Krooninen sairaus

tiivistelmä

Eturauhassyöpä (PCA) on yleisin syöpä miehillä Yhdysvalloissa, mikä vaikuttaa suhteettomasti Afrikkalainen amerikkalainen laskuja. Vaikka etäpesäke on yleisin kuolinsyy PCa potilailla, mitään erityisiä markkereita on osoitettu vaikeusasteen ja etnisten biasness taudin. MikroRNA edustaa lupaava uusi luokka biomarkkereiden koska niiden luontainen vakautta ja sietokykyä. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme tutkineet mahdollisia miRNA joita voidaan käyttää biomarkkereita ja /tai terapeuttisina kohteina ja voi auttaa selvittämään vakavuus ja etninen biasness Eturauhassyövän. PCR array suoritettiin FFPE PCa kudoksissa (5 valkoihoinen amerikkalainen ja 5 Afrikkalainen amerikkalainen) ja valitut ilmentyvät eri miRNA todensi qRT-PCR, in 40 (15 CA ja 25 AA) pariksi PCa ja viereisten normaaleissa kudoksissa. Merkittävästi vapautuneilla miRNA myös analysoimalla virtsanäytteistä tutkia niiden potentiaalia ei-invasiivisia biomarkkereiden PCA. Out of 8 miRNA valittu validointi PCR array data, miR-205 (

p

0,0001), mir-214 (

p

0,0001), miR-221 (

p

0,001) ja miR-99b (

p

0,0001) olivat merkittävästi vaimentua PCA kudoksissa. ROC-käyrä osoittaa, että kaikki neljä miRNA onnistuneesti syrji PCa ja viereisten normaaleissa kudoksissa. MiR-99b osoitti merkittäviä alas asetuksen (

p

0,01) AA PCa kudoksissa verrattuna CA PCa kudoksiin ja saattavat liittyä aggressiivisuus liittyy AA väestöstä. Virtsassa miR-205 (

p

0,05) ja miR-214 (

p

0,05) olivat merkittävästi vaimentua PCA potilaiden ja pystyy erottamaan PCa potilaita terveistä yksilöiden 89 % herkkyys ja 80% tarkkuus. Lopuksi esillä oleva tutkimus osoitti, että miR-205 ja miR-214 vaimentua PCA ja voivat toimia mahdollisina ei-invasiivisia molekyylitason biomarkkereiden PCA.

Citation: Srivastava A, Goldberger H, Dimtchev A, Ramalinga M , Chijioke J, Marian C, et ai. (2013) MicroRNA Profilointi in Eturauhassyöpä – Diagnostiikka potentiaalin Virtsa miR-205 ja miR-214. PLoS ONE 8 (10): e76994. doi: 10,1371 /journal.pone.0076994

Toimittaja: Rakesh K. Srivastava, University of Kansas Medical Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 05 heinäkuu 2013; Hyväksytty: 04 syyskuu 2013; Julkaistu: 22 lokakuu 2013

Tämä on avoin-yhteys artikkeli, vapaa kaikki tekijänoikeudet, ja saa vapaasti jäljentää, levittää, välittää, modifioitu, rakennettu, tai muuten käyttää kuka tahansa laillista tarkoitusta. Teos on saatavilla Creative Commons CC0 public domain omistautumista.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat avustusta NIH (CA162264 ja CA141935) ja PCRP ohjelma CDMRP (PC111314). JC tukee liitelomake CA162264-02S1. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Eturauhassyöpä (PCA) on useimmin diagnosoitu miesten yleisin ja toiseksi suurin syy onkologian kuolleisuus miehillä Yhdysvalloissa [1]. Vuonna 2013 ~238,590 uutta tapausta Eturauhassyövän arvioidaan diagnosoidaan Yhdysvalloissa, joka voi vaatia ~29,720 kuolemia [1]. Afrikkalainen amerikkalainen (AA) miehet kärsivät suhteettomasti PCA jossa esiintyvyys oli kahden kolmasosan korkeampi ja kuolleisuus kaksinkertainen verrattuna valkoihoinen amerikkalaiset (CA) [2]. Koska sen ei- erityisiä oireita ja asteittainen eteneminen, PCA yleensä diagnosoitu edennyt pitkälle. Jos kuitenkin diagnosoitu varhaisessa vaiheessa PCa voidaan hoitaa menestyksekkäästi.

