Krooninen sairaus

tiivistelmä

Johdanto

Genetic aberrancies sisällä kasvutekijän reseptorin (EGFR) koulutusjakso liittyy hoitotulosten EGFR-tyrosiinikinaasin estäjät (TKI) kehittyneissä ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC). Kuitenkin vaikutus kemoterapia on EGFR-liittyvä geenien muutoksia ei ole määritelty NSCLC. Tutkimuksemme tavoitteena on selvittää vaikutusta neoadjuvanttikemoterapian (Neoadj-Chemo) on EGFR aktivoivia mutaatioita ja liittyvät EGFR-TKI vastus liittyviä geenejä.

Potilaat ja menetelmät

Hyväksytty kasvain näytteet saatiin takautuvasti 66 NSCLC potilaiden (vaiheet Hb-IIIb) vastaavat ennalta ja post Neoadj-Chemo. EGFR mutaatioita havaittiin denaturoivalla korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (DHPLC) ja vahvistettiin Amplification Refractory Mutation System teknologia (ARMS), KRAS mutaatioita, T790M mutaatio ja c-MET-monistus tunnistettiin käyttämällä polymeraasiketjureaktiota-restriktiofragmenttipituuspolymorfismin (PCR-RFLP ), ARMS, ja reaaliaikainen PCR, vastaavasti.

tulokset

Ennen Neoadj-Chemo, EGFR mutaatioita tunnistettiin 33,3% (22/66) NSCLC potilaiden. Vain 18,2% (12/66) potilaista suorittaa EGFR mutaatioita jälkeen Neoadj-Chemo (p = 0,013). Mediaani huippuarvo EGFR 19 eksonista mutaatioita vähentynyt ei-merkitsevästi jälkeen Neoadj-Chemo. KRAS-mutaatio laski 4,6% (3/66) ja 3,0% (2/66) ja Neoadj-Chemo. Vaikka yleinen potilaiden prosenttiosuus, joilla c-MET monistuksissa (6,1% [4/66]) eivät muuttuneet Neoadj-Chemo, kaksi potilasta siirtynyt negatiivisesta positiiviseen c-MET vahvistus, ja kaksi potilasta päinvastaiseksi nämä muutokset post-Neoadj- kemoterapia. T790M mutaatiot olivat poissa kaikista näytteistä.

Johtopäätös

neoadjuvanttikemoterapian pyrkii pienentämään mutaation taajuus EGFR-mutaatio ja alavirran geenien, mikä viittaa siihen, että reaaliaikainen näytteiden analyysi geneettisen aberrancies sisällä EGFR reittejä on tärkeä arvo hahmotella tiettyjä potilasryhmiä ja helpottaa yksilöllinen hoito.

Citation: Wang S, An T, Duan J, Zhang L, Wu M, Zhou Q, et al. (2013) Muutokset EGFR ja Related Geenit seuraava Neo-adjuvanttihoitoa Kiinan Potilaat, joilla on ei-pienisoluinen keuhkosyöpä. PLoS ONE 8 (3): e51021. doi: 10,1371 /journal.pone.0051021

Editor: John D. Minna, Univesity Texas Southwestern Medical Center at Dallas, Yhdysvallat

vastaanotettu: 11 elokuu 2012; Hyväksytty: 29 lokakuu 2012; Julkaistu: 08 maaliskuu 2013

Copyright: © 2013 Wang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: tukemana avustuksia National Natural Sciences Foundation Distinguished Young Scholars (81025012), National Natural Sciences Foundation General Program (81172235), Capital Development Foundation (2007-1023), Peking Health Systems Academic Leader (22.2.2011) ja Science and Technology Project Beijing (Z090507017709015), National Natural Sciences Foundation China Youth Science Foundation (81101726). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

epidermaalisen kasvutekijän reseptori-tyrosiinikinaasin estäjät (EGFR-TKI) edustavat vallankumouksellinen yksilöllisiä hoitoja NSCLC potilaiden osajoukko, joka liittyy erityisiä EGFR mutaatioita, jotka ennustavat suotuisa kliininen vaste EGFR-TKI: [1] – [3]. Somaattisista mutaatioista eksoneissa 19 tai 21 muodostavat noin 90% kaikista EGFR-aktivoivia mutaatioita, ja tunnistaminen Näiden mutaatioiden voidaan soveltaa valittaessa keuhkosyövän hoidossa. Useat faasin III kliinisissä tutkimuksissa ovat vahvistaneet, että läsnäolo EGFR-aktivoivia mutaatioita ennustaa myönteisen tuloksen EGFR-TKI (eli gefitinibi ja erlotinibi) verrattuna kaksinkertainen kemoterapiaa, ensilinjan hoitoa NSCLC, ja molemmissa Aasian ja valkoihoinen kehittynyt pienisoluista keuhkosyöpää [4] – [7]. Kaikki edellä viittaavat siihen, että EGFR-mutaatio asema säädetään lopputulos EGFR-TKI riippumatta etnisen [8].

