Krooninen sairaus

tiivistelmä

177Lu-DOTA-HH1 (

177Lu-HH1) on uusi anti-CD37 radioimmuunikonjugaatin kehitetty hoitamaan non-Hodgkin-lymfooman. Hiiret, joilla ihonalainen Ramos ksenografteja käsiteltiin eri toimintojen

177Lu-HH1,

177Lu-DOTA-rituksimabi (

177Lu-rituksimabi) ja epäspesifistä

177Lu-DOTA-IgG

1 (

177Lu-IgG

1) ja terapeuttinen vaikutus ja myrkyllisyys hoidon seurattiin. Merkittävää kasvaimen kasvun viivästyminen ja elonjäämisetua hiirten havaittiin hiirissä, joita hoidettiin 530 MBq /kg

177Lu-HH1 verrattuna hoidettujen hiirien samanlainen toimintaan

177Lu-rituksimabi tai määrittelemätön

177Lu-lgG1 , 0,9% NaCl tai leimaamattomia HH1. Kaikki hiiret injektoitiin 530 MBq /kg

177Lu-HH1 siedetty hoidon hyvin. Sen sijaan, 6 10 hiiriä hoidettiin 530 MBq /kg

177Lu-rituksimabi kokenut vakavaa säteilyä myrkyllisyyttä. Säilyttäminen

177Lu-rituksimabia elinten mononukleaarisessa fagosyyttijärjestelmä oli pidempi kuin

177Lu-HH1, mikä selittää korkeamman myrkyllisyyttä havaittu hiirissä, joita hoidettiin

177Lu-rituksimabia.

In vitro

sisäistämisen tutkimukset osoittivat, että

177Lu-HH1 sisäistää nopeammin ja vielä enemmän kuin

177Lu-rituksimabi, jotka saattavat olla syynä siihen, että parempi terapeuttinen vaikutus

177Lu-HH1.

Citation: Repetto-Llamazares AHV, Larsen RH, Patzke S, Fleten KG, DIDIERLAURENT D, Pichard A, et al. (2015) Kohdennettu Cancer Therapy kanssa Novel Anti-CD37 Beta-Particle Emitting Radioimmuunikonjugaatin hoitoon Non-Hodgkin-lymfooma. PLoS ONE 10 (6): e0128816. doi: 10,1371 /journal.pone.0128816

Academic Editor: Ken Mills, Belfastin yliopisto, Yhdistynyt Kuningaskunta

vastaanotettu: 09 helmikuu 2015; Hyväksytty: 30 huhtikuu 2015; Julkaistu: 11 kesäkuu 2015

Copyright: © 2015 Repetto-Llamazares et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus oli osittain rahoittama Norja Research Council (https://www.forskningsradet.no) lupanumeroita 213633 ja 219454 sekä Nordic Nanovector ASA ( https://www.nordicnanovector.com). Co-kirjoittajat Ada H. V. Repetto-Llamazares ja Jostein Dahle työskentelee Nordic Nanovector ASA. Nordic Nanovector ASA tukivat muodossa palkkojen tekijöille AHVR-L ja JD, mutta ei ollut mitään ylimääräistä roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. Toinen kirjoittaja Roy H. Larsen on sidoksissa Sciencons AS. Sciencons AS on osakkaana Nordic Nanovector ASA. Sciencons AS ei toimittanut tukea muodossa palkan tekijän RHL, ja ei ollut mitään ylimääräistä roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. Erityinen roolit nämä kirjoittajat ovat muotoutuneet ”kirjoittaja maksujen osiossa.

Kilpailevat edut: Tämä Tutkimuksen rahoittivat osittain Nordic Nanovector ASA (https://www.nordicnanovector.com/). Kirjoittajat Jostein Dahle ja Ada H. V. Repetto-Llamazares työskentelee Nordic Nanovector ASA, ja Roy H. Larsen on hallituksen jäsen Nordic Nanovector ASA ja Sciencons AS ja kolme niistä ovat osakkeenomistajien Nordic Nanovector ASA. 177Lu-HH1 on päätuote Nordic Nanovector ASA. Ei ole olemassa patentteja, edelleen kehitteillä tai muita kaupan tuotteita julistaa. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamiseen ja materiaalien

Johdanto

Huolimatta lupauksen terapian avulla paljain monoklonaalinen vasta-aine (mAb) rituksimabi, huomattava määrä potilaista hoidettiin tavanomaisilla annoksilla rituksimabia yksinään tai yhdistettynä kemoterapia ei saada täydellistä vastausta ja saattaa lopulta relapsin [1]. Vaihtoehtoiset hoidot ovat anti-CD20-mAb: t konjugoitu

