Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Eturauhassyöpä (PCA) on yleisin syöpä miehillä Länsi maat. Vaikka aktiivinen valvonta on yhä käytössä, suurin osa potilaista hoidetaan nykyisin eturauhasen. Jotta vältettäisiin liiallinen hoito, on kiistaton tarve luotettavien biomarkkereiden tunnistamiseen mahdollisesti aggressiivinen ja tappava tapauksissa. Nuclear väli hehkulampun proteiineja kutsutaan lamins rooli chromatin organisaatiossa, geenien ilmentyminen ja solujen jäykkyys. Ilmaisu Lamin A liittyy huono tulos kolorektaalisyövässä mutta toistaiseksi ennustavia arvoa lamins ei ole testattu muita kiinteitä kasvaimia.

Methods

Tutkimme ilmentäminen lamins kanssa immunohistokemia kudoksen microarray materiaali 501 PCa potilailla, joille tehdään eturauhasen ja imusolmuke leikkelyn. Potilaat jaettiin kahteen värjäytymistä luokkaan (matala ja korkea ilmaisun). Korrelaatio Lamin ilmaisun kanssa kliinis muuttujia testattiin ja yhdistyksen lamiinivektori aseman biokemiallisia toistumisen (BCR) ja tautikohtaisten selviytyminen (DSS) analysoitiin edelleen.

Tulokset

Alhainen ilmentyminen lamiinivektori liittyvä imusolmuke positiivisuus (p 0,01), mutta ei muiden kliinis muuttujien ja heikkoa ilmentymistä oli rajatapaus itsenäinen merkittävää yhteyttä DSS (HR = 0,4; 95% CI 0,2-1,0; p = 0,052). Vastaavasti alhainen lamiinivektori C ilmaisun yhteydessä heikompaan eloonjäämisen (HR = 0,2; 95% CI 0,1-0,6; p = 0,004). Lamin B1 ilme ei liittävät kliinis muuttujia, mutta korkea ilmaisun itsenäisesti ennustivat BCR Monimuuttuja Coxin regressioanalyysiä (HR = 1,8; 95% CI 1,1-2,9; p = 0,023). Alhainen ilmentyminen lamiinivektori B2 korreloi imusolmuke positiivisuus (p 0,01) ja ennustetun epäsuotuisa DSS (HR = 0,4; 95% CI 0,2-1,0; p = 0,047).

Johtopäätökset

Nämä tulokset viittaavat siihen, ero rooleja lamins PCA etenemistä. Vähentynyt määriä Lamin A /C ja B2 lisäystä riski imusolmuke etäpesäke ja tautikohtaisten kuolemaan mahdollisesti lisäämällä ydinvoiman muodonkestävyyskokeita samalla korkea ilmentymä lamiinivektori B1 ennustaa taudin uusiutumisen.

Citation: Saarinen I, Mirtti T, Seikkula H , Boström PJ, Taimen P (2015) Differential Ennakoiva roolit A- ja B-tyypin Nuclear Lamins eturauhassyövässä Progression. PLoS ONE 10 (10): e0140671. doi: 10,1371 /journal.pone.0140671

Editor: Pavel Strnad, RWTH Aachen, Saksa

vastaanotettu: 22 heinäkuu 2015; Hyväksytty: 29 syyskuu 2015; Julkaistu: 15 lokakuu 2015

Copyright: © 2015 Saarinen et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Tietopaketti.

Rahoitus: tuettiin seuraavasti: Päivikki ja Sakari Sohlberg Foundation, https://www.pss-saatio.fi/, PT; Sigrid Juseliuksen https://www.sigridjuselius.fi/foundation/, PT; Suomen Lääketieteen Säätiö, https://www.laaketieteensaatio.fi/, PT; ja sairaanhoitopiiri Varsinais-Suomen, https://www.vsshp.fi/en/Pages/default.aspx, PT. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Eturauhassyöpä (PCA) on yleisin maligniteetti miesten ja merkittävän kansanterveyden haaste länsimaissa. Yhdysvallat, yli 230 000 uutta tapausta ja 29 000 PCa liittyviä kuolemantapauksia oli tarkoitus diagnosoitu vuonna 2014 [1]. Tärkeimmät riskitekijät PCA ovat ikä, positiivinen suvussa ja Afrikkalainen Amerikan rotu [2]. Valtaosa potilaista hoidetaan nykyisin eturauhasen ja /tai sädehoidon aikana aktiivinen valvonta voi olla hyödyllistä alhaisen riskin potilailla. Useimmissa tapauksissa tauti on paikallinen ja vain ~ 7% potilaista hoidettiin eturauhasen (HE) kuolee PCa aikana 15-year follow-up [3]. Lisäksi näyttää selvältä, että hoito huonolaatuisen syöpä (Gleason pisteet 6 tai alle) ei seuraa eloonjäämishyötyä verrattuna muihin kuolinsyitä. Käyttö eturauhasen antigeenin (PSA) on mullistanut diagnostiikka Eturauhassyövän aikana viimeisten 25 vuoden aikana ja viime aikoina järjestelmällinen PSA on osoitettu vähentävän PCa liittyvää kuolleisuutta [4]. Kuitenkin PSA puuttuu spesifisyys havaita kliinisesti merkittävä syöpien ja haittapuoli on yli-diagnoosi syöpiä, jotka eivät ole vaikutusta laatuun ja odote elämän hoitamattomana [5]. Tämä puolestaan ​​johtaa ylihoito kanssa mahdollisia haittavaikutuksia. Jotta vältettäisiin liiallinen hoito, on kiistaton tarve luotettavien biomarkkereiden tunnistamiseen mahdollisesti aggressiivinen ja tappava tapauksia, jotka pysyvät paikallinen.

