Krooninen sairaus

tiivistelmä

Nykyisessä tutkimuksessa arvioimme maailmanlaajuinen DNA metylaatiomuutokset ihmisen lymfoblastoidisissa (TK6) solut

in vitro

vastauksena 5 suoria ja 10 välillisiä toimiva genotoksinen aineita. TK6 altistettiin valittu aineita 24 h: n läsnä ja /tai ilman S9 metabolisen sekoitetaan. Nestekromatografia-massaspektrometriaa käytettiin kvantitatiivista profilointi 5-metyyli-2′-deoksisytidiini. Vaikutus altistumisen 5-metyyli-2′-deoksisytidiini ja vertailuryhmän välillä kulttuureissa arvioitiin soveltamalla marginaalinen malli vastaaviin jäännösten päälle% maailmanlaajuinen DNA: n metylaatio tietoja. Me raportoitu induktio maailmanlaajuinen DNA hypometylaatio in TK6 vastauksena S9 aineenvaihdunnan mix, nykyisen koeasetelmia. Bentseeni, hydrokinoni, styreeni, hiilitetrakloridi ja trikloorietyleeni aiheuttama maailmanlaajuinen DNA hypometylaatio sisään TK6. Lisäksi osoitimme, että annosta ei ollut vaikutusta maailmanlaajuiseen DNA-metylaation TK6. Lopuksi me raportoimme muutoksia globaalissa DNA Metylointia varhainen tapahtuma vastauksena aineita perinteisesti pidetty genotoksinen.

Citation: Tabish AM, Poels K, Hoet P, Godderis L (2012) Epigeneettiset Factors in Cancer Risk: vaikutus Chemical Syöpää Globaali DNA metylaatiokuvion Human TK6. PLoS ONE 7 (4): e34674. doi: 10,1371 /journal.pone.0034674

Editor: Lorenzo Chiariotti, Università di Napoli Federico II, Italia

vastaanotettu: 29 marraskuu 2011; Hyväksytty: 06 maaliskuu 2012; Julkaistu: 11 huhtikuu 2012

Copyright: © 2012 Tabish et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat Katholieke Research Fund. Rahoittajat ei ole osallistunut tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Environmental karsinogeeneja ovat tunnettuja riskitekijä ihmisen syövän [1]. Sen klassinen malli, Karsinogeneesi aloittaa ja etenee muutokset genomissa (eli geneettiset vaikutukset) [2]. Siten mittaus karsinogeeni aiheuttama DNA-vaurioita eli DNA additiotuotteet muodostuminen ja silloittumisen, ja DNA mutaatiot on käytetty klassisia syöpäriskin arviointiin lähestymistapoja, esim Ames-testi, comet ja mikrotumatutkimuksessa [3] – [5]. Karsinogeeni aiheuttama DNA-vaurioita on tärkeä varhainen tapahtuma aikana aloitusvaiheessa Karsinogeneesin joka heijastaa pysyvä ja peruuttamaton muutos vireille soluissa [6], [7]. Kuitenkin aloittaminen

sinänsä

klassiseen karsinogeneesissä malli ei riitä kasvainten kehittymiseen, joka on seurausta laajemmasta muutoksia solun homeostaasin, lähinnä kyvyttömyys aloitti solujen kunnolla valvoa ja säädellä geeniekspressiota [ ,,,0],8].