tulos EGFR-TKI-terapialle määräytyy paitsi läsnäolo EGFR herkistävää mutaatioita, vaan myös EGFR kestävä tai sen ohitusleikkaus tai alavirran liittyviä geenejä aberrances. Erityisesti, EGFR T790M mutaatio, havaittiin mekanismi sekä hankittujen ja ensisijainen EGFR-TKI vastus [9], ja monistaminen c-MET onkogeenin [10] on kuvattu hankittu resistenssi, kun taas KRAS mutaatio liittyy ensisijaisesti vastus [11] . Nämä havainnot ovat johtaneet kliinisiin tutkimuksiin soveltamalla Uusien hoitomuotojen suunnattu resistenssimekanismit sekä lupaavia alustavia tuloksia laboratoriossa ja kliinisissä tutkimuksissa.

havaitseminen EGFR mutaatioita nykyisin suositellaan valittaessa potilaita, jotka voisivat hyötyä ensilinjan EGFR-TKI-terapialle. On kuitenkin tiedetä tila EGFR-mutaatio ja alavirtavastuksen liittyvien geenien aberrances (

ts.

, KRAS mutaatioita, T790M, tai c-MET vahvistus) ovat yhdenmukaisia ​​ennen ja jälkeen kemoterapiaa näytteitä. Sen vuoksi on tarpeen arvioida vaikutuksen kemoterapian kasvaimen molekyyliprofiilien. Chin et al ilmoitti, että ennen altistumista platina lääkeaineet saattavat vähentää hyötyä jälkikäsitellään EGFR-TKI varten erlotinibin herkkiä EGFR-mutantti NSCLC solun kautta fosfatidyyli 3-kinaasi /AKT selviytymisreittiin [12]. Viimeaikaiset tutkimuksessa tutkittiin vaikutusta kemoterapia on EGFR mutatoitunut taajuuksilla käyttäen kaksi ikäluokat kuten plasma DNA pitkälle NSCLC ja ennen ja jälkeen leikkauksen kudosnäytteet potilailla, joilla on paikallisesti edennyt NSCLC, ja tutki mahdollinen mekanismi kemoterapian liittyvä poikkeama EGFR-mutaatio. Tulokset viittasivat siihen, että kemoterapia voi vähentää E

GFR

mutaatio taajuuksia potilailla, joilla NSCLC, todennäköisesti seurausta etuoikeutettu vasteen Saharan kloonien EGFR mutaatioita kasvaimissa heterogeeninen kasvainsolupopulaatioissa [13]. Tietääksemme harvat tutkimukset ovat arvioineet kliinisten näytteiden vaikutuksen kemoterapia on EGFR-TKI vastus liittyviä geenejä.

Siksi arveltu, että kemoterapia saattaa vaikuttaa Mutaatiofrekvenssi EGFR-mutaatio ja loppupään geenejä, joten se voi aiheuttaa vaikutusta rooli näiden geenien työskentelee selektiivisiä markkereita yksilöllinen hoito EGFR-TKI. Koska jatkuvuus prophase tutkimus, nykyinen tutkimus selvitti vaikutuksia kemoterapiaa molemmin EGFR aktivoivia mutaatioita, erityisesti, arvioidaan vaihtelut mutaatio määrä EGFR eksonissa 19 ja kliinistä merkitystä, ja tutki tarkemmin mahdollisia muutoksia EGFR-TKI vastus liittyvien geenien , kuten T790M, KRAS ja c-MET aberrances käyttäen samaa kohortti sovitetun kasvain kudosnäytteiden esi- ja post Neoadj-Chemo vaiheesta Hb-IIIb pienisoluista keuhkosyöpää.

potilaat ja menetelmät

Patient

Potilaat osallistuivat tähän retrospektiivinen tutkimus oli yli 18 vuotta, ja näytteillä vaihe II B-IIIB NSCLC jotka kooltaan mitattavissa oleva tauti ennen leikkausta. Hyväksytyillä potilailla oli myös ECOG (Eastern Cooperative Oncology Group) suorituskyky oli 0-2 ja oli saanut 2-4 sykliä Neoadj-Chemo ilman aikaisempaa kemoterapiaa tai biologinen /immunologinen hoito. Kaikki potilaat jos täsmäsi kudosnäytteitä koepaloja suoritetaan esi- Neoadj-Chemo ja asemointia jälkeinen Neoadj-Chemo.

