Krooninen sairaus

tiivistelmä

Viime aikoina useat genomin laajuinen yhdistys tutkimukset (GWAS) ovat tunnistaneet monet altis yhden emäksen monimuotoisuus (SNP) krooninen keuhkoahtaumatauti (COPD) ja keuhkosyöpä jotka ovat kaksi läheisesti liittyvät sairaudet. Niistä, SNP: t, joista jotkut ovat yhteisiä sekä sairaudet, mikä on mahdollista geneettistä samankaltaisia ​​sairauksia. Tässä testasimme hypoteesin, että ovatko nämä yhteisiä SNP: t ovat yhteisiä ennustaja riskejä tai ennusteen COPD ja keuhkosyöpään. Kaksi SNP (rs6495309 ja rs1051730) sijaitsee nikotiiniasetyylikoliini reseptorin alfa 3 (

CHRNA3) B-geenin genotyypattiin vuonna 1511 keuhkoahtaumatautipotilailla, 1559 keuhkosyöpää ja 1677 tarkastuksia Etelä- ja Itä-Kiinan väestön. Huomasimme, että rs6495309CC ja rs6495309CT /CC variantti genotyypit liittyy lisääntynyt riski COPD (OR = 1,32, 95% CI = 1,14-1,54) ja keuhkosyöpä (OR = 1,57; 95% CI = 1,31-1,87), tässä järjestyksessä. Rs6495309CC genotyyppi vaikutti nopeampana laskuna vuosittaisen uloshengityksen sekunnissa (FEV1) sekä COPD tapausten ja kontrollien (

P

0,05), ja se liittyi pitkälle edennyt COPD (

P

= 0,033); rs6495309CT /CC genotyyppien koitui huono selviytymisen keuhkosyöpä (HR = 1,41, 95% CI = 1,13-1,75). Lusiferaasi määritykset osoittivat lisäksi, että nikotiinin ja muiden tupakka-kemikaalit olivat erilaisia ​​vaikutuksia lusiferaasin aktiivisuus rs6495309C tai T-alleelien. Kuitenkaan mikään näistä vaikutuksista havaittiin toisen SNP, rs1051730G . Tiedot osoittavat tilastollinen yhteys ja ehdottaa biologiseen uskottavuuteen että rs6495309T C polymorfismin osaltaan lisääntyneitä riskejä ja huonon ennusteen sekä keuhkoahtaumatauti ja keuhkosyöpää.

Citation: Yang L, Qiu F, Lu X, Huang D, Ma G, Guo Y, et ai. (2012) toiminnallinen polymorfismit

CHRNA3

Ennakoi riskit Keuhkoahtaumatauti ja Keuhkosyöpä kiinaksi. PLoS ONE 7 (10): e46071. doi: 10,1371 /journal.pone.0046071

Editor: Raju Reddy, Emory University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 19 huhtikuu 2012; Hyväksytty: 27 elokuu 2012; Julkaistu: 03 lokakuu 2012

Copyright: © Yang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat National Natural Tiedesäätiö Kiinan myöntää 30671813, 30872178, 81072366 (JCL), ja osittain 81170043 (PXR), 81001278 (Y. Zhou), 30872142 (WDJ); Guangdongin maakunnan High Level Experts Avustukset 2010-79 (JCL); Changjiang Tutkijat ja Innovative Research Team yliopistossa apurahan IRT0961 ja Guangdongin Natural Science Foundation joukkue avustus 10351012003000000 (NSZ). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

COPD ja keuhkosyöpä ovat silmiinpistävän kasvaa keuhkosairaudet kanssa riveissä neljännen kuolinsyy ja ensimmäisen syöpään liittyvät kuolemat maailmanlaajuisesti, vastaavasti [1], [2]. Tupakointi on merkittävä riskitekijä molempien tautien, noin 20-30% tupakoitsijoista kehittyy COPD ja 10-15% tupakoitsijoista keuhkosyövän [3], [4]. Useita yhteisiä patologinen mekanismeja käsittäen sekä sairaudet on ehdotettu, erityisesti pitkäaikainen tulehduksellinen prosessi [5], [6] ja epithelial- mesenkymaalitransitioon (EMT), joiden uskotaan aiheuttavan keuhkojen syövän synnyn aikana COPD aikana [7] , mikä COPD riskitekijä keuhkosyövän [8]. Koska sekä keuhkoahtaumataudin ja keuhkosyövän ovat periytyviä, geneettiset ominaisuudet antavat tämän kaksiosaisen alttius päällekkäisiä [9].