Altistuminen genotoksisten karsinogeenien, lisäksi niiden geneettisiä vaikutuksia, saattaa liittyä erilaisia ​​ei-genotoksisia vaikutuksia soluihin [9]. Non-genotoksisia vaikutuksia soluissa voi olla tärkeä rooli syövän kehittymisessä [10]. Todisteet viittaavat siihen, että ei-genotoksinen muutoksia soluissa, esim muutoksia solujen epigenome, voi johtaa syntymistä epigeneettiseltä ohjelmoida soluja [11]. Nämä epigeneettiseltä ohjelmoida solut näyttävät epigenetic profiili on samanlainen kuin havaitaan usein syöpäsolujen, kuten muuttunut histonimodifikaation malleja, DNA: n hypometylaatio toistuvia elementtejä ja proto-onkogeenien ja hypermetylaatiota tuumorisuppressorigeeneille. Altered epigeneettisellä tila antaa genomin epävakautta ja menetys hallittu kasvu signaaleja, tyypillisesti havaitaan syöpäsoluja [12]. Epigeneettiset muutoksiin eikä yksittäisiä geneettisiä mutaatioita

sinänsä

raportoidaan varten kloonilaajenemisen muuttunut maksan esineoplastiset pesäkkeet ja kasvainten kehittymiseen [13].

Viime aikoina useat tutkimukset raportoitu, että syöpää aiheuttavat vaikutukset aiheuttama 2-asetyyliaminofluoreeni, tamoksifeenin, trikloorietyleeni, aflatoksiini B1, okratoksiini, nikkelin ja kromin eivät noudata klassisen karsinogeneesin malli, vaan liittyy kirjo cellular muutoksia kattaa epigenetiikka. [8], [14] – [16]. Epigeneettiset tekijöillä on tärkeä rooli syövän etiologiassa; kuitenkin, ei ole riittävästi tietoa yhdistää epigeneettisellä tekijöiden ympäristön syövän syntymistä premaligni kudoksessa [17]. Perustuen yhä dokumentoitu epigeneettiset muutokset syövän etiologiassa, tavoite Tämän tutkimuksen tarkoituksena on arvioida, muutokset globaalissa DNA: n metylaatio on varhainen solujen tapahtuma vastauksena genotoksisten karsinogeenien kanssa tunnettu vaikutustapa (additiotuotteiden muotoilu ja silloitusaineita ). Tässä tutkimuksessa käytimme 5 suoraan ja 10 epäsuorassa toimivat genotoksisia karsinogeenejä paljastaa ihmisen lymfoblastoidisoluja (TK6) 24 tuntia. TK6 altistettiin karsinogeeneille 3 annostasoilla (low, medium ja suuri) kaksoiskappaleissa. S9 metabolinen mix lisättiin kulttuureissa puolessa kokeissa koska epäsuorassa vt karsinogeeneja vaatia S9 metabolista sekoitus tulla toiminnallinen karsinogeeneja. Käytimme ihmisen tymidiinikinaasi heterotsygoottianalyysin TK6 tässä tutkimuksessa, koska ne ilmentävät villityyppistä p53, kasvaa nopeasti jousitus (väestö kaksinkertaistuu aika 12-14 h), ja käytetään rutiininomaisesti geneettisen toksisuustutkimuksissa. Altistuksen jälkeen solut otettiin talteen, DNA uutettiin, hydrolysoitiin ja maailmanlaajuinen DNA: n metylaatio kvantitoitiin TK6.

Materiaalit ja menetelmät

Cell Culture

TK6 olivat ostettu European Collection of Cell Cultures (ECACC, Wiltshire, UK). Solut jaettiin 15 hoitoryhmään ja 2 kontrolliryhmiin (ohjaus S9-, ohjaus S9 +), ja niitä viljeltiin RPMI 1640 -elatusaineessa, joka sisälsi 10% lämpöinaktivoitua hevosen seerumia, 100 U /ml penisilliiniä, 100 ug /ml streptomysiiniä ja 2 mM L -glutamine 5% CO2 ja 37 ° C: ssa. Soluja pidettiin tiheydellä 10

6 solua /ml, ja altistettiin 24 tunnin ajan syöpää aiheuttaville aineille. Olemme perustaneet kaksi biologista rinnakkaista per kemiallisten annos, 10 ohjaus S9- rinnakkaisnäytteiden ja 5 ohjaus S9 + toisintaa.

