisen vaarat mallia käytettiin monimuuttuja analyysit riippumattoman ennustetekijät (ikä, sukupuoli, tupakointi asema, histologia, erilaistuminen laatu, patologisen vaiheessa T vaiheessa N vaiheessa, kemoterapia, sädehoito, surviviinin ilmaisu, DNA- PKcs ilme, Ku70 ilmaisun ja ATM lauseke) vaikuttavat OS, DFS. Kriteeri merkitys valittiin p 0,05, ja kaikki testit olivat kaksisuuntaisia. Selviytyminen analyysi suoritettiin käyttäen tilastollista pakettia SPSS version 13.0.

Tulokset

Nuclear surviviinin immunoreaktiivisuus havaittiin 166 (64,8%) ulos 256 kasvainten tutkittu. Positiivinen immunoreaktiivisuus Surviviinia oli läsnä vain tuumorisoluissa eikä lähialueiden normaalin keuhkojen epiteelisolujen. Kasvainkudoksissa, värjäytyminen DNA-PKcs, Ku70 ja ATM oli pääasiassa ydinvoiman kanssa minuutti värjäytymistä sytoplasmassa. Normaali kudokset osoittivat heikkoa värjäytymistä intensiteetti ATM ja maltillinen värjäytymisen intensiteetti DNA- PKcs ja Ku70. Niiden positiivisten tumien oli merkittävästi suurempi kasvainkudoksessa verrattuna normaaliin kudokseen. DNA-PKcs immunoreaktiivisuus havaittiin 190 (74,2%) ulos 256 kasvaimia ja 56 (51,9%) ulos 108 normaaleissa kudoksissa; Ku70 immunoreaktiivisuus havaittiin 189 (73,8%) ulos 256 kasvaimia ja 48 (44,4%) ulos 108 normaaleista kudoksista, ja ATM immunoreaktiivisuus havaittiin 125 (48,8%) ulos 256 kasvaimia ja 26 (24,1%) ulos 108 normaalit kudokset. Kun kasvaimet luokiteltiin mukaan värjäytymisintensiteettiä pisteet ja positiivista värjäytymistä pisteet, 124 kasvaimia oli heikkoa ilmentymistä ja 132 oli korkea ilmentymä surviviinin, 121 kasvaimia oli heikkoa ilmentymistä ja 135 oli korkea ilmentyminen DNA-PKcs, 107 kasvaimia oli heikkoa ilmentymistä ja 149 oli korkea ilmentymä Ku70 ja 156 kasvaimia oli heikkoa ilmentymistä ja 100 oli korkea ilmentymisen ATM (Fig. 1).

Heikko värjäytyminen ATM (E), DNA-PKcs (F), Ku70 (G ) ja ydinvoiman surviviinista (H) keuhkosyövässä kudoksissa.

Korrelaatio ennustetekijöiden

väliset korrelaatiot potilaat ilmentävät ydinvoiman surviviini, DNA- PKcs, Ku70 ja ATM eri tasoilla ja niiden kliinis-patologinen ominaisuudet esiteltiin taulukossa 1. Nuclear surviviinista korreloi merkitsevästi patologisen vaiheessa ja imusolmuke tila. Nuclear surviviinin ekspressiotasoja potilailla, joilla on vaiheen III kasvaimet olivat merkittävästi korkeammat kuin potilailla, joilla on vaiheen I ja vaiheen II kasvaimet (P = 0,009). Nuclear surviviinin ilmentymistä potilailla, joilla on N2 ja N3 tauti oli suurempi kuin potilailla, joilla on N0 ja N1 sairaus (P = 0,004). Ei ollut tilastollisesti merkittävää eroa DNA- PKcs, Ku70 tai ATM ilmaisun ja ennusteeseen viittaavia muuttujia.