rutiininomaisesti testit varhaista havaitsemista Eturauhassyövän kuuluvat eturauhasen (DRES) ja eturauhasen-antigeenin (PSA) testaus. PSA testaus on epäspesifinen, kuten kohonnut PSA taso johtuu eturauhasen hyvänlaatuinen liikakasvu (BPH), infektio, ja /tai krooninen tulehdus voi johtaa sekoittavia tuloksiin [3] – [4]. Matala spesifisyys (PSA testaus) ja matala herkkyys (DRE) näiden kokeiden rajoittaa niiden diagnostinen merkitys [5]. Vaikka kliiniset kokeet puoltavat että PSA helpottaa suuresti varhainen diagnosointi PCA onko tämä seulontamenetelmä alentaa merkittävästi PCA kuolleisuus on edelleen kysymys keskustelun [6] – [7]. Tuore meta-analyysi totesi, että seulontakäytäntö joko DRE tai PSA tarjoaa mitään hyötyä ja ei vaikuta PCa kuolleisuutta [8]. Ratkaisemaan nämä ongelmat, uusia biomarkkerit on ehdotettu myös PSA johdannaiset kuten kokonais- PSA nopeus (yhteensä PSAV) ja eri molekyyli- muodot PSA kuten vapaan PSA, BPSA, pro-PSA, ja ehjät PSA [9]. Muut veren pohjainen biomarkkerit kuten ihmisen rauhas kallikreiini 2 (hK2), urokinaasi plasminogeeniaktivaattori (uPA) ja sen reseptorin (uPAR), transformoiva kasvutekijä-beeta 1 (TGF β1); interleukiini-6 (IL-6) ja sen reseptorin (IL-6R), on tutkittu yksin tai yhdessä PSA: n ja ehdotetaan diagnosointiin, pysähdyspaikan, ennustavat, ja seuranta eturauhassyövän [10]. Kuitenkin, johtuen heterogeeninen Taudin luonteesta, ylimääräinen prognostisia biomarkkerit tarvitaan kiireesti parempaa ennustamista taudin etenemisen, jotka voivat auttaa kliinistä päätöksentekoa siitä ajoituksesta koepala ja tarpeellisuutta hoitoa.

MikroRNA (miRNA) ovat pieniä (18-24 nukleotidia), erittäin konservoituneen, ei-koodaavat RNA-molekyylejä, jotka säätelevät geenien ilmentymistä transkription jälkeen [11] – [12]. Laskennallinen tutkimusten mukaan yli 60% nisäkkäiden geenitranskriptien säätelevät miRNA [13] – [14]. MiRNA pelata keskeinen säätelevä rooli eriävät solun prosessit, myös solusyklin, lisääntymistä, erilaistumista ja apoptoosia [15]. Viimeaikaiset tutkimukset ovat sekaantuneet eri miRNA kehittämiseen ja etenemiseen useiden ihmisen syöpien ja myös mahdollisina biomarkkerina syövän diagnoosi ja ennuste [16] – [19].

Kun otetaan huomioon epäyhtenäisyys syöpä kudoksiin, laser kaapata mikro leikkely (LCM) tarjoaa houkuttelevan lähestymistavan eristää määritelty solupopulaatioiden FFPE yksilöt [20]. LCM yhdistettynä qRT-PCR teknologiaa on käytetty tarkkaa mittausta varten geeniekspressioiden peräisin FFPE näytteistä. Esillä olevassa tutkimuksessa käytimme LCM ja suoritetaan miRNA profilointi eturauhassyövässä ja vastaavien viereisten normaaleissa kudoksissa tunnistaa miRNA kehittämiseen liittyvät Eturauhassyövän. MiRNA tunnistettu oli edelleen validoitu suuremmissa näytejoukoille. Testata ei-invasiivisia diagnostisia potentiaalia, me arvioitiin myös ilmaus ehdokas miRNA itsenäisessä joukko virtsanäytteiden PCA potilaista.