131I (tositumomab) tai

90Y (ibritumomabi-tiuxetan). Hoito tavanomaisilla toimintaan radioleimatun mAbien on tuottanut suurempia kokonaisvaste ja täydellinen remissioprosentit verrattuna paljain mAbien [2-5]. Ottaen huomioon, että radioimmunoterapiassa (RIT) käytetään useimmiten, kun potilasta on hoidettu useita kierroksia rituksimabin ja että kaksi hyväksyttyä radioimmuunikonjugaattien (RIC) kliiniseen käyttöön,

90Y-ibritumomabi-tiuxetan (Zevalin) ja

131I-tositumomab (Bexxar), kohdistuvat samaan CD20-antigeenin rituksimabi, on toivottavaa suunnitella uusi RIC, joka kohdistaa eri antigeenille kuin CD20. CD37-antigeeni ilmentyy runsaana B-soluissa, mutta puuttuu plasman soluja ja normaaleja kantasoluja [6-8]. Siksi CD37 näyttää olevan sopiva terapeuttinen kohde potilailla, joilla oli uusiutunut B-soluissa tuotettu maligniteetteja, kuten B-solujen KLL, karvainen-cell leukemia (HCL) ja B-solu-NHL.

RIT kanssa CD37 kuin tavoite on aiemmin tutkittu käyttäen

131I-leimattua hiiren monoklonaalinen vasta-aine (MB-1) sekä hiirimallissa ja potilailla [9-14]. Korkeampi sisäistämisen ja hajoaminen

131I-leimattu RIC havaittiin CD37 kuin CD20 [14]. Huolimatta lupaavia kliinisiä vasteita havaittiin näissä kliinisissä tutkimuksissa anti-CD37-vasta-aine, jatkokehitys RIT keskittyi CD20 tavoitteeksi antigeeni eikä myöhemmin on pyritty kehittämään RIT anti-CD37-pohjainen RIC. Muutamat muut CD37-suunnatun vasta-pohjainen immunoterapioiden on kuitenkin tutkittu potilailla. Pieni Modulaarinen immunopharmaceutical proteiini Otlertuzumab on edennyt kliiniseen testaukseen [15] ja raportoi hiljattain toisen vaiheen tietojen yhdistettynä bendamustiini [16]. Lisäksi Fc-muokattu vasta-aine CD37.1 (BI836826) [17] on äskettäin tullut vaihe I [18]. Lisäksi kaksi vasta-aine-lääke-konjugaatteja (ADC: t) on kehitetty, että kovalenttisesti sytotoksisia aineita CD37-kohdistaminen vasta-aineita, jotta niiden kasvainten vastainen teho: IMGN529 [19] ja AGS-67E [20]. ADC on suunniteltu antamaan toimitusajat sytotoksisten yhdisteiden ilmentävät solut kohdeantigeeniä kautta ADC sitova, sisäistämistä, ja solunsisäinen hyötykuorma vapautumista. Kliiniset tiedot osoittavat potentiaalia ADC syövän hoitoon CD30 ja HER2 kasvaimia [21,22]. Kaikki nämä CD37 kohdistaminen huumeita oli saatu lupaavia tuloksia, mikä edelleen vahvistaa CD37 tavoitteeksi hoitoon NHL ja CLL. Eräs etu RIT verrattuna paljain mAbien ja ADC on välillä säteilyn, joka antaa ristituleen vaikutus, niin että kasvainsolut vähemmän antigeenejä tai ei-saatavilla kasvainsolut myös kärsiä sytotoksista säteilyä. Jää nähtäväksi, vaikutusmekanismi RIT on parempi kuin ADC.

potenssi RIT vastaan ​​sisäistämistä antigeeni CD37 ehkä olisi aliarvioitu käyttämällä radionuklidin

131l, joka taipumus olla lohkaistaan ​​pois vasta ja erittyy soluista kun sisäistämistä ja hajoamista, kun niitä käytetään ”ei-residualizing” tyrosiinia sisällytetty radioaktiivinen merkkiaine, kuten tehtiin alussa tutkimuksissa

131I-MB-1 [23]. ”Residualizing” radioleimoilla, toisaalta, ovat loukussa soluissa jälkeen aineenvaihduntaa RIC. Yrittäessään arvioida uudelleen ja parantaa RIT vastaan ​​CD37 olemme kehittäneet uuden RIC (Betalutin), joka perustuu ”residualizing” radioaktiivinen merkkiaine

177Lu liittyy anti-CD37-vasta-aine HH1 [24]. Hoito 100 MBq /kg

177Lu-HH1 johti kolminkertainen selviytymisen SCID jotka injisoitiin laskimonsisäisesti Daudi-lymfooma solujen käsittelemättömään verrattuna hiiriin [7]. SCID-hiiriin eivät voi korjata DNA: n kaksoisjuosteen katkeaminen [25], rajoittaa radioaktiivisuuden määrä, joka voidaan antaa, kun taas nude-hiiret sietävät suurempia annoksia säteilyä. Ihonalaisena -tuumoriksenografti nude-hiirissä on enemmän merkitystä malli vieviä taudin tyyppi, joka on usein NHL potilailla kuin laskimonsisäisen mallin SCID-hiirissä. Siksi terapeuttinen ja myrkyllisyyttä vaikutus

177Lu-HH1 tutkittiin nude-hiirissä ihon alle Ramos vierassiirrännäiset paperin.

