Krooninen sairaus

tiivistelmä

Menetelmät perustuvat reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (PCR) voidaan nopeuttaa diagnoosin invasiivisen aspergilloosin, mutta rajoittavat puute standardoinnin. Arvioimme kaupallisesti saatavilla MycAssay ™ Aspergillus testi diagnosoimiseksi invasiivisen aspergilloosin potilailla, joilla ei hematologisen syövän. Me takautuvasti kerätään 322 alempien hengitysteiden näytteitä (marraskuu 2009-tammikuu 2011) 175 potilaalla on alempien hengitysteiden infektio ja seuraavat altistavia tekijöitä: solid syöpä (16,8%), kirroosi (16,8%), kortikosteroidihoito (71,7%), HIV infektio (15,6%), krooninen obstruktiivinen keuhkosairaus (COPD, 52,6%), elinsiirron (munuainen [1,2%], sydämen [3%], maksan [4,6%]) tai ei mitään (3,5%). Näytteet saatiin kliinisen tarpeen ja analysoidaan mikrobiologian laboratoriossa.

Aspergillus

DNA uutettiin ja monistettiin avulla MycXtra® ja MycAssay ™ Aspergillus.

Aspergillus

spp. eristettiin 65 näytettä (31 potilasta). Mukaan European Organisation for Research and Treatment of Cancer ja Bulpa kriteerit (potilailla, joilla on COPD), 15 oli todennäköinen invasiivinen aspergilloosi. MycAssay ™ Aspergillus tulokset olivat negatiivisia (n = 254), positiivinen (n = 54), tai määrittelemätön (n = 14). Herkkyys, spesifisyys, positiivinen ennustearvo, negatiivinen ennustearvo, ja diagnostinen kertoimet suhde MycAssay ™ (ensimmäinen näyte /tahansa näyte) olivat 86,7 /93, 87,6 /82,4, 34,1 /34,1, 92,2 /100 ja 48 /68,75. Erot osuus näytteiden positiivinen PCR määritykset (63%) ja osuus näytteiden

Aspergillus

spp. eristäminen (75%) ei ollut tilastollisesti merkitsevä (

P

= 0,112). Mediaaniaika näytteestä kulttuurin visualisointiin sienten kasvu oli 3 päivää, verrattuna ~ 4 tuntia MycAssay ™ Aspergillus PCR. MycAssay ™ Aspergillus osoitti suuri herkkyys diagnosoimiseksi invasiivisen aspergilloosin potilailla, joilla ei hematologisen syövän. Herkkyys lisääntyi, kun useita näytteitä käytettiin. Verrattuna sieniviljelmää, PCR vähensi merkitsevästi aikaa diagnoosia.

Citation: Guinea J, Padilla C, Escribano P, Muñoz P, Padilla B, Gijón P, et al. (2013) arviointi MycAssay ™ Aspergillus diagnosointiin Invasiivinen keuhkojen aspergilloosi potilailla, joilla ei Hematologiset Cancer. PLoS ONE 8 (4): e61545. doi: 10,1371 /journal.pone.0061545

Toimittaja: David R. Andes, University of Wisconsin Medical School, Yhdysvallat

vastaanotettu: 21 joulukuu 2012; Hyväksytty: 11 maaliskuu 2013; Julkaistu: 19 huhtikuu 2013

Copyright: © 2013 Guinea et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus rahoitettiin osittain avustuksilla Fondo de Investigación Sanitaria (FIS) CP09 /00055 ja PI09 /1257 (Instituto de Salud Carlos III) sekä avustuksia Myconostica. Jesús Guinea (MS09 /00055) ja Pilar Escribano (CD09 /00230) tukevat FIS. MycXtra® ja MycAssayTM Aspergillus sarjat käytetään suorittamaan tutkimukseen ystävällisesti tukee Izasa (Barcelona, ​​Espanja). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat julistaa, että MycXtra® ja MycAssayTM Aspergillus sarjat ystävällisesti syötetään Izasa ( Barcelona, ​​Espanja). Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Invasiivisen aspergilloosin on opportunistinen infektio vaikuttaa potilaiden eriasteisia immunosuppression. Potilaat, joilla on syvä ja pitkittynyt neutropenia on perinteisesti ollut suurin riski invasiivisen aspergilloosin [1], [2], [3], [4], [5]. Muut riskiryhmät ovat kiinteät Elinsiirtopotilaista, potilailla, joilla on krooninen keuhkoahtaumatauti (COPD), saavilla potilailla kortikosteroideja tai muita immunosuppressiivisia lääkkeitä, ja Maksakirroosipotilaille [6], [7].