Materiaalit ja menetelmät

Potilasnäytteet

Kaikki potilaan näytteet saatiin de-suojelemiseksi määritetyt potilaan luottamuksellisuuden ja oli Georgetown University IRB-hyväksynnän ja suostumuksen. Kaikki kudosnäytteet saatiin GU /LCCC histopatologia Tissue resurssin (https://lombardi.georgetown.edu/research/sharedresources/htsr/) ja kirjallinen suostumus saatiin kaikkia osallistujia virtsanäytettä. Lyhyesti, 40 formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut (FFPE) kudosnäyte korttelin päässä eturauhasen koostuu 15 valkoihoinen amerikkalainen (CA) ja 25 Afrikkalainen amerikkalainen (AA) saatiin Lombardi histopatologia ja Tissue resurssin (HTSR) välillä 1997-2002. Virtsanäytteet 36 PCa potilaista (18 CA ja 18 AA) ja 12 iän ja etnisen terveisiin luovuttajien (6 CA ja 6 AA) saatiin Georgetown University Hospital Cyberknife Eturauhassyöpä Program vuodesta 2009 vuoteen 2012.

Laser Capture mikrodissektiomenetelmiä (LCM) B

hematoksyliinillä ja eosiinilla (H viereiseen normaaliin kudokseen kollegansa toimi kuin syöpä ohjaus. Teimme miRNA profilointi analyysi ja havaittiin, että suurin osa miRNA oli vaimentua syövän kudoksissa, lukuun ottamatta miR-367, miR-758 ja miR-190, joka havaittiin voimistuvan (taulukko 1). Sillä validointi, valitsimme 3 voimistunut miRNA (miR-367, miR-758 ja miR-190) ja 5 vaimentua miRNA (miR-205, miR-214, miR-212, miR-221 ja miR-99b), joka perustuu niiden julkaistu rooli syövän biologian. Profilointi tiedot kaikista 10 potilasta (5 CA ja 5 AA) on toimitettu GEO-tietokantaan (hakunumero GSE48430).

validointi miRNA kvantitatiivisen RT-PCR

valitut 8 miRNA validoitu in LCM-leikeltiin kasvain ja vieressä normaali kudos 40 potilasta, mukaan lukien 10 potilasta käytetty miRNA profilointiin. Taulukko 2 osoittaa, kliinis-patologisia potilaiden ominaisuuksiin. QRT-PCR tulokset 40 potilaan näytteestä (15 CA ja 25 AA) yksilöitä paljasti vähentynyt ilmentyminen miR-205 (

p

0,0001), miR-214 (

p

0,0001), miR-221 (

p

0,001) ja miR-99b (

p

0,0001) syöpäkudoksessa verrattuna viereiseen ei-syöpäkudoksessa (Fig. 1A) . Vaikka miR-212 osoitti suuntauksena downregulation PCA verrattuna viereiseen normaaliin kudokseen, ero ei ollut tilastollisesti merkitsevä (

p

= 0,061). Ei ollut mitään merkittävää eroa suhteellisen ilmentymisen miR-758, ja miR-190 kasvainkudoksessa verrattuna niiden viereiseen normaaliin kollegansa ja tasot miR-367 ei voitu havaita sen jälkeen, kun 38 sykliä (tuloksia ei ole esitetty). Siksi miR-212, miR-758, miR-190 ja miR-367 jätettiin pois jatkotutkimuksia.

