Krooninen sairaus

tiivistelmä

edellinen tutkimus osoitti, että DEK-proteiinia yli-ilmennetään kolorektaalikarsinoomasta (CRC) verrattuna normaaliin peräsuolen limakalvo. DEK myös korreloi merkitsevästi ennustetekijöiden ominaisuudet potilailla, joilla on CRC, joka osoittaa, että DEK ollut tärkeä rooli CRC etenemiseen. Tässä työssä me vaikutusten arvioimiseksi DEK on biologista käyttäytymistä CRC ja tutkia liittyvän molekyylitason mekanismeja. Tulokset osoittivat, että DEK yliekspressoitui ihmisen CRC kudoksissa, ja se korreloi Ki-67-indeksi ja apoptoottisen indeksin. DEK ehtyminen RNAi SW-620 ja HCT116-soluissa merkittävästi vähentynyt soluproliferaatiota, mutta lisääntynyt solujen apoptoosin. Säätelyä DEK oli mukana p53 /MDM, Bcl-2-perheen, ja kaspaasi polkuja. Tutkimuksemme osoittaa, että DEK edistää kasvua CRC, ja voisi olla terapeuttinen tavoite CRC.

Citation: Lin L, Piao J, Ma Y, Jin T, Quan C, Kong J, et al. (2014) mekanismit syövän kasvua ja Apoptoosi DEK yli-ilmentymisen peräsuolen syövän. PLoS ONE 9 (10): e111260. doi: 10,1371 /journal.pone.0111260

Editor: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 26 kesäkuu 2014; Hyväksytty: 24 syyskuu 2014; Julkaistu: 23 lokakuu 2014

Copyright: © 2014 Lin et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Special Fund 973 profaasissa Research National Ministry of Science Technology of China (2014CB560708), avustuksina, National Natural Science Funds Kiina (61371067), ja Basic Scientific Research Fund of Jilin University Kiinassa (2013-01). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

kolorektaalisyöpää (CRC) on kolmanneksi yleisin maligniteetti ja toiseksi yleisin syy syövän kuoleman maailmanlaajuisesti [1]. Elämän laatu ja 5 vuoden pysyvyys ovat vähän kehittyneitä CRC jopa kirurginen mukana kemoterapiaa ja sädehoitoa. Varhainen havaitseminen CRC on ratkaisevan tärkeää onnistuneen hoidon, koska kehittynyt korkealaatuisesta tauti korreloi lisääntynyt etäpesäkkeitä ja kuolleisuutta [2] – [4]. Siksi tunnistaminen uusien CRC välittäjiä ja biomarkkereita, erityisesti niitä, jotka liittyvät etäpesäkkeitä ja kasvua, on edelleen ratkaiseva tekijä torjumiseksi kuolleisuus uusiutuva sairaus. Edistymistä syövän synnyssä voi auttaa purkamaan elintärkeä /voimassa molekyyli biomarkkereita mukana peräsuolen syövän synnyn ja auttavat kehittämään ja löytää uusia terapeuttisia interventioita, ja ennaltaehkäisevien strategioiden ja tekijöille. Aikaisemmat tiedot ovat osoittaneet, että DEK proteiinin ilmentyminen on yliaktiivista CRC kudoksissa [5]. Yli-ilmentyminen on erityisen suuri korkealaatuisesta ja myöhäisvaiheen CRC, joten DEK mahdollisen uuden biomarkkeri ennusteeseen CRC ja tavoite torjunnassa toistumisen [5].

DEK alunperin löydettiin kuin tavoite kromosomaalisen translokaatio tapahtuma t (6, 9) on osajoukko akuutin myeloidileukemiat [6] – [7]. Nyt DEK on nousemassa jäsenenä uutta luokkaa DNA topologian modulaattorit, jotka voivat olla tavoitteet ja efektoreita pro-tuumorigeenisen tapahtumat [8]. DEK etsii kromosomissa 6p22.3 [9], ja on erittäin konservoitunut nukleoproteiini- voidaan fosforyloituu. Muodostuu 375 aminohappoa, DEK jaetaan pääasiassa tumassa euchromatin, ja edullisesti ilmaisee aktiivisesti lisääntyvissä ja pahanlaatuisia soluja, joissa se voi olla jopa 4-6 miljoonaa kopiota tuma [8]. Myöhemmät tutkimukset ovat toistuvasti havaittu DEK kuin usein yli-ilmentynyt geeni useissa kasvainten [10] – [12]. Lisäksi DEK voidaan käyttää vaikutuksia mRNA, transkriptionaalisen säätelyn, DNA vahinkosaneeraus, erilaistuminen, solun elinkelpoisuus ja solu-solu signalointi [11], [13] – [15]. Kuitenkin toiminnot DEK