Koska vaatimus entsymaattisen biotransformaation prokarsinogeenien tulla aktiivisiksi karsinogeeneja, sekoitus S9 (1% v /v) ihmisen maksasta lisättiin kulttuuriin puolessa kokeissa [18], [19]. Maksan S9-fraktioita saatiin CELSIS (Neuss, Saksa), ja sisälsi lääkettä metaboloivia entsyymejä, mukaan lukien sytokromi P450, flaviini- monooxygenases ja UDP glukuronyylitransferaasien. Eksogeenisen NADPH-regeneroituva järjestelmä (1,3 mM NADP +, 3,3 mM glukoosi-6-fosfaattia, 0,4 U /ml glukoosi-6-fosfaattidehydrogenaasi, ja 3,3 mM magnesiumkloridia, BD Biosciences, Erembodegem, Belgia) vaaditaan maksan S9-vaihe I hapetus oli mukana kokeissa. Solut altistettiin karsinogeeni kaksoiskappaleet tai ilman S9 aineenvaihdunnan sekoitus.

Chemicals, luelinkykymäärityksillä ja Dose Selection

Valitsimme kemikaaleja hyvin kuvattu genotoksinen ominaisuudet [20]. Luettelo valittujen aineiden, niiden luokittelu ja valotuksen annos annetaan taulukossa S1. Kaikki kemikaalit hankittiin Sigma Aldrich, ja liuotettiin ja laimennettiin dimetyylisulfoksidiin (DMSO). Elinkykymääritykset käytettiin valita annosta kohti agentti. Käytimme 3- [4,5-dimetyylitiatsol- 2-yyli] -2,5-difenyylitetratsoliumbromidi (MTT) elinkelpoisuus määritys [21], ja myös laskettiin osuudet elävät ja kuolleet solut käyttäen Countess ™ Automated Cell Counter ( Invitrogen, Carlsbad, CA). Perustuen elinkelpoisuuden määritykset, valitsimme kolme annosta kohden kemian, eli annos 95% solujen elinkelpoisuuden (korkea annos), 1/10 suuren annoksen (medium annos) ja 1/100 suuren annoksen (pieni annos).

DNA Extraction, keskittyminen ja Purity

24 tunnin kuluttua hoidon solut heti käsitelty DNA: n eristämiseksi. DNA uutettiin käyttämällä Trizol® reagenssin kanssa PureLinkTM Micro-to-Midi System® mukaan valmistajan protokollan (Invitrogen, Carlsbad, CA). DNA määrän ja laadun mitattiin NanoDrop Spektrofotometria ja Agilent 2100 bioanalysaattorin.

entsymaattinen hydrolyysi DNA

Uutettu DNA hydrolysoitiin yksittäisille deoksiribonukleosidejä yksinkertaistetussa yksivaiheisen menettelyn [22]. Lyhyesti, DNA sulattaa seos valmistettiin lisäämällä 250 U BenzonaseTM (Sigma Aldrich), 300 mU fosfodiesteraasi-I (Sigma Aldrich), ja 200 U alkalista fosfataasia (Sigma Aldrich) 5 ml: aan Tris-HCI-puskuria (pH 7,9, 20 mM) joka sisälsi 100 mM NaCl ja 20 mM MgCl

2. 1 ug uutettu DNA alttiina ja kontrollinäytteistä hydrolysoitiin 100 ui reaktio lisäämällä 50 ui sulattaa sekoitus, ja näytteitä inkuboitiin 37 ° C: ssa 6 h. Hydrolysoitu näytteet tuotiin 1 ml lisäämällä HPLC-luokan H

2O.

kalibrointistandardit

Kalibrointivaatimukset varten 5’methyl- deoksisytidiinikinaasin ((5Me) dC) ja deoksisytidiini (dC ) ostettiin Sigma, ja liuotetaan LC-MS puhdistettua vettä (kantaliuoksia). Kalibrointi sarja valmisteltiin 5 (Me) dc ja dC alueella 0,1-10 ppb ja 10-100 ppb vastaavasti varastosta ratkaisuja. Samoja kalibrointistandardit käytettiin kaikissa kokeissa.