Kuusikymmentäkuusi potilailla, jotka seulottiin tietokantaan perustettiin vuonna 1999, mukaan lukien yli 1900 potilasta, joilla kliiniset tiedot täytti edellä mainitut kriteerit ja käsiteltiin Pekingissä Cancer Hospital syyskuusta 2001 ja kesäkuun 2010 mennessä (mukaan edellytys ilmoittautuminen tämä on 9 vuotta span, mutta suurin osa kerättiin 2005-2010). Käytettävissä olevat kemoterapiahoitojen mukana Platinapohjaisen lääkkeet (

esim.

, Sisplatiini tai karboplatiini yhdistettynä gemsitabiinin tai taksaaneja). Röntgenkuvauksilla vaste Neoadj-Chemo määritettiin käyttämällä RECIST (Response arviointiperusteet kiinteitä kasvaimia) suuntaviivat [14]. Kaikki potilaat toimitti kirjallisen tietoisen suostumuksen biomarkkereiden analyysiin niiden ensimmäistä kertaa sairaalahoitoa. Tutkimuksen protokolla hyväksyi institutionaalisten eettisen komitean Pekingin Cancer sairaalan.

Ethics lausunto

Kaikki potilaat kunhan kirjallinen lupa varten biomarkkereiden analyysiin. Tutkimuksen protokolla hyväksyi Institutional eettinen komitea Pekingissä syövän sairaalassa. Emme tutkimustyötä ulkopuolella asuinmaan. Kaikki osallistujat tarjota kirjallinen lupa osallistua tähän tutkimukseen. Meidän eettiset toimikunnat hyväksyi tämän lupamenettelyssä. Yksittäiset Tämän käsikirjoitus on antanut kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen julkaista nämä runko-osat.

Näytteenotto ja DNA: n eristämiseksi

kasvain kudosten ennen ja jälkeen Neoadj-Chemo hoitojen prosessoitiin genomista DNA eristäminen käyttämällä EZNA FFPE DNA sarjat (Omega Biotek, USA). Välttämiseksi vaikutuksen Neoadj-Chemo aiheuttama nekroosi kudosten EGFR ja liittyvät geenit aberrance löydöistä, leikkauksen jälkeinen näytteet makrotason leikattiin parafinoidut kirurginen kudosleikkeiden varmistaa, että vain kasvaimen kudokset saatiin. Kasvaimen sisältö on tallennettu kullekin näytteelle käyttäen välittömästi vieressä kudosleikkeiden.

EGFR mutaation havaitseminen denaturoivalla korkean suorituskyvyn nestekromatografialla (DHPLC) ja monistaminen Tulenkestävät Mutation System (ARMS) B

analysoitiin kaikki vastaavat näytteet samassa kunnossa tasaamiseksi havaitsemisen olosuhteissa. EGFR eksoni 19 poisto tai eksonin 21 substituoidun mutaatioita havaittiin menetelmällä raportoinut meille aiemmin [15].

ARMS, herkempi menetelmä, käytettiin arvioimaan uudelleen tapauksissa EGFR-mutaatio poikkeamia ennalta – ja post neoadjuvanttikemoterapian [13].

semikvantitatiivinen analyysi eksonin 19 mutaation runsaus suoritettiin laskemalla suhde piikkien korkeudet mutantti (M) ja villin tyypin /normaali (W) tuotteet (eli M /W). Tämä analyysi ei jatkettu eksonia 21, koska M ja W huiput päällekkäin tässä eksonissa.

PCR-RFLP KRAS mutaatioiden

PCR-RFLP suoritettiin analysoida KRAS mutaatiostatus mukaan standardin protokollat ​​[16]. PCR-alukkeet suunniteltiin monistamaan sekvenssejä ympäröivän kodonit 12 ja 13: n eksonissa 1. KRAS; nämä kodonit ovat mukana noin 85% aktivoivia KRAS mutaatioita.

Quantitative reaaliaikainen PCR c-MET

Pariksi kasvain analysoitiin c-MET geenikopiomäärä käyttäen reaaliaikaista PCR havaitseminen standardimenetelmien mukaisesti. Kasvaimen näyte määriteltiin vahvistus-positiivinen, jos sen suhde ylitti seuraavasti: keskiarvo (M) + 2 x standardipoikkeama (SD) [17]. HCC827 (Homo sapiens (ihmisen) keuhkoadenokarsinooma, ATCC CRL-2868) käytettiin negatiivisena kontrollina.