Nuclear lamins ovat tyyppiä V väli hehkulampun (IF) proteiineja. Ne ovat olennaisimpia tumalevy, kuitumaisen meshwork proteiineja, jotka taustalla sisempi tumakalvoa [6]. Lamins on jaettu kahteen alaryhmään, A-tyypin ja B-tyypin lamins. Yksittäinen geeni

LMNA

, koodaa kaikki A-tyypin lamins jotka sisältävät Lamin A, lamiinivektori C, joka on kives-specific isoformia lamiinivektori C2 ja pieniä isoformin lamiinivektori AΔ10. Suuret B-tyypin lamins, lamiini B1 ja lamiini B2, koodaavat kaksi geeniä (

LMNB1

ja

LMNB2

, vastaavasti) [7]. Lisäksi sukusolujen tietyn lamiinivektori B3 syntyy

LMNB2

vaihtoehtoisen silmukoinnin [8]. Ainakin yhden B-tyyppisen lamiinivektori ilmentyy kaikissa metazoan soluissa, kun taas A-tyypin lamins pääasiassa ilmaistaan ​​erilaistuneita soluja [7].

lamins on useita toimintoja solun tumassa. Ne on mekaaninen tuki tumaan ja rooli DNA: n replikaatio ja korjaus, transkriptio, kromatiinin organisaatio ja geenisäätelyn [7]. Lukuisat mutaatiot

LMNA

aiheuttaa ryhmä peritty ihmisen sairauksia tai häiriöitä kutsutaan yleisesti laminopathies. Näitä ovat esimerkiksi sydämen ja luuston myopatiat, lipodystrophies, perifeerinen neuropatia ja ennenaikaista vanhenemista tunnettua tautia Progeria oireyhtymä [9]. Vaikka olennainen patobiologian näiden sairauksien on enimmäkseen huonosti, poikkeavuudet ydinvoiman muoto (esim herniations ja lobulations) on raportoitu yleisesti soluissa kuljettavat sairauteen liittyvän lamiinivektori mutaatioita. Mielenkiintoista on, että samankaltaisia ​​morfologisia muutoksia ytimen havaitaan usein syöpäsoluissa, mukaan lukien PCa soluihin [10]. Siksi on mahdollista, että muuttunut ilme ja muutoksia lamins osaltaan pahanlaatuisiin syöpäsoluissa [11].

Vain muutama takautuva tutkimukset ovat perusteltuja yhdistyksen välillä muuttunut lamiinivektori ilmaisun ja potilaiden hoitotuloksiin. Vaiheessa I-III peräsuolen syöpä (CRC), potilaiden lamiinivektori ilmentävien kasvainten oli huomattavasti suurempi riski kuolla CRC verrattuna potilaisiin, joilla lamiinivektori Negatiivinen kasvaimissa [12]. Perustuen

in vitro

tutkimuksissa kirjoittajat totesi lisäksi, että tämä johtuu kohonneista solun liikkuvuus, invasiivisuus ja kantasolujen kaltaisia ​​fenotyyppi edistetään Lamin A /C. Päinvastoin, Belt et ai. kertoi, että menetys Lamin A /C II vaiheessa III paksusuolensyöpä liittyy tauti uusiutuu [13]. Vuonna solmukohtien diffuusi suuri B-solujen lymfooma inaktivaatio Lamin A /C-geenin CpG-saarekkeen promoottori hypermetylaation liittyy huono selviytyminen [14].