LC-ESI-MS /MS Instrumental Analysis

Global DNA: n metylaatio saatiin määrällisesti (5Me) dC ja dC käyttäen ultra-painetta nestekromatografia (UPLC) ja osa erotus- ja tandem-massaspektrometrialla (MS-MS) kvantitointiin. Analyysit tehtiin Waters ACQUITY UPLC varustettu autosamplerista ja Micromass MS Technologies Quattro Premier massaspektrometrillä. 10 ui näytettä otettiin käyttöön koskevasta ACQUITY UPLC BEH C

18, 50 mm x 2,1 mm, 1,7 um, pidettiin 40 ° C: ssa. Liikkuva faasi, jota käytetään kromatografista erottamista oli seos, jossa on 0,1% muurahaishappoa vedessä (A) ja 0,1% muurahaishappoa asetonitriilissä (B) käyttäen seuraavaa gradienttia: 0 min: 90% A ja 10% B, 2-2,5 min: 100% B, 3,9-4,0 minuuttia 90% A: ta ja 10% B virtausnopeudella 0,35 ml /min. Kaikki liikkuva faasi osatekijät olivat LC-MS luokan ja ostettiin Biosolve (Valkenswaard, Alankomaat).

Ensin suoritetaan täysi-scan spektrin alla sähkösumutusionisaatiota (ESI) olosuhteissa. Täydessä scan spektri, natrium additiotuotteet 5 (Me) DC /DC-[M + Na] + ja 5 (Me) DC-DC-dimeerit havaittiin myös, mikä on yleinen ilmiö ESI-MS täysi tarkistus [23]. Analyysit suoritettiin ESI + -tilassa ja usean reaktion seuranta (MRM) menetelmää käytettiin argonia, kuten törmäys kaasun paineessa, joka on 2,88 10

-3 mbar. Siirtymät seurataan olivat m /z 242.00 → 125,85 5 (Me) dC (kartion jännite 14 V, törmäysenergia 10 eV) ja m /z 228,10 → 112.00 varten dC (kartio jännite 14 V, törmäysenergia 17 eV). Pysähdysaika kohti siirtyminen oli 100 ms.

Kalibrointikäyrän

Havaitsimme lineaarisen vasteen standardien yli konsentraatioalueella (0,1-10 ppb ja 10-100 ppb) 5 (Me) dC ja DC korrelaatiokertoimet 0,9991 ja 0,9970 vastaavasti.

tilastot

prosenttiosuus maailman DNA: n metylaatio on laskettu per kemiallinen annosta ja ilmaistaan ​​(5Me) dC /[(5Me) dC + DC] %. Käytimme marginaalinen malli tutkia tekijät vaikuttivat vuonna havaitun vaihtelun maailmanlaajuinen DNA-metylaation TK6 eli kemikaalit, annos ja S9. Jäännökset piirrettiin olettamusten varmistamiseksi normaaliuden vuonna marginaalinen mallissa. Shapiron-Wilk testi jäännösten osoitettiin olevan ei-merkitsevä, mikä merkitsi sitä, että lähentämällä vastaus normaalijakaumaa oli tarkoituksenmukaista. SAS 9.2 tilastollinen paketti käytettiin sopivaksi marginaalinen mallia. Rasiakuvaajien kertyi kemikaaleilla, joilla on merkittävä vaikutus maailmanlaajuiseen DNA-metylaation TK6 SPSS V.18.

Tulokset

Global DNA-metylaation ja vertailuryhmän kulttuureissa per kemiallinen annosta ilman ja S9 aineenvaihdunnan yhdistelmä on annettu taulukossa 1 ja 2 vastaavasti. Tuloksemme osoittavat induktion globaalin DNA hypometylaatio vastauksena S9 aineenvaihdunnan yhdistelmä, kuten on esitetty kuviossa 1.