Materiaalit ja menetelmät

tuumorisoluja

Ramos lymfoomasolut (LGC Standards, Borås, Ruotsi), joka ilmaisee CD20 ja CD37-reseptorit kasvatettiin RPMI 1640 -alustassa, jota oli täydennetty Glutamax (Gibco, Paisley, UK), 10% lämpöinaktivoitua FCS: ää (Gibco) ja 1% penisilliini-streptomysiiniä (Gibco) kosteassa ilmakehässä 95% ilma /5% CO

2.

radioleimaus vasta

vasta HH1 (anti-CD37, Nordic Nanovector ASA, Oslo, Norja ), rituksimabi (anti-CD20, Roche, Pharma Schweiz, Basel, Sveitsi) ja hiiren ei-spesifisen isotyyppikontrollivasta-vasta-aine (IgG

1) (MAB002, R Packard Instrument Co, Meriden, CT, USA) ja solut pestiin kaksi kertaa käyttäen DPBS (Gibco, Paisley, UK), johon oli lisätty 0,5% paino- naudan seerumin albumiini (BDH Prolabo, VWR, Lutterworth, Leicestershire, UK), jonka jälkeen sitoutuneen aktiivisuuden soluihin laskettiin gamma-laskurilla. Tasapainodissosiaatiovakio (K

d) ja enintään keskimääräinen tiheys antigeenejä (B

max) laskettiin asentamisen kokeelliset tiedot. Kolme koetta suoritettiin käyttämällä

177Lu-HH1 ja 2, joissa käytettiin

125l-rituksimabia. Tulokset kaikissa kokeissa kunkin RIC laskettiin keskiarvo saamiseksi keskiarvoa K

d ja B

max jokaiselle RIC.

Ulkoisten kokeita

HH1-DOTA leimattiin Alexa Fluor 488 ja rituksimabin kanssa Alexa Fluor 647 (Molecular Probes, Invitrogen, Paisley, UK). Yksi miljoonaa Ramos-solua per ml kasvualustaa inkuboitiin 10 ug /ml HH1 tai 20 ug /ml rituksimabia joko 19 tunnin ajan 37 ° C: ssa tai 1 tunnin ajan noin 4 ° C: ssa. Hoechst 33342 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) lisättiin soluihin pitoisuutena 2 ug /ml 1 tunnin ajan, ennen kuin kuvantaminen. Solut kuvattiin kanssa AxioImager Z1 ApoTome mikroskooppi järjestelmä (Carl Zeiss, Jena, DE) käyttämällä PlanApo 63 × /N.A.1.4 DIC objektiivi, asianmukaisia ​​optisia suodattimia, joka on AxioCam MRM kamera ja Axiovision 4.8.2 (Carl Zeiss). Z-profiilit saatiin jokaista 1 um koko solun tilavuus. Kuvat esitetään peittokuvia fluoresenssikuvia Keski z-osassa ja DIC kuva. 20- 40 solua skannataan kussakin käsittelyssä.

Eläimet ja ksenografteissa

Institutionaalisesti kasvatettu nainen Kateenkorvattomiin nude FOX1

nu-hiiriä käytettiin. Ikä ja paino hiirille annetaan taulukossa 1. Eläimiä pidettiin alle patogeenivapaissa olosuhteissa, joissa on 12 tunnin valaistuksen aikana huoneenlämmössä 23 ° C ja ilman suhteellinen kosteus 55% muovihäkkeihin. Ruoka ja vesi syötettiin

ad libitum

ja vuodevaatteet vaihdettiin säännöllisesti. Hiiret nukutettiin ihonalaiset 70-100 ui Tiletamin-tsolatsepaami mix (Virbac, Carros Cedex, Ranska), laimennettu 1: 5 steriilillä vedellä ennen istutusta kappaletta Ramos lymfooma ksenograftikudoksesta päässä kantaja-hiiriä, (halkaisija 1,5-2 mm) kyljissä. Kaikki menettelyt ja kokeista, joissa eläimiä tässä tutkimuksessa oli hyväksynyt Norja Animal Research Authority (NARA). Department of Comparative Medicine institutionaalisten eläinlääkäri on vahvistanut säännöt ruokintaan, seuranta, käsittely, ja uhrata eläimiä lainsäädännön mukaisia ​​asettamia maa- Norjan ja ”Eurooppalainen suojelemista käytettävien selkärankaisten eläinten kokeellisiin ja muihin tieteellisiin tarkoituksiin ”. Institutionaaliset eläinlääkäri on siirtänyt viranomainen Norja Animal Research Authority (NARA). Laboratorio eläin tilat voivat rutiininomaisesti terveydenhuollon seuranta ohjelma ja testataan tarttuvan organismeja mukaan muunnosta felasa (FELASA) suosituksia.