rooli lamins PCA on tutkittu viime aikoina. Käyttämällä massaspektrometriaa (MS) ja immunohistokemia, Skvortsov et ai. raportoitu vähentynyt ilmentyminen Lamin A huono laatu (Gleason pisteet 6) kasvaimen suhteen pariksi näytteitä histologisesti normaalista kudoksesta kun taas lisääntynyt ilmentyminen havaittiin korkean riskin (Gleason pisteet 8) kasvaimissa [15]. Lisäksi Lamin A /C on yli-ilmentynyt leviämisrintamassa Eturauhassyövän kudosten ja edistää solujen kasvua, muuttoliikkeen ja hyökkäyksen kautta PI3K /AKT /PTEN reitin viljelyolosuhteissa [16]. Ilmentymisen B-tyypin lamins, toisaalta, on kasvanut syöpä- eturauhasessa ja vahvasti korreloi Gleason [17]. MS-analyysi ehdottaa, että lamiinivektori B1 on hyperfosforyloi- androgeeni itsenäistä PC-3-solujen [18]. Mielenkiintoista, kromosomialueita liittyy PCa riski paikallistaa ja tumalevy B-puutosta mikrodomaineja (LDMD) että näytteille vähensi geenitranskription (10). Vaikka luonne näiden rakenteiden on tällä hetkellä epäselvä, taajuus LDMDs korreloi PCa solulinjan aggressiivisuus, soluliikkuvuus ja Gleason luokka [10]. Yhteenvetona lamins tehdään merkittäviä muutoksia malignin transformaation aikana, mutta toistaiseksi on epäselvää, onko nämä muutokset ovat ennustearvoa PCA erityisesti korkean asteen syöpään.

Tässä tutkimuksessa tutkimme ilmaisun eri lamins PCA yksityiskohtaisesti käyttäen kudosta mikrosirulla (TMA) materiaali, joka kattaa yli 500 potilasta hoidettiin eturauhasen ja imusolmuke leikkelyn. Tuloksemme osoittavat, että vähentynyt ilmentyminen A-tyyppinen lamins liittyy kohonnut riski imusolmuke etäpesäke ja tautikohtaisten kuolemaan siten lisääntynyt ilmentyminen lamiinivektori B1 liittyy BCR ja paikallisten leviämistä. Lisäksi alhainen lamiinivektori B2 ilmaisu ennustettu suurempi riski PCa kuolleisuutta. Olemme myös keskustella mahdollisista solu biologiset mekanismit sekä niiden merkitys kliinisen riskin kerrostuminen.

Materiaalit ja menetelmät

Tissue materiaali

Parafiini upotettu formaliinilla kudoksen 501 potilasta liikennöidään eturauhasen ja rajoitettu lantion imusolmukkeiden Turun yliopistollisen keskussairaalan tammi 2000 syyskuu 2005 käytettiin rakennettaessa TMA lohkojen kuten aikaisemmin on kuvattu [19]. Lyhyesti kolme kahdentoista (mediaani 3,0) vieressä ydintä 1 mm halkaisijaltaan saatiin indeksi karsinooma vaurio, joka pidettiin merkittävin (perustuu Gleason luokan malli, tilavuus syövän leesion ja /tai ylimääräisiä-eturauhasen laajennus ). Lisäksi, yhden ytimen histologisesti hyvänlaatuinen eturauhasen kudosta saatiin samasta potilaasta. Nämä kudos ytimet siirrettiin luovuttajalta lohkojen vastaanottajalle TMA lohkot kokonaismäärään sisältyvä 63 ydintä kohden lohko sisältäen kontrollisilkkipaperia normaalista maksasta. Kaikki tapaukset lopullisessa TMA lohkot luokiteltiin perustuen International Society of Urologisessa Patologian päivitetty Gleason pisteytysjärjestelmä [20]. Tuolloin leikkaus, ei suostumus saatiin osallistujien tätä erityistä tutkimusta. Tuolloin tutkimuksen, käyttöä kudoksen ja vastaava kliinispatologiset ja seurantatietoja hyväksyi eettinen komitea sairaanhoitopiirin Lounais-Suomen (130/180/2008) ja kansallisen viranomaisen Sosiaali- ja terveydenhuollon (Valvira 394 /05.01.00.06 /2009) mukaisesti kansallisen lainsäädännön. Potilaan tiedot nimettömiksi ja de-tunnistettu ennen analyysiä.

Kliinisen

Kukaan potilaista sai androgeenideprivaatio tai sädehoitoa ennen tai välittömästi leikkauksen jälkeen. Seurantaa tehtiin eturauhasen ja leikkauksen jälkeen PSA mittaus vähintään kolme kertaa ensimmäisen vuoden aikana leikkauksen jälkeen ja vähintään kerran vuodessa seuraavien vuosien aikana. Niistä 501 potilasta, 158 (31%) oli biokemiallinen toistumisen (BCR) määritellään PSA taso 0,2 ug /L tai yli leikkauksen jälkeen.

lavastus kumppanuus- suoritettiin WHO pTNM luokitusjärjestelmän [21]. 28 potilasta (4,4%) kuoli PCa aikana seurannan, kun taas 39 (7,8%) kuoli muista syistä. Pitkien aikaväli toimintojen kunkin potilaan alkuperäinen kliininen Gleason (GS) arvioitiin uudelleen kokeneet urogenitaalinen patologi mukaan nykyinen Gleason luokitusjärjestelmä kriteerien [20] käyttämällä hematoksyliini- eosiinileikkeissä alkuperäisestä eturauhasen yksilöitä. Tämä pisteytys käytettiin selviytymisen analyysien ja on esitetty taulukossa 1.