Äskettäin yksitoista genomin laajuinen yhdistys tutkimukset (GWAS) ovat raportoineet useita alttiuslokukset keuhkoahtaumataudin ja keuhkosyövän [ ,,,0],10] – [20]. Niistä viisi tutkimukset suoritettiin keuhkoahtaumataudin hoitoon tarkoitettu valkoiset kuten Norja, Euroopan amerikkalaiset, ei latinalaisamerikkalainen amerikkalaisia ​​[10] – [14] ja kuusi tutkimukset suoritettiin keuhkosyövän ryhmissä, kuten japani, korea, kiina, amerikkalaiset eurooppalaisten syntyperä ja British [15] – [20]. Huomattavaa on, kaikki nämä tutkimukset ovat osoittaneet, että yhden nukleotidin polymorfismit (SNP: t) on sijoitettu asetyylikoliinin nikotiinireseptorin geenit (

CHRNA3

,

CHRNB4

,

CHRNA5

), jotka kartoitettiin kromosomiin 15 q25 jaetaan kahden taudin [10], [11], [14] – [18]. Esimerkiksi GWAS conduced in Norja käyttämällä Illumina n HumanHap550 genotyypityksen Helmet Chip raportoitu, että SNP rs1051730 on

CHRNA3

merkitsevästi liittyy COPD riski (

P

= 5,74 x 10

– 10) [11], ja toinen tutkimus amerikkalaisessa raportoitu, että SNP rs8042374 15 q25 oli alttiuslokukset keuhkosyövän (

P

= 7,75 x 10

-12) [16]. Kuitenkin, tämä yhteinen geneettinen etiologia voi yksinkertaisesti johtua nicotine- riippuvuutta, koska nämä SNP: t ovat myös yhteydessä tupakointikäyttäytymiseen [21], [22]. Silti, kiistelty tuloksia saatiin tupakoimattomia. Tutkimukset amerikkalaiset ja brittiläiset populaatiot osoittivat, että nämä SNP eivät liittyneet keuhkosyövän riskiä in tupakoimattomia, mutta tutkimukset joissakin muissa Euroopan, Japanin ja Kiinan väestön raportoitu merkittävän yhdistyksen tupakoimattomia [17], [23] – [25 ]. On todennäköistä, että koska oli passiivinen tupakoitsijoita sisällytetty koskaan tupakoineet näissä tutkimuksissa, kuten Luokitteluvirheillä saattanut puolueellinen yhdistysten.

Genetic vaikutuksia joidenkin alttiita SNP voivat vaihdella eri ethnics. Tuore kiinalainen tutkimus kertoo, että kaksi merkittävintä syy SNP (ts rs1051730, rs8034191) yhteinen keuhkosyövän ja keuhkoahtaumataudin Euroopan populaatiot eivät liittyneet keuhkosyövän riskiä Kiinan väestöstä [25]. He löysivät funktionaalinen SNP (rs6495309)

CHRNA3

geeni, joka aiheutti vaikutus geenin ilmentymisen säätelemiseksi, joka voi suurentaa keuhkosyövän riskiä. Kiehtovan, tämä SNP liittyi myös COPD riskin norjalaista [11]. Kuitenkaan mikään tutkimus on tutkinut nämä SNP COPD Kiinan väestöstä.

COPD ja keuhkosyöpää ovat läheistä sukua, samanaikaisesti tutkia näitä herkkiä SNP sekä sairauksien paljastaisi geneettisiä mekanismeja yhteinen näihin sairauksiin, mikä saattaa selittää miksi keuhkosyöpä esiintyvyys on korkea keuhkoahtaumatautipotilaat. Lisäksi tupakointi liittyy aina huonoon ennusteeseen COPD ja keuhkosyövän [26], [27], nämä SNP nikotiinin liittyviä geenejä voi olla joitakin vaikutuksia ennusteeseen COPD tai keuhkosyöpäpotilaita. Siksi nykyinen tutkimus, tutkimme yhdistysten kahden SNP (rs1051730 ja rs6495309)

CHRNA3

geenin ja riskejä sekä ennuste COPD ja keuhkosyövän Etelä- ja Itä-Kiinan väestön. Olemme edelleen analysoineet toiminnallisuutta näiden polymorfismien kanssa biologisissa määrityksissä.