(A) validointi miRNA by qRT-PCR: Rasiakuvaajat edustavat kudosekspressiotutkimuksen taso neljä miRNA 40 FFPE PCa kudokset ja niiden pariksi viereisen normaaleissa kudoksissa. Ekspressiotasot miRNA normalisoidaan U6 snRNA kuin endogeeninen kontrolli. Tilastollisesti merkitseviä eroja ei määritettiin käyttämällä paritonta Studentin t-testiä. Olemme havainneet merkittävää laskua ilmaus miR-205 (

p

0,0001), miR-214 (

p

0,0001), miR-221 (

p

0,001) ja miR-99b (

p

0,0001) PCA kudoksissa verrattuna viereiseen normaaleissa kudoksissa. * Merkitsee

p

0,0001 ja ** tarkoittaa

p

0,001. (B) Vastaanotin toimii (ROC) käyrä analyysi: ROC käyrä neljän miRNA tehtiin erottamaan PCa terveistä kudoksista. Alue ROC-käyrän alla (AUC) kullekin miRNA välittää sen tarkkuuden erilaistumisen Eturauhassyövän ja normaalit kudokset kannalta herkkä ja spesifinen.

Vastaanotin käyttöominaisuudet (ROC) käyrät olivat rakennettava tutkia herkkyyden ja spesifisyyden miR-205, miR-214, miR-221 ja miR-99b ja arvioida niiden mahdollisia käytettäväksi biomarkkerina erottelemaan PCa ja taudista vapaan yksilöiden (Fig. 1 B). Tulokset viittaavat siihen, että neljä miRNA voi syrjiä kahden ryhmän erittäin tarkasti; miR-205, AUC = 0,83 (95% CI = 0,74-0,91); miR-214 AUC = 0,92 (95% CI = 0,86-0,99); miR-221 AUC = 0,75 (95% CI = 0,63-+0,84) miR-99b AUC = 0,86 (95% CI = 0,78-0,95) (Fig. 1 B).

ilmentäminen miRNA GEO Datasets

Data mining suoritettiin käyttäen GEO2R tarkistaa tilan ilmentyvät eri miRNA in julkisesti saatavilla GEO aineistoja. Microarray aineistot GSE21036 (Taylor et ai.) [31] ja GSE36802 (Lin et ai.) [32] tiedusteltiin ilmentämiseen valittujen neljän miRNA (miR-205, miR-214, miR-221 ja miR-99b) ja kiinnostaa. Tukevat myös kudoksen tietojen osalta, GSE21036, kaikki neljä miRNA myös vaimentua primaarisessa eturauhasen kasvaimissa (n = 99) verrattuna normaaliin eturauhasen kudosten (n = 28) (miR-221,

p

0,0001 ; miR-205,

p

0,0001; miR-99b,

p

0,0001; miR-214,

p

0,05). Samoin GSE36802, havaitsimme downregulation kaikki neljä miRNA kliinisesti paikallinen primaarikasvaimen (n = 21) verrattuna hyvänlaatuinen PCa (n = 21) (miR-221,

p

0,0001; miR -205,

p

0,0001; miR-99b,

p

0,0001; miR-214,

p

0,05) (Fig. 2).

microRNA validointi tiedot (A) 99 ensisijaisen PCa potilasta ja 28 normaalia valvontaa ja (B) 21 potilaalla kussakin on kliinisesti paikallinen ensisijainen PCa ja hyvänlaatuisia PCa saatiin NCBI GEO tietokanta (GEO tulonumero. GSE21036 ja GSE36802, vastaavasti). Näkyy ovat sirontakuvaajiin ilmentymisen tason miR-205, miR-214, miR-221 ja miR-99b on aineistot saadaan GEO tietokannasta.