immunohistokemia ja mikroskopia

Jotta suorittamiseksi immunohistokemiallinen (IHC) arviointi, parafiini ensin poistetaan ksyleenillä ja kohdat rehydratoitiin luokiteltujen sarjojen alkoholia. Kaikki vasta-aineet testattiin eturauhasen TMA koekappaleiden ennen käyttöä lopullisessa TMA materiaalin optimoimiseksi laimennus ja sopivin esikäsittelyä. Epitooppi peittymisen suoritettiin mikroaaltouunissa kudoksen liukuu joko Tris-HCI-puskuria (pH 9; lamiinivektori B1, B2 ja C vasta-aineet) tai sitraatti perustuu puskuria (pH 6; lamiinivektori vasta-aineen) 10 min. Ensisijainen käytetyt vasta-aineet olivat hiiren monoklonaalinen anti-Lamin A (1: 1000, klooni 133A2, Abcam), vuohen polyklonaalinen anti-Lamin B1 (1: 4000, C-20, Santa Cruz), hiiren monoklonaalinen anti-Lamin B2 (1: 500, LN43, Abcam) ja kanin polyklonaalista anti-Lamin C (1: 150, RalC, Novus). Johtuen vaihtelu värjäytyminen eri laikkuja lamiinivektori C vasta-aineen, vain 199 potilasta värjätään samalla laastari sisällytettiin lopulliseen tilastollista analyysiä. Värjäykset suoritettiin käyttäen Ventana värjäysautomaatilla ja ensisijaisen vasta-aineet havaittiin Vectastain anti-hiiri- tai anti-vuohi-HRP-konjugoidun sekundaarisen vasta-aineita. Objektilasit vastavärjättiin hematoksyliinillä ja havaittu Olympus BX60 mikroskoopilla (Olympus Optical Co., Ltd., Tokio, Japani).

TMA dioja lajiteltiin visuaalisesti IHC laadut, tietämättä kliinis ominaisuuksien potilailla. Värjäytymisen voimakkuudet kunkin ytimen luokiteltiin 0 (mitään erityistä värjäytyminen karsinoomasoluja, voimakas värjäytyminen hyvänlaatuisia rauhaset ja stroomasoluja), 1 (matalan intensiteetin tumalevy värjäytyminen karsinoomasoluja, voimakkaampi värjäytymistä hyvänlaatuinen rauhasten tai stroomasolut), 2 (kohtalaisia ​​ja selvästi näkyvissä kerrostuman karsinoomasoluja, mutta voimakkaampi värjäytymistä hyvänlaatuinen rauhaset ja stroomasolujen) tai 3 (korkea intensiteetti kerroksesta värjäyksen vastaavat tai ylittävät intensiteetti normaali rauhaset ja stroomasolut). Potilaat, joiden kudosnäytteitä värjättiin huonosti (perustuen sisäistä valvontaa) tai irrottaa liukuu aikana värjäystä prosessi jätettiin analyysin. Keskimääräiset voimakkuuden arvot 3 tai enemmän syöpä sydämiä määritettiin kullekin potilaalle ja lopulta potilaat kahtia matalan (IHC arvosana 0 ja 1) ja korkea (IHC laadut 2 ja 3) ilmennetään ryhmää edelleen tilastollisen analyysin (paitsi lamiinivektori B1 ja C, katso taulukko 2). Dichotomization perustui jakamisesta eri alaryhmien kunkin lamiinivektori värjäystä, jotta verrattavissa olevien kanssa riittävä määrä potilaita (katso taulukko 2).

Tilastollinen

Tilastollinen analyysi suoritettiin SPSS 20 (IBM). Korrelaatiot kliinis muuttujien ja biomarkkerit analysoitiin käyttäen chi-neliö testi. Korrelaatio keskimääräisen lamiinivektori ilmaisun hyvänlaatuisia ja syöpä- eturauhasessa samasta potilaista analysoitiin itsenäinen-näytteiden T testi. Kaplan-Meier menetelmä, Log-rank-testi ja Coxin suhteellisen vaarat regressiomallin käytettiin analysoimaan yhdistyksen värjäyksen intensiteetin lopputulokseen. Lopputuloksen analyysien aika BCR-elinaika laskettiin leikkauspäivänä on päivä havaita PSA 0,2 ug /L tai yli. Tauti erityinen elinaika laskettiin alkaen leikkausta viimeisestä Seurantakäynti tai kuolemaan.