Methods

Tutkimus aiheet

Olemme suorittaneet kaksi sairaala-pohjainen tapausverrokkitutkimukset Etelä- ja Itä-Kiinan väestön. Lyhyesti, eteläisen Kiinan väestön mukana 1025 Keuhkoahtaumatautipotilailla 1056 keuhkosyöpäpotilaita, ja 1061 normaalia valvontaa käytettiin löytö asettaa ja itäisen Kiinan väestön mukana 486 Keuhkoahtaumatautipotilailla 503 keuhkosyöpää ja 616 valvontaa käytettiin validointi asetettu. Keuhkosyöpä potilaat on kuvattu aiemmin [28] – [31] Määritelmä COPD mukaan oli maailmanlaajuisen aloitteen krooninen obstruktiivinen keuhkosairaus [2], ohjaus ei normaali keuhkojen toimintaa ja olivat ikä (± 5 vuotta) ja sukupuoli taajuus-sovitettu COPD tapauksia. Lisäksi oli 510 keuhkosyöpäpotilaita Etelä-Kiinan ja 296 tapausta Itä Kiinassa, joka oli täydellinen selviytymisen tuloksia data kuoleman suoraan aiheuttamia keuhkosyöpä tai edunjättäminen, ja 116 COPD potilaat ja 357 valvontaa oli vähintään neljän vuoden seuranta vuodesta 2002 ja 2010 vuotuinen spirometriaparametreille llä [26], [32], [33]. Kaikki osallistujat olivat etnisten Han kiinalaisia ​​ja he jakoivat mitään sukulaisuutta keskenään, eikä kukaan ollut verensiirron viimeisen 6 kuukauden aikana. Osallistuja pyydettiin toimittamaan tietoja tupakointistatus, ennestään COPD ja muut tekijät ja lahjoittaa 5 ml ääreisverenkierron jälkeen tietoisen suostumuksen saatiin kaikki osallistujat kirjallisesti. Muita yksityiskohtia näytteiden rekrytointia ja määritelmä tupakoinnista ja muita tekijöitä annetaan lisäyksessä S1 ja muualla [28] – [30], [34]. Tutkimukset hyväksyi laitoksen tarkastuslautakunta Guangzhou Medical University (eettinen komitea Guangzhou Medical University: GZMC2007-07-0676) ja Soochow University (eettinen komitea Soochow University: SZUM2008031233).

SNP valinta ja genotyypin analyysi

tietojen perusteella julkaistujen GWAS COPD tai keuhkosyöpä, voimme perustaa tietokanta, joka sisältää raportoitu SNP ja

P

arvot kunkin yhdistyksen taudeista, ja etsimme jaetun loci sekä sairaudet, joilla on omatekoinen excel-tiedoston (File S1). Seitsemän SNP: tä tunnistettiin (ts rs1051730, rs1394371, rs1996371, rs4887077, rs6495309, rs667282 ja rs8034191; kuvio S1). Kaikki nämä SNP: tä sijaitsee kromosomissa 15 q25, ja viisi SNP (rs1051730, rs1394371, rs1996371, rs4887077 ja rs8034191) olivat erittäin kytkentäepätasapainossa (LD) toisiinsa (D ’= 1,00, r

2 0,80), ja kaksi muuta SNP: rs6495309, rs667282 olivat myös erittäin LD (D ’= 0,90, r

2 = 0,71) (kuvio S2). Siksi valitsimme kaksi SNP (rs1051730G V: Y215Y; rs6495309T C: -2109 bp transkription alkuperäisen sivuston ATG) edustajana SNP jotka kattavat geneettistä informaatiota on ennen kaikkea raportoitu GWAS SNP.

SNP genotyypitys suoritettiin PCR-RFLP-menetelmällä. Lyhyesti, alukkeita [5′- GCC ATC ATC AAA GCC CCA GGC TT-3 ’(eteenpäin) ja 5′- GGC AGG TAG AAG ACG AGC AC-3’ (taaksepäin)] ja entsyymi

Dra

I (New England BioLabs, Ipswich, MA, USA) käytettiin tunnistamaan rs1051730G C genotyyppejä. 10% näytteistä valittiin satunnaisesti suorittaa toistuvia määrityksiä kullekin SNP, ja tulokset olivat 100% yhtäpitävät. Myös satunnaisesti valittu 100 näytettä suoraan sekvensointiin vahvistaa -genotyypitystulosten, ja tulokset olivat myös 100% yhtäpitävät (kuva S3).

Lusiferaasimäärityksiä

Kaksi lusiferaasireportterista plasmidit sisälsivät

CHRNA3

promoottorialueen joko rs6495309T tai C-alleeli oli lahjakas tri Cheng Wu ja Zhibin Hu [25]. Havaitsimme SNP ”vaikutukset promoottorin toimintaa vastaanottavassa soluja hoidossa tupakkauute tai tupakan kemiallisten karsinogeenien [eli nikotiini, nikotiiniin johdettu nitrosoamiinin ketoni (NNK) tai bentso [a] pyreeniä (B (a) P) ]. Tupakkauutetta oli itse valmistettu, kuten on kuvattu julkaisussa Nakamura et ai. [35]. Lyhyesti, savusumu kahden valaistu savukkeiden kerättiin ruiskulla-pumppu ja lähetettiin 50 ml DMEM-F12. Sulkemisen jälkeen ja täydellinen sekoittuminen, 1 M NaOH: a käytetään säätämään sen pH on 7,4 ja suodatetaan membraanin (huokoskoko: 0,22 um) käytettiin bakteerien poistamiseksi. Jaoimme 5 x 10