Pathway Verkko Analyysi Differentially Moduloitu miRNA

Saadaksemme toiminnallisia oivalluksia rooliin miRNA PCA ja tutkimaan mahdollisia geeni-geeni vuorovaikutukset tavoitteiden neljästä miRNA rakensimme vuorovaikutusverkosto käyttäen Pathway Studio 9.0. Kaikkiaan 98 mRNA tavoitteita tunnistettiin (a) yhteiset tavoitteet saatiin kolmesta ohjelmistot (TargetScan, PicTar ja miRDB) kaikista 4 miRNA ja (b) validoitu tavoitteet 4 miRNA saatiin miRTarBase. Lisäsimme yhteinen sääntelyviranomaisten kanssa suoraan vuorovaikutusta-suora geeniekspression säätelyä, proteiini-proteiinin sitoutuminen, tai promoottori sitova. Signalointivastaanotin kompleksi kehittynyt 62 98 tavoitteiden paljasti VEGFA, ICAM1, p53, ESR1, SELE ja FOS yhteisinä solmut /navat useiden vuorovaikutusten viittaa yleisesti ohjaavat väylät liitetty geenit ja ehdokas tulevaisuuden kokeellista tarkastusta ja toiminnalliset tutkimukset (Fig. 3). Loput 36 tavoitteet ulkopuolelle ohjelmiston puutteessa yhteisiä liittimiä. Toinen polku, rakennettu tunnistamaan miRNA tavoitteita suora vuorovaikutus näyttää samalta solmut /navat (Fig. 3).

Pathway verkko rakennettiin yleisesti ennakoi maalin mRNA erilaisesti moduloidun miRNA (miR-205, asennuspalveli- 214, miR-221 ja miR99b), käyttämällä Pathway Studio 9.0 (A) yleisesti ennustettu miRNA tavoitteensa yhteisten sääntelyviranomaisten. (B) suoraan vuorovaikutuksessa tavoitteita.

Etniset Vaihtelu miRNA Expression

Afrikkalainen amerikkalainen (AA) miehillä on korkeampi esiintyvyys Eturauhassyövän verrattuna valkoihoinen amerikkalainen (CA) miehiä. Kysyimme onko ekspressiotasot miR-205, miR-214, miR-221 ja miR-99b olivat erilaiset kahden populaatioiden (n = 15 CA; n = 25 AA). Tämän testaamiseksi vertasimme kertaiseksi erot kunkin miRNA syöpäkudoksen suhteessa niiden viereiseen normaaliin kudokseen AA ja CA näytteitä. Kuten on esitetty kuviossa. 4, ei ollut merkitsevää eroa ekspressiomalleja miR-205, miR-214, ja miR-221 välillä CA ja AA väestöstä. Kuitenkin merkittävästi vähentynyt lauseke (

p

0,01) on miR-99b havaittiin syöpäkudoksessa AA PCa potilaista verrattuna CA PCa potilaille (Fig. 4).

Box tontteja edustavat kertainen ero ekspressiotasot neljän miRNA PCA kudoksissa verrattuna niiden normaaliin viereiseen vastine. Tiedot 15 valkoihoinen amerikkalainen (CA) ja 25 Afrikkalainen amerikkalainen (AA) potilasta arvioituna qRT-PCR näytetään. Ekspressiotasot miRNA normalisoitiin U6 snRNA kuin endogeeninen kontrolli. Tilastollisesti merkitseviä eroja määritettiin käyttämällä paritonta Studentin t-testiä.

Detection of miRNA virtsanäytteistä

kudoskoepaloihin ovat invasiivisia eikä ensisijainen lähde biomarkkereita. Me seuraavaksi tutkitaan mahdollisuutta, onko miR-205, miR-214, miR-221, ja miR-99b voitiin havaita ei-invasiivisesti analysoimalla virtsanäytteitä PCA potilaista. Vuodesta jatkuva tutkimus, valitsimme 36 PCa potilaiden ja 12 iän ja etnisen terveisiin luovuttajien ei-syöpä kontrolliryhmään. Taulukossa 3 esitetään ominaisuudet PCa potilaiden ja terveiden yksilöiden värvättiin tutkimuksesta virtsanäytteistä. Koska sillä miRNA profilointia käytimme kudosnäytteiden kanssa GS6 ja GS7, saimme virtsanäytteistä potilailta, joilla GS6 ja GS7 kuin heijastus kudosnäytteitä. Kaikki neljä miRNA (miR-205, miR-214, miR-221 ja miR-99b) oli läsnä havaittavissa pitoisuus virtsanäytteistä. Huomasimme, että virtsan miR-205 (