in vitro

CRC solukäyttäytyminen ei ole arvioitu. Aikaisemmin osoitimme, että DEK-proteiinia yli-ilmentyy 109 tapauksissa CRC kudosten, korreloi merkittävästi potilaiden ennuste ominaisuuksia, ja oli itsenäinen riskitekijä eloonjäämiseen [5]. Tämä tutkimus noudattaa ilmaus DEK uudessa ryhmässä kerättyjen ensisijainen CRC, ja korreloi DEK ilmaisun kanssa Ki-67 ja apoptoottisten indeksejä, jotka heijastavat osuudet soluproliferaation ja solun menetys, vastaavasti. Lisäksi meillä asemaa selkeytetään DEK CRC etenemisen kanssa DEK RNA-interferenssi (RNAi) solulinjassa johdettu CRC.

DEK on inhibiittori p53-riippuvaisen ja riippumattaman solujen vanhenemista ja apoptoottisten fenotyypit [ ,,,0],7], [14], [16], ja transkriptionaalisesti voimistuvan Rb /E2F-reitin, joka on usein levoton CRC [17] – [19]. Siksi sen ilme on voimakkaasti ohjeellinen leviämisen ja apoptoosin. Täällä määritellään erityisiä onkogeenisia toimintaa DEK in CRC

in vitro

, ja tunnistaa molekyylitason mekanismi, jonka avulla DEK edistää kasvaimen kasvua.

Methods

Ethic Statement

Kaikki osallistujat antoivat kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen tutkimukseen, joka noudattaa Helsingin julistuksen ja hyväksyi Human Ethics and Research Ethics komiteoiden Yanbian University Medical College Kiinassa. Kautta leikkauksen suostumuslomakkeen, kaikki osallistujat ilmoitettiin, että resektoitua näytteitä varastoitiin sairaalan ja mahdollisesti käytetään tieteelliseen tutkimukseen, ja että heidän yksityisyyttään olisi säilytettävä.

Tissue yksilöitä

Fresh näytteitä neljä tapausta CRC pariksi viereisen noncancerous kudoksiin, ja oli mukana rutiininomaisesti käsitelty ja diagnosoitu 55 tapausta paksusuolisyövän kudoksia, jotka valittiin satunnaisesti leikkauspotilaiden välillä 2009 ja 2012 Tuumorikudoksen Bank of Yanbian University Medical College . Patologinen parametreja tarkasti kaikissa tapauksissa. Kaikkiaan 22 viereisen normaalin paksusuolen limakalvon kudokset syöpä resektio marginaali ja 18 suolen kasvainten kudokset olivat mukana myös. Kukaan potilaista oli saanut kemoterapiaa ennen leikkausta tai oli kaukaisia ​​etäpesäkkeitä. H kaikki sekvenssit suunniteltiin ja syntetisoitiin RiboBio (RiboBio, Guangzhou, Kiina) (taulukko S1). Sidek Tässä tutkimuksessa käytetty on esitetty taulukossa 1.

MTT-määritystä

tuhatta solua per kuoppa, inkuboitiin 96-kuoppaisilla levyillä. Kaksikymmentäneljä tuntia myöhemmin, siControl ja Sidek transfektoitiin Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Sidek sekvenssit lisättiin annoksesta riippuvalla tavalla 30 nM, 50 nM ja 100 nM. Neljäkymmentä kahdeksan tuntia myöhemmin, 5 mg /ml MTT lisättiin kuhunkin kuoppaan. Kun oli inkuboitu 37 ° C: ssa 4 tuntia, supernatantit poistettiin varovasti. Sitten 200 ui dimetyylisulfoksidia lisättiin kuhunkin kuoppaan ja kuopat sekoitettiin perusteellisesti 10 min. Absorbanssiarvo (OD) 560 nm: ssä kuhunkin kuoppaan mitattiin käyttämällä mikrolevylukijaa (TECAN-ääretön M200 pro, Mannedorf, Sveitsi).