5 ihmisen keuhkojen solulinjojen 16HBE (kuolematon ihmisen keuhkoputken epiteelisolujen linja), A549 (ihmisen keuhkojen adenokarsinooman solulinja) ja H460 (ihmisen keuhkojen suuri karsinooma solulinja) 24-hyvin levyt ja transfektoitu heille pGL3-peruskonstrukti kanssa rs6495309C tai T-alleelin. Kolme solulinjat ostettiin Cell Bank of Type Culture Collection of Kiinan tiedeakatemia, Shanghai Institute of Cell Biology, Kiinan tiedeakatemia. PRL-TK-plasmidia (Promega) kotransfektoitiin normalisoitu kontrolli. Kaikki transfektiot tehtiin kolmena kappaleena. Sen jälkeen, kun soluja oli viljelty 14 tunnin ajan, lopullinen konsentraatio 10 uM nikotiinin, 100 nM NNK tai 1 uM B (a) P: tä lisättiin viljelmiin, vastaavasti [36]. Toiminta

CHRNA3-

pGL3 reportteri tulikärpäsen lusiferaasi ja sisäinen standardi reportteri Renilla lusiferaasin kvantitoitiin Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, Madison, WI, USA) 1 tunnin käsittelyn jälkeen.

tilastollinen analyysi

Chi-square testiä käytettiin vertaamaan Blandgrupp kategorisen muuttujien tapausten ja kontrollien välillä sekä Hardy-Weinberg tasapaino testi kontrolleissa. Assosiaatioita SNP ja keuhkoahtaumataudin sekä keuhkosyöpään riskit arvioitiin käyttäen ehdoton logistinen regressiomalli korjattuna ikä, sukupuoli, tupakointi ja juominen tila. Paras geneettinen vaikutus malli jokaiselle SNP sairauksista riski arvioitiin perustuen pienimmän Akaike tiedot kriteeri (AIC) arvo [37]. 10000 permutaatio testejä käytettiin arvioimaan tarkkaa

P

arvot liittyvät

P

vastinetta COPD tai keuhkosyövän riskiä. Kerrostuminen analyysi suoritettiin osoittavat vaikutuksen mahdollisen sekoitin tekijöiden yhteydestä CHRNA3 genotyyppien ja keuhkosairaudet riskejä, ja geeni-ympäristö vuorovaikutusta COPD tai keuhkosyövän riskiä sekä keuhkosyöpään selviytymisen analysoitiin monikertaisesti vuorovaikutusta kun OR 11 OR 10 × OR 01, jossa OR 11 = OR kun molemmat tekijät olivat läsnä, OR 01 = OR kun ainoa tekijä 1 oli läsnä, OR 10 = OR kun ainoa tekijä 2 oli läsnä [38]. Breslowin päivän testi käytettiin analysoimaan homogeenisuus välillä ositteessa-syrjäisimpien kerrostumista analyysiin. Virran ja otoskoko laskeminen (PS) ohjelmisto (https://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize) käytettiin laskemiseen tilastollinen voima. Yksisuuntainen ANOVA testi ja lineaarista regressiomallia korjattuna ikä, sukupuoli, tupakointi ja juominen tila käytettiin analysointiin vuosittainen väheneminen ennalta keuhkoputkia FEV1 by

CHRNA3

genotyypit ja ympäröivän tekijät kuten ikä , sukupuoli, tupakointi, pakkaus vuoden savustettu, juominen asema, ruoanlaitto hiiltä, ​​biomassaa käyttäviin ja COPD vaiheissa. Kaplan-Meier menetelmä, log-rank testi, ja Coxin suhteellisen vaarat regressiomallin korjattuna ikä, sukupuoli, tupakointi, histologia, vaiheissa, kirurgia, kemoterapia, ja sädehoidon käytettiin vaikutusten arvioimiseksi

CHRNA3

genotyyppien samoin kuin edellä ympäröivä tekijät ja kliinisiä hoitoja eloonjäämiseen keuhkosyöpäpotilaiden. Ero lusiferaasiaktiivisuus analysoitiin Studentin

t

testi. Kahden pyrstö

P

0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä, ja SAS-ohjelmiston (versio 9.1; SAS Institute, Cary, NC, USA) käytettiin kaikissa analyyseissä.

Tulokset

CHRNA3 genotyypit ja riskit COPD tai keuhkosyöpään

Kohderyhmätiedot valitut muuttujat ja kliinisten tietojen COPD ja keuhkosyöpäpotilaita sekä terveiden verrokkien on esitetty taulukossa S1. Kuten on esitetty, tupakoinnista, pakkaus vuoden savustettu, ruoanlaitto hiiltä, ​​biomassaa käyttäviin ovat yhteisiä riskitekijöitä sekä sairauksia (

P

0,05 kaikille).

frekvenssijakaumat genotyypit kahden SNP yksilöissä esiteltiin taulukossa 1. löytö asettaa, huomasimme merkittäviä assosiaatioita rs6495309T C genotyyppejä sekä alleelit ja molempien tautien riskien (

P

0,05 kaikille). Mukaan pienin AIC arvo, rs6495309CC genotyyppi aiheutti huomattavasti suurempi riski COPD alle väistyvä geneettinen malli (OR = 1,33; 95% CI = 1,10-1,60;

P

= 0,003), kun taas rs6495309CT /CC genotyypit liittyy keuhkosyövän riskiä alla hallitseva geneettinen malli (OR = 1,51; 95% CI = 1,21-1,87;

P

= 2,2 × 10

-4). Kuitenkaan mitään merkittävää yhdistyksen välillä sekä sairauksien ja genotyypit eikä alleelit havaittiin SNP rs1051730G A (

P

0,05 kaikille).