Amplification Refractory Mutation System havaitsemista EGFR T790M

Amplification Refractory Mutation System (ARMS) tekniikka käytettiin havaitsemaan T790M mutaatio. Havaitsemismenetelmä ja syrjinnän perusteita mukaan manufactory (Amoy Diagnostics Co., Ltd).

Tilastollinen

Taajuus jäsentely ja tilastotiivistelmät toimitettiin luonnehtia tietojen jakaminen. Mcnemarin testi levitettiin verrata muutosta mutaation aseman (

ts.

, EGFR [mukaan lukien T790M] mutaatiot, KRAS mutaatio, ja c-MET vahvistus) ennen ja jälkeen hoidon. Cochran-Armitage suuntaus testiä käytettiin testaamaan, onko muutos mutaatiostatus liittyi kliiniseen tulokseen suhteen osittainen vaste, stabiili tauti. Yhdistysten pariton kategorisen muuttujia analysoitiin käyttäen chi-neliö testi, paitsi että Fisherin testiä käytettiin pienestä otoksesta (n 5 missä tahansa solussa kontingenssitaulukkomenetelmillä). Wilcoxonin summa testiä sovellettiin vertaamaan mutantti runsaasti EGFR 19 eksonin välillä ennen ja jälkeen Neoadj-chem. Tilastollinen merkitsevyys asetettiin tasolle 0,05. Kaksipuolinen suoritettiin kaikissa yhteyksissä. Kaikki laskelmat suoritettiin käyttäen SAS Version 10.0 (SAS Institute, Inc., Cary, NC).

Tulokset

Potilaan ominaisuuksista ja EGFR-mutaatio asema

perustason ominaisuudet tutkimuksen populaatio on esitetty taulukossa 1. 66 potilaista 50 urosta ja 16 naarasta, joiden ikäryhmä on 35-78 vuotta (mediaani 60 vuotta). Potilaista oli 35 (53,0%) tapauksista okasolusyöpä, 27 (40,9%) tapauksista adenokarsinooma, ja 4 tapauksia adenosquamous syöpä. Kaikki potilaat saivat Neoadj-Chemo; 63 (95,5%) käsiteltiin platina ja paklitakseli (mediaani 2 sykliä; alue 2-4 kierrosta). Perustuen 2009 American sekakomitean Cancer n keuhkosyöpä kasvain-solmu-etäpesäke pysähdyspaikan järjestelmä, 9 potilaalla diagnosoitiin vaiheessa IIb, 35 kuten vaiheessa III a ja 22 kuten vaihe IIIb ennen leikkausta; ja leikkauksen jälkeen, 11 kuten

pstage II, 27 kuten

pstageIIb, 23 kuten

pstage III a, 5 kuten

pstage IIIb. Jossa Neoadj-Chemo hoito, 39 66 potilasta saavutti osittaisen vasteen (PR), 27 potilasta luokiteltiin vakaa tauti (SD), eikä yksikään näytteillä etenevä sairaus (PD).

EGFR-mutaatio vaihtelu ennen ja jälkeen Neoadj-Chemo

Niistä 66 pienisoluista keuhkosyöpää, pre-Neoadj-Chemo EGFR-mutaatio oli 33,3% (22/66), 12 potilasta mutaatioita eksonissa 19, 9 potilaalla on mutaatioita eksonissa 21, ja 1 potilas, jolla mutaatiot molemmissa eksonien. Post-Neoadj-Chemo, EGFR mutaatio laski 18,2% (12/66), joista 7 potilaalla on mutaatiot 19 eksonin ja 5 mutaatioita eksonissa 21 (mcnemarin testi P = 0,013; Kuva 1). Johdonmukaisuutta EGFR mutaatioita ennen ja jälkeen kemoterapiaa yksilöitä oli 78,8% (52/66). Jossa Neoadj-Chemo hoitoa, EGFR tila siirtynyt välillä mutantti villityyppiseen 12 potilaalla; päinvastainen esiintyi 2 potilaalla.