immunofluoresenssi

CRC-solulinja, SW- 620, kasvatettiin peitinlaseilla 70% konfluenssiin, ja kiinnitettiin sitten 4% paraformaldehydillä 10 minuutin ajan ja tehtiin läpäiseviksi 0,5% Triton X-100: ssa 10 min kuluttua 24 h. Estäminen suoritettiin 3% naudan seerumin albumiini, jae V (Solarbio, Peking, Kiina) 1 h huoneen lämpötilassa. PBS-pesun jälkeen, soluja inkuboitiin hiiren anti-ihmis-DEK (01:50, BD Biosciences Pharmingen, San Diego, CA, USA) 4 ° C: ssa yön yli, jonka jälkeen inkuboitiin Alexa Fluor 568 vuohen anti-hiiri-IgG (H + L) (A11004, 1:1000, Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. PBS-pesun jälkeen solut vastavärjättiin 49-6-diamino-2-fenyyli (DAPI) (Beyotime, Shanghai, Kiina) ja peitelaseja asennettu mikroskooppipreparaatin haalistumista estävää Medium (Beyotime, Shanghai, Kiina). Lopuksi immunofluoresenssilla signaaleja visualisoitiin ja tallennetaan käyttäen Leica SP5II -konfokaalimikroskoopilla [21].

Pesäkkeenmuodostusta määrityksessä

Scrambled Sidek (SiControl) ja Sidek transfektoitu SW620 solulinjaa maljattiin 10 cm ruokia tiheys 5 x 10

4 solua per malja. Seuraavana päivänä elatusaine korvattiin elatusaineella, joka sisälsi 800-1000 ug /ml G418: aa (Gibco, Gaithersburg, MD, USA). Noin 7 päivän kuluttua, väliaine korvattiin. Määritys lopetettiin, kun pesäkkeet olivat selvästi näkyvissä, vaikka katsomatta mikroskoopilla, ja se oli noin 2~3 viikon inkuboinnin jälkeen 37 ° C: ssa, 5% CO2: ta. Sitten solut kiinnitettiin 0,5% paraformaldehydillä, värjättiin kristallivioletilla ja laskettiin sitten mukaan määritelty koko pesäkkeen [22].

Hoechst33342 värjäys

Solut maljattiin tiheydellä 1 x 10

4 solua /ml ja viljeltiin 2: sta 4 päivää, kunnes 80%: sta 90% konfluenssiin. Matka- tiheys 0,5-3,0 x 10

6 solua /ml on saavutettu, ja kiinnitettiin 10 minuutin ajan huoneenlämpötilassa 3% paraformaldehydiä (50 ui) ennen kuin hoito Hoechst 33342. Hoechst 33342 liuotettiin tislattuun veteen 25 mg /ml ja lisättiin DMEM (Dulbeccon Modified eagle Medium), jossa oli 2% FBS: ää lopulliseen konsentraatioon 16 ug /ml 15 min. Apoptoosi laskettiin laskemalla 500 solut fluoresenssimikroskoopilla.

Virtaussytometria

SW-620-soluja viljeltiin kuuden kuoppalevyille, ja transfektoitiin siRNA kohdistaminen DEK tai kamppailu siRNA 48 h Lipofectamine 2000 Invitrogen, Carlsbad, CA, USA. Käsittelyn jälkeen solut kerättiin trypsiinillä (0,25%) – EDTA ja kerättiin sentrifugoimalla 1000 x g: ssä 5 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Solut pestiin ja suspendoitiin uudelleen sitoutumispuskuriin, ennen kuin leimattu anneksiini V-FITC: llä ja 7AAD 20 min. Fluoresenssi (DNA pitoisuus) mitattiin virtaussytometrialla käyttämällä vakio-ohjelmiston. Solut, jotka olivat anneksiini V-FITC: llä (-) ja 7AAD (-) pidettiin elinkelpoisten solujen, kun taas solut, jotka olivat anneksiini V-FITC: llä (+) ja 7AAD (-) pidettiin alkuvaiheen apoptoottisia soluja. Solut, jotka olivat anneksiini V-FITC: llä (+) ja 7AAD (+) pidettiin myöhäisvaiheen apoptoottiset solut.