Hoito ja myrkyllisyyden kokeet

eläimillä kasvava kasvaimia, joiden läpimitta on välillä 4 ja 12 mm satunnaistettiin häkeissä mukaan hoitoryhmissä ja annettiin suonensisäisesti 100 ui injektioliuosten säätää yksittäisiä hiiren painoa. Kaksi alustavaa kokeet suoritettiin ruiskuttamalla toimintojen välillä 50 ja 1000 MBq /kg

177Lu-HH1 (S1 File). Nämä kokeet käytettiin päättää koeparametreihin valittu kahdesta kokeesta esitetään tässä asiakirjassa (taulukko 1), joka sisälsi ruiskutetaan toiminta 410 ja 530 MBq /kg

177Lu-HH1, 300 ja 530 MBq /kg

177Lu -rituximab, 530 MBq /kg

177Lu-IgG

1 ja 15 ug /kg HH1 ja 0,9% NaCI: a kontrolliryhmiin.

hiiret punnittiin ja kliinisesti havaittu kaksi tai kolme kertaa viikossa enintään 109 päivää. Lisäksi hiiriä seurattiin päivittäin mitään merkkejä sairaudesta tai epämukavuutta. Aktiivisuustaso, ihosairaus (ekseema, verenvuodot, jne.) Ja yleisen terveyden hiiriä tarkkailtiin päivittäin. Hiiret lopetettiin kaulan sijoiltaan alla Sevofluraani kaasun anestesiassa jos jokin seuraavista inhimillinen loppupisteet saavutettiin: kasvaimen halkaisija ylitti 20 mm, paino laski 20% suurimmasta kehon painoa tai eläinten muuten osoitti oireita vakava sairaus ja epämukavuutta.

kasvaimen kasvua seurattiin jopa ensimmäisessä kasvaimen tilavuuden mittaus ylittää 2000 mm

3 kussakin hiiren (isompi kasvaimet kehittyvät yleensä nekroottisen haavoja). Täydellinen remissio määriteltiin havaittavaa kasvainta. Hiiret saavuttaa tässä vaiheessa pidettiin pitkän aikavälin vasteen.

Hematologia.

otettiin verinäytteet ennen injektiota, kuollessa ja jokainen 4-7 viikkoa hoidon jälkeen annon. Veren näytteenotto suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [26]. Säteily myrkyllisyys määriteltiin valkosolujen alle 1 x 10

9 1 /l trombosyyttiarvo alle 400 x 10

9 1 /L, äkillinen laihtuminen-noin 5% kulunut 2-3 päivää – mukana on matala aktiivisuustaso, ja yleinen sairauden. Vertailut keskiarvot eri hoitoryhmien tehtiin käyttäen t-testejä merkitsevyystasolla 0,05.

Yksi hiiri käsiteltiin 530 MBq /kg

177Lu-HH1 uhrattiin 11 päivää hoidon jälkeen pistoksen saamiseksi hematologian ja histologia dataa tässä aikapisteessä. Lisäksi saadakseen enemmän hematological tietoa 3 hiirtä, joissa kasvainten halkaisijat välillä 12 ja 15 mm: n (800 ja 1300 mm3) olivat mukana myös kokeessa 2.

histopatologia.

Hiiret ruumiinavaus ja sydän, keuhkot, maksa, vatsa, perna, pienten ja suurten suolet, munuaiset, reisiluu, lihas, kallo, aivot, kasvain, ihon, munasarjat ja imusolmukkeet kiinteitä ja kuljetettiin Accelera, Milano, Italia valamiseen, leikkaamista, värjäystä ja patologiset tutkimukset .

bioleviäminen kokeissa

konjugaatteja annettiin häntälaskimoinjektiona 100 ui liuosta (0,2 ja 0,9 MBq) jokaiselle eläimelle. Välillä 4 ja 7 hiiret tapettiin kaula sijoiltaan alla Sevofluraani kaasua anestesiassa kunakin ajankohtana jälkeen sydänpunktio verinäytteiden ottoa varten. Kasvaimen koot at injektion konjugaattien vaihteli 120 ja 1800 mm

3. Tutkimukset tehtiin kuvatulla tavalla viitaten [28]. Vertailut keskiarvojen tehtiin käyttäen t-testejä merkitsevyystasolla 0,05.

pilotti

In vivo

SPECT /CT tehtiin 2 hiiriä Ramos ihonalaisen ksenografteja, joiden läpimitta on noin 12 mm niiden oikeaan kylkeen on nanoSPECT /TT (Bioscan Inc., Washington DC, USA). SPECT /CT yritysostoja tehtiin 3, 24 ja 48 tunnin kuluttua altistuksesta injektion hiiri 1 ja 24 tunnin kuluttua hiiren 2. Toimet mitattuna SPECT /CT verrattiin ex vivo mittaukset tehty 48 tunnin kuluttua hoidon annon. Hiiriin injektoitiin i.v. 150 ui 10 MBq

177Lu-HH1 ja nukutettiin 2% isofluraanilla kuvien hankintaan.