Expression of Nuclear surviviinin ja DNA: n DSB korjaus Geenit Suhde Ennuste

Mediaani seuranta-aika oli 64 kuukautta. Mediaani OS potilaista oli 47 ± 5,8 kuukautta, ja mediaani DFS oli 25 ± 4,5 kuukautta. Univariate selviytyminen analyysi paljasti, että kasvainhistologiaa, erilaistuminen laatu, patologisen vaiheessa T tila, N tila, ydin- surviviinin ilmaisu, DNA- PKcs ilmaisun ja Ku70 ilmaisun merkittävästi vaikuttanut OS ja DFS (taulukko 2). Monimuuttuja-analyysissä suoritettiin tulokset yhden muuttujan analyysin. Tulokset osoittivat, että kasvain eriyttäminen luokalla patologisen vaiheessa ja ydinvoiman surviviinin ilmentyminen olivat riippumattomia ennustetekijöitä (taulukko 3). Laskennallinen suhteellinen riskit kuoleman ja toistuminen oli 1,68 (P = 0,047) ja 1,83 (P = 0,041) potilailla, joilla on korkea surviviinin ilme, 1,67 (P = 0,001) ja 1,59 (P = 0,003) potilailla, joilla on korkea patologisen vaiheessa ja 0,63 (P = 0,015) ja 0,51 (P = 0,002) potilailla, joilla on alhainen eriyttäminen, vastaavasti.

Kaplan-Meier-analyysi osoitti, että potilailla, joilla on ydin- surviviinin korkea ilmentyminen oli huonompi OS (44,8 vs. 55,7 kuukautta; p = 0,001) (Kuva. 2A) ja DFS (35,7 vs. 49,7 kuukautta; p = 0,001) (Kuva. 2B) verrattuna potilaisiin, joilla alhaisempi ydin- surviviinin. Potilaat, joilla on kohtalainen tai voimakas erilaistumista arvosana oli parempi eloonjäämisen kuin potilailla, joilla on alhainen eriyttäminen grade (OS, P = 0,007; DFS, P = 0,008). Lisäksi korkeampi patologinen vaiheessa (OS, P 0,001; DFS, P 0,001) olivat merkitsevästi yhteydessä huonoon OS ja DFS. Potilaat, joilla on korkea DNA- PKcs tai Ku70 ilme oli huomattavasti huonompi OS ja DFS kuin vähemmän ilme, mutta ne eivät olleet itsenäisiä ennustavia tekijöitä.

. Eloonjäämisaste potilaiden, joilla on alhainen ydin- surviviinista (n = 124) verrattuna potilailla, joilla on korkea ydin- surviviinista (n = 132). P-arvo Log-Rank-testi on 0.001.B. Tautivapaa elinaika potilailla, joilla on alhainen ydin- surviviinista (n = 124) verrattuna potilailla, joilla on korkea ydin- surviviinista (n = 132). P-arvo Log-Rank-testi on 0.001.

suhde Nuclear Surviviinispesifisiä ja DNA Vahinkosaneerauksessa Geenit

Tutkimme mahdollinen suhde ydin- surviviinin ja DNA vaurioita korjaavien geenien joukossa 256 potilasta. Niistä kolme asiaa geenien, DNA-PKcs ja Ku70 ilmentymistä merkittävästi positiivisesti ydin- surviviinin ilmentymisen (taulukko 4). Kaikkiaan 91 (67,4%) ulos 135 potilailla, joilla on korkea DNA- PKcs joilla oli samanaikainen korkea surviviinin ilmentymisen verrattuna 44 (32,6%) ulos 135 potilailla, joilla on korkea DNA- PKcs joilla oli matala surviviinin lauseke (P 0,001). Kaikkiaan 99 (66,4%) ulos 149 potilailla, joilla on korkea Ku70 oli samanaikainen korkea surviviinin ilmentymisen verrattuna 50 (33,6%) ulos 149 potilailla, joilla on korkea Ku70 ilme ja matalan surviviinin ilmaisun (P 0,001). Vuonna surviviini negatiivinen tapauksissa DNA- PKcs ilmentymisen merkittävästi vaikuttanut OS (46,0 vs. 61,3 kuukautta; p = 0,009) ja DFS (35,0 vs. 55,1 kuukautta; p = 0,02). Tämä ei löytynyt surviviini positiivisia tapauksia.