Tilastollinen analyysi

Kukin koe suoritettiin kolmena rinnakkaisena. Kaikki tiedot ilmaistiin keskiarvona ± SD. Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttäen SPSS 17.0 tilastollinen paketti (SPSS, Inc., Chicago, IL, USA), ja vertailun ryhmien välillä suoritettiin käyttäen Studentin t-testiä. Korrelaatiot DEK ekspressiotasoja CRC ja histologisia tekijöitä analysoitiin käyttämällä Fisherin testiä. Erot katsottiin tilastollisesti merkitsevä

P

0,05.

Tulokset

DEK proteiinin yli-ilmennetään CRC

osoittamiseksi roolin DEK on CRC mittasimme DEK proteiinin tasot neljässä tapauksessa CRC Hyväksytty viereisen ei-kasvain tuore kudoksiin. Western blot tiedot osoittivat vahvaa DEK proteiinin ilmentymistä CRC kudoksissa verrattuna sovitetun viereisen ei-tuumorikudoksissa (Fig. 1).

(A) Kuvia western blotit DEK proteiinin ilmentymistä neljässä pareittain CRC ( T) ja viereisen ei-tuumorikudoksissa (NT). (B) Suhteellinen T /NT suhteet DEK proteiinin ekspressiotasot pariksi CRC ja viereisen ei-tuumorikudoksista esitetään (lisääntynyt kertainen muutos, **

P

0,01).

DEK proteiinin ilmentyminen oli ydin- IHC värjäyskuvion in CRC (Fig. 2). Solujen lukumäärä sisältävien DEK proteiinia (positiivisia) oli merkitsevästi korkeampi CRC kudoksissa (80,0%, 44/55) kuin normaalissa vieressä limakalvolla (36,4%, 8/22) ja peräsuolen adenoomien (16,7%, 3/18) . Vastaavasti voimakkaasti positiivinen määrä DEK proteiini oli 50,9% (28/55) in CRC, joka oli huomattavasti korkeampi kuin viereisillä normaalissa paksusuolen limakalvo (18,2%, 4/22) ja peräsuolen adenoomien (16,7%, 3/18) (Molemmat

P

0,001) (taulukko 2).

(A) DEK proteiinivärjäys oli negatiivinen viereisissä normaalissa paksusuolen kudoksiin. (B) DEK proteiini osoitti hajanaisesti ja voimakkaasti ydinvoiman positiivinen värjäytyminen myöhäisvaiheen CRC. (C) DEK proteiini on positiivinen invasiivisen syöpäsoluja herakalvojen paksusuolen. (D) DEK proteiini on negatiivinen CRC ilman etäpesäkkeitä.

väliset korrelaatiot DEK ilmaisun ja Ki-67-indeksi ja apoptoosin indeksi ihmisen CRC kudoksissa

arvioinut korrelaatioita DEK ilmaisun ja Ki-67 ja apoptoottisten indeksit ihmisen CRC kudoksissa. Ki-67-indeksi oli 26,60 ± 8,12% kudoksissa alhaisen DEK ekspressiotasot ja 48,17 ± 7,87% vuonna kudoksista korkealla DEK ekspressiotasot (Fig. 3A). DEK ekspressiotasot ja Ki-67-indeksi korreloivat positiivisesti (

P

= 0.030). Apoptoottiset indeksi oli 0,78 ± 0,10% kudoksissa alhaisen DEK ekspressiotasot ja 0,30 ± 0,16% vuonna kudoksista korkealla DEK ekspressiotasot (Fig. 3B). Siellä oli myös merkittävä korrelaatio DEK ekspressiotasot ja apoptoottisten indeksi (

P

= 0.010).

(A) Huomattavat erot havaittiin korreloivia DEK ilmaisun ja Ki-67-indeksi (

P

= 0.030). (B) oli myös merkittävä korrelaatio DEK ilmaisun ja apoptoottisten indeksi (

P

= 0.010). (DEK matala ”-” ja ”+” DEK korkea, ”++” ja ”+++”.).

DEK ilmentymistä CRC soluissa RT-PCR ja western blot

IHC tiedot yllä ja meidän aiemmin raportoitujen tietojen [5] viittaavat siihen, että DEK saattaa olla mukana etenemistä CRC ja hyvä merkki leviämisen ja etäpesäkkeiden. Niinpä havaitaan ekspressiotasot DEK mRNA: ta ja proteiinia useita CRC solulinjoissa, mukaan lukien SW-620, SW-480, HCT116, ja HT29. RT-PCR-data osoitti, että kaikki SW-620, SW-480, HT29 ja HCT116-solut osoittivat korkeaa ekspressiotasot DEK mRNA: ta (Fig. 4A). Samanlaisia ​​tuloksia havaittiin proteiinin tasot näiden solulinjojen western blot määritykset (Fig. 4B). Tässä valitsimme SW-620-solut, joilla on korkea lisääntymistä ja etäpesäkkeiden potentiaalia vahvistetaan aiemmissa raporteissa [23], että seuraavilla kokeilla.