Global DNA: n metylaatio on ilmaistu prosentteina 5-metyylisytosiinin verrattuna kokonaismäärä sytosiinit läsnä genomissa. Rasiakuvaajan kuvataan mediaani (viiva laatikossa), välinen neljännekseen valikoima ja maksimi- ja minimiarvot (viikset). Vieraat havainnot esitetään avoimina ympyrät ulkopuolella päät viikset.

Vaihtelu maailmanlaajuinen DNA metyloinnin ja vertailuryhmän kulttuureissa osoittanut normaalijakaumaa (kuva S1). Olettaen maailmanlaajuinen DNA: n metylaatio on normaalisti jakautunut, ja ottaen huomioon kunkin kemikaalialtistuksen olla itsenäinen, mutta replikointi kuluessa altistumisesta korreloivan, marginaalinen malli, joka kaappaa riippuvuus, sovellettiin. Kovarianssi välillä malli jäännökset, joka vastaa yhdenmukaisen korrelaatio toistetuilla näytteitä arvioitiin olevan 0,54. Unohtaminen korrelaatio sisällä jäljitellä altistus voi johtaa tarkka arvio merkitys maailmanlaajuisen DNA: n metylaatio. Meidän tulokset havaitsimme kemikaaleja ja S9 kirjanpitoa varten havaitun vaihtelun maailmanlaajuinen DNA-metylaation TK6 (taulukko S2). Annos todettiin olevan merkityksettömiä jopa ilman S9 marginaalinen mallissa. Mallia kunnostetaan ilman annosta ja tulokset on esitetty taulukossa 3.

Lisäksi osoitamme, että bentseenin ja sen metaboliitin hydrokinonia, ja styreeni, hiilitetrakloridi ja trikloorietyleeni vaikutti merkittävästi maailmanlaajuisen DNA-metylaation TK6 (taulukko 3). Global DNA: n metylaatio profiilien havaittu altistuminen näitä kemikaaleja TK6 kanssa ja ilman S9 on esitetty kuviossa 2 ja 3 vastaavasti.

Global DNA: n metylaatio on ilmaistu prosentteina 5-metyylisytosiinin verrattuna kokonaismäärä sytosiinien läsnä genomissa. Rasiakuvaajan kuvataan mediaani (viiva laatikossa), välinen neljännekseen valikoima ja maksimi- ja minimiarvot (viikset). Harha on esitetty avoimet ympyrät ulkopuolella päät karvojen.

Global DNA: n metylaatio on ilmaistu prosentteina 5-metyylisytosiinin verrattuna kokonaismäärä sytosiinit läsnä genomissa. Rasiakuvaajan kuvataan mediaani (viiva laatikossa), välinen neljännekseen valikoima ja maksimi- ja minimiarvot (viikset). Vieraat havainnot esitetään avoimina ympyrät ulkopuolella päät viikset.

Keskustelu

Klassinen teoria syövän ohjaavat geneettisten mutaatioiden ja kromosomipoikkeavuuksien annetaan genomin epävakautta [24], [25 ]. Kuitenkin nykyinen tutkimus korostaa maailmanlaajuisen DNA: n metylaatio varhaisena epigeneettiset tekijä vastauksena genotoksinen altistumista.