selviytyminen analyysit tehtiin koko kohortin (paitsi lamiinivektori C, katso edellä) ja korkean riskin potilaiden alaryhmässä lukien potilaan GS 7-10 kasvaimia. Kaikki tilastolliset testit olivat kaksipuolisia ja p-arvot ≤0.05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Sen tutkimiseksi, onko ilmaisun eri lamins liittyy PCa biokemiallisia etenemisen ja sairausspesifistä selviytyminen (DSS), TMA materiaali sisältää vähintään kolmeen rinnakkaiseen syöpä- näytettä ja yksi morfologisesti hyvänlaatuisia näyte 501 radikaalisti toiminut PCa potilailla värjättiin vasta-aineilla havaitsemiseksi eri lamins (A, C, B1 ja B2) ja värjäytymisvoimakkuuksia verrattiin kliinis muuttujia. Väestörakenne potilaista on esitetty taulukossa 1. Kaplan-Meier arvio analyysi, tunnettu kliinis ominaisuuksia, kuten korkea GS ja ennen leikkausta PSA, T luokka, extraprostatic laajennus (EPE) ja rakkularauhanen invaasiota (SVI) olivat tilastollisesti merkitsevästi yhteydessä BCR osoittaa, että kohortti on erittäin edustava testata korrelaatio kiinnostavia proteiineja ja potilaan tulokset (tuloksia ei ole esitetty). Vastaavasti korkea GS, T luokka, positiivinen kirurgiset marginaali, EPE, SVI ja imusolmukkeesta (LN) positiivisuus ennusti lyhentää aikaa taudin aiheuttamaa kuolemaa (tuloksia ei ole esitetty). Monimuuttuja Coxin regressioanalyysiä joka otti muut ennustetekijöitä markkereita huomioon, korkea GS, leikkausta edeltävän PSA ja T-luokan olivat riippumattomia ennustajia BCR (taulukko 3), kun taas korkea GS, T-luokka ja LN positiivisuus ennusti kuolemaa PCA (taulukko 4).

lisäksi koko tutkimuksen kohortin alapopulaation potilaalla on GS 6 kasvain analysoitiin erikseen.

lisäksi koko tutkimuksen kohortin alapopulaation potilaalla on GS 6 kasvain analysoitiin erikseen.

Värjäys lamiinivektori spesifistä vasta-ainetta osoitti, että Lamin A ilmaistaan ​​sekä perus- ja luminaalisen epiteelisolujen normaalin eturauhasen rauhasten ja on rikastettu tumalevy alueen odotetusti (kuvio 1A ). Oli kuitenkin merkittäviä eroja värjäytymisvoimakkuuksia välillä karsinoomat yksittäisistä potilaista (palkkaluokasta 0-3). Keskimääräinen värjäytymisvoimakkuuksia carcinoma solutumien olivat huomattavasti korkeammat verrattuna normaaliin epiteelin hyvänlaatuista näytteet samoilta potilaista (pariksi-otosten t-testiä; tarkoita värjäytymisvoimakkuuksia +/- SEM 1,97 +/- 0,03 ja 1,45 +/- 0,03 syöpä ja hyvänlaatuinen vastaavasti p 0,001). Alhainen Lamin A: n eks- (arvosana 0-1) oli tilastollisesti merkitsevää yhteyttä imusolmuke positiivisuus (Pearson Chi-Square testi, p = 0,009), mutta ei muita kliinis testattuihin muuttujiin. Kaplan-Meier arvio analyysi ei ollut korrelaatiota lamiini A: n eks- ja BCR (tietoja ei ole esitetty). Kun DSS käytettiin päätepiste, trendi välillä alhainen Lamin A: n eks- ja huono tulos nähtiin koko väestöstä, mutta tämä ero ole osoittanut tilastollista merkittävyyttä (kuvio 1 B; p = 0,27). Kuitenkin alaryhmästä GS 6 kasvaimet potentiaalisesti aggressiivista käyttäytymistä, alhainen Lamin A: n eks- tilastollisesti merkitsevästi yhteydessä huonoon tulokseen (kuvio 1 C; p = 0,044). Nämä tulokset viittaavat siihen, että vähentynyt määrä Lamin A voi edistää lymphovascular invaasion ja etenemisen mahdollisesti etäpesäkkeitä.

(A) Edustavia esimerkkejä TMA dioja värjättiin Lamin A immunohistokemiallisesti. Matala ja korkea teho kentän kuvia sekä matala ja korkea ilmentävien kasvainten näkyvät. (B-C) Kaplan-Meier-analyysi osoittaa suuntauksen välillä alhainen Lamin A: n eks- ja huono DSS koko kohortin (B; p = 0,27). Kuitenkin alaryhmästä sairastavien potilaiden Gleason pisteet 6 kasvaimia, on tilastollisesti merkitsevä ero (C; p = 0,044).