Numero potilaista ilman hematologisten maligniteettien, jotka kärsivät invasiivisen aspergilloosin kasvaa. Kuolleisuus tässä ryhmässä on korkea, luultavasti koska alhainen indeksi epäillään tartunnan ja siitä johtuva Diagnoosin viivästymisen [8], [9], [10], [11]. Koska myönteisen tuloksen riippuu nopean ja asianmukaisen sienilääkitystä, nopea diagnoosi on yhä tärkeämpää.

Detection galaktomannaania seerumissa on osoittautunut hyödylliseksi diagnosoimiseksi invasiivisen aspergilloosin neutropeniapotilailla; Valitettavasti sen herkkyys on alle 50% potilaista, joilla ei neutropeniaa [12], [13], [14], [15], [16]. Detection galaktomannaania bronkoalveolaarisessa huuhtelu (BAL) näytteet on herkempi kuin havaitsemiseksi seeruminäytteistä, vaikka BAL näytteet eivät ole aina saatavilla [15]. Eristäminen

Aspergillus

alempiin hengitysteihin näytettä joilla ei ole neutropeniaa on usein ensimmäinen mikrobiologista näyttöä invasiivisen keuhkojen aspergilloosin. Koska kulttuuri on hidasta, havaitseminen

Aspergillus

kliinisissä näytteissä on viivästynyt.

Menetelmät perustuvat reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (PCR) voidaan nopeuttaa diagnoosin invasiivisen aspergilloosin mutta eivät rajoittaa puute standardoinnin [17], [18]. MycAssay ™ Aspergillus on hiljattain markkinoille reaaliaikaisen PCR-tekniikkaa havaitsemiseen

Aspergillus

DNA alahengitysteiden näytteitä. Tämä määritys on tutkittu lähinnä BAL näytteissä potilailta, joilla hematologisen maligniteetteja tai niitä otettu tehohoidossa [19].

Tässä tutkimuksessa olemme arvioineet MycAssay ™ Aspergillus testin hengitys- näytteistä ja BAL, spontaani yskös, ja keuhkoputken aspirate, diagnosoimiseksi invasiivisen aspergilloosin potilailla, joilla ei hematologisen syövän.

Materiaalit ja menetelmät

potilaiden ja kliinisissä näytteissä

Marraskuusta 2009 tammikuu 2011 rekrytoimme 175, joilla on yksi tai useampi alempi hengitysteiden näytteiden on mikrobiologian laboratorioon. Suurin osa potilaista (96,5%) oli kliininen epäilys alempien hengitysteiden infektio ja ainakin yksi invasiivinen keuhkojen aspergilloosi isäntä tekijä, lukuun ottamatta hematologiset syöpä. Yhteensä 322 näytettä kerättiin. Näytteet, joissa epämääräinen tuloksia testattiin uudelleen, ja toinen tulos valittiin. Näytteet osoittavat uudistetun määrittelemätön PCR tulos jätettiin pois analyysistä (n = 14; 4,3%). Näytteiden lukumäärä tutkittu /kerättiin oli seuraava: spontaani yskös (n = 142/145), keuhkoputken aspiraatista (n = 104/111), BAL (n = 61/65), ja suojattu harja katetrin (n = 1/1 ).

Kahdella potilaalla oli yksi näyte, joissa jokaisessa on määrittelemätön tulos, ja ne jätettiin pois analyysistä. Loput 173 potilasta luokiteltiin tai ei katsota olevan invasiivisen keuhkojen aspergilloosi muiden hometta infektio mukaan tarkistettujen arviointiperusteiden Euroopan järjestön tutkimus- ja syövän (EORTC) [20], [21] tai Bulpa kriteerit (yksinomaan potilaiden COPD) [20], [21]. Kolonisaatio määriteltiin eristäminen

Aspergillus

spp. alempien hengitysteiden näytteissä potilailla, jotka eivät täytä EORTC tai Bulpa kriteerit. Kirroosi sisällytettiin isäntänä tekijä, koska invasiivisen aspergilloosin on löydetty kriittisesti sairaiden potilaiden Kirroottisilla eikä muita altistavia tekijöitä [8]. Altistavan edellytykset invasiivisen aspergilloosin olivat aktiivisia kiinteitä syöpä (16,8%), kirroosi (16,8%), kortikosteroidien kulutus (71,7%), HIV-infektio (15,6%), COPD (52,6%), elinsiirron (munuainen [1,2%] , sydän [3%], maksan [4,6%]), neutropenia, (4,6%), tai ei mitään (3,5%). Suuri osa potilaista (90%) oli vievää antibioottien kun näyte on kerätty.