Neoadj-Chemo: neoadjuvanttikemoterapian; EGFR: EGFR-mutaatio; KRAS: KRAS mutaatio; C-MET: C-MET vahvistusta

Pre-Neoadj-Chemo näytteitä, EGFR-mutaatio oli 55,6% (15/27) in adenokarsinooma, joka on suurempi kuin mitattu potilailla, joilla levyepiteeliperäinen karsinooma (17,1% [6/35]). Kuitenkin EGFR mutaationopeudet potilailla, joille tehtiin Neoadj-Chemo laski 33,3% (9/27) vuonna adenokarsinooma ja 8,57% (3/35) in okasolusyöpä, ei-merkitsevä ero (P 0,05). Neljä potilasta, joilla adenosquamous syöpä muodostuu liian pieni ryhmä tilastollista analyysia (taulukko 1).

suhde DHPLC piikkien korkeuksien liittyy EGFR mutaatio eksonissa 19

arvioimiseksi vaihtelut mutaatio määrä mutaatiot EGFR eksonin 19 oli osittain kvantitatiivisesti havaita 13 potilaalla mutaatioita tässä eksonin (kuvio 2). Suhde piikkien korkeuksien välillä ennen ja jälkeen Neoadj-Chemo muuttui kaikilla potilailla. Sen jälkeen Neoadj-Chemo, eksoni 19 mutaatiot siirtynyt positiivisesta negatiiviseksi 7 potilaalla. Piikin korkeudet osoitti jyrkkä lasku kolmella potilaalla, että se nousi kolmella muilla potilailla. Mediaani M /W-suhde valmiiksi Neoadj-Chemo oli 0,50; suhde laski 0,24 jälkeiseen Neoadj-Chemo, ei-merkitsevä ero (P = 0,078).

EGFR-mutaatio vaihtelua ja tehoa Neoadj-Chemo

Kaikki potilaat arvioitiin niiden vastetta Neoadj-Chemo. 39 potilasta (59,1%) saavutettiin PR, 27 potilasta (40,9%) oli SD, eikä yksikään esillä PD (taulukko 1). Niistä 66 potilasta, 12 potilaan EGFR tila muuttunut mutaation villin tyypin hoidon jälkeen, 2 tapausta oli käänteinen muutos, 52 pysyi villityypin (n = 42) tai mutaatio (n = 10) asema esi- ja post neoadj- kemoterapia. PR hinnat näissä alaryhmissä olivat 58,33% (7/12), 50% (1/2), ja 59,6% (31/52), tässä järjestyksessä. Kliininen vaste ei merkittävästi liittynyt muutos EGFR-mutaatio aseman (P = 0,13, Cochran-Armitage suuntaus testi).

KRAS-mutaatio vaihtelua ennen ja jälkeen Neoadj-Chemo

KRAS mutaatioaste vaihteli 4,5% (3/66) pre-Neoadj-Chemo 3,0% (2/66) käsittelyn jälkeen (taulukko 2). Konsistenssi KRAS mutaatioiden ennen ja jälkeen kemoterapiaa oli 95,5% (63/66). Kaksi potilasta säilyttivät KRAS-mutaatio statukset hoidon jälkeen, kun taas yksi potilas, jolla KRAS mutaatio siirtynyt villi tila jälkikäsitelty Neoadj-Chemo.

c-MET vahvistusta ennen ja jälkeen Neoadj-Chemo

yleinen c-MET amplifikaatiosuhde eivät muuttuneet Neoadj-Chemo hoitoa (6,0% [4/66]) (taulukko 2). Kuitenkin 4 66 potilasta osoitti siirtyminen c-MET vahvistusta tila. Erityisesti kahdessa tapauksessa siirtynyt monistamisesta-negatiivisesta positiivisia, ja kaksi näytteillä käänteinen siirtyminen. Kaksi potilasta, joilla c-MET vahvistusta esikäsittelyn säilyttivät vahvistusta tilan hoidon jälkeen. Johdonmukaisuutta c-MET vahvistusta ennen ja jälkeen Neoadj-Chemo oli 93,9% (62/66). Kiinnostavaa kyllä, kaksi potilasta, joiden c-MET vahvistus tila muuttunut positiivisesta negatiiviseksi saatu PR kanssa Neoadj-Chemo. Kaksi potilasta c-MET muuttuu negatiivisesta positiiviseksi näytteillä SD kanssa Neoadj-Chemo.

T790M mutaatiostatus ennen ja jälkeen Neoadj-Chemo

T790M mutaatiot olivat poissa kaikista näytteistä, kuten määritetään ARMS tekniikkaa.

keskustelu

Aikaisemmat tutkimukset eivät arvioineet onko molekyyliprofiilien kasvainkudosnäytteet vaihtaa alustavan diagnoosin ja post-kemoterapiaa. Perustuu prophase Tutkimuksen tulokset [13], me osoitti lisäksi, että Neoadj-Chemo vaikuttaa paitsi EGFR mutaatio asema, mutta myös poikkeavaa mutaatio aseman EGFR liittyvien ala- tai ohitusleikkaus geenien pienisoluista keuhkosyöpää. Nämä tulokset tukevat kemoterapiaa liittyviä molekyyli epäyhtenäisyys.