p

0,05) ja miR-214 (

p

0,05) tasot olivat merkitsevästi pienempi syövän ryhmässä verrattuna terveisiin kontrolliryhmään ( kuva 5A). Ei merkittävää eroa ekspressiotasot miR-221 ja miR-99b havaittu. Arvioidaan diagnostinen potentiaali, ROC käyrät kaikille 4 miRNA analysoidaan virtsanäytteistä rakennettiin. ROC-käyrä osoitti, että miR-205 ja miR-214 pystyy erottamaan PCa potilailla normaalista ohjaus AUC: 0,7083 (95% CI = +0,54-+0,86) ja 0,7431 (95% CI = 0,58-0,90), vastaavasti (Fig. 5B) . Myös miR-205 ja miR-214 jos sitä käytetään yhdessä voi syrjiä PCA potilaiden terveiltä yksilöiden 89% herkkyys ja 80% tarkkuus (Fig. 6). Yhdessä tuloksemme osoittavat, että miR-205 ja miR-214 ovat läsnä sekä kudokseen ja virtsaan Eturauhassyövän potilaista, mikä viittaa siihen, että virtsa voidaan käyttää muutosten havaitsemiseksi ekspressiotasot miRNA.

(A) rasiakuvaajien edustavat virtsan ilmentymisen taso neljä miRNA (miR-205, miR-214, miR-221 ja miR-99b) virtsan 36 PCa potilaista ja 12 terveiden yksilöiden arvioituna qRT-PCR. Ekspressiotasot miRNA on normalisoitu RNU48 kuin endogeeninen kontrolli. Tilastollisesti merkitseviä eroja ei määritettiin käyttämällä Studentin t-testiä. Olemme havainneet merkittäviä vähentynyt ilmentyminen miR-205 (

p

0,05), miR-214 (

p

0,05) virtsasta Eturauhassyövän potilailla verrattuna terveisiin kontrolleihin. Ei merkittävää eroa ekspressiotasot miR-221 ja miR-99b havaittiin. * Merkitsee

p

0,05. (B) Vastaanotin toimii (ROC) käyrä analyysi neljästä miRNA käytettiin erottamaan PCa potilaille terveistä yksilöistä. Alue ROC-käyrän alla (AUC) kullekin miRNA välittää sen tarkkuuden erilaistumista Eturauhassyövän potilaiden ja terveiden henkilöiden kannalta herkkä ja spesifinen.

Kun määritellään miR-205 ja miR-214 yhteen voi parantaa diagnostista arvoa ja sitä voidaan käyttää erottamaan PCa potilaille terveistä yksilöiden 89% herkkyys ja 80% tarkkuus.

keskustelu

Muutokset miRNA ekspressiotasot, johtaen modulaatioon useiden signalointireittien, ovat yhteydessä taudin alkamisen ja etenemisen PCa. Esillä olevassa tutkimuksessa käyttämällä globaalia miRNA profilointia seuraa validointitutkimuksissa, olemme osoittaneet, että miR-205, miR-214, miR-221 ja miR-99b merkittävästi vaimentua PCA kudoksissa verrattuna viereiseen normaaliin kudokseen kanssa.

Yksi tutkittu microRNA, miR-205, joka on osoitettu olevan alaspäin säännellään eri syöpiä, kuten PCa [33] – [34], määriteltiin myös vaimentua miRNA PCA tutkimuksessamme. miR-205: n on osoitettu olevan epigeneettiseltä tukahdutettu tuumorisuppressoriproteiinia PCA [35], että kykenee sen kasvaimeen tukahduttava tehtäviä ihmisen eturauhasen läpi säätely alaspäin monipistemittaus kuten BCL2 [36], proteiinikinaasi C epsilon [34] ja androgeenireseptorin (AR) [37]. Menetys miR-205 on myös liitetty huonoon ennusteeseen, apoptoosin resistenssin PCa ja on ehdotettu olevan tuntomerkki epiteelin-mesenkymaalitransitioon [37] – [41]. Muut ilmaisun array tutkimuksissa on myös tunnistettu miR-205 on tukahdutettu PCA [33] – [34], [42] – [43]. Matalan tason ilmentymistä miR-205 on myös ennusteen merkki ihmisen pään ja kaulan okasolusyöpä [44] ja locus on raportoitu vaiennetaan promoottori hypermetylaation invasiivisessa virtsarakon kasvaimissa [45]. Tässä tutkimuksessa sekä edellinen kirjallisuus vahvistaa tärkeä rooli miR-205.