Kaikki näytteet saatiin vasta kun siihen on lääketieteellistä, eikä ylimääräisiä näytteitä pyydettiin tutkimukseen. Näytteet prospektiivisesti kerättiin ja potilaiden kaavioita oli jälkikäteen tarkistetaan. Hoitohenkilökunta sokaisi PCR tulokseen, joka ei sisälly mikrobiologisena diagnostinen kriteeri.

Näytteen käsittely, genomista

Aspergillus

DNA: n eristämiseksi, ja monistus käyttämällä MycAssay ™ Aspergillus

näytteet jaettiin sieniviljelyä ja DNA: n uuttaminen. Kaikki näytteet käsitellä

Aspergillus

DNA havaitseminen, ja suurin osa (n = 298/308; 97%) viljeltiin sekä bakteerien ja sienten media. BAL näytteet (1 ml) sentrifugoitiin 3000

g

10 minuuttia. Konsentroitu Saadut rakeet käsitelty sieniviljelyä ja siveltiin elatusaineet levyt. Yskös ja keuhkoputkien aspiroi muutettiin nestettä lisäämällä asetyylikysteiini (Pharmazam, Espanja) ja lisättiin agarmaljoille käyttämällä steriiliä silmukan (10 ui). Sieni elatusaineet olivat Sabouraud-dekstroosiagarille kloramfenikoolia ja aivot-agar- on antibioottihoito. Bakteerien elatusaineet olivat lampaan verta agar ja suklaa-agar. Rihmasieni-isolaattia tunnistettiin standardin morfologisia menettelyjä.

Näytteet DNA: n eristämiseksi säilytettiin pakastettuna -20 ° C: ssa, kunnes erän analyysiin. Paksu limakalvojen näytteitä, kuten ysköksen ja keuhkoputkien aspirate, muunnettiin nestettä lisäämällä BBL ™ MycoPrep ™ Reagent (Becton Dickinson, Shannon, Irlanti). Näitä näytteitä ja BAL näytteet (1 ml), sentrifugoitiin sitten 3000

g

20 minuuttia. Saadut rakeet käsitellä

Aspergillus

DNA: n eristämiseksi käyttäen manuaalista MycXtra® sieni- DNA: n eristämiseksi pakki (Myconostica, nyt Lab21 yhtiö, Cambridge, UK), joka sisältää mekaanisen häiriöitä askel. BAL supernatantit säilytettiin galaktomannaanina määrittämiseen.

Puhdistettu uutettu genomi-

Aspergillus

DNA monistettiin edelleen käyttämällä MycAssay ™ Aspergillus Kit (Myconostica, nyt Lab21 yhtiö, Cambridge, UK) on Kefeidi SmartCycler ® alustan (Cepheidiltä, ​​Sunnyvale, Kalifornia, USA). MycAssay ™ Aspergillus oli suunniteltu havaitsemaan genomista DNA: ta 18 eri

Aspergillus

lajit (mukaan lukien

a. Fumiqatus

,

a. Flavus

,

. Terreus

, ja

a. niger

) käyttäen molekyylimajakoissa. Määritys kohdistuu 18S rRNA-geenin ja sisältää sisäisen valvonnan kasviperäisiä välttää väärien negatiivisten tulosten vuoksi läsnäolo PCR-inhibiittoreita.

Lyhyesti, 10 ui uutettua DNA: ta sekoitettiin vahvistus reagenssien lopullinen reaktio tilavuuteen 25 ui. PCR tulokset kunkin näytteen raportoitu negatiivisina (näytteet ilman

Aspergillus

DNA monistamalla positiivinen vahvistus sisäisen valvonnan), positiivinen (näytteitä

Aspergillus

DNA vahvistus), tai määrittelemätön (näytteiden negatiivinen

Aspergillus

DNA: n monistuksen ja epäonnistumisen vahvistus sisäisen valvonnan). MycXtra® DNA: n eristämiseksi pakki ja MycAssay ™ Aspergillus levitettiin mukaan valmistajan ohjeiden [22]. Risteyskohdassa (Cp) oli syklin, jossa reaaliaikainen PCR-testi tuli positiivinen.