Lamin C on toinen merkittävä A-tyypin lamiinivektori koodaama

LMNA

vaihtoehtoisin liittämiseen. Tämä isoformi on 92 aminohappoa lyhyempi kuin lamiini A: n ja kuljettaa ainutlaatuinen C-terminaalisen hännän, joka on poistettu ennen lamiini A: lla posttranslationaalinen modifikaatio. Värjäyksen lamiini C vasta-aineen (havaitaan lamiini C erityisiä C-terminaalisen hännän domeeni vain) osoitti, että lamiini C on samalla ilmaistaan ​​ja läsnä tumalevy sekä normaaleilla pohjapinta ja luminaalisen epiteelin solujen sekä suurin osa (mutta ei kaikki) karsinoomat, joilla on alhainen tai kohtalainen intensiteettiä (S1A kuvio). Parillisten T-testi osoitti, että keskimääräinen värjäytymisen intensiteettiä lamiini C olivat merkittävästi korkeammat karsinoomanäytteistä (1,30 +/- 0,06) suhteessa normaaliin epiteelin (1,04 +/- 0,05, p = 0,001). Ei ollut mitään korrelaatiota lamiinivektori C ilmaisun ja kliinis muuttujia (tuloksia ei ole esitetty). Vuonna Kaplan-Meier-analyysi, huomasimme mitään korrelaatiota lamiinivektori C ilmaisun ja BCR (tuloksia ei esitetty) samankaltainen lamiinivektori A. Oli suuntaus välillä huomaamattomasti alhainen lamiinivektori C lauseke (luokka 0) ja epäedullisempi DSS kun potilaalla on kaikki eri Gleason ryhmät tutkittiin (S1B kuvio; p = 0,14). Lisäksi GS 6 alaryhmästä potilaiden lamiinivektori C syöpäkasvain (luokka 0) oli tilastollisesti merkitsevästi suurempi riski kuolla PCA (S1C kuvio; p = 0,009). Nämä tulokset viittaavat siihen, että lamiini A ja C, jotka molemmat on valmistettu

LMNA

geeni, voi olla samanlaisia ​​biologisia vaikutuksia malignin transformaation Eturauhassyövän.

ilmentyminen lamiinivektori B1 havaitaan yleensä kaikissa eukaryoottisissa solut ja sen menetys on vakavia vaikutuksia alkionkehityksen aikana kuin korostettu kehityspoikkeavuuksia keuhkojen ja aivojen ja varhainen perinataalisesti kuolemaan

LMNB1

hiirten [22]. Meidän materiaali, kaikki histologisesti hyvänlaatuinen näytteet osoittivat lievää tai kohtalaista värjäytymisen intensiteetti lamiinivektori B1. Kaikki karsinooma näytteet olivat lamiinivektori B1 sekä myönteiset (kuvio 2A), mutta 65% karsinoomien osoittivat korkean ilmentymisen (arvosana 3) Lamin B1. Parillista t-testi osoitti, että oli huomattavasti enemmän lamiinivektori B1 värjäytymistä karsinoomia suhteessa normaaliin hyvänlaatuinen näytteitä (2,7 +/- 0,03 vs. 1,7 +/- 0,03, p 0,001). Mitään merkittävää korrelaatio löytyi lamiinivektori B1 ilmaisun ja kliinis testattuihin muuttujiin. Vuonna Kaplan-Meier-analyysi, korkea ilmentyminen lamiinivektori B1 liittyi BCR koko kohortin (kuvio 2B; p = 0,038) ja alaryhmästä GS 6 (p = 0,034, tuloksia ei ole esitetty). Kuitenkaan ollut mitään korrelaatiota lamiinivektori B1 ilmaisun ja DSS joko koko kohortti (kuvio 2C; p = 0,55) tai alaryhmästä sairastavien potilaiden GS 6 kasvaimet (p = 0,57, tuloksia ei ole esitetty). Monimuuttuja Coxin regressioanalyysiä korkea lamiinivektori B1 ilme säilyi itsenäisenä ennustaja BCR koko kohortin korjattuna preoperative PSA ja Gleason arvosana (HR 1,8, 95% CI 1,1-2,9, p = 0,023; taulukko 3). Nämä tulokset viittaavat siihen, että korkea ilmentyminen lamiinivektori B1, tuntemattomasta syystä, lisää riskiä PCA uusiutumisen mutta ei ole merkittävää vaikutusta PCa eloonjäämiseen.

(A) Edustavia esimerkkejä TMA dioja värjättiin lamiinivektori B1 kanssa immunohistokemiallisesti. Matala ja korkea teho kentän kuvia sekä matala ja korkea ilmentävien kasvainten näkyvät. (BC) Kaplan-Meier-analyysi osoittaa, että korkeat lamiinivektori B1 ilmaisu ennustaa lyhyemmän aikaa BCR koko kohortin (B; p = 0,038), mutta ei ole mitään korrelaatiota DSS (C; p = 0,55).

