Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

T lymfooma ja metastaasit 1 (Tiam1) on potentiaalinen muokkaaja kasvaimen kehittymistä ja etenemistä. Aikaisemmat tutkimus in vitro ja nude-hiirissä ehdotti edistäminen roolin Tiam1 päälle ja metastaasit kolorektaalisyövän (CRC). Esillä olevassa tutkimuksessa olemme syntyy Tiam1 /C1199-CopGFP siirtogeenisiä hiiriä tutkia tumorigenetic, invasiivinen ja metastaattinen muutoksia paksusuolen ja peräsuolen villityypin ja Tiam1 siirtogeenisten hiirten 1,2-dimetyylihydratsiinia (DMH) hoitoon.

Methods

Siirtogeeniset hiiret tuotettiin menetelmällä pronukleaarinen microinlectlon. Koko kehon fluoresenssikuvantamisella (Lighttools, Edmonton, Alberta, Kanada), PCR, ja immunohistokemiallinen tekniikat (IHC) levitettiin peräkkäin tunnistamaan siirtogeenisiä hiiriä. Karsinogeeni DMH (20 mg /kg) käytettiin indusoimaan Kolorektaalituumorien vaikka vatsaonteloon (ip) injektioita kerran viikossa 24 viikon iästä alkaen 4 viikkoa Tiam1 siirtogeenisiä tai ei-siirtogeenisiä hiiriä.

Tulokset

onnistuneesti luotu Tiam1 /C1199-CopGFP transgeenisissä hiirissä ja indusoitiin primaarikasvaimille suolistossa sekä villityypin Tiam1 siirtogeenisten hiirten DMH hoitoon. Lisäksi, Tiam1 siirtogeenisiä hiiriä kehittyi suurempia ja aggressiivinen kasvain kuin villikannan hiirissä. Lisäksi, immunohistokemiallinen värjäys paljasti, että ylösajon Tiam1 korreloi lisääntyneen ekspression β-kateniinin ja vimentiinin, ja vaimennussäätely E-kadheriini hiirissä.

Päätelmät

tutkimus on tarjonnut in vivo todiste, että Tiam1 edistää invaasio ja etäpesäkkeiden CRC, luultavasti aktivoimalla Wnt /β-kateniinin signalointireitin, joka Tiam1 siirtogeenisen hiiren mallia.

Citation: Yu LN, Zhang QL, Li X, Hua X Cui yM, Zhang NJ, et ai. (2013) Tiam1 siirtogeenisiä hiiriä lisääntynyttä Kasvain invasiivinen ja Metastasoitunut potentiaali peräsuolen syövän jälkeen 1,2-dimetyylihydratsiinin hoito. PLoS ONE 8 (9): e73077. doi: 10,1371 /journal.pone.0073077

Editor: Xin-Yuan Guan, The University of Hong Kong, Kiina

vastaanotettu: 21 kesäkuu 2013 Hyväksytty: 14 heinäkuu 2013; Julkaistu: 12 syyskuu 2013

Copyright: © 2013 Yu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Natural Science Foundation of China (nos: 81001111, 81071735, 30901791) ja Natural Science Foundation of Guangdongin (S2011040003696) kantavassa rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) osallistuu kolmanneksi eniten syöpä tyyppi länsimaissa . Toistuminen ja etäpesäke ovat kuolinsyistä CRC. Noin 50 prosenttia potilaista, joilla CRC kuolee, koska komplikaatio etäpesäkkeiden. Vaikka tutkijat ovat tunnistaneet useita geenejä, jotka ovat vastuussa kehittämiseen CRC, molekyyli tapahtumia, jotka ovat mukana monimutkaisia ​​prosesseja CRC etäpesäkkeiden edelleen suureksi osaksi tuntemattomia.