Tietojen analysointi

Kukaan potilaista oli osoittautunut invasiivinen keuhkojen aspergilloosi; Ainoastaan ​​todennäköinen invasiivinen aspergilloosi pidettiin todellinen infektio. Laskimme herkkyys, spesifisyys, positiivinen ennustearvo (PPV), negatiivinen ennustearvo (NPV), todennäköisyys suhde positiivisen tuloksen (LR +), todennäköisyys suhde negatiivinen tulos (lR-), ja diagnostisten kerroinsuhde (DOR) ja PCR diagnosointiin invasiivisen keuhkojen aspergilloosin. Koska useita hengityselinten näytteet tutkittiin useille potilaille, diagnostinen arvot PCR laskettiin perustuu sekä tulokset ensimmäisen näytteen toimitti mikrobiologian laboratoriossa ja tuloksista otosta samasta potilaasta. PCR ja sieniviljelmää kuvattiin ja verrattiin käyttäen chi-neliö testi ja standardi binomimallia laskentamenetelmän 95%: n luottamusväli.

Ethics selvitys

Tutkimus hyväksyi paikallinen eettinen komitea (Comité Ético de Investigación Clínica (CEIC-A1)). Osallistujat jos niiden kirjallinen suostumus osallistua tutkimukseen. Kaikki potilaan tiedot olivat anonymisoidaan keräämisen jälkeen.

Tulokset

173 potilasta tutkittiin olivat pääosin miehiä (76,3%) ja keski-ikä oli 60,8 ± 19,5 (2-96) vuotta. Potilaat luokiteltiin todennäköinen invasiivinen aspergilloosi (n = 15; 8,7%), mahdollinen invasiivisen aspergilloosin (n = 3, 1,7%),

Aspergillus

kolonisaatio (kliinisesti ei-merkitsevä

Aspergillus

eristäminen [n = 21, 12,2%], keuhkojen skedosporioosin [n = 1, 0,6%)], tai ei-invasiivisia muotin infektio. 15 potilaasta, joilla todennäköinen invasiivinen aspergilloosi on esitetty yhteenvetona taulukossa 1. Tuolloin Näytekokoelmatodistuksen kaikilla potilailla oli kuumetta, joka ei vastannut laajakirjoiset antibiootit, ja 80% tarvitaan ottamista tehohoidossa. Suuri osuus (40%) oli COPD kuin kyseiset altistavia kunnossa. 14 ulos 15 tapauksessa, keuhkon oli ainoa elin tartunnan. Seerumin galaktomannaanina määritys oli vain positiivinen 5 (35,7%) ulos 14 potilaille, joille sitä on sovellettu.

Aspergillus

spp. eristettiin 63/308 (22%) näytettä 31 potilasta. Lajin levinneisyys oli seuraava:

. fumigatus

(n = 45),

. niger

(n = 10),

. Terreus

(n = 7),

. flavus

(n = 5), ja muut (n = 3) spp.

Aspergillus

spp. eristettiin yhdessä tai useammassa kliinisen näytteitä 15 potilaasta, joilla todennäköinen invasiivinen aspergilloosi.

MycAssay ™ Aspergillus oli positiivinen 54/254 (17,5%) näytteistä, ja ainakin yhtä näytettä 14 15 potilasta kanssa invasiivinen aspergilloosi. Cp arvot positiivinen PCR määritykset olivat pienemmät näytteissä potilailta, joilla todennäköinen aspergilloosia kuin näytteissä potilailta, joilla on kliinisesti ei-merkitsevä

Aspergillus

(30,18 ± 3,3 vs. 33 ± 2,66;

P

= 0,001). Tämä havainto osoitti suurempaa kuormaa

Aspergillus

spp. potilailla, joilla on invasiivinen aspergilloosi kuin ilman.