Olemme vain vahvisti yhdistysten of rs6495309T C Itä Kiinan ja tulokset olivat yhdenmukaisia. Kantajia rs6495309CC genotyypin oli 1,32-kertainen lisääntynyt COPD riski (OR = 1,32, 95% CI = 1,02-1,71;

P

= 0,036) ja rs6495309CT /CC genotyyppien oli 1,66-kertainen keuhkosyöpä riski (OR = 1,66, 95% CI = 1,21-2,26;

P

= 0,002). Yhdistykset olivat homogeenisia kahdessa aineistoja (COPD,

P

= 0,907; keuhkosyöpä,

P

= 0,549), The rs6495309CC ja rs6495309CT /CC genotyypit siirrettävä riskin kohoaminen COPD (OR = 1,32, 95% CI = 1,14-1,54,

P

= 1,3 × 10

-4) ja keuhkosyöpä (OR = 1,57; 95% CI = 1,31-1,87,

P

= 2,2 × 10

-7), vastaavasti (kuva S4). Samaan aikaan permutaatio testi vahvistivat lisäksi edellä yhdistysten korjauksen jälkeen 10.000 testaus resampling (korjattu

P

= 0,001 COPD;

P

= 5,9 × 10

-6 keuhkosyövän, vastaavasti ).

COPD myötävaikuttaa lisääntyneeseen keuhkosyövän riskiä, ​​joten haitalliset genotyypit voi olla additiivinen vaikutus kasvaa keuhkosyövän riskiä, ​​joilla on ennestään COPD. Niissä henkilöillä on ennestään COPD, rs6495309C genotyyppejä oli intuitiivisesti suurempi riski sairastua keuhkosyöpään (OR = 1,83, 95% CI = 1,04-3,21,

P

= 0,024) verrattuna potilaisiin ilman ennestään COPD (OR = 1,50, 95% CI = 1,24-1,81,

P

= 1,47 x 10

-5), mutta syrjäisimmät alueet eivät olleet tilastollisesti erilaisia ​​(Breslowin päivän testi:

P

= 0,364, tuloksia ei ole esitetty).

ositus Analysis

yhdistäessämme populaatioiden kerrostumista analyysi lisätä tutkimuksen voima. Vain tiedot rs6495309T C polymorfismi esiteltiin, koska rs1051730G ollut enää positiiviset tulokset. Kuten kuviossa S4 oli merkittäviä eroja yhdistysten välisen

CHRNA3

genotyypit ja lisääntynyt riski keuhkoahtaumataudin sekä keuhkosyöpä tupakoinnin tila (Breslowin päivän testi:

P

= 0,043 keuhkoahtaumataudin;

P

= 0,002 keuhkosyövän), koska yhteydet olivat kaikki merkittävät tupakoitsijoilla (

P

0,05 kaikille), mutta ei koskaan tupakoitsijoita (

P

0,05 kaikille); ja he olivat myös merkittäviä keuhkosyövän riskiä (

P

= 0,028) ja COPD riskejä rajatapaus merkittävä (

P

= 0,098) passiivisessa tupakoitsijoita. Lisäksi oli merkittävästi suurempi keuhkosyövän riskiä joilla rs6495309CT /CC genotyyppien ja passiivinen tupakointi vanhemmilta (OR = 3,53; 95% CI = 1,73-7,20;

P

= 0,001) verrattuna niihin, joilla non passiivinen tupakointi vanhemmilta (Breslowin päivän testi: kaikki

P

= 0,008) ei kuitenkaan ollut merkittävää eroa vaikutus rs6495309T C iän, sukupuolen, juominen asema, ruoanlaitto hiiltä, ​​biomassaa käyttäviin tai kliinisen vaiheen molempiin sairauksiin.

Koska intuitiivisesti merkittävä yhteisvaikutuksia ei havaittu

CHRNA3

haitallisia genotyypit ja keuhkosyövän riskiä (kuva S4), me edelleen osoitti vuorovaikutuksesta SNP rs6495309T C ja tupakointi asema kolme ehtoa (koskaan tupakoitsija, passiivinen tupakoitsija, tupakointi avoider) molemmille COPD ja keuhkosyöpää riskejä kuviossa 1. Kuten on esitetty, merkittäviä vuorovaikutuksia koskaan tupakointi ja rs6495309C genotyyppien tarkkailtiin riskin molempien tautien (

P =

0,048 COPD;

P =

0.003 keuhkosyöpään), ja passiivista tupakointia ja rs6495309C genotyyppien lisäämiseen keuhkosyövän riskiä (

P =

0.010). Lisäksi, kuten kuviossa S4, passiivinen tupakointi vanhemmilta myös vuorovaikutuksessa rs6495309CT /CC genotyyppien lisäämään keuhkosyövän riskiä (

P

= 0,005) ja COPD riskejä rajatapaus merkittävä (

P

= 0,051).

tupakoitsija avoiders kanssa rs6495309TT genotyyppi määritellään viitteenä. Rs6495309C variantti genotyyppi (t) vuorovaikutuksessa tupakoinnin riskeistä molempien tautien mutta vain vuorovaikutuksessa passiivinen tupakointi keuhkojen syöpäriskiä.