T-lymfooma ja metastaasit 1 (Tiam1), guaniininukleotidiä vaihto tekijä, joka selektiivisesti aktivoi Rho kaltainen GTPaa- Rac, tunnistettiin alun perin hyökkäys-asiakkuutta ja etäpesäkkeiden aiheuttavia geenin T-lymfooman soluissa [1]. Tiam1 on potentiaalinen muokkaaja kasvaimen aloittamista ja etenemistä. Se osoittautui olla mukana Ras-aktiinin polymeroinnin, soluadheesiota ja liikkuvuus, solujen eloonjäämistä ja solusyklin etenemisen [2], [3]. Kuitenkin tutkimukset ovat ehdottaneet, että Tiam1 on vastakkaiset vaikutukset eri syöpiä. Jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että ylösajon Tiam1 korreloi aggressiiviseen käyttäytymiseen ihmisen syövän ja huono kliininen tulos potilaiden useita erilaisia ​​pahanlaatuisia kasvaimia, kuten rintasyöpää, paksusuolen syöpä, eturauhasen syöpä, maksasyöpä, nenänielun karsinooma, sekä ruokatorven squamous cell carcinoma (ESCC) [4], [5], [6], [7], [8], [9]. Kun taas päinvastoin, Tiam1 tehostaa homotyyppisessä solu-solu-adheesion ja estää hyökkäyksen munuaissolukarsinooma soluihin [10]. Lisäksi Tiam1 soittaa invaasio-vaimennin rooli Madin-Darby koiran munuaissolut (MDCK) soluja [11]. Tiam1 knock-out hiiri on suhteellisen vastustuskykyinen kemiallisen induktioon ihokasvainten [12]. Vuonna kudosteknologian ihmisen ihoa, Tiam1 ehtyminen ihon fibroblasteista johti tehostetun invasiivisuus epidermaalisen keratinosyyttien kanssa premaligni ominaisuuksia [13].

edellinen tutkimus osoitti, että Tiam1 oli yläreguloituja CRC kudoksissa ja korkean ilmentymistason Tiam1 oli tiiviisti aggressiivinen ja etäpesäkkeiden mahdollisuus CRC. Hiljentäminen Tiam1 CRC solulinjoissa johti estoon solumigraation ja invaasiota in vitro, ja etäpesäkkeitä nude-hiirissä [9]. Jotta voidaan paremmin ymmärtää rooli ja mekanismi Tiam1 etenemisessä CRC, me syntyy pCDFl-Tiaml-copGFP siirtogeenisiä hiiriä ja tutki vaikutusta Tiaml kehitykseen karsinoomien paksusuolen ja peräsuolen jotka synnyttivät kemiallinen karsinogeeni (DMH ), yhdistettyjen histologisia havainto paikallisen invaasion ja etäinen etäpesäke.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

tutkimus toteutettiin tiukasti mukaisesti suosituksia opas Care ja käyttö Laboratory Animals of National Institutes of Health. Protokolla hyväksyi valiokunnan Ethics Eläinkokeiden Etelä Medical University (Luvan numero: scxK2007 – 0005). Kaikki Leikkaus suoritettiin natrium- pentobarbitaalianestesiassa, ja yritettiin minimoida kärsimyksen.

Generation of Tiam1 /C1199-CopGFP siirtogeenisiä hiiriä

täyspitkä cDNA Tiam1 peräisin C1199 kloonattiin osaksi lentivirus vector pCDF1-CopGFP. Siirtogeenisiä hiiriä tuotettiin menetelmällä pronukleaarinen microinlectlon. Yhteensä 60 super-ovulated ja 33 pseudo-raskaana ICR käytettiin kokeeseen. Lentivirukselle sisältävä TIAM1 /EGFP-geeni mikroruiskutettiin esitumaan jokaisen alkion. Alkioita viljeltiin 72 h FHM keskipitkällä ja morulaksi vaiheen alkiot siirrettiin munajohtimista 0-5 jälkeisen päivän yhdyntä valeraskaana. Hiiret olivat raskaana ja pennut olivat toimitettu 20-21 päivää.