Kuten odotettua, osuus näytteiden

Aspergillus

eristäminen tai positiivinen PCR tuloksia oli suurempi potilailla, joilla oli invasiivinen aspergilloosi (taulukko 2). Concordance välillä sieniviljelmää ja PCR oli korkea kaikissa näytteissä ja näytteissä potilailta tai ilman invasiivisen aspergilloosin (83,9%, 86,5%, ja 83,5%, tässä järjestyksessä). Poikkeamia löytyy useimmiten näytteistä saadaan

Aspergillus

ilman DNA vahvistusta (noin 10% näytteistä). Mielenkiintoista, useimmat poikkeamia havaittiin näytteissä potilailta, joilla oli invasiivinen aspergilloosi (PCR-negatiivinen /kulttuuri-positiivisia tuloksia, 86%, PCR-positiivinen /kulttuuri-negatiivisia tuloksia, 94,4%). Näytteet, joissa PCR-positiivisten /kulttuuri-negatiiviset tulokset osoittivat korkeampia op arvoja kuin näytteet, joissa kulttuuri ja PCR olivat yhtäpitävät. Analyysi näytteitä potilaista, joilla oli invasiivinen aspergilloosi osoitti, että osuus näytteistä, joissa PCR-tulos oli positiivinen (63%) ei poikennut osuus näytteitä joista

Aspergillus

spp. eristettiin (75%) (

P

= 0,615). Tulokset vertailusta PCR ja sieni kulttuurin BAL, yskös, ja keuhkoputkien aspiroi näytteet on esitetty taulukossa 3. suorituskykyä PCR ja sieniviljelmää eivät eronneet tyypin näyte tutkittiin (

P

kuitenkin, analyysi useita näytteitä ei vaikuttanut spesifisyys missään määrin. Jotta voidaan tutkia, miten diagnostinen arvo PCR voisi vaikuttaa eri tilanteissa, potilaat jaettiin seuraaviin ryhmiin: Keuhkoahtaumapotilailla (n = 91), potilailla, joilla on infektio ei parane antibiooteilla (n = 28), ja potilaat in tehohoidossa kanssa keuhkokuume (n = 35). Herkkyys ja spesifisyys pysyivät muuttumattomina tämän kerrostumista. MycAssay ™ Aspergillus tulokset olivat saatavilla noin 4 tunnin kuluttua näytteen vastaanottoa. Sitä vastoin, niiden päivien lukumäärä, visualisointiin sienten kasvun mikrobiologista levyt oli seuraava: keskiarvo, n = 4,3 ± 4,1; mediaani, n = 3; ja tila, n = 2.

14 ulos 15 potilaalla, joilla todennäköinen invasiivinen keuhkojen aspergilloosi, näytteet otettiin ennen aloittamista Sienilääkitystä, ja mitään ylimääräisiä näytteitä tutkittiin aikana antifungaalista hoitoa. Serial näytteitä jäljellä potilaan (nro. 15, taulukko 1) tutkittiin; Viiden otettujen näytteiden Sienilääkitystä, kolme oli positiivinen MycAssay ja kaksi olivat negatiivisia. Mielenkiintoista, kun näytteet tuli negatiivinen MycAssay, potilaan kliininen tila parani. Kolmesta potilaalla on mahdollista invasiivinen aspergilloosi, yksi sai vorikonatsoli ja parannettu, ja kaksi ei saanut Sienilääkitystä ja kuoli. Tulos MycAssay ™ Aspergillus oli negatiivinen näytteet kolmesta potilaalla on mahdollista invasiivinen aspergilloosi.

Keskustelu

kirjo potilaalla on riski invasiivisen keuhko- aspergilloosin on kasvanut viime vuosina, koska lisääntyminen potilaiden määrä muita altistavia tekijöitä muiden kuin hematologisten häiriöiden. Tämä laajennus on havainnollistettu tutkimuksissa yleensä kolmannen asteen sairaaloissa, joissa asia kokoelma ei rajoitu hematologian osastolla ja teho-osastoilla ja joissa suuri määrä ruumiinavaukset tehdään [6], [8], [23].

Invasiivinen aspergilloosi potilailla, joilla ei-hematologinen maligniteettien on ominaista korkea kuolleisuus (60-100%) [6], [10], [11], joka heijastaa todennäköisesti rajoitukset nykyisen diagnoosimenetelmien perustuvat röntgen tai mikrobiologian ja alhainen indeksi kliininen epäily.