Dosimetria

annosnopeus ja imeytyy annokset

177Lu-HH1 ja

177Lu-rituksimabia hiiret laskettiin kuvatulla viitaten [28] varten injektion 1 MBq /hiiri (40 MBq /kg) ja olettaen keskimääräinen energia β-hiukkasten, Auger- ja muuntaminen elektroneja olevan 0,1473 MeV [29]. Itsestään säteilytysjaksoa kasvainten oli arviolta 0,944 (200 mg kasvain [30]).

Tilastollinen

selviytymistä eri hoitoryhmään verrattiin Kaplan-Meyer eloonjääminen analyysi käyttäen SigmaPlot for Windows versio 12.0 (Systat Software Inc., Kalifornia, USA) käyttämällä aikaa päästä kasvaimeen määrä ylittää 4 kertaa alkuperäisen kasvaimen tai eutanasiaa aiheutuu säteilystä myrkyllisyyden oireita kuin päätepisteet. Hematologia ja biodistribuutio tietoja verrattiin käyttäen yksisuuntaista ANOVA. Useat vertailut suoritettiin käyttäen Holm Sidak menetelmällä. Merkitsevyystasolla p 0,05 käytettiin kaikissa testeissä.

Tulokset

Hoito ja myrkyllisyyden kokeissa

Kasvaimen kasvua ja selviytymistä.

Oli selvästi kasvaimen kasvun viivästyminen hiirillä käsiteltiin 530 MBq /kg

177Lu-HH1 verrattuna hiirillä, joita hoidettiin joko

177Lu-IgG

1 tai 0,9% NaCl: lla (kuvio 1A). Kasvaimen kasvu oli myös viivästynyt joissakin hiirissä, joita hoidettiin 530 MBq /kg

177Lu-rituksimabi, mutta tämä hoito on osoittautunut myrkyllisiä: 60% hiiristä oli uhrata aiheuttamien oireiden vaikean säteilyn toksisuuden välillä 11 ja 18 päivää injektion jälkeen hoidon (taulukko 2). Mikään hiiret tapettiin johtuen säteilystä toksisuuden oireita minkään muun hoitoryhmissä. Kasvaimen kasvua kontrollihiirissä käsiteltiin 0,9% NaCl tai 15 ug /kg paljaalla HH1 oli epähomogeeninen, 30% ja 10% täydellisen remission, vastaavasti. Toisaalta, hiirissä hoidettiin 530 MBq /kg

177Lu-IgG

1 kasvoi tasaisesti ja eivät osoittaneet luonnollista regressiota. Määrä pitkän aikavälin vasteen oli korkein hiirissä, joita hoidettiin 530 MBq /kg

177Lu-HH1 (kuvio 1 B). Lisäksi hoito 530 MBq /kg

177Lu-HH1 merkittävästi laajennettu selviytymisen hiirten verrattuna

177Lu-IgG

1, 0,9% NaCl ja HH1 (p 0,05) (kuvio 1 C, taulukko 2 ). Survival hoidettujen hiirien

177Lu-IgG

1 oli huomattavasti lyhyempi kuin niillä, joita hoidettiin 0,9% NaCl (p 0,05), mikä johtui kasvusta homogeenisuus ja puute kasvainregressio havaittiin hiirissä, joita hoidettiin jossa

177Lu-IgG

1, joka saattaa liittyä säteilyn aiheuttama immunosuppressio. Aiemmin on osoitettu, että kasvua hiirissä voidaan parantaa koko kehon säteilytys (WBI) [31-34], tai muiden immunomoduloivien aineiden [32,35-38]. Luonnollinen regressoitava nude-hiirissä in kontrolliryhmissä on havaittu aiemmin [33,35], erityisesti nude-hiirissä ihon alle Ramos ksenografteja [39,40]. RIT voidaan pitää eräänlaisena WBI hoitoa, joka voi siis johtaa parempaan ottaa ja kasvua ksenograftien käsitellyissä hiirissä kuin kontrollihiirillä. Täten terapeuttinen teho RIT mahdolliseen aliarviointiin hiiren malleissa, joissa koko kehon sädehoidon edistää kasvaimen kasvua, varsinkin kun verrataan terapeuttinen vaikutus RIC edustaja, jolla on matala systeeminen toksisuus kuten NaCl tai leimaamattoman mAbien. Se voi olla helpompaa, siis verrata vaikutusta RIC vastaaviin annoksia ei-spesifisiä, ohjaus RIC sijaan.