Effects of DEK RNAi soluproliferaatioon on koolonisyöpäsolulinja , SW620

Transfektoimme SW-620-solujen kanssa DEK RNAi, ja totesi, että DEK RNAi tehokkaasti vaimentua mRNA ja proteiini ekspressiotasojen DEK in SW-620 soluissa immunofluoresenssivärjäyksellä, RT-PCR, ja western blot analyysit (Kuva. 5A-C).

(A) Nuclear paikallistaminen DEK proteiinia havaitaan siControl ja Sidek SW-620-soluissa. DEK (punainen) lokalisoitu SW-620 soluytimet mukaan immunofluoresenssivärjäyksen ja konfokaalimikroskopialla havainto. DAPI värjäytyminen (sininen) sisällytettiin visualisoida tumaan. (B) DEK mRNA: n ekspression ihmisen CRC solulinjaa SW-620 jälkeen siControl ja Sidek. (C) DEK proteiinin ilmentymistä ihmisen CRC solulinjaa SW-620 jälkeen siControl ja Sidek.

The effects of DEK proteiinin ilmentymisen solun kasvuun testattiin käyttämällä MTT-määritystä. Kasvunopeus 100 nM Sidek käsiteltyjä soluja väheni annos-riippuvaisella tavalla (Kuva. 6A). Absorbanssiarvot on MTT-määritystä 72 tunnin jälkeen ja 96 h olivat 0,43 ± 0,02 ja 0,62 ± 0,03 varten siControl, ja 0,35 ± 0,03 ja 0,39 ± 0,02 varten Sidek-transfektoidut SW-620-soluja, sekä

P

0,05, vastaavasti (kuvio. 6B). Lisäksi pesäkkeiden muodostumisen testi osoitti, SW-620-soluja tehokkaasti vähennetään läsnä Sidek (100 nM). Vertailun vuoksi Sidek esti pesäkkeenmuodostusta SW-620-soluissa noin 70% (

P

0,05) (Fig. 6C). Nämä tiedot osoittivat, että oli olemassa merkittävä väheneminen solujen kasvun Sidek-transfektoituja soluja verrattuna siControl soluja.

(A) MTT-määritys osoitti Sidek (100 nM) jäljittelee vähensi merkittävästi leviämisen SW- 620 solut suhteessa siControl ryhmään (

P

= 0,034). (B) MTT-analyysi 24 tunnin jälkeen, 48 h, 72 h ja 96 h siControl ja Sidek transfektoitiin SW-620-soluja, *

P

0,05, vastaavasti. (C) Pesäkkeenmuodostusta testi osoitti Sidek hoito esti pesäkkeenmuodostusta SW-620-soluissa noin 70% (

P

0,001).

Effects of DEK ilmaisua apoptoosin SW-620-soluja

Kuten kuviossa. 7A, kun SW-620-soluja transfektoitiin 100 nM Sidek tai siControl, apoptoottisen nopeus lisääntyi merkitsevästi Sidek SW-620-soluissa verrattuna siControl transfektoidut SW-620-soluissa. Prosenttiosuus anneksiini V-FITC + /7AAD- soluissa oli 13,13% vuonna Sidek ryhmässä, ja 4,99% vuonna siControl ryhmässä, mikä osoittaa, että DEK ehtyminen lisääntynyt varhaisen apoptoosin SW-620-solut (Fig. 7B).