Diagnoosi invasiivisen aspergilloosin perustuu yhdistelmään yhteensopivan kliiniset löydökset potilailla, joilla on riskitekijöitä, sekä histopatologisten todisteita hyökkäyksen, radiologisia löydöksiä, eristäminen

Aspergillus

spp alempiin hengitysteihin näytteitä, tai havaitsemista kiertävän biomarkkereiden nesteissä. Histopatologia on välttämätöntä saada lopullisen diagnoosin, vaikka keuhkojen koepaloja harvoin saadaan [24]. Verrattuna kulttuuriin ja molekyylidiagnoositekniikoiden testaus tarkkuus histomorphological diagnoosi on parhaimmillaan 80% [25]. Radiologisen havainnot, jotka ovat yleisempiä potilailla, joilla neutropeniaa ja invasiivisen aspergilloosin ovat harvinaisia ​​joilla ei ole neutropeniaa [8], [26]. Culture alempien hengitysteiden näytteitä potilaista, joilla kliininen epäily on edelleen laajalti käytössä, vaikka se on hidasta ja rajoittaa alhainen herkkyys ja [27]. Lisäksi havaitseminen kiertävän galaktomannaanina seeruminäytteissä joilla ei ole neutropeniaa on alhainen herkkyys diagnosoimiseksi invasiivisen aspergilloosin [6], [14], [16].

Tässä skenaariossa kehittäminen nopea, herkkä, ja erityisiä diagnostisia menetelmiä havaitsemiseksi

Aspergillus

hengitystie näytteissä potilailta, joilla hematologisia maligniteetteja on houkutteleva. Yksi rohkaiseva uusia menettelyjä on DNA

Aspergillus

havaitsemista reaaliaikaisella PCR-määrityksissä. Tutkimuksessamme PCR tulokset olivat käytettävissä niin nopeasti kuin 4 tuntia näytteenoton jälkeen, joka on must nopeampi läpimenoaika kuin 3 päivää noudatettava kasvuun

Aspergillus

kulttuuriin. Kuitenkin aika näyte kulttuurin ja havaitseminen sienten kasvua voitaisiin vähentää tarkastelemalla levyjä joka päivä, jopa viikonloppuisin. Lisäksi samanaikainen monistaminen DNA hengityselinten näytteistä ja sieniviljelmää antaa meille mahdollisuuden tunnistaa isolaatit lajitasolla ja suorittaa antifungaalinen herkkyysmääritykseen päälle isolaattien.

havaitseminen

Aspergillus

DNA BAL näytteissä on rohkaisevaa ja vahvistaa diagnoosin invasiivisen aspergilloosin enemmän potilaita kuin tavanomaisilla menetelmillä [28]. Sitä on tutkittu lähinnä potilailla, joilla on hematologisia häiriöitä [29], [30], [31]. Tuore meta-analyysi osoitti herkkyys ja spesifisyys 0,91 ja 0,92, vastaavasti, mutta korosti standardoinnin puute [32]. Kuitenkin rooli PCR hengitystie näytteissä ei-hematologinen potilaista vaatii tarkempaa arviointia. BAL kerättiin vuonna 4 ulos 15 potilaalla, joilla todennäköinen invasiivinen aspergilloosi. Kaikissa tapauksissa BAL galactomannan pitoisuudet olivat yli 0,5 ng /ml.

standardoinnin puute

Aspergillus

PCR mennessä on haitannut sen käyttöönotto kriteerien määrittelystä todennäköistä aspergilloosi [20 ]. MycAssay ™ Aspergillus on kaupallisesti saatavissa reaaliaikainen PCR-havaitsemiseksi kaikkein kliinisesti merkittäviä

Aspergillus

lajit [22]. Koska täysin standardoitua CE-merkintä testi täydellä valmistuksen laadun valvontaa, MycAssay ™ Aspergillus täyttää standardointia

Aspergillus

PCR tarpeen vahvistaa diagnoosin invasiivisen aspergilloosin. MycAssay ™ Aspergillus aiemmin määritet- BAL näytteistä [19], yskös näytteitä [33], [34], ja kudosnäytteet [35]. MycAssay voidaan suorittaa kliinisen mikrobiologian laboratorio koulutetut henkilöt molekyylibiologian tekniikkaa; arvioidut kustannukset testin kohden määritys Espanjassa on € 25-30.