epäsuorassa toimii karsinogeeneja edellyttävät metabolista aktivaatiota tulla reaktiivista karsinogeeneja. Johtuen tarvitaan metabolista aktivaatiota, seos S9 maksauute (1% v /v) lisättiin puoli viljelmiä. S9 seos sisältää entsyymejä tarvitaan vaiheittain I metabolisen aktivaation vierasaineiden. Expression of metabolisia entsyymejä liittyy reaktiivinen oksidatiivisen stressin reittejä [26]. Oksidatiivinen stressi vaikuttaa DNA: n metylaatio muuttamalla S-adenosylmethionine (SAM) ja S-adenosyylihomokysteiinin (SAH) suhde [27] – [29]. Tässä tutkimuksessa lisäämällä S9 metabolisen sekoita TK6 soluviljelmissä johti maailmanlaajuisen DNA hypometylaatio (β = -0,9082,

p

0,0001) (taulukko 3, kuvio 1). S9 aiheuttama maailmanlaajuinen DNA hypometylaatio Näiden viljelmien voidaan mekaanisesti liitetty induktion oksidatiivisen stressin reittejä. Oksidatiivista stressiä aktivoi solujen ja ydinvoiman signalointireittejä, joka on luontainen histoni liasetyylitransferaasi (HAT) ja histonideasetylaasi (HADC) toimintaa. Puolestaan ​​nämä proteiinit liittyvät DNA metyylitransferaaseja (DNMTs) ydinenergia väyliä johtaa konformaatiomuutoksia histonien ja kromatiinirakenteeseen, ja siten ne muuttavat solun transkription tasolla [30], [31].

useita kemikaaleja käytettiin tässä tutkimuksessa vaikuttanut maailmanlaajuinen DNA: n metylaation muutoksia TK6 (taulukko 3, kuvio 2 ja 3). Havaitsimme mielenkiintoisen globaalin DNA metylaation. Bentseeni (β = -1,5289,

p

0,0295) ja sen metaboliitin hydrokinonia (β = -1,8029,

p

0,0108) altistuksen aiheuttama maailmanlaajuinen DNA hypometylaatio vuonna TK6, kun taas styreeni altistus (β = -1,7332,

p

0,0115) aiheuttama maailmanlaajuinen DNA hypometylaatio mutta sen aineenvaihduntatuotteen styreenioksidilla altistumista ei vaikuttanut maailmanlaajuinen DNA-metylaation TK6 (β = -0,2999,

p

0,6547). Bentseeni altistus on osoitettu liittyvän vähentyneeseen metylaatiotasoilla DNA toistuvia elementtejä [32]. Bentseeni ja hydrokinoni altistuminen aktivoi oksidatiivisen stressin reittejä soluissa, joka vaikuttaa solujen DNA metylaatiokuvion [33]. Styreeni altistus indusoi DNA adduktin muodostumista ja oksidatiivista stressiä soluissa [34]. Näiden vaikutusten lisäksi raportoimme induktio maailmanlaajuisen DNA hypometylaatio jonka styreeni mahdollisena ei-genotoksinen, mikä voisi selittää sen myrkyllisyydestä. Olemme myös alttiina TK6 Hiilitetrakloridista ja trikloorietyleeni. Nämä kemikaalit toimivat yleensä muodostamalla reaktiivisia välituotteita jälkeen metabolisen aktivaation. Nykyisessä tutkimuksessa havaitsimme maailmanlaajuinen DNA hypometylaatio aiheuttama hiilitetrakloridin (β = -1,3879,

p

0,0475) ja trikloorietyleeni (β = -1,5302,

p

0,0294) altistuminen TK6 (taulukko 3, kuvio 2 ja 3). Aiemmat tutkimukset raportoitu samanlaisia ​​havaintoja hiilitetrakloridia ja trikloorietyleeni (TCE) aiheuttama maailmanlaajuinen DNA hypometylaatio. Hiilitetrakloridi aiheuttama maailmanlaajuinen DNA hypometylaatio pelastettiin lisäravinteen S-adenosylmethionine (SAM) rotan maksasta [35], [36]. Nämä havainnot viittaavat siihen, että hiilitetrakloridin indusoima DNA hypometylaatio mukana metioniinia metaboliareitteihin. Lisäksi nämä kemikaalit aiheuttaa oksidatiivista stressiä, joka voi vaikuttaa solujen methylome.