Lamin B2 ilmaistiin kaikki tavalliset ja pahanlaatuiset eturauhasen rauhaset (kuvio 3A). Kuitenkin samanlainen kuin muut lamins oli tilastollisesti merkitsevästi suurempi IHC intensiteetti lamiinivektori B2 syöpä rauhaset suhteessa normaaliin hyvänlaatuinen rauhaset (1,74 +/- 0,03 vs. 1,48 +/- 0,03, p 0,001). Alhainen lamiinivektori B2 ilmentyminen liittyi imusolmuke positiivisuus (Chi-square; p = 0,005) ja oli suuntaus välillä alhainen lamiinivektori B2 ilmaisun ja T-luokan (p = 0,076) ja EPE (p = 0,098). Kaplan-Meier-analyysi ei ollut korrelaatiota lamiinivektori B2 ilmaisun ja BCR (tietoja ei ole esitetty). Kuitenkin kun DSS käytettiin päätepiste, oli suuntaus välillä alhainen lamiinivektori B2 ilmaisun ja huono DSS koko kohortin (kuvio 3B; p = 0,099) ja rajatapaus tilastollista merkittävyyttä GS 6 alaryhmässä (kuvio 3C; p = 0,051). Nämä tulokset osoittavat, että lamiinivektori B1 ja lamiinivektori B2 ennustaa eri lopputulokseen PCA, jotka voivat johtua-eroon rooleja syöpä eturauhasen soluissa.

(A) Edustavia esimerkkejä TMA dioja värjättiin lamiinivektori B2 kanssa immunohistokemiallisesti. Matala ja korkea teho kentän kuvia sekä matala ja korkea ilmentävien kasvainten näkyvät. (B-C) Kaplan-Meier-analyysi osoittaa suuntauksen välillä alhainen lamiinivektori B2 ilmaisun ja lyhentää DSS koko kohortin (B; p = 0,099). Alaryhmässä, jossa potilaalla on Gleason pisteet 6 kasvaimia, Kaplan-Meyer analyysi hieman ei osoita tilastollisesti merkitsevää eroa, mutta vahva trendi on nähtävissä (C; p = 0,051).

Keskustelu

ydin- lamins ovat hyvin konservoituneita lajien välillä ja fylogeneettinen analyysi viittaa siihen, että ne edustavat esi koko IF proteiinin perhe [23]. On kertynyt todisteita siitä, että lamins tue ainoastaan ​​fyysistä muotoa tumaan vaan myös edistää useita perustavanlaatuisia ydin- toimintoja, kuten genomin organisaatio ja transkription kautta vuorovaikutusta kromatiinin ja useiden transkriptiotekijöiden [7]. Toimintahäiriö nämä mekanismit voivat olla vahingollisia vaikutuksia

in vivo

osoituksena useat perinnöllisiä ihmisten sairauksien vuoksi lamiinivektori mutaatioista [9]. Kuitenkin rooli ja korjauksilla lamins pahanlaatuisia sairauksia huonommin ymmärretään.

Tässä tutkimuksessa selvitimme ilmaisun eri lamins PCA ja niiden mahdollinen käyttö arvioidut potilaiden hoitotuloksiin käyttäen laajaa TMA materiaalista ja yksityiskohtainen kliininen potilastiedot mediaani seuranta-aika on yli 8 vuotta. Vaikka ilmaus kaikkien tärkeimpien lamins havaittiin eturauhasen epiteelin, tilastollinen analyysi paljasti mielenkiintoisia muutoksia, jotka ovat merkityksellisiä, kun otetaan huomioon viimeaikainen

in vitro

löydöksiä lamiinivektori toiminto. Swift, et ai. ovat osoittaneet, että määrä lamiini A: n ja suhde A- ja B-tyypin lamins korreloi kudoksen jäykkyys (esim. lihas on enemmän lamiinivektori kuin aivot) vakauttaa tumaan ja kromatiinin fyysistä rasitusta [24]. Lisäksi alhainen A-tyypin lamins lisätä ydin- muodonmuutoskyky ja parantaa solujen maahanmuuton mikrofluidinen constrictions

in vitro

[25] ja

in vivo

in hiiren kasvain malli [26]. Tämä on sopusoinnussa tuloksemme osoittaa, että pienempiä määriä Lamin A /C liittyy imusolmuke etäpesäke ja epäsuotuisa DSS, oletettavasti lisääntyneen lymphovascular hyökkäystä. Yhdistyksen välinen matalan Lamin A: n eks- ja epäsuotuisat DSS olivat tilastollisesti merkitseviä Kaplan-Meier-analyysi suoritettiin potilailla, joilla on potentiaalisesti aggressiivinen GS 6 tauti (kuvio 1 C). Kuitenkin Coxin monimuuttuja regressioanalyysi, joka ottaa myös muita kliinis muuttujia huomioon, lamiinivektori Hieman ole tilastollisesti merkitsevä (p = 0,052, taulukko 4), että sillä ei ole itsenäinen ennustava markkeri eroaa lamiinivektori B1. Tiedot toiset taas näkevät Lamin A yliekspressoituu leviämisrintamassa PCA ja voi lisätä paikallista muuttoliike ja invaasiota [16]. Jos näin olisi, voisi olettaa, että korkeat ekspressiotasot Lamin A /C korreloi BCR mutta emme pystyneet vahvistamaan tällaista ilmiötä. Nämä erot voivat olla, ainakin osittain, vaihtelun vuoksi näytteenotto. Huolimatta siitä, että saimme kolme triplikaattinäytteet indeksistä kasvain, nämä kudoksen ytimet edustavat yleistä kasvain ekspressiotasot ja ei tarkoituksella kohdistettu alueille invasiivisen edessä.