(A) Yksittäiset kasvaimen kasvua (n = lukumäärä kasvainten remissiossa lopussa tutkimus /kokonaislukumäärä alkuperäisen kasvaimet); (B) Prosenttia pitkäaikaisen vasteen (hiiret lopetettiin johtuen säteilystä myrkyllisyyden oireita tai hematologian mittauksiin ennen yksi niiden kasvaimet saavuttivat tilavuuden 2000 mm

3 ei pidetty analyysissä); (C) Kaplan-Meier selviytymisen käyrä. Päätepiste: kasvaimen tilavuus ≥ 4 kertaa alkuperäisen kasvaimen tilavuus. Ristit edustavat sensuroitu eläimistä, jotka lopetettiin ennen 4 kertaa alkuperäisen kasvaimen tilavuus. N = 9-10. Useat vertailut suoritettiin käyttäen Holm Sidak menetelmällä. Merkitsevyystaso: p 0.05.

Kun otetaan huomioon korkea myrkyllisyys havaittu kahden ensimmäisen viikon joidenkin hoidettujen hiirien

177Lu-rituksimabi, yksi koe suoritettiin käyttäen alempaa toimintaa. Hoidot 410 MBq /kg

177Lu-HH1 ja 300 MBq /kg

177Lu-rituksimabi (noin 50% LD50 kunkin RIC) johti vähäiseen kasvaimen kasvun viivästyminen (kuvio 2A). Hiiret käsiteltiin 410 MBq /kg

177Lu-HH1 oli eniten pitkäaikaisen vasteen, kun ei ollut pitkäaikaisia ​​vasteen hiirillä käsiteltiin 300 MBq /kg

177Lu-rituksimabi takia ei tuumorikasvun estoon ( Kuva 2B). Eloonjäämismediaanin enää hiirillä, joille 410 MBq /kg

177Lu-HH1 (yli 15 kertaa verrattuna kontrolliryhmään), mutta ero ei ollut tilastollisesti merkitsevä verrattuna muihin hoitoryhmissä (p 0,05) (kuvio 2C, taulukko 2). Eloonjäämismediaani hoidettujen hiirien 300 MBq /kg

177Lu-rituksimabin on noin 3 kertaa pidempi kuin hiirillä kontrolliryhmässä, kun taas mediaanielossaolosta käsiteltyjen hiirien 530 MBq /kg

177Lu-rituksimabin on samankaltainen hiirille kontrolliryhmässä. Siinäkin tapauksessa, että pitkän aikavälin vasteen oli suurempi korkeamman pistetään aktiivisuutta

177Lu-rituksimabi myrkyllisyyden hoito oli vahva vaikutus mediaanielossaolosta. Optimaalinen ruiskutetaan aktiivisuus

177Lu-rituksimabia saattaa olla välillä 300 ja 530 MBq /kg, kun optimaalinen määrä pitkän aikavälin vasteen löytyisi ilman hengenvaarallisia myrkyllisyys.

(A) Yksittäiset kasvain kasvu (n = lukumäärä kasvaimia remissiossa lopussa tutkimuksen /kokonaismäärästä alkuperäisen kasvaimia) (B) Prosenttia pitkäaikaisen vasteen; (C) Kaplan-Meier selviytymisen käyrä. Päätepiste: kasvaimen tilavuus ≥ 4 kertaa alkuperäisen kasvaimen tilavuus. Ristit edustavat sensuroitu eläimistä, jotka lopetettiin ennen 4 kertaa alkuperäisen kasvaimen tilavuus. N = 5-6. Useat vertailut suoritettiin käyttäen Holm Sidak menetelmällä. Merkitsevyystaso: p 0.05.

Paino.

keskimääräinen paino hoidettujen hiirien RIC laski voimakkaasti injektion jälkeen. Keskimääräinen laihtuminen kesti noin 7 päivää hoidon 530 MBq /kg ja noin 4 päivää hoidon 410 ja 300 MBq /kg toiminta (kuvio 3). Tämän jälkeen keskimääräinen paino käsiteltyjen hiirten alkoi kasvaa, pyrkien kohti keskimääräinen paino verrokkiryhmässä.

Keskimääräinen ruumiinpainossa karvattomilla hiirillä, joilla Ramos ksenografteja käsiteltiin 530 MBq /kg

177Lu -HH1, 530 MBq /kg

177Lu-rituksimabi, 530 MBq /kg

177Lu-IgG

1 epäspesifinen isotyyppikontrollilla, 15 ug /kg HH1, NaCl 0,9%, 410 MBq /kg

177Lu-HH1 ja 300 MBq /kg

177Lu-rituksimabi.