Päinvastoin kuin muissa tutkimuksissa, emme tarkkailla maailmanlaajuinen DNA: n metylaation muutoksia TK6 altistuksella polyaromaattisia hiilivetyjä (PAH). Krooninen altistuminen bentso [a] pyreenin hiiren alkion fibroblastien

in vitro

aiheuttama maailmanlaajuinen DNA hypermetylaation [37]. Lisäksi erot DNA: n metylaation tason on raportoitu perifeerisiä veren lymfosyyttejä työntekijöiden kroonisesti alttiina PAH verrattuna niiden verrokkeihin [38]. Erilaisia ​​kokeellisia asetuksia käytetään näissä tutkimuksissa verrattuna nykyiseen tutkimuksen selittäisi heterogeenisyys havaittiin PAH aiheuttama DNA metylaatiomuutokset. Lisäksi ei maailmanlaajuinen DNA: n metylaation muutoksia TK6 havaittiin mitomysiini C, formaliinia, syklofosfamidi, ethylenedibromide, epikloorihydriini ja akryyliamidin. Global DNA metylaatiomuutokset vastauksena näiden kemikaalien ei ole raportoitu muualla. Subtle epigeneettiset vaikutuksia, kuten histonimodifikaation ja geenin tietyn DNA: n metylaatio, vastauksena näiden kemikaalien ei voida jättää huomiotta, ja tutkitaan edelleen.

Global DNA hypometylaatio in TK6 aiheuttama suora ja epäsuorassa toimii genotoksisten karsinogeenien tässä tutkimuksessa voisi merkitä sitä, että solut ovat alle preneoplastisen olosuhteissa. Jatkuessaan maailmanlaajuinen DNA hypometylaatio jatkuu, tämä voisi ajaa näiden solujen kasvainilmiasua. Kuitenkin kesto ja laajuus altistumisen tarvitaan globaalit DNA hypometylaatio antaa kasvainilmiasua on täysin ymmärretty.

Johtopäätös

Yhteenvetona raportoimme ei-genotoksinen vaikutus eli, muutos globaalissa DNA: n metylaatio, vastauksena useisiin syöpää joita perinteisesti pidetään toimivan avulla genotoksisten mekanismien. Kuvaamme myös, että S9-metabolisen yhdistelmä muuttaa globaalia DNA metylaatiokuvion sisään TK6. Tulevaisuuden työ on osa annoksesta riippuvia vaikutuksia S9 metabolisen mix

in vitro

ja reittejä mukana karsinogeeni aiheuttamaa DNA metylaatiomuutokset. Tuloksemme viittaavat siihen, että on käytetty erilaisia ​​solulinjoja ja monipuolisempaa määrityksiä validoimiseksi edellä esitetyt toteamukset ja tutkia mekanistisen linkkejä.

tukeminen Information

Kuva S1.

Histogrammi ja tiheys juoni jäännösten arvioida normaaliuden. Normaalius oletus vasteen (maailmanlaajuinen DNA metylaatio) arvioitiin piirtämällä jäännökset (x-akseli). Juoni näyttää osoittavan, että tämä olettamus on uskottava. Shapiro-Wilk testi suoritettiin myös vahvistaa normaaliuden ja jäännösten osoitettiin olevan merkityksettömiä.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0034674.s001

(TIF) B Taulukko S1.

Katsaus aineita, niiden luokittelu ja annokset käytetään hoidossa TK6.

doi: 10,1371 /journal.pone.0034674.s002

(DOCX) B Taulukko S2.

tulokset marginaalinen kuvaava vaikutus altistumisen eli kemikaalit, annos, ja S9, maailmanlaajuisten DNA-metylaation TK6

in vitro

.

doi: 10,1371 /journal.pone.0034674.s003

(DOCX) B

Kiitokset

Haluamme kiittää Peter Collaerts ja Karine Vranckx heidän avustaan ​​kemiallisen altistumisen TK6 soluviljelmissä.