(A) Hoechst33342 värjäys osoitti, että knockdown että DEK geenin aiheuttamaa apoptoosia. (B) Transfektoituja Sidek 48 h selvästi kasvanut alkuvaiheen apoptoottiset solut merkitsevät suurempaa prosenttiosuudet anneksiini V-FITC + /7AAD- soluja verrattuna siControl ryhmän.

p53- /MDM2, kaspaasi perhe, ja Bcl-2 /Bax proteiinien Sidek-transfektoiduissa soluissa

Kuten kuviossa. 8A ekspressiotasot mutantti-p53: n ja MDM2-ilmentymisen Sidek saaneilla SW-620-soluja väheni suuresti western blot määrityksissä, mikä viittaa siihen, että DEK stimuloi SW-620-soluja kautta p53 /MDM2-reitin. Lisäksi ilmaisu Bcl-2: ta säädeltiin seuraavat Sidek hoitoon. Sen sijaan, Bax ilmentyminen säädeltiin samoissa olosuhteissa. Nämä havainnot viittaavat siihen, että Bcl-2 /Bax polku on tärkeä rooli SW-620-soluja ”etenemistä, joka säätelee DEK (Fig. 8B).

(A) mutantti-p53 ja MDM2-proteiinien olivat merkittävästi vaimentua in Sidek-transfektoiduissa SW-620-soluissa. (B) suhde Bcl-2 /Bax väheni merkittävästi Sidek-transfektoiduissa SW-620-soluja. (C) PARP-proteiinin ilmentyminen oli paljon suurempi Sidek soluissa, ja kaspaasi-3 ja -9 proteiinit olivat merkitsevästi vähemmän Sidek-transfektoiduissa SW-620 soluja kuin ne, jotka siControl ryhmässä. Kaspaasi-8-proteiinin tasot pysyivät muuttumattomina.

Lisäksi meidän tiedot osoittivat myös, että katkaistun kaspaasi-3 ja pilkottiin kaspaasi-9 määrä väheni Sidek soluissa, kun taas ilmentymistaso kaspaasin 8 ei muuttaa. Kuitenkin lohkaista poly ADP riboosi-polymeraasi (PARP) ekspressiotasoja kasvoi Sidek sovelluksen. Nämä tiedot osoittivat, että kaspaasi-3 ja kaspaasi-9, mutta ei kaspaasi-8, ovat mukana SW-620-solujen apoptoosin jälkeen Sidek transfektion, mikä osoittaa, että Sidek myös aktivoi kaspaasiriippuvaisen reittien (Fig. 8C).

mekanismi DEK funktion CRC vahvistettiin myös toisessa CRC solulinjassa HCT116, ja löysi samanlaisiin tuloksiin että SW620-soluissa. Tiedot toimitettiin kuin täydennettynä luvut (Kuva. S1-S3).

Keskustelu

DEK geenin monistuminen ja ilmen- tymisen lisääntymisen ilme on kuvattu useita syöpätyyppejä kuten maksasyövän, virtsarakon syöpä, ja melanooma [7], [16], [24]. Teokset Khodadoust et al [7] osoitti, että DEK ekspressiotasoja voidaan erottaa hyvänlaatuiset nevi pahanlaatuisia ihosyövän, mikä osoittaa, että tämä proteiini voi osoittautua erittäin hyödyllistä erotusdiagnooseissa. Äskettäin Datta et ai. [24] ilmoitetaan, että onkoproteiinia DEK oli yläreguloituja virtsarakon syövän kudoksissa verrattuna normaaliin kollegansa määritettynä western blotit. Todellakin, DEK proteiinia oli läsnä mitätöity virtsassa potilailla, joilla on matalan ja korkean asteen virtsarakon syöpiä, mikä viittaa siihen, että DEK voitaisiin käyttää biomarkkerina havaitsemiseksi virtsarakon syövän käyttäen potilaan virtsanäytteitä. Nykyinen tutkimus on ensimmäinen raportoimaan kasvaimia synnyttävän toiminnasta DEK CRC kuluttamalla DEK, ja määritellä toimiva ja molekyylitason mekanismeja DEK CRC synnyssä.

edellinen tutkimus [5] osoittaa, että vahvasti positiivinen nopeudella DEK proteiini oli 48.62% (53/109) ja peräsuolen syövät, joka oli huomattavasti korkeampi kuin joko viereiseen normaalissa paksusuolen limakalvo (9,17%, 10/109) tai peräsuolen adenoomien (13,46%, 7/52). DEK yliekspressio CRC korreloi positiivisesti kasvaimen kokoa, laatu, imusolmuke etäpesäke, seröösisiä invaasio, myöhäisessä vaiheessa, ja taudista vapaan eloonjäämisen ja 5-vuoden eloonjäämisluvut. Edelleen analyysit osoittivat, että potilailla, joilla on loppuvaiheen CRC ja korkea DEK ilme oli huonompi eloonjäämisaste kuin ne, joilla on alhainen DEK ilme. Lisäksi monimuuttuja-analyysi osoitti korkea DEK ilme, herakalvon invaasio, ja myöhäisessä vaiheessa ovat merkittäviä itsenäisiä riskitekijöitä kuolleisuuden CRC. Tässä työssä, western blot ja IHC värjäys analyysit osoittivat, että korkea DEK ilmentyminen oli merkitsevästi yleisempää CRC kudoksissa kuin joko viereiseen normaaliin peräsuolen limakalvo tai peräsuolen adenoomia.