tunnistaminen Tiam1 /EGFP siirtogeenisiä hiiriä

Normal ICR hiiriä käytettiin kontrollina. Koko kehon fluoresenssikuvantamisella (Lighttools, Edmonton, Alberta, Kanada), PCR, ja immunohistokemiallinen tekniikat (IHC) levitettiin peräkkäin tunnistamaan siirtogeenisiä hiiriä. Siirtogeenisiä hiiriä ja niiden ei-siirtogeenisiä poikueesta eläimiä genotyypitettiin PCR: llä käyttäen seuraavia alukkeita Tiam1: 5 ’AAGACGTACTCAGGCCATGTCC 3’ ja 5 ’GACCCAAATGTCGCAGTCAG 3’. Genominen DNA valmistettiin hiiren hännän koepaloja. PCR lämpötilaprofiili oli 94 ° C 45 s, 58 ° C: ssa 45 s, ja 72 ° C: ssa 45 s pidentämistä Viimeisen syklin 10 minuuttia 72 ° C: ssa. PCR-tuotteet analysoitiin agaroosigeelielektroforeesilla etidiumbromidilla UV-valossa. PCR-analyysi paljasti, että 60 124 eläimet olivat siirtogeenisiä. IHC suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [9]. Kanin polyklonaalinen vasta-aine Tiam1 (Santa Cruz, CA, USA, laimennus 1: 200), hiiren anti-β-kateniinin (BD, MO, 1: 500), hiiren anti-E-kadheriini (BD, MO, 1: 500) , hiiren anti-vimentiinista (Cell Signaling Technology, PO, 1: 200) käytettiin.

RNA ja käänteiskopiointi-PCR: n (RT-PCR) B

Kokonais-RNA uutettiin käyttäen Trizol-reagenssia (Invitrogen) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. RNAwas esikäsitelty DNaasia ja käytetään cDNAsynthesis satunnaisella heksameerejä. MRNA: n Tiam1 monistettiin PCR: llä cDNA-näytteistä siirtogeenisten hiirten ja ei-siirtogeenisiä eläimiä. Seuraavia alukkeita käytettiin monistamiseen Tiam1: sense-aluketta, 5-AAGACGrACTCAGGCCATGTCC-3; antisense-aluke, 5-GACCCAAATGTCGCAGTCA-3. Glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi monistettiin sisäisenä kontrollina käyttämällä sense-aluketta, 5-AATCCCATCACCATCTTCCA-3, ja antisense-aluketta, 5-CCTGCTTCACCACCTTCTTG-3. Sopiva koko PCR-tuotteiden varmistettiin agaroosigeelielektroforeesilla.

Hoito DMH

tutkimiseksi vaikutuksen Tiam1 on peräsuolen syövän kehittymisen ja etenemisen, Tiam1 siirtogeenisiä ja siirtogeenisissä hiiret satunnaistettiin kahteen ryhmiä, vastaavasti, käsitellään joko DMH (testi ryhmiä) vai ei (kontrolliryhmiin). Kontrolliryhmiin 1 ja 2 annettiin 0,1 ml PBS: ää i.p. kerran viikossa 10 viikon ajan. Testiryhmiä annettiin karsinogeeniksi DMH (20 mg /kg) läpi vatsaonteloon (i.p.) injektiota kerran viikossa 24 viikon iästä alkaen 4 viikkoa Tiam1 siirtogeenisiä tai ei-siirtogeenisiä hiiriä. Kaikki hiiret saivat vapaasti vesijohtovettä ja standardin ruokavalio. Kaikki eläimet tarkkailtiin päivittäin kliinisten sairauden merkit.

Tulokset

Generation ja tunnistaminen Tiam1 /EGFP siirtogeenisiä hiiriä

yhteensä 823 munaa saatiin 60 super-ovulated hiirillä. Tiam1-EGFP rekombinoitua lentivirus on mikroruiskutettiin perivitelline tilaa 628 munaa, joita siirrettiin sitten 33 ICR pseudo-raskaana hiirillä. 21 33 valeraskaan hiiret kyllästetty. 67 potentiaali Tiam1 /EGFP siirtogeenisiä hiiriä syntyi. Viisi positiivista Tiam1-EGFP siirtogeenisiä hiiriä, jotka on nimetty F0-17 (♂), F0-36 (♀), F0-48 (♂), F0-52 (♀) ja F0-61 (♀), jotka syntyvät pro ydinvoima helmiä mikroinjektiotekniikalla. Yhteensä 44 positiivista F1 (kuvio S1) ja 146 positiivisen F2 Tiam1 hiiret syntyvät F0-36 (♀) ja F0-48 (♂). Kaikki positiiviset Tiam1-geenin PCR-sekvenssit sovitettu Tiam1 geenin sekvenssi, joka on saatavilla NCBI (tuloksia ei ole esitetty).