Seuraava poikkeuksellisesti ilmaistu miRNA tutkimuksessamme oli miR-214, joka on osoitettu olevan usein vaimentua kohdunkaulan syövän [46], munasarjojen syöpä [47] – [48], maksasyövän [49] – [51] ja kolangiokarsinooma [52]. Sen sijaan korkea ilmentyminen miR-214 on liittynyt haimasyöpä [53] sekä epäsuotuisa lopputulos kokonaiseloonjäämisessä mahalaukun syöpä [54]. MiR-214 vapauttaminen ei ole aikaisemmin raportoitu eturauhassyöpää. Tämä on ensimmäinen tutkimus osoittaa, että miR-214 on poikkeuksellisesti ilmaistaan ​​PCA. Merkittävä alaspäin asetusta kudosbiopsioista sekä virtsanäytteiden PCA potilaista esittelee miR-214 uutena pelaaja PCA, joka on vielä etsintä.

Toinen vaimentua miRNA tutkimuksessamme oli miR-221. Tärkeää on, miR-221 tunnistettiin merkittävimmin moduloitu miRNA kahdessa PCa GEO aineistoja. MiR-221 on de-säädellään erilaisia ​​syöpiä, lähinnä yli-ilmaisivat miRNA [55] – [59].

PCA, downregulation miR-221 on raportoitu TMPRSS2: ERG Fuusioon positiivinen PCa ja liittyy merkittävästi etäpesäkkeitä ja biokemiallisten uusiutuminen [58], [60]. Harvat tutkimukset ovat myös raportoineet onkogeenisessä rooli miR-221 PCA [61] – [62] kehittämistä ja ylläpitoa kastraatiotason resistenssifenotyyppi [63] – [64]. Tuloksemme on yksi harvoista raportoinnin alas-säätely miR-221 PCA kudoksissa ja takaa lisätutkimuksia.

Toinen hyvin tärkeä miRNA tunnistettu tutkimuksessamme oli miR-99b. MIR-99 perheelle myös miR-99b on liittynyt PCa tukahduttaminen ja ennusteen [63]. Down-regulation miR-99b on havaittu myös potilailla, joilla on keuhkosyöpä [65]. Mir-99b on myös osoitettu olevan yliekspressoitu nivelkalvon sarkooma [66] ja jotka liittyvät läsnäolo imusolmuke etäpesäke ruokatorven syöpä [67]. Tuloksemme osoittavat, että alas-säätely miR-99b on voimakkaampi AA PCa kudoksissa verrattuna CA PCa kudoksiin (Fig. 4). Funktionaaliset tutkimukset miR-99b on rajoitettu ja nämä uudet havainnot vaatia lisätutkimuksia rooliin miR-99b tavoitteita. Yhdessä esillä tiedot osoittavat, että yhdessä monien muiden tekijöiden ilmentyminen vaihtelu miRNA kuten miR-99b voi selittää etninen aggressiivisuus tauti.