Hematologia.

keskimääräinen määrä valkosolujen (WBC) ja veren punasoluja (RBC) hiiriä käsiteltiin 530 MBq /kg eri RIC olivat alle arvot NaCl kontrolliryhmässä 4 ja 8 viikkoa, mutta normalisoitui tutkimuksen lopussa (kuvio 4A). Keskimäärin verihiutaleiden (PLT) ei vaihdellut merkittävästi vuosina käsitellyissä ja kontrolliryhmissä. Kuitenkin välillä 11 ja 25 päivää hoidon jälkeen RIC, valkosolujen, punasolujen ja PLT numerot olivat huomattavasti alhaisempia käsitellyillä hiirillä 530 MBq /kg, mikä osoittaa aallonpohja noin 2 viikon kuluttua hoidon annon. Ei ollut ohjaus eläimiä uhrattiin tällä aikajaksolla, mutta säätöarvoja voidaan olettaa olevan lähellä mitattuja lähtötilanteessa ja noin 4 viikon kuluttua hoidon injektiona NaCl ryhmässä.

määrä valkosolujen (WBC ), punasolut (RBC) sekä verihiutaleet (PLT) hiirillä Ramos ksenografteissa hoidettiin 530 MBq /kg

177Lu-HH1, 530 MBq /kg

177Lu-rituksimabi, 530 MBq /kg

177Lu IgG

1 ei-spesifinen isotyyppikontrolli 15 ug /kg HH1, 0,9% NaCl: lla (A) ja 410 MBq /kg

177Lu-HH1 ja 300 MBq /kg

177Lu-rituksimabi (B). Pinta-ala kunkin ympyrän edustaa hiirien lukumäärän laskemiseen käytetään keskiarvoja. Circles tummaa vanteen ja yhdistetty linjat edustavat otettujen näytteiden kiinteiden ajankohtina tutkimuksen aikana, jossa kaikki elossa hiiret otettiin näytteet. Ympyrät ilman tumma vanteen eikä yhdistetty viivat edustavat verinäytteet otetaan ennen eutanasiaa, joissa yleensä yksi tai kaksi hiiret tapettiin. N = 1-10. Virhepylväät = keskivirhe. *: Merkitsevä ero vastaavasta 0,9% NaCl (kontrolli) ryhmässä arvo (Yksisuuntainen ANOVA Holm Sidak menetelmällä monimuuttujille, p 0,05).

keskimäärin WBC hiirillä käsitelty 410 MBq /kg

177Lu-HH1 ja 300 MBq /kg

177Lu-rituksimabin on huomattavasti alhaisempi kuin kontrolliryhmässä 4 viikkoa hoidon aloittamista mutta arvot normalisoituivat loppupuolella kokeen (kuvio 4B ). Keskimäärin RBC ja PLT olivat samanlaisia ​​kaikissa hoitoryhmissä (p 0,05). Ei ollut kuolemia liittyy vakavia oireita säteilyn myrkyllisyydestä tässä kokeessa. Kuitenkin valkosolut hiirillä, joille

177Lu-rituksimabi jotka tapettiin 13 ja 17 vuorokautta johtuen kasvaimen halkaisija suurempi kuin 20 mm oli valkosolujen, punasolujen ja PLT arvoja huomattavasti pienempi kuin mitatut NaCl samankaltaisilla ajankohtina.

histopatologia.

tärkein elimet vaikuttavat käsittelemällä RIC toimintaan yhtä suuri tai suurempi kuin 530 MBq /kg olivat luuydin, imusolmukkeet, perna ja munasarjat. Eläimet käsiteltiin 530 MBq /kg

177Lu-rituksimabi osoittivat vakavia muutoksia Hemato-lymfatopoeettisten kudoksissa, mukaan lukien vähentynyt extra-medullaarinen hematopoieesia lymfoidia ehtyminen pernassa ja surkastumista luuytimen (kuvio 5A), mikä osoittaa säteilyvauriot (taulukko 3). Nämä havainnot olivat vaikeampia ennemmin hiiret oli tapettiin hoidon injektion. Samanlaisia ​​havaintoja tehtiin hoitoja 800 ja 1000 MBq /kg

177Lu-HH1 [26]. Suurin osa hiiristä osoittaa vakavaa säteilyä myrkyllisyyttä oireita esitellään myös ihon verenvuotoja (kuvio 5B), joka alkoi ihottuma muutamaa päivää ennen eutanasiaa. Histopatologisen havainnot olivat hyvässä kanssa hematologian mittauksiin. Toimintaan 530 MBq /kg ja suurempi munasarjat vaikutti [26]. Hiiret lopetettiin välillä 11-25 päivää hoidon jälkeen hallinto ei kuitenkaan näy poikkeavuuksia munasarjat, mikä osoittaa, että nämä muutokset kestää yli 3 viikkoa kehittämiseksi.