koko kehon fluoresenssin kuvantamisen osoitti vahvaa GFP-signaalin elimissä F1 homotsygoottisten Tiam1 /EGFP siirtogeenisiä hiiriä, kuten paksusuoli-, vatsa-, keuhko-, munuais- ja Tesis (kuvio 1A). Jäädytetyt osassa näistä elinten EGFP siirtogeenisiä hiiriä myös näyttää vahva GFP Signa (kuvio 1 B). Kuitenkin, mitään signaalia tai vain heikko signaali havaittiin villityypin hiirissä (kuvio 1A ja 1 B). Immunohistokemiallista analyysiä käyttäen kanin anti-humaani Tiam1 vasta-aine, vahvistivat, että ihmisen Tiam1 proteiini ilmentyy voimakkaasti paksusuolessa Tiam1 siirtogeenisiä hiiriä, kun se on vain heikosti havaittu villityypin hiirissä (kuvio 1C).

( A ja B) Havainto EGFP ja Tiam1 ilmentymisen differente elimet (A) ja vastaavat pakastetut osat (B) pCDFl-Tiaml-copGFP transgeenisiä (TG) hiirille ja villityypin (WT) hiirillä koko kehon fluoresenssin kuvantamisjärjestelmä . (C) havaitseminen Tiaml proteiinin paksusuolen ja pCDFl-Tiaml-copGFP transgeenisissä hiirissä ja villin tyypin hiirillä kautta immunohistokemiallisesti värjäämällä. (D) havaitseminen Tiaml mRNA paksusuolen 10 pCDFl-Tiaml-copGFP transgeenisissä hiirissä ja 1 villin tyypin hiirissä siten RT-PCR: llä.

humaani Tiam1 mRNA paksusuolessa analysoitiin RT-PCR: llä, ja voitiin havaita vain in Tiam1 siirtogeenisiä hiiriä, joissa β-Actin käytetään ilmaisua ohjaus (kuvio 1 D). Hoidon DMH ei indusoida endogeenisen Tiam1 mRNA-tasolla, ei siirtogeenisissä eläimissä eikä niiden ei-siirtogeenisten poikueesta (tuloksia ei ole esitetty).

vaikutus pCDFl-Tiaml-copGFP on DMH indusoi tuumorigeneesiä

Kahdeksan viikon kuluttua DMH-käsittely, hyperplasia imukudoksen on suoliliepeen ja suolen seinämän sekä pCDFl-Tiaml-copGFP (3/5) ja ei-siirtogeenisiä poikueesta (2/5) havaittiin. Hyperrugosity että peräsuolen limakalvo ja paksuuntuminen suoliepiteeliin esiintyi molemmissa siirtogeenisiä (4/5) ja villityypin hiiriin (3/5) 12 viikon ajan DMH-hoidon. 16 viikkoa myöhemmin, suolen kasvainten havaittiin molemmissa siirtogeenisissä (2/5) ja villityypin hiiriin (1/5). 20 viikkoa myöhemmin, ja peräsuolen kasvaimen tapahtui sekä siirtogeenisissä (1/6) ja villityypin hiiriin (1/6), joka on histologisesti todettu paksusuolen adenokarsinooma (taulukko 1). Seuraavat DMH-käsittely, 21/21 (100%) Tiam1 transgeenisissä hiirissä ja 18/21 (85,7%) ei-siirtogeenisissä poikueesta kehittynyt kasvaimia 32 viikkoa (taulukko 1). Kuvio 2A ja 2C osoitti edustaja makro-vaurioita ja histologia muutokset (H 0,001) kuin villityypin hiirillä (4,929 ± 0,580 mm

3).