Kartoitimme MycAssay ™ Aspergillus alemman hengitysteiden näytettä (sisältäen BAL, spontaani yskös, ja keuhkoputkien aspiroi) potilaista, joilla on altistavia tekijöitä muiden kuin hematologisista sairauksista ja kliininen epäily invasiivisen aspergilloosin. Huomasimme, että kolmenlaisia ​​alempien hengitysteiden näytteet tutkittiin soveltuivat havaitsemiseen

Aspergillus

spp. DNA: ta. Meidän kultakanta oli kliininen, että meillä on luokiteltu potilaat käyttävät ehdottamien kriteerien EORTC [20], [21] tai Bulpa [20], [21]. Herkkyys PCR oli korkea ja kasvaa, kun useita näytteitä potilasta kohden tutkittiin; erityisyyttä ei vaikuttanut myös useiden näytteiden potilasta kohden. Herkkyys oli myös korkea COPD-potilaiden, altistava tila, suuri osa potilaista tutkittu. MycAssay ™ Aspergillus osoitti korkeaa NPV, mikä viittaa siihen, että PCR-negatiivinen tulos tahansa alempien hengitysteiden näyte potilaalta ilman hematologisen syövän voi osoittautua hyödylliseksi sulkea pois invasiivinen aspergilloosi. Sen sijaan, PPV ja määrityksessä oli alhainen. Selitys tähän havaintoon on se, että MycAssay ™ Aspergillus pystyy havaitsemaan

Aspergillus

DNA näytteissä siirtomaita potilaista tai potilaista, joilla on muita aspergilloosin, mukaan lukien krooninen ja allergiset keuhkojen aspergilloosi [36], [37] ( Taulukko 5). Toinen selitys saattaa olla alhainen esiintyvyys invasiivisen keuhkojen aspergilloosin löytyy tutkimuspopulaatiossa.

Tärkein rajoittava Tutkimuksemme on, että emme pystyneet sisällyttämään histologisesti todistettu tapauksissa, koska ei keuhko biopsiat kerättiin tai post mortem suoritettujen tutkimusten. Tämä on yleinen rajoitus tutkimuksissa arvioidaan rooli uusien diagnostisten välineiden diagnosoimiseksi invasiivisen aspergilloosin. Siksi potilailla diagnosoitiin invasiivisen aspergilloosin perustuvat mikrobiologiset tai radiologisia tietoja. Se, että

Aspergillus

eristettiin alahengitysteiden näytteet kaikilla potilailla saattaa selittää suuri korrelaatio välillä havaittu sieniviljelmää ja PCR. Meidän potilailla, MycAssay ™ Aspergillus ei salli meidän diagnosoida uusia tapauksia, jotka voitaisiin hukata sieniviljelmää. Toinen rajoitus on se, että me luokitella potilaita käyttäen EORTC kriteerejä, jotka on kehitetty erityisesti syöpäpotilaille. EORTC kriteerit valittiin puuttuessa erityiset perusteet kuin syöpäpotilailla.

Olemme päätellä, että MycAssay ™ Aspergillus suoritettu alempien hengitysteiden näytteet osoittivat suuren herkkyyden diagnosoimiseksi invasiivisen aspergilloosin potilailla, joilla ei hematologisen syövän. Herkkyys lisääntyi, kun useita näytteitä analysoitiin. Herkkyys oli korkea potilailla, joilla on COPD, joka on syntymässä riski väestön joissakin sairaaloissa. MycAssay ™ Aspergillus osoittautuneet erityisen käyttökelpoinen sulje pois diagnoosi invasiivisen aspergilloosin ja merkittävästi vähentää aikaa diagnoosiin verrattuna tavanomaisiin sieniviljelmää. MycAssay ™ Aspergillus tulisi käyttää samanaikaisesti sieniviljelmää alempien hengitysteiden näytteitä, jotta saataisiin lisää tietoa antifungal herkkyydestä ja varmistaa tarkan tunnistamisen isolaateista.

Kiitokset

kiittää Thomas O’Boyle muokkaamiseen ja oikoluku artikkeli. Arvostamme arvokkaita ehdotuksia David W. Denning kun hänen kriittinen tarkastelu käsikirjoituksen. Tämä tutkimus esiteltiin osittain klo 21. eurooppalainen kongressi Clinical Microbiology and Infectious Diseases (ECCMID) ja 27. kansainvälinen kongressi Kemoterapia (ICC), Milano, Italia 2011 (P-2095).