CHRNA3 genotyypit ja keuhkojen toiminta

Kuten kuviosta 2, ne rs6495309CC genotyyppi kantajia oli merkittävä korkeampi keskimääräinen vuotuinen lasku ennalta FEV1 kuin CT /CC genotyyppien 116 COPD potilailla (CC: n = 36, -0,115 ± 0,086 L, CT /TT: n = 80, – 0,080 ± 0,059 L, Opiskelijan

t

testi:

P =

0,028, lineaarinen regressio testi

P

= 0,023; kuvio 2A). Samanlainen tulos havaittiin myös 357 verrokeilla (CC: n = 115, -0,076 ± 0,077 L, CT /TT: n = 242, -0,095 ± 0,098 L, Opiskelijan

t

testi:

P

= 0,047, lineaarinen regressio testi

P

= 0,045; kuvio 2B). Lisäksi rs6495309T C polymorfismin korreloi merkitsevästi keuhkoahtaumataudin etenemiseen näytteillä COPD Gold vaiheittain (

P

= 0,033).

, vuotuinen keskiarvo väheneminen ennalta keuhkoputkia FEV1 by rs6495309T C genotyyppien keuhkoahtaumatautipotilaat. B, keskimääräinen vuotuinen lasku ennalta keuhkoputkia FEV1 by rs6495309T C genotyyppien terveillä verrokeilla. C, Kaplan-Meier selviytymisen käyrän keuhkosyöpäpotilaita by rs6495309T C genotyyppejä Discovery setti. D, Kaplan-Meier selviytymisen käyrän keuhkosyöpäpotilaita by rs6495309T C genotyyppien validointi asetettu. Rs6495309CC variantti genotyyppi liittyi nopeampi väheneminen ennalta keuhkoputkia FEV1 molemmissa COPD tapauksissa ja valvonta sekä rs6495309C genotyyppien koitui huono selviytymisen keuhkosyöpään.

Lisäksi, tupakoinnista ja pakkaus vuoden savustettu liittyivät vuosittainen väheneminen ennalta keuhkoputkia FEV1 molemmissa COPD tapausten ja kontrollien (

P

0,05), kun taas biomassan avulla, COPD vaiheissa oli sama vaikutus tapauksissa ja sukupuoli oli samat vaikutukset tarkastukset (

P =

0,032, taulukko S2).

CHRNA3 genotyypit ja Survival keuhkosyöpäpotilaiden

selviytyminen analyysi osoitti, että iästä, tupakoinnista, kliininen vaiheita, kirurgiset toiminta, kemoterapiaa, ja radio sädehoito olivat kaikki merkitsevästi yhteydessä selviytymisen tuloksia keuhkosyöpäpotilaiden (

P

0,05 kaikille; taulukko S3).

Kuten taulukosta 2, pahempi selviytymisen mediaani elinaika (MST) 12 kuukauden havaittiin rs6495309CT /CC genotyyppejä kantajia kuin 15 kuukautta rs6495309TT genotyypin kantajia Etelä Chinese (

P

= 0,026, kuvio 2C). Coxin malli osoitti, että vaarat suhde (HR) on rs6495309C genotyyppien syövän kuolema oli tilastollisesti merkitsevä (HR = 1,34, 95% CI = 1,03-1,74,

P

= 0,028). Tulokset Itä Kiinan edelleen vahvisti nämä havainnot, joissa rs6495309 CT /CC genotyyppien kantajia oli paljon pienempi MST (13 kuukautta) kuin rs6495309TT genotyypin harjoittajia 18 MST (Log-rank-testi:

P

= 0,025 ; COX malli: HR = 1,55, 95% CI = 1,04-2,30,

P

= 0,028; Kuva 2D). Yhdistetty analyysi kahden populaation osoitti, että rs6495309CT /CC genotyyppien koitui 1,41-kertainen kuoleman riski (95% CI = 1,13-1,75,

P

= 0,002) kuin rs6495309TT genotyyppi keuhkosyöpäpotilaita.

haitallisia geneettisiä vaikutuksia keuhkosyöpä eloonjääminen sitten tutkittiin kerrostumista analyysiin. Kuten kuviossa S5, yhdistyksen välillä rs6495309CT /CC genotyyppien ja huono keuhkosyöpä eloonjääminen oli selvempää mies, tupakoitsijoilla, alaryhmissä enemmän pack-vuoden savustettu, jos potilaalla on kliinisessä vaiheessa I tai II, ja potilailla, joilla on levyepiteelikarsinooma cell carcinoma tyyppi. Lisäksi ei ollut merkittävää vuorovaikutusta rs6495309T C genotyypit ja ympäristötekijöiden vaikutusta keuhkosyöpä selviytyminen (

P

0,05 kaikille).