tutkia signalointi verkkojen säätelevät näiden neljän miRNA, me rakennettu polku niiden yhteinen ennustettu tavoitteensa käyttäen saatavilla bioinformatiikan työkaluja ja validoitu tavoitteet kirjallisuudesta. Lisäämällä yhteinen sääntelyviranomaisten tunnistimme keskeinen signalointi navat, jotka on ilmoitettu olevan tärkeä rooli syövän solusignalointia viittaa tärkeä rooli näiden neljän miRNA PCA (Fig. 3). Seuraavaksi rakensimme suoraan vuorovaikutuksessa verkon miRNA tavoitteet ilman yhteisiä sääntelyviranomaisten. VEGFA, p53, ESR1, FOS ja ICAM1 pysyi keskuksista [68] – [72]. MTOR oli ainoa miR-99b tavoite, joka oli sisällytetty yhteiseen verkkoon. Havaitsimme miR-99b kuten differentiaalisesti moduloidut miRNA AA PCa. mTOR polku on tärkeä rooli PCA ja on liittynyt aggressiivinen sairaus, vastustuskyky hoito ja kehittäminen kastraatiotason resistenttien PCa [73]. mTOR-inhibiittorit ovat myös arvioitu terapiaa CRPC [74]. Association of miR-99b AA PCa on erittäin merkittävä ja lisätutkimuksia meidän lab on suunnattu luonteenomaiset miR-99b ja sen tavoitteet tekee aggressiivinen PCa fenotyypin.

käsitettä käytetään virtsan havaitsemiseen differentiaalisesti ilmaisi miRNA biomarkkerina on suhteellisen uusi. Ottaen huomioon, ajatus siitä, että kudos johdettu ekspressiomalleja miRNA voi auttaa meitä arvioimaan kiertävän miRNA biomarkkereina eritasoisten syöpiä, lupaavimmat miRNA havaittu tutkimuksessamme tutkittiin virtsassa Eturauhassyövän potilaiden arvioida niiden diagnostista tai prognostisen potentiaalia. Vastaa meidän havaintojen kudosnäytteistä, pystyimme myös havaitsemaan miR-205, miR-214, miR-99b ja miR-221 on virtsanäytteistä Eturauhassyövän potilaista. Tasot miR-205 ja miR-214 oli huomattavan alhainen PCA potilaille ja voidaan tutkia ei-invasiivisia diagnostisia biomarkkereiden PCA. Vaikka herkkyys ja spesifisyys on suurempi kudoksen, virtsan miR-205 ja miR-214 tasot yhteen pystyy erottamaan potilaita terveistä yksilöistä erittäin tarkasti. Tietääksemme Tutkimuksemme osoittaa ensimmäistä kertaa, että miR-205 ja miR-214 voi tarjota vaihtoehdon ei-invasiivisia liikennemuotojen erottamaan PCa ja terveille henkilöille ja voi toimia luotettavana biomarkkereiden PCA.

käyttö virtsaan mallin mukaan tuumorimarkkeri edelleen haastava, kun otetaan huomioon, että virtsa sisältää erilaisia ​​biomolekyylien kuten suuri määrä nukleaasien ja RNaasit. Kuitenkin johtuen pienestä koosta, miRNA ovat stabiileja RNaasia hajoamista mikä puoltaa niiden ansiot biomarkkereina [75]. Harvat tutkimukset ovat tutkineet mahdollisuuksia virtsan miRNA kuten diagnostisia ja prognostisia markkereita virtsarakon syövän, munuaissairaus, urothelial cancer, hepatosellulaarinen karsinooma ja munuaissolukarsinooma [76] – [80]. Vaikka miRNA tasot on tutkittu eri sairauksien, ei kattavaa tutkimusta kierrättämiseksi miRNA virtsassa PCA on raportoitu tähän mennessä, lukuun ottamatta Bryant et al [81] – [82]. Huomattavasti suurempi pitoisuus miR-107 ja miR-574-3p kvantifioitiin virtsaan miesten PCA verrattuna kontrolleihin [82]. Parhaan tietomme mukaan osoitamme ensimmäistä kertaa, että miR-205 ja miR-214 vaimentua PCA kudosta sekä virtsan PCA potilaista. Tunnustamme rajoittamisesta Tutkimuksemme että kudokset ja virtsan saatu eivät samasta potilaiden ja meidän pieni otoskoko. Kuitenkin meidän tutkimus todiste siitä, että sääntelemätön miRNA kudoksissa voidaan tutkia ei-invasiivisia virtsan biomarkkereiden PCA. ROC-käyrä osoittaa, että miR-205 ja miR-214 on yhdessä kyky erottaa terveille henkilöille ja PCa potilaalla on 89% herkkyys ja 80% tarkkuus.