(A) Distribution Kolorektaalituumorien hiirillä DMH hoidon. (B) vertailu tilavuus peräsuolen kasvaimen siirtogeenisiä hiiriä ja villityypin hiirillä.

vaikutus pCDFl-Tiaml-copGFP invasiivisista ja metastaattisen kyvyn DMH aiheuttama CRC

määrittämiseksi luonne peräsuolen massojen, selvitimme kasvaimia käyttäen histologisia menetelmiä. Mikroskooppisella analyysillä, ei-siirtogeenisissä hiirissä, useimmat kasvaimet kehitetty DMH hoito näkyy vaurioita vain rajoitetusti syvyys neoplastisten hyökkäystä. Kuten on esitetty kuviossa 4A-B, neoplastisen paksusuolen epiteelin muodostivat plakkia kuin massa, joka on erillään viereisestä normaali limakalvo. Neoplastiset rauhaset laajennettu ja sen läpi submukoosan, mutta ei päittäin lihaksen seinä.

(A-B) Kasvaimet kehitetty DMH hoito näkyy vaurioita vain rajallinen syvyys neoplastisten hyökkäystä. Neoplastiset rauhaset laajennettu ja sen läpi submukoosan, mutta ei päittäin lihas seinään. (C-F) Tiaml siirtogeenisiä hiiriä, jotka sisältyvät aggressiivisempia kasvaimia ja näytetään syvempiin neoplastiset solut lihakseen kerrokseen sekä imusolmuke sisällä suolen seinämän (G-H).

Yhdenmukainen Suuremmat kasvaimen tilavuus kehitetty DMH hoidon Tiaml siirtogeenisiä hiiriä sisältyi myös aggressiivisempia kasvaimia ja näytetään syvempiin neoplastiset solut lihakseen kerros (kuvio 4C-F) sekä imusolmuke sisällä suolen seinämän (Kuva 4G-H) , jossa he muodostivat erillisiä rauhaset, verrattuna ei-siirtogeenisiä littermates. Nämä aggressiiviset kasvaimet tunkeutuneet vapaasti kaikkien kerrosten läpi suolen muodostaen suuria limaa täynnä rauhaset.

lisäksi paikallista invaasiota ja imusolmukekudoksesta osallistumista, Tiaml siirtogeenisiä hiiriä myös syntyy kasvaimia levinnyt kaukaisiin kohteisiin, kuten vatsakalvon, maksa ja keuhko (Kuva 5). Kuten esitetty taulukossa 1, 52,4% (11/21) Tiaml transgeenisissä hiirissä tuotettu etäpesäkkeiden 32 viikkoa seuraavan DMH hoidon. Ei kuitenkaan etäpesäkkeiden tai mikro-etäpesäkeleesioita havaittiin kaikissa 21 ei-siirtogeenisiä hiiriä samanaikaisesti kohdan (taulukko 1). Vielä enemmän tunkeutumisen tuumorisolujen pienten alusten havaittiin myös Tiaml siirtogeenisissä hiirissä, mutta ei ei-siirtogeenisissä hiirissä (kuvio 5).

aktivointi β-kateniinin reitin liittyi pCDFl -Tiaml-copGFP siirtogeenisiä eläimiä

vieressä tarkasteltiin ilmentymisen β-kateniinin, epiteelin markkeri E-kadheriini ja mesenkymaaliset merkki vimentiinista kasvaimissa kehitetty villityypin hiirissä. Kuten kuviossa 6 on esitetty, immunohistokemiallinen analyysi näkyy, että kasvaimia muodostunut Tiaml-siirtogeenisissä ryhmä oli korkeampi ilmentyminen koko ja ydinvoiman β-kateniinin, ja korkeammat heikomman värjäyksen E-kadheriinin, kun taas vahvempi värjäys vimentiinista, verrattuna villin tyypin ryhmä .