(A) edustaja kuvaa: normaali luuytimen hiireltä että NaCl ryhmässä (kivuttomasti 109 päivää käsittelyn jälkeen), merkitty alentunut cellularity vuonna käsitellyn hiiren 530 MBq /kg

177Lu-HH1 lopetettiin 11 päivää hoidon jälkeen, kohtalainen vähensi cellularity vuonna käsitellyn hiiren 530 MBq /kg

177Lu-IgG

1 kivuttomasti 25 päivää hoidon jälkeen ja vakavan vähensi solukkoisuus vuonna käsitellyn hiiren 530 MBq /kg

177Lu-rituksimabi lopetettiin 15 päivän kuluttua hoidon. (B) Esimerkki hiiri vakavaa ihon verenvuotoja 11 päivää annon jälkeen 530 MBq /kg

177Lu-rituksimabia. Hiiri uhrattiin päivänä kuvat on otettu.

bioleviäminen ja dosimetriaa

Veren puhdistuma oli hieman nopeampi

177Lu-rituksimabi kuin

177Lu -HH1 (kuvio 6A), joka antoi absorboituneen annoksen veren hiirillä, joille

177Lu-rituksimabi noin puolet tästä

177Lu-HH1 (taulukko 4, kuvio 6B). Säilyttäminen

177Lu-rituksimabia maksassa, pernassa ja reisiluu oli huomattavasti pidempi kuin

177Lu-HH1 tai

177Lu-IgG

1 (kuvio 6A ja 6B) ja siten absorboituneet annokset näille elimet olivat 2-3 kertaa suuremmat hoidon

177Lu-rituksimabi kuin

177Lu-HH1. Korkeampi otto

177Lu-rituksimabia reisiluu (taulukko 4) luultavasti johti korkeampaan absorboitunut annos punainen luuydin, joka on sopusoinnussa suurempi myrkyllisyys ja vähentää luuytimen soluihin havaittiin hiirissä, joita hoidettiin

177Lu-rituksimabi . Kertymä kasvaimen oli nopeampi

177Lu-rituksimabi, mutta retentio oli lyhyempi (ei tilastollisesti merkitsevä, p 0,05) kuin

177Lu-HH1 (kuvio 6A). Absorboituneet annokset kasvaimen olivat lähellä 2 Gy sekä

177Lu-HH1 ja

177Lu-rituksimabi (taulukko 4). Omaksumista ja säilyttäminen

177Lu-HH1 ja

177Lu-IgG

1 ohjaus olivat samanlaiset kaikille elimet /kudokset paitsi munuaisia ​​ja kasvaimen (kuvio 6A).

(A) Uptake on

177Lu-HH1 (N = 6-8),

177Lu-rituksimabi (N = 4-5),

177Lu-lgG1 ohjaus (N = 5) valituissa elimissä /kudoksissa nude-hiirissä kanssa Ramos vierassiirrännäiset kulkeutunut osa radioaktiivisesta annoksesta grammaa kudosta (% IA /g). Virhepylväät = keskivirhe. *: Merkitsevä ero

177Lu-HH1 (Yksisuuntainen ANOVA Holm Sidak menetelmällä monimuuttujille, p 0,05). (B) annosnopeus kohden MBq pistetään aktiivisuuden valituissa elimissä nude-hiirten kanssa Ramos ksenografteissa hoidettiin

177Lu-HH1 (N = 6-8) ja

177Lu-rituksimabi (N = 4-5). (C)

In vivo

SPECT /CT monisuuntaisiin sulatettu näkymä nude hiiren kanssa Ramos ksenograftin sen oikeaan kylkeen injektoitiin 10 MBq:

177Lu-HH1.

SPECT /CT-kuvia osoitti korkeaa ja heterogeeninen kasvaimeen verrattuna muihin kudoksiin 48 tunnin kuluttua injektion

177Lu-HH1 (kuvio 6C). Kertymä keuhkoissa, sydämessä ja aortta oli korkea 3 tunnin kuluttua ja laski yhä ajan, on huomattavasti vähentynyt 48 tunnin kuluttua. Kertymä kasvain oli alhainen 3 tuntia

177Lu-HH1 hallinto mutta lisääntyi ajan ja oli suurempi kuin muissa kudoksissa 48 tunnin kuluttua. Ero kasvaimen oton mitattuna SPECT ja gamma laskuri oli alle 10%, mikä osoittaa hyvää välisen mittauksissa

in vivo

kanssa SPECT ja

ex vivo

gammalaskennalla.

Ulkoisten kokeissa

HH1 oli lähes kokonaan sisäistetään jälkeen 19 tunnin inkubaation 37 ° C: ssa, kun taas ei ollut merkittävää sisäistämisen jälkeen 1 tunnin inkuboinnin jälkeen 4 ° C: ssa.