EGFR mutaatioita vakiintuneita ennustavia lopputuloksen ensilinjan EGFR-TKI-terapialle [4] – [7]. Kuitenkin on ollut epäselvää, EGFR-mutaatio asema havaita käyttäen aluksi diagnostisia näytteitä myös tarkasti ennustaa toisen tai kolmannen linjan EGFR-TKI hoitoja. Tällä hetkellä suurin osa kiinalaisten joilla on pitkälle edennyt NSCLC läpi EGFR-TKI vain toisen tai kolmannen linjan hoitoja, mahdollisesti johtuen sairausvakuutus politiikkaa. Siksi on tärkeää tietää vaikutusta ensilinjan kemoterapian EGFR-mutaatio aseman ohjata valinnan toisen linjan EGFR-TKI-terapialle. Korkea esiintyvyys muutoksia EGFR-mutaatio aseman kemoterapian kanssa antaisi aihetta toinen koepala ennen aloittamista toisen tai kolmannen linjan EGFR-TKI-terapialle.

Tutkimuksessamme yleinen EGFR-mutaatio aleni merkittävästi jälkeisissä Neoadj-Chemo kudosnäytteistä verrattuna pre-Neoadj-Chemo olevista varhaisvaiheen potilaiden NSCLC. Olemme havainneet ristiriitainen osuus 18,2% (12/66), joka sisälsi potilaita, jotka siirryit EGFR-mutaatio-positiivisesta -negatiivisilla (n = 10) ja toiselta (n = 2). Mitään merkittäviä eroja ei havaittu koskien esiintyvyys EGFR mutaatioiden aikaisin edistyneeseen pysähdyspaikan NSCLC [18]. Siksi oletetaan, että Neoadj-Chemo liittyviä muutoksia EGFR mutaatio havaittiin alkuvaiheen NSCLC ehkä analoginen aiheuttamien muutosten ensilinjan kemoterapia kehittyneiden NSCLC tapauksissa. Tuloksemme viittaavat siihen, että EGFR-mutaatio tila arvioidaan ennen kemoterapiaa ei saa heijasta mutaatiostatus jälkeistä kemoterapiaa, joka tukee ”reaaliaikaista” kasvain profiloinnin henkilökohtainen terapiassa NSCLC.

mekanismeja, jotka auttavat kemoterapian liittyvät muutokset EGFR-mutaatio asema jää epäselväksi. Heterogeeniset sisäisten kasvainten EGFR mutaatioita ja erilaiset herkkyydet EGFR mutantti ja villityypin kasvainsolut kemoterapia voi liittyä muutoksia yleisen EGFR-mutaatio asema kemoterapian jälkeen [4], [19]. Yatabe ym [20] ehdottanut, että keuhkojen adenokarsinoomat, heterogeeninen jakaumat EGFR mutaatioita poikki solut ovat erittäin harvinaisia. Kuitenkin useat muut tutkimukset ovat havaittu heterogeenisyys EGFR geeniekspression, mutaatio tai vahvistusta välillä ensisijainen ja etäpesäkkeitä tai muun sisäisen kasvaimen pesäkkeitä, joilla on erilaiset discordance nopeudella [21] – [23]. Okami ym [24] ilmoitti, että potilaat, joiden kasvaimet kuului sekä EGFR-mutatoitunut ja -wild soluilla oli huomattavasti lyhyempi aika ilman taudin etenemistä pituudet seuraavat gefitinibiä verrattuna potilaisiin, joiden kasvaimet koostui EGFR-mutatoituja soluja vain. Zhou et al [25] osoitti potilailla, joilla on korkea introtumoral runsaasti EGFR mutaatiot voivat hyötyä enemmän kuin ne, joilla on alhainen runsaasti EGFR-mutaatio. Kaikki nämä löydökset viittaavat siihen, että kasvaimensisäisenä heterogeenisyys EGFR mutaatiostatuksesta riippumatta voi vaikuttaa lopputulokseen EGFR-TKI-terapialle.