ennustaminen hoitotuloksia

Leikkauksen jälkeinen sädehoito voisi vähentää huomattavasti riskiä paikallisen uusiutumisen. Tutkimuksessamme 92 potilasta sai postoperatiivisen sädehoitoa. Monimuuttuja-analyysi osoitti, että kasvaimen erilaistumiseen luokalla DNA- PKcs ja Ku70 ilmaisun olivat riippumattomia ennustetekijöitä (taulukko 5). Laskennallinen suhteellinen riski paikallisen uusiutumisen oli 2.025 (p = 0,007) potilailla, joilla on korkea DNA- PKcs lauseke, 2,161 (P = 0,029) potilailla, joilla on korkea Ku70 ilme ja 0,522 (P = 0,008) potilailla, joilla on alhainen eriyttäminen luokalla, vastaavasti . Potilailla, joilla on alhainen ilmentyminen Ku70 ja DNA- PKcs, paikallinen uusiutuminen elinaika (LRS) oli merkitsevästi suurempi verrattuna potilaisiin, joilla on korkea ilmentymisen Ku70 (P = 0,012; Kuva. 3A) ja DNA-PKcs (P = 0,02; Kuvio. 3B). Suurin hyöty sädehoidon havaittiin potilailla, joiden kasvaimet olivat alhainen ilmentyminen Ku70 ja DNA- PKcs.

. Paikallisen uusiutumisen elinaika potilailla, joilla on alhainen Ku70 ilme (n = 36) verrattuna potilailla, joilla on korkea Ku70 surviviinista (n = 56). P-arvo Log-Rank-testi on 0.012. B. Paikallinen uusiutuminen elinaika potilailla, joilla on alhainen DNA- PKcs lauseke (n = 49) verrattuna potilailla, joilla on korkea ydin- surviviinista (n = 53). P-arvo Log-Rank-testi on 0.02.

Keskustelu

Nykyisessä tutkimuksessa määritimme ilmaus ydin- surviviinin ja 3 avaintekijät DNA: n DSB korjaus väyliä potilailla NSCLC käyttäen TMA. Verrattuna normaaliin keuhkokudoksessa, osuus solujen, jotka värjäytyivät positiivisesti ytimet ja värjäytymisen intensiteetti oli suurempi tuumorikudoksissa kuin normaalissa keuhkokudoksessa. Vähentynyt ilmentyminen lähetti-RNA DNA-PKcs ja ATM normaalissa keuhkokudoksessa on myös osoitettu aikaisemmassa tutkimuksessa [16]. Surviviinin ilmentyminen havaittiin vain Tuumorinäytteissä, ei ympäröivän normaaleissa kudoksissa, mikä on sopusoinnussa tulosten aiemmista tutkimuksista [17], [18].

prognostista ennustearvo surviviinin ilmentymisen ja että tumavärjäystä vs. sytoplasman värjäytymistä useissa maligniteetteja, mukaan lukien NSCLC, on tutkittu useissa tutkimuksissa ristiriitaisia ​​tuloksia. Samoin tutkimustulokset tutkii ennustetekijöiden ennustearvo tumavärjäystä surviviinin ovat myös ristiriitaisia. Näitä ristiriitoja voitaisiin selittää, vuonna IHC tutkimuksissa pohjalta käyttäen vasta-aineita eri spesifisyydet tai pitoisuuksina, ja käyttämällä erilaisia ​​katkaisurajapisteet ja erilaisia ​​lähestymistapoja varastoimiseksi ja jalostamiseksi kudoksiin. Tutkimuksemme osoitti, että ydinvoiman ilmaus surviviinin on itsenäinen negatiivinen ennustetekijä hengissä kirurgisesti resekoituun pienisoluista keuhkosyöpää. Vastaa meidän tuloksia, muut retrospektiivinen sarja on tunnistettu ydinvoiman sijaan sytoplasmista surviviinin ilmaus itsenäisenä negatiivinen ennustetekijä hengissä NSCLC [19] – [22]. Jopa NSCLC, ydin- surviviinin ilmentyminen osoitettiin korreloivan parempaan lopputulokseen äskettäin useita edistyneitä (vaihe IIIA-IV) käyttökelvottoman potilailla, joille tehtiin kemoterapiaa [17]. Kuitenkin meta-analyysi surviviinispesifisten tekemän Jiang Fan [23] avulla potilaan tiedot löytyy ristiriitaisia ​​tuloksia. Tiedot kolmesta tutkimuksesta yhdistettiin löytää että taso ydin- surviviinin ei ollut vaikutusta OS NSCLC potilaiden (RR1.58, 95% CI +0,87-+2,85, P = 0,13). Mutta tutkimukset mukaan vain kolme tutkimusta ja numero potilaat olivat pieniä, negatiivinen tulos voi johtua potilaiden lukumäärä on pieni.