Ki-67-antigeeniä ilmentävät jakautuvat solut aikana G1, S, G2, ja M vaiheita, mutta ei aikana G0 vaiheen (leposoluissa) [25]. Ki-67 käytetään markkerina kasvaimen leviämisen ja aggressiivisuus, ja se voi olla suuri vaikutus ennusteeseen potilailla, joilla on CRC [26] – [27]. Edellisessä tulokset osoittivat, että DEK proteiinin ilmentyminen kuvio oli hyvin samanlainen kuin Ki-67-antigeenin lisääntyvän merkki kohdun kohdunkaulan syövistä [28]. Positiivinen korrelaatio DEK ilmaisun ja Ki-67 tai apoptoottisia indeksi CRC kudoksissa todettiin myös tässä tutkimuksessa.

Wise-Draper et al. [29] palveluksessa RNAi lähestymistapoja varten kohdentaminen DEK syövän ja ensiöparit, ja totesi, että DEK ehtyminen HeLa kohdunkaulan syöpäsoluja johti apoptoosin. Samanlaisia ​​tuloksia saatiin primäärisistä ihmisen keratinosyyttien, syytetään DEK syövän ja ensisijaisen solun selviytymisen tekijä. Tässä tutkimuksessa olemme myös havainneet yhdistyksen välillä DEK yli-ilmentymisen ja pahanlaatuiset käyttäytymistä CRC käyttäen SW-620 ja HCT116 ihmisen CRC solujen kanssa ja ilman RNAi hoitoa. Solu apoptoosin analyysi paljasti, että DEK ehtyminen lisääntynyt varhaisen apoptoosin SW-620 ja HCT116-soluissa. Tästä huolimatta myös havaittu, että DEK ehtyminen esti solun kasvua MTT-määritys ja pesäkemuodostusta. Nämä tulokset yhtyi tulokset Ki-67 ja apoptoosin indeksiä CRC kudosnäytteestä. Tuloksemme osoittavat, että DEK säätelee CRC solujen kasvua ja selviytymistä

in vitro

.

Ihmisen p53-proteiini on useimmin inaktivoitu tuumorisuppressorigeeniä ihmisen syövän ja osallistuu valvontaan soluproliferaation vastauksena korostaa [30]. Kuitenkin p53 on lyhyt puoliintumisaika ja pidetään matalassa tai havaita tasoilla jatkuvasti proteolyyttisen hajoamisen normaaleissa soluissa. Jatkuva hajoamista p53 välittyy pääasiassa E3-ligaasi MDM2 [31]. Sitoutumalla p53, MDM2 estää transaktivaatiodomeenin p53 ja tämän vuoksi se estää sen transkriptioaktiviteettia [32]. Altistettiin stressi signaalit kuten hypoksiaa tai DNA-vaurioita, takaisinkytkentäsilmukan MDM2-p53 häiriintyy, mikä johtaa apoptoosin tai syöpäsairauden [33]. Khodadoust tutkimuksessa ehdotetaan uutta roolia DEK solun selviytymisen, johon horjuttaa p53 tavalla, joka on omiaan edistämään ihmisen syövän synnyn [7]. Lisäksi Wise-Draper et al. myös, että solukuolemaa vastauksena DEK ehtyminen mukana oli lisääntynyt proteiini vakautta ja transkriptionaalista aktiivisuutta p53 tuumorisuppressorin, ja myöhemmin säätelyä tunnettuja p53 kohdegeenien kuten Bax [29]. Bax, pro-apoptoottisen tekijän Bcl-2-perheen, sijaitsee monomeerisen muodon sytosoliin tai löysästi kiinnitetty kalvoja normaaleissa olosuhteissa. Jälkeen kuolema ärsyke, soluliman ja monomeerisen Bax translokoituvat mitokondriot, kun ne saavat kiinteä kalvo proteiineja.