edellisessä tutkimuksessa havaittiin vaihtelua EGFR-mutaatio aseman kautta mikrodissektion eri kohtaan 85 kehittynyt pienisoluista keuhkosyöpää seuraavat lievittävä leikkauksen resektio. Tulokset osoittivat, että noin 30% näytteistä sisälsi sekä EGFR mutantti ja villityypin solujen osuus EGFR mutanttisoluista vaihtelevat 1%: sta 90% [13]. Useita prekliiniset ja kliiniset kokeet osoittivat, että EGFR mutantit olivat herkempiä paitsi EGFR-TKI myös kemoterapiaa, kuin niitä kuljettavat villityypin EGFR [4], [21], [26]. Me spekuloida, että kemoterapia saattaa tappaa selektiivisesti ja estävät mutanttiklooneissa sisällä kasvain, kun taas Kloonit villityypin EGFR saattaa lisääntyä runsaasti kemoterapian jälkeen. Tällainen ilmiö voisi selittää, miksi EGFR-mutaatio aseman siirtynyt EGFR-mutantti villityyppiseen kemoterapian jälkeen. Kun taas hyvin alhainen usein mutaatio soluja (1% -5%) havaittiin vain mikropaloitelluista näytteissä [13], joka voi liittyä vaihtelu EGFR villityypin mutaatio kemoterapian jälkeen. Nämä pienet klooneja EGFR mutaatio voidaan valita ja lisääntyneet jälkeen altistuvat kemoterapiaa.

discordance EGFR-mutaatio aseman välillä koepala ja kirurgisesti toistoleikattiin näytteitä ennen ja jälkeen Neoadj-Chemo vastaavasti myös saattaa johtua näytteenotto erot johtuvat sisäisistä kasvaimen heterogeenisuus. Erityisesti pienet biopsianäytteissä rajalliset materiaalien ehkä kuvasta täydellistä biologiset ominaisuudet kasvain, ja minimaalisia mittasuhteet mutanttien solujen voidaan unohtaa. Kuitenkin nykyinen tutkimus havaittu korkeampi esiintyvyys EGFR-liittyvä geeni aberrances biopsianäytteissä ennalta Neoadj-Chemo verrattuna leikkauksen resektoitiin näytteitä jälkeisen Neoadj-Chemo. Tämä viittaa siihen, että ristiriita EGFR-mutaatio aseman havaittiin näytteitä ennen ja jälkeen Neoadj-Chemo ei ole johtanut näytteenoton bias.

osoittaneet, että Neoadj-Chemo hoito NSCLC potilaiden vaikutti paitsi EGFR mutaatiostatus mutta myös aberrancies liittyvien alavirran geenien, mukaan lukien KRAS ja c-MET. KRAS-mutaatio oli 4,6% (3/66) pre-Neoadj-Chemo ja laski 3,0% (2/66) hoidon jälkeen. Vaikka C-MET amplifikaatiosuhde ennen ja jälkeen Neoadj-Chemo ei muuttunut (6,1% [4/66]), 4 potilasta näytteillä vuorossa. Erityisesti kahdessa tapauksessa siirtynyt monistamisesta-negatiivisesta positiivisten kanssa Neoadj-Chemo, ja kaksi potilasta osoittivat päinvastainen muutos. Tuloksemme viittaavat siihen, että c-MET ja KRAS-geenin aberrancies esiintyä hoitamattomilla kudosnäytteistä matalilla taajuuksilla; tämä on sopusoinnussa tutkimukset turke et al [27] ja Maheswaran et al [28]. Yhdessä havaittujen EGFR mutaatio muutoksia, nämä tulokset viittaavat siihen, että toistuvia kasvainbiopsioissa aikana potilaan tauti voi paremmin ohjata valintaa hoito-ohjelman.

Emme voi täysin selittää mahdollisia mekanismeja, jotka auttavat muutoksiin näissä resistenssiin liittyviä geenejä aikana kemoterapiaa. Useat tutkimukset ovat viime aikoina raportoitu vastaavia muutoksia EGFR vastustuskykyisiä geenejä [27] – [30]. Sequist ym [29] suoritetaan pitkittäinen analyysi geneettisten ja fenotyyppisten muutosten 37 potilaalla on erlotinibin kestävät NSCLCs kuljettavat EGFR mutaatioita. Käyttämällä sarja koepaloja, kirjoittajat raportoitu, että T790M ja PIK3CA (fosfoinositidi-3-kinaasin katalyyttinen, alfa-polypeptidiä) mutaatio menetettiin puuttuessa edelleen selektiivisen paineen EGFR: n estäjien. Tällaisia ​​syöpiä voi tulla herkkiä toisen kierroksen hoito EGFR: n estäjien. Tietääksemme tämä tutkimus ensin hyödyntää toista koepaloja tutkia dynaamisesti muutoksen genotyypin ja fenotyypin EGFR-TKI ja kemoterapiaa. Chin et al ilmoitti, että ennen altistumista platinavalmisteisiin voi vaikuttaa myöhemmän vasteen erlotinibille soluviljelmässä mallin muodostaminen erlotinibin herkän EGFR-mutantti NSCLC solulinjassa [12]. Tämä tapahtuu kautta sitkeästi PI3K /AKT-reitin ja helpottaa sisplatiinin aiheuttama väheneminen PTEN (fosfataasi ja tensin homologi) funktio. Mekanismeja tässä kemoterapia liittyvä muutos voi olla syvällisiä ja epigenetiikan voi olla tärkeä rooli. Tämä takaa lisätutkimuksia.