Reporter Gene n Activity

kuten kuviossa 3 on esitetty, olemme vahvistaneet korkeampi reportterigeenin aktiivisuus, jota ohjaa rs6495309C alleeli verrattuna vetämänä rs6495309T alleelin [25], ja tupakan poimia sekä nikotiini voi aiheuttaa suuremman promoottorin aktiivisuus sekä reportterigeenejä kanssa rs6495309T tai C-alleelin (

P

0,05 kaikissa solulinjoissa). Samaan aikaan, tupakkauutetta ja nikotiini voi aiheuttaa huomattavasti korkeampi kohonneen lusiferaasiaktiviisuuden vetämänä rs6495309C alleelin kuin ohjaavat T-alleelin (Opiskelijan

t

testi:

P

0,05 kaikille) . Lisäksi olemme myös havainneet, että NNK voisi myös kohtuullisesti lisätä transkription aktiivisuutta rs6495309C rakentaa kuin rs6495309T konstruktin (

P

0,05 kaikkiin). Ei kuitenkaan ole tällaista vaikutusta ei havaittu alle hoidossa B (a) P.

A, 16HBE. B, A549. C, NCI-520. Sarakkeet, keskiarvo kolmesta itsenäisestä kokeesta; baaria, SD; ja ero Lusiferaasiaktiivisuuden välillä C /T-alleelin ja lusiferaasin aktiivisuuden tasot kemiallisella käsittelyllä (lusiferaasivaikutusta kanssa kemiallisen käsittelyn – lusiferaasivaikutusta ilman hoitoa) analysoitiin Studentin

t

testi Tobacco uute, nikotiinin ja NNK voisi aiheuttaa huomattavasti suurempi kohonneen lusiferaasiaktiviisuuden vetämänä rs6495309C alleelin kuin ohjaavat T-alleelin.

keskustelu

nykyinen tutkimus osoitti, että SNP rs6495309T C

CHRNA3

geeni liittyy lisääntyneitä riskejä ja huonon ennusteen sekä keuhkoahtaumataudin ja keuhko- Caner Kiinan väestö. Rs6495309C variantti genotyyppien (CC tai CT /CC) vuorovaikutuksessa tupakoinnin riskin kasvamisesta molempien tautien, ja mahdollisesti passiivinen tupakointi keuhkosyövän riskiä ja keuhkoahtaumatauti. Reportteri määritykset osoittivat, että nikotiinin ja NNK, mutta ei B (a) P voisi aiheuttaa suuremman promoottorin aktiivisuus rs6495309C alleelin kuin T alleelin. Kuitenkin SNP rs1051730G A, mitään merkittävää yhdistys ei havaittu ei COPD eikä keuhkosyöpä. Jotta Parhaan tietomme, tämä on ensimmäinen tutkimus paljastaa SNP

CHRNA3

geeni liittyvät sekä keuhkoahtaumataudin ja keuhkosyövän riskejä ja ennusteen.

biologisen funktion rs6495309C variantin genotyypit lisäämiseen keuhkosyövän riski oli kuvattu aiemmin [25]. Täällä, osoitimme että rs6495309T C vaihtelu vaikutti vähentää spirometriset fenotyypit. Nopea pieneneminen FEV1 on merkkiaine ilmavirtauksen ahtauma ja käytettiin arvioitaessa vakavuus ilmavirtauksen ahtauma [39], tämä on sopusoinnussa meidän toteamuksen, että rs6495309CC genotyyppi korreloi huonompi COPD vaiheissa. Tutkimukset ovat osoittaneet, että CHRNA3 liittyvät tupakoinnin riippuvuus kautta korkea ilmentymisen CHRNA3 keskeisillä alueilla aivoissa [40] mukaan rs6495309CC genotyyppi harjoittajat voivat kuluttaa enemmän savukkeita, mikä aiheuttaa enemmän vahinkoa keuhkojen toiminnan [26], [41] . Johdonmukaisesti, keuhkosyöpäpotilaita kanssa rs6495309C genotyyppien oli huono selviytyminen, koska tupakointi on aina liittyy vähentynyt selviytymisen keuhkosyöpään [27], ja CHRNA3 toiminnot edistää kemoterapian resistenssin kautta Akt-riippuvaisen proliferaation ja NF-kappaB riippuvaisen eloonjääminen reittejä alle stimulaatio NNK- [36], [42] – [44]. Yhdessä tuimme että rs6495309T C polymorfismi on käytettävissä indikaattori ennustetta sekä keuhkoahtaumatauti ja keuhkosyöpää.

kokeellisesti paljastaen transfektoitu plasmideilla tupakkaan liittyvien kemiallisten komponenttien, huomasimme, että nikotiini indusoi korkeamman tason promoottorin aktiivisuuden