Tutkimuksessamme ydin- surviviinin ilmentyminen korreloi positiivisesti patologisen vaiheessa ja imusolmuke- tila. Nykyinen tulokset ovat yhdenmukaisia ​​niiden kanssa, jotka kertoivat, että surviviini oli merkkiaine imusolmuke etäpesäke [18], [24], [25]. Välinen yhteys surviviinin ilmaisun ja mahdollisuudet imusolmuke etäpesäke voidaan selittää seuraavasti. Surviviinispesifisiä voisi olla apoptoosi: osuus syöpäsolujen kudoksessa, joka muutoin poistetaan apoptoosin, kasvaa jatkuvan kasvun ja lisääntyneet ja metastaasit.

Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että korkeat ilmentyminen DNA-PKcs ja Ku70 oli yhteydessä huonoon kokonaiselossaoloaikaa potilailla, joilla on NSCLC, mutta se ei ollut tilastollisesti merkitsevä. DNA double-säikeen katkoksia (DSB: t) pidetään kaikkein vaarallisin kaikista DNA vaurioita. Nopea ja tehokas korjaus DNA DSB: t on kriittinen ylläpitämiseksi genomista eheys. Viat DSB korjaus reitti voi aiheuttaa geneettisiä muutoksia, kromosomi epävakautta, ja lopulta pahanlaatuisiksi. Sitä vastoin tuumorisolut lisääntynyt DNA: n DSB korjaus kapasiteetti olisi todennäköisemmin hengissä ja lisääntyä, mikä johtaa heikkoon ennusteeseen syöpäpotilailla. Prognostisia arvo näiden geenien tutkittiin ja tulokset olivat ristiriitaisia. Kun tutkimuksessa Jinliang et ai, jossa RT-PCR: ää käytettiin mittaamaan DNA-PKcs ja ATM ilmentyminen keuhkosyöpä, potilailla, joilla on korkea kasvain: normaali (T /N) ilmentymisen suhde ATM tai DNA-PKcs oli huomattavasti lyhyempi eloonjäämismediaani kuin potilailla, joilla on alhainen suhde [16]. On kuitenkin olemassa myös joitakin ristiriitaisia ​​tuloksia kannalta ennusteen arvioinnissa näiden geenien. Vuonna kattava katsaus, Wynand ilmoitti, että solut, jotka omaavat virhe niiden DNA: n korjaukseen väyliä ovat omiaan kärsivät DNA-vaurioita aiheuttaman apoptoosin [26]. Esimerkiksi, selviytymisen potilailla, joilla on korkea ekspressio DNA-PKcs tai Ku86 oli merkittävästi parempi verrattuna selviytymisen potilailla, joilla on alhainen ilmentyminen DNA-PKcs tai Ku86 [27]. Nämä epäjohdonmukaisuudet voivat johtua monista tekijöistä, kuten erilaisia ​​syöpätyyppejä, eri histologian ja kasvainten ominaisuuksiin tai menetelmäerojen, kuten käytetty tekniikka koetin geeniekspression tai vasta reagoimaan vastaan ​​tiettyä epitooppia.