Havaitsimme, että EGFR T790M mutaatio oli poissa sekä ennen ja jälkeen Neoadj-Chemo näytteitä. Se ristiriidassa havaintojen Maheswaran et al [28] ja Rosell et al [31], jotka kertoivat, että T790M mutaatio voitiin havaita esikäsitelty kasvaimen biopsianäytteistä. Kaksi hypoteesia tällä hetkellä ole selittää mekanismin T790M mutaatio. Hankittu resistenssi hypoteesi väittää, että paljastamalla EGFR-TKI indusoi toisen pistemutaatio, jolloin treoniinin-to-metioniini muutos asemassa 790 EGFR. Vaihtoehtoisesti selektiivinen vastus hypoteesi ehdottaa, että T790M mutaatio voi olla olemassa potilaille pieninä klooneja ennen käsittelyä; Näiden resistenttien kloonien saattavat lisääntyä jälkeen altistua gefitinibi tai erlotinibi. Kuitenkin Tutkimuksessamme puuttuminen T790M mutaatio sekä ennen post Neoadj-Chemo näytteet on vahvistettu itsenäisesti Amoy Diagnostics Co., Ltd. Mahdollinen syy epäjohdonmukaisuutta T790M tila ilmoitetaan meille ja Maheswaran et al [28] voi liittyä etnisten ero tietyissä molekyyliprofiilien, joita on validoitu lisätutkimuksia.

Rajoitukset olivat seuraavat: Tämän tutkimuksen on pieniä näytteitä ja retrospektiivinen tutkimus sekä potilailla, joilla on levyepiteelisyöpä (SQC) tässä tutkimuksessa oli 53%. Entinen tutkimus osoitti mutaationopeus SQC valkoihoisista on korkeintaan 3,6% [32]. Kuitenkin Kiinan kehittynyt NSCLC väestön mutaationopeus SQC potilaista oli paljon suurempi kuin valkoihoisia potilaita (12-20%) [33] – [34], joka oli yhdenmukainen tuloksia meidän keskustassa (17,8%) [35]. Nykyisissä tutkimuksessa mutaatioaste okasolusyöpä 23,5%, tämä on aivan nurkan taso Kiinan väestöstä.

Johtopäätös

Kartoitimme vaihtelut EGFR mutaatioita (mukaan lukien T790M), KRAS mutaatiot sekä c-MET vahvistusta sekä ennen post Neoadj-Chemo hoitoa. Meidän havainnot tukevat että kemoterapia voivat vaikuttaa molekyyli- biomarkkereiden profiilit ja epäsuorasti ilmaisemaan kasvaimen heterogeenisyys. Siksi vaikutukset hoitojen kasvainten profilointia tulisi arvioida ennen koskevassa päätöksenteossa toisen tai kolmannen linjan EGFR-TKI hoitojen pienisoluista keuhkosyöpää. Valmistelu reaaliaikaisen molekyylitason biomarkkereiden profiilit EGFR-TKI ehdotetaan hahmotella tiettyjä potilasryhmiä ja helpottaa yksilöllinen hoito.

Kiitokset

Kiitämme tohtori Keneng Chen ja hänen tiiminsä, kirurgit alkaen Department of Thoraxkirurgia Peking Cancer Hospital Instituutti, tarjota osa näytteistä tutkimustyöllemme; Dr. Ning Wang, radiologi alkaen radiologia Department of Beijing Cancer Hospital Institute, hänen panoksestaan ​​vasteen arviointiin; ja Mr. Guoshuang Feng, tilastotieteilijä kiinalaiset Center for Disease Control ja ehkäisy, hänen panoksestaan ​​Tilastot analyysejä.