keskustelu

Tiam1 ehdotetaan pelata rooli kehityksen ja etenemisen ihmisen syövissä. On molekyylitason, in vitro-tutkimuksissa edellyttäen oivalluksia vaikutuksen Tiam1 syövän synnyn ja kasvaimen invaasio. Lisäksi in vivo tutkimukset osoittivat, että Tiam1 osallisina syövän kehitystä ja etäpesäkkeiden nude-hiirissä.

edellinen tutkimus on osoittanut, että Tiam1 tiiviisti korreloi metastaattisen potentiaalin kolorektaalisyöpä, ja sen loppuminen vähensi kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden kyky CRC-solujen [9]. Jotta voidaan paremmin ymmärtää rooli ja mekanismi Tiam1 CRC etäpesäkkeitä in vivo, tässä tutkimuksessa kehitimme pCDFl-Tiaml-copGFP hiiret ja indusoi peräsuolen kasvainten muodostumisen kautta hoitoon DMH. Kautta histologinen analyysi, huomasimme, että vaikka kasvaimen esiintymistiheys ja kasvaimen määrä eläintä kohden ei vaikuttanut Tiam1, keskimääräinen kasvainten lisättiin merkittävästi Tiam1-siirtogeenisiä ryhmä kuin villityypin hiirillä. Lisäksi olemme havainneet, että Tiam1 hiiret muodostivat aggressiivisempia kasvaimia kuten paikallisia invaasiota ja imusolmukekudoksesta osallistumista, verrattuna villin tyypin hiiriin. Vielä tärkeämpää on, Tiaml siirtogeenisiä hiiriä myös syntyy kasvaimia, jotka leviävät kaukaisiin kohtiin, kuten vatsakalvon, maksa ja keuhko, sekä tunkeutumisen tuumorisolujen pieniin aluksiin. Vaikka mikään kaukainen etäpesäke tai mikrometastaattisessa vaurioita havaittiin villityypin ryhmässä.

Kaksi vastakkaista toimintoja Tiam1 cellular maahanmuuttoa, invaasio, ja tarttuvuus tukevat aikaisempia tutkimuksia eri solujen yhteyksissä. Toisaalta, on raportoitu, että läsnä Tiam1 yleensä liittyvän hyvän ennusteen mahasyövän [14]. Ras-transformoitujen Madin-Darby koiran munuaissolut (MDCK) soluja ja NIH3T3-solut, Tiam1 indusoi mesenkyymikasvaimia-epiteelikasvaimet siirtyminen (MET) ja estää solujen vaeltaminen tehostamalla kadheriinin välittämiä solun-soluadheesiota [11], [15], [16 ]. Ihmisen munuaissyöpä solulinjat, Tiam1 estää hyökkäyksen kautta Ras-indusoidun ilmentymisen lisääntyminen kudoksen estäjä metalloproteinaasien-1 (TIMP-1) ja TIMP-2 [10]. On todistettu, että Rac signalointi voisi antagonisoida Rho aktiivisuutta suoraan GTPaasi tasolla, ja vastavuoroinen tasapaino Rac ja Rho aktiivisuus määrittää solun morfologiassa, muuttavien ja invasiivisen kyvyn [17]. Siksi esto vaikutukset Tiam1 siirtolaisuudesta ja invaasio eri yhteyksissä saattaa johtua Ras-välitteisen suppression Rho aktiivisuuden.