Tulokset tästä ja muista tutkimuksista viittaavat siihen, että muutokset in lamiinivektori ilmaisun ja niiden vaikutusta kasvaimen ja kliininen tulos voi olla monimutkainen ja elinspesifisessä. Aikaisemmin ennusteen arvioinnissa on lamins syövän etenemisessä on perustettu kolorektaalisyövässä (CRC), jossa Lamin A: n eks- ennustaa huono tulos verrattuna Lamin Negatiivinen syövistä [12]. Kuitenkin vähän tiedetään ennustetekijöiden roolista lamins muissa kiinteitä kasvaimia ja tulokset viittaavat siihen, vastapäätä roolia Lamin A PCa etenemisen (kuvio 1 C). Perustavanlaatuinen ero näiden kahden adenokarsinoomien on, että 30% CRC olivat lähes vailla lamiinivektori [12], mutta ainakin jonkin verran lamiinivektori ekspressiota havaittiin kaikissa Kumppanuus- mukana tässä tutkimuksessa. Tulokset

in vitro

tutkimukset viittaavat siihen, että hiljentäminen Lamin A voi itse herkistää solut mekaanista rasitusta ja vähentää solujen eloonjäämistä [26]. Siksi läsnäolo Lamin A CRC voi suojata mekaanisesti vaeltavat syöpäsolut ja vähentää kasvaimen solukuolemaa verrattuna Lamin negatiivinen kasvaimia kun taas jos Eturauhassyövän kohtalaisen pieni määrä Lamin A voi samanaikaisesti tarjota ihanteellisen ydin- muodonmuutoskyky ja riittävä suoja mekaanisen rasituksen tunkeutuvat soluihin.

A- ja B-tyypin lamins on ero rooleja normaaleissa soluissa. Kun A-tyypin lamins useimmiten ilmaistaan ​​terminaalisesti erilaistuneita soluja, toinen tai molemmat B-tyypin lamins ilmentyvät kaikissa eläinsoluissa. Hiiret puuttuu lamiinivektori B1, lamiinivektori B2 tai molemmilla on puutteita keuhkojen ja aivojen kehitykseen ja nämä hiiret kuolevat syntyessään viittaa olennainen kehityshäiriöitä toiminto [22]. Mielenkiintoista on, että lisääntynyt tuotanto yhden B-tyypin lamiinivektori ei pelastaa menetys muiden B-tyypin lamiinivektori osoittaa, että lamiinivektori B1 ja B2 on myös ero solutoiminnoille [27]. Vastaavasti meidän tulokset viittaavat ero roolit lamiinivektori B1 ja B2 PCA etenemistä. PCa kudokset sisälsivät merkittävästi enemmän lamiinivektori B1 kuin hyvänlaatuinen kudosten samoista potilaista. Korkea lamiinivektori B1 ilmaisu liittyy BCR koko kohortin sekä GS 6 alaryhmässä (kuvio 2B) ja monimuuttuja Coxin regressioanalyysiä lamiinivektori B1 ilmestynyt itsenäinen ennustetekijä BCR (taulukko 3). Kuitenkin, ei ollut tilastollisesti merkitsevä korrelaatiota lamiinivektori B1 ilmaisun ja DSS (kuvio 2C ja taulukko 4). Vaikka kohortti on suhteellisen suuri, on tärkeää huomata, että vain 4,4% potilaista kuoli PCa aikana seurannan aikana 31% osoitti BCR. Useimmissa tapauksissa tämä voi johtua minimaalinen paikallisia jäljellä kasvain, joka ei vaikuta DSS jälkeen salvage sädehoidon [28]. Siksi korkea lamiinivektori B1 ilmentyminen todennäköisesti edistää paikallista kasvua ja /tai lisääntymistä, sen sijaan mahdollistaa metastaattinen käytös kautta lymphovascular hyökkäystä. Tueksi tätä, tuore tutkimus on osoittanut, että maltillisesti lamiinivektori B1 syöpäsoluissa viivästyksiä solusyklin etenemisen [29]. Lisäksi hiljentäminen Lamin B1 normaaleissa diploidi Wi-38 keuhkon solujen aiheuttaa monistus vanhenemista kun yli-ilmentyminen lisää proliferaatiota rate [30]. Coradeghini et ai. aiemmin raportoitu, että lamiinivektori B1 ilmaisu korreloi GS ja voitaisiin käyttää biomarkkerina kasvaimen erilaistumiseen ja ennustavat [17]. Emme pystyneet vahvistamaan korrelaatio GS mutta vielä tärkeämpää tuloksemme osoittavat selvästi, että lamiinivektori B1 on itsenäinen ennustaja, jota voitaisiin käyttää määrittämään riskin paikallisen kasvun ja lisääntymisen.

tiedetään vähän roolista Lamin B2 ja sen yhdessä syöpä.