CHRNA3

valvonnassa promoottorin kanssa rs6495309C alleeli kuin, että T-alleelin. Näin ollen nämä rs6495309C alleelin kantajia ovat alttiimpia olla nicotine- riippuvuutta. Kiehtovan, Huomasimme myös, että NNK siirrettävä lisääntynyt transkriptio toimintaa etenkin

CHRNA3

promoottori kanssa rs6495309C alleeli. Koska

CHRNA3

on myös reseptori NNK, voisimme olettaa, että NNK moduloi haitallisia geneettisiä vaikutuksia rs6495309C genotyyppien lisäämisestä keuhkosairauksien riski, koska NNK voi aiheuttaa geenimutaatio, DNA vaurioita, aktivointi onkogeenien ja kasvaimeen liittyvä signaalien kulkureiteillä [45], [46].

kerrostuneisuus analyysissä assosiaatioita rs6495309C variantin genotyypit ja keuhkoahtaumataudin sekä keuhkosyövän riskiä olivat kaikki merkittävät tupakoitsijoilla mutta ei koskaan tupakoitsijoita; ne olivat myös merkittäviä keuhkosyövän riskiä, ​​ja raja merkittäviä COPD riski passiivinen tupakoitsijoita, mikä oli uusi havaintoja. CHRNA3 SNP: t liittyvät tupakointikäyttäytymiseen [21], [22]; se mahdollista, että rs6495309C variantti genotyypit vuorovaikutuksessa yhä tupakoinnin kasvaa keuhkoahtaumataudin ja keuhkosyövän riskiä, ​​ja välillä variantti genotyyppien ja passiivisen tupakoinnin lisäämiseen keuhkosyövän riskiä, ​​koska moduloivan tupakan tupakoinnin CHRNA3. Lisäksi nämä henkilöt ovat passiivisia tupakoitsijoita lapsuudessa (passiivinen tupakointi vanhemmilta) kanssa rs6495309C genotyyppien kohtaisivat paremmin havaittavissa suuri riski sairastua keuhkosyöpään kuin COPD, mikä vaaran riskin vanhempien tupakoinnin lasten terve. Aiemmat tutkimukset olivat kiistanalaisia ​​tuloksia yhdistyksen välillä

CHRNA3

SNP ja keuhkosairauksiin riskeeratun tupakoimattomia [16], [17], [25], mikä johtuu pääasiassa bias eri passiivisesta tupakoinnista. Täällä, osoitimme, että yhdistys oli merkittävää passiivinen tupakoitsija mutta ei savua avoider, mikä viittaa siihen, että CHRNA3 SNP saa käyttää geneettistä vaikutusta tupakointiin liittyvät väestön.

Kuten tiedämme, COPD ja keuhkosyöpä ovat silmiinpistävin tupakointiin liittyviin sairauksiin, ja COPD pidetään tärkeä riskitekijä keuhkosyövän [8]. Täällä, tämä toiminnallinen syy SNP rs6495309T C jaetaan COPD ja keuhkosyöpä, tuetaan luontainen sidos tupakoinnin vaikutuksesta näihin sairauksiin. Lisäksi COPD tapauksissa rs6495309C genotyyppien kärsisivät intuitiivisesti suurempi riski sairastua keuhkosyöpään, viittaa mahdolliseen taipumus COPD potilaiden kehittämiseen keuhkosyövän näissä genotyyppiä harjoittajille. Silti tutkimukset syvälle tutkimalla ja tarkastamaan niitä ilmoittanut geenimerkit ennustaa keuhkosyövän riskiä COPD-potilaat ovat välttämättömiä.

Tämä tutkimus on useita vahvuuksia. Aiemmissa keuhkosyöpä tapausverrokkitutkimukset, ohjaus ei syöpää vapaa aiheita sulkematta pois keuhkoahtaumatautipotilaat [15], [16], [18], [19], [25], [33], ja näin nämä tutkimukset voivat välttää mahdollinen sekoittava bias arviointiin assosiaatio perimä ja keuhkosyövän riskiä. Täällä meidän suunniteltu tapauskontrollitutkimuksessa, ohjaus ei kaikki syöpää vapaa ja normaali keuhkojen toiminta, joka antoi meille mahdollisuuden samanaikaisesti verrata COPD ja keuhkosyöpä ryhmien kanssa samaan kontrolliryhmään. Tällainen tutkimus muotoilu auttoi meitä purkaa luontaista kytkös COPD ja keuhkosyövän. Lisäksi tutkimuksemme oli korkea tilastollinen voima sekä keuhkoahtaumataudin ja keuhkosyövän yhdistys analyysi (98,3% keuhkosyöpään, 94,5% COPD). Joukossa oli kuitenkin myös joitakin rajoituksia, koska tämä oli sairaalan johdolla tapauskontrollitutkimuksessa on oltava valinta bias tai tietoja bias.