Toisaalta, on olemassa myös lukuisia raportteja, jotka tukivat roolia Tiam1 edistämisessä pahanlaatuisen muutoksen, kasvaimen leviäminen, invaasio, ja etäpesäkkeiden [9], [18], [19], [20], [21]. Tiam1 on liitetty syövän syntyyn NIH3T3-soluihin [22]. Lisäksi Tiam1 lisää invaasio ja etäpesäkkeiden useissa ihmisen syövän solulinjojen melanooma ja rintasyöpä [18], [23]. Lisäksi meidän edellinen tutkimus ehdottaa myös tärkeä rooli Tiam1 maahanmuutto- ja etäpesäkkeiden CRC solujen [9]. Nykyinen tutkimus osoittaa, että käyttöönotto ihmisen Tiam1 geeni ituradan merkittävästi parannettu hyökkäyksen ja etäpesäkkeiden kolorektaalisyövän, kun taas vain huomaamattomasti kehitystä edistävä Kolorektaalituumorien jotka aiheutettiin alla DMH hoitoa. Näin tietomme tukevat pääasiassa invasiivisen ja metastaattisen edistäminen toiminta Tiam1 CRC. Vielä toisessa tutkimuksessa, vertaamalla kasvaimen biologista käyttäytymistä APC mutantti Min (useita suoliston kasvain) hiiriä, jotka ekspressoivat tai puuttuu Tiam1, havaitsivat, että Tiam1 ehtyminen aiheutti tehostettu hyökkäys pahanlaatuisten suoliston kasvaimia, vaikka muodostumista ja kasvua polyyppien in vivo oli merkitsevästi vähennetään [24]. Ilmeinen ristiriita nykyisen tulosten ja edellä mainitun tutkimuksen voisi mahdollisesti johtua APC mutantti taustan ja DMH hoitoa. Siten erilaiset vaikutukset Tiam1 siirtolaisuudesta ja invaasio todennäköisesti riippuvat eri yhteyksissä kuten solutyypistä, kasvualusta, transformaatio tilan ja aktivointi tilaa pieniä G-proteiineja erilaisissa soluissa. Paremmin havainnollistaa Tiam1 rooli syövän etenemisen ja etäpesäkkeiden, lisätutkimuksia on välttämätöntä parantaa ymmärrystämme Tiam1 alkupään sääntelyä.

Wnt /β-kateniinin signalointi kriittisesti säätelee kehittymistä ja etenemistä CRC [25]. Nuclear lokalisaatio β-kateniinin on ratkaisevan tärkeää kanoninen Wnt signaloinnin aktivointi. Jäsenet Rho perheen pieniä GTPaaseja, kuten RhoA, Rac1, ja Cdc42, on osoitettu osallistumaan edistämiseen aktiivisuuden Wnt signalointia ja valvoa Planar solun polariteetin Drosophila [26]. Rac1 aktivointi indusoi tumaansiirtymiseen of β-kateniinin [27]. Koska Rac1-spesifinen vaihto tekijä, Tiam1 edistää vuorovaikutusta Rac1 ja β-kateniinin, ja on välttämätöntä Rac1 aktivaatio kanonisen Wnt-reitin [28]. Esillä olevassa tutkimuksessa osoitimme, että käyttöönotto Tiam1 osaksi ituradan aiheutti merkittävän kasvava ydinvoiman kertyminen β-kateniinin, vähentyneestä kalvo E-kadheriinin ja rikastumista vimentiinista vuonna Kolorektaalituumorien enemmän invasiivisia kyky. Siten meidän nykyinen tutkimus antaa näyttöä, että Tiam1 edistää invaasio ja etäpesäkkeiden CRC, ja implicates että Wnt /β-kateniinin reitin saattaa osalliseksi vaikutus Tiam1 CRC invaasio ja etäpesäkkeiden in vivo.

Yhteenvetona tutkimuksemme on antanut in vivo todiste että Tiam1 edistää invaasio ja etäpesäkkeiden CRC, luultavasti aktivoimalla Wntβ-kateniinin signalointireitin. Kuitenkin Wnt /β-kateniinin signalointireitistä voinut olla ainoa mekanismi, jonka avulla Tiam1 voisi edistää etenemistä CRC. Lisätutkimuksia tarvitaan luomaan sääntelyn verkosto Tiam1 syövän etenemiseen.

tukeminen Information

Kuva S1.

tunnistaminen Tiam1 /EGFP siirtogeenisiä hiiriä PCR. Siirtogeenisiä hiiriä ja niiden ei-siirtogeenisiä poikueesta eläimiä genotyypitettiin PCR: llä käyttäen seuraavia alukkeita Tiam1: 5 ’AAGACGTACTCAGGCCATGTCC 3’ ja 5 ’GACCCAAATGTCGCAGTCAG 3’. Genominen DNA valmistettiin hiiren hännän koepaloja.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0073077.s001

(TIF)