molekyylitason mekanismi taustalla ero lokalisointi tuumorisoluissa on vielä epäselvä. Solunsisäisen jakautumisen surviviinin on merkittävä tehtävä kyky molekyylin säädellä solun jakautumista. Viimeaikaiset tiedot osoittavat lisäksi, että vuorovaikutus leusiinirikkaita tumasta signaali (NES) kanssa tumasta reseptorin kromosomin alueen kunnossapito proteiini 1 homologi (Crm1) on kriittisesti mukana surviviinista n solunsisäinen sijainti ja syöpään liittyviä toimintoja [28], [29 ]. DNA-vaurioita voi stimuloida nopea purkaus mitokondrioiden altaan surviviinin sytosoliin, joka säilyttää elinkelpoisuuden kasvainsolujen aikana pitkittynyt G2 lohko vastavaikuttamalla DNA-vaurioita aiheuttaman apoptoosin [30]. Pearsonin korrelaatiokerroin analyysi, korrelaatio ekspressiotasot ydin- surviviinin ja näiden DNA-PKcs tai Ku70 havaittu tutkimuksessamme. Surviviini on jäsen apoptoosi-inhibiittori (IAP) -perheen, ja sen suoraan inhiboi kaspaasien, erityisesti kaspaasi-3. Äskettäin on osoitettu, että surviviini stimuloi myös DSB korjaus sen vuorovaikutusta DNA-PK [14], [31]. Siksi me spekuloida, että DNA-vaurioita stimuloi nopea purkaus surviviini tumaan, joka fyysisesti vuorovaikutuksessa tekijöiden DNA DSB korjaus proteiineja DNA-PKcs ja Ku70. Näin surviviini stimuloi DNA double-lohkon korjaus kapasiteettia säätelemällä DNA- PKcs ja Ku70 aktiivisuutta ja siten estävät DNA-vaurioita indusoiman apoptoosin. Kuitenkin lisää tutkimuksia tarvitaan selvittämään tämän avoimen kysymyksen.

uusi tulos tutkimuksessamme on, että proteiini ekspressiotasot DSB korjaus proteiinit voivat olla hyödyllisiä ennustamiseen hoitotulokseen. Potilaat, joilla on alhainen Ku70 ja DNA- PKcs ilme oli suurempi hyöty sädehoidon kuin potilailla, joilla on korkea ilmentymisen Ku70 ja DNA- PKcs koska jälkimmäinen ryhmä oli suuri määrä toistumisen jälkeen sädehoidon. Meidän tulkinta on, että Ku70 ja DNA- PKcs ovat välttämättömiä DNA-vaurioita tunnustamista ja signalointi ja että menetys näiden proteiinien johtaisi alentunut DNA korjaukseen, lisääntynyt säteilyherkkyyttä, ja parantaa paikallista kasvaimen valvontaa. Karin et ai. kertoi, että alhainen ilmentyminen Ku70 /Ku80 ennustettu hyvä vaikutus sädehoidon alussa rintasyövän [32]. Beskow totesi myös, että säteilyresistenteille kohdunkaulan syövän osoitti useammin DNA-PKcs, Ku70 ja Ku86 positiivisten solujen [33]. Bouchaert et ai. kertoi, että positiiviset DNA- PKcs tumavärjäystä oli tiiviisti biokemiallisten uusiutuminen ja ehdotti, että DNA-PKcs voisi olla ennakoivaa merkkiaine uusiutumisen jälkeen sädehoidon eturauhassyövän [34]. On kuitenkin olemassa myös tuloksia, jotka ovat ristiriidassa meidän havaintoja [27], [32], [35]. Se on edelleen kiistanalainen onko DNA- PKcs tai Ku70 ilme voi olla ennustetekijä vastauksesta potilaiden keuhkosyöpä sädehoidon.

Yhteenvetona havaitsimme, että ydinvoiman surviviini merkitsevästi yhteydessä huonoon säilymiseen potilaiden kanssa NSCLC ja että ydinvoima surviviini oli vahvasti liittyvät patologisen vaiheessa ja imusolmuke etäpesäke. Nuclear surviviini korreloi positiivisesti DNA- PKcs ja Ku70 ja voi siten stimuloida DNA double-säikeen katkoksia korjaus sen vuorovaikutusta DNA-PKcs ja Ku70. Nykyinen Tulokset osoittavat, että ydinvoiman surviviini voi olla hyötyä ennustettaessa kliinisiä tuloksia potilaiden NSCLC.

Kiitokset

Olemme erittäin kiitollisia Dr. Hongfei Ji Institute of Cancer Prevention and Treatment , Harbin Medical University ja tohtori Shuhuai Wang laitoksella patologian, kolmas Affiliated sairaala Harbin Medical University niiden tekniikka tukea.