Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tuoreet tiedot tarjoavat näyttöä tärkeä rooli verihiutaleiden in imusuonten sisällä ihmisen pahanlaatuinen sairaus. Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia roolia trombosyyttien in lymfangiogeneesiä ihmisen ruokatorven syöpään. Perioperative perifeerisen verihiutalearvosi (PBPC) arvioitiin takautuvasti 320 potilailla, joilla on ruokatorven syöpä, joka käsittää 184 adenokarsinoomat (AC), ja 136 levyepiteelikarsinoomien (SCC). Tiedot imusuonten arvioitiin anti-podoplanin immunovärjäys oli saatavilla aikaisemmista tutkimuksista, verihiutaleiden sisällä tuumorikudoksen arvioitiin CD61 immunovärjäyksellä. Sillä

in vitro

tutkimuksissa ihmisen imusuonten endoteelisolujen (LEC) eristettiin ja viljeltiin yhdessä perifeerisen veren verihiutaleita. Strooman thrombocytic klusterit (STC) näkyivät 82 näytettä (25,6%), ja verisuonten thrombocytic klusterit (VTC) 56 (17,5%). STC ja VTC liittyi merkittävästi suurempi PBPC milloin tutkinta kaikista tapauksista. Läsnäolo STC liittyi suurempi imusuonten mikroverisuonitiheys (p 0,001), PBPC ja STC liittyi lymphovascular invaasio kasvainsolujen regressiomallin. Läsnäolo vakiosopimusehtojen liittyi lyhyempi DFS kaikista potilaista (p = 0,036, Breslow testi), ja VTC lyhyemmin DFS SCC (p = 0,025, Breslow testi). Soluviljelmässä, LEC leviämisen tehostettiin yhdessä viljelemisen ihmisen verihiutaleiden annoksesta ja ajasta riippuvaisella tavalla välittämä vapautumista PDGF-BB: n ja VEGF-C. Verihiutaleet tärkeä rooli lymfangiogeneesiä ja lymphovascular hyökkäyksen ruokatorven syöpä, vaikuttavat ennustetta. Joten häiriöitä signalointipolkujen verihiutaleiden, kasvainsolujen ja lymfaattiseen endoteeliin saattaa olla hyötyä potilaille.

Citation: Schoppmann SF, Alidzanovic L, Schultheis A, Perkmann T, Brostjan C, Birner P (2013) trombosyytit korreloivat lymfangiogeneesiä Human ruokatorven syöpä ja Mediate kasvu Lymphatic endoteelisoluissa

in vitro

. PLoS ONE 8 (6): e66941. doi: 10,1371 /journal.pone.0066941

Editor: Claudia Daniela Andl, Vanderbilt University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 08 huhtikuu 2013; Hyväksytty: 13. toukokuuta 2013. Julkaistu: 26 kesäkuu 2013

Copyright: © 2013 Schoppmann et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

ruokatorven adenokarsinoomat (AC) mahalaukkurajan risteyksen ovat uskotaan pääosin aiheuttamien refluksitaudin, kun taas levyepiteelikarsinoomien (SCC) syyksi on pääasiassa alkoholin ja tupakan kulutusta [1], [2]. Viime vuosikymmeninä, ilmaantuvuuden AC on herättänyt huomattavasti länsimaissa [3]. Huolimatta multimodaalinen hoitostrategioita, kokonaistulos potilaille, joilla on ruokatorven syöpä on edelleen huono. Joten uudet terapeuttiset käsitteet tarvitaan pikaisesti, ja oivalluksia patofysiologia taudin ovat edellytys niiden kehitystä. Kuten monet muut syövät, ruokatorven syövät lähinnä leviävät imunestejärjestelmän ja lymphovascular invaasio syöpäsolujen on heikentynyt ennuste potilaista [4].

Tänään silmiinpistävää esiintynyt kasvaimia voivat perustaa paitsi omaa verta alusten tarjontaa, mutta saattaa myös aiheuttaa muodostuu uusia imusuonten (lymfangiogeneesiä) ja siirtyä aktiivisesti tähän äskettäin muodostettu alukset edistää niiden leviämistä [5].

Joten mahdollinen estyminen tämä prosessi voi olla hyvä ratkaisu potilaat, etenkin kun viimeaikaiset tiedot viittaavat siihen, että prosessi lymfangiogeneesiä ja imusuonien invaasiota (LVI) ei rajoitu vain ensisijainen kasvaimia, mutta näkyy myös imusolmukemetastaaseja, jolloin leviäminen kasvainsolujen [6].

muodostuminen kasvaimeen liittyvä imusuonten on monimutkainen prosessi ja tällä hetkellä vain osittain ymmärretty. Aikana alkion angiogeneesiin, verihiutaleet näyttävät olevan keskeisessä asemassa erottaa veren ja imusuoniston [7]. Mutta on yhä enemmän todisteita siitä, että verihiutaleet voisi vuorovaikutuksessa ihmisen imunestejärjestelmän myös pahanlaatuinen sairaus, ja saattaisi helpottaa lymfangiogeneesiä ja tuumorietäpesäke [8], [9].

Tämän tutkimuksen tavoitteena oli tutkia roolia verihiutaleiden osalta lymfangiogeneesiä ihmisen ruokatorven syöpään.

Materiaalit ja menetelmät

potilaat

Kaikki potilaat, joille tehtiin kirurginen resektio karsinoomien ruokatorven tai gastroesofageaalisen välinen liitos 1992 ja 2011 Kirurgian klinikka, Medical University of Vienna, kuuluivat tähän tutkimukseen, mikäli riittävä kudosten ja ennen leikkausta thrombocytic count oli saatavilla. Kasvaimet potilaista arvioitiin uudelleen mukaan UICC 7. painos TNM lavastus.

Ethics lausunto

Institutional Review Board hyväksyntä saatiin (Institutional Review Board of Medical University of Vienna, Austria, EK 1122/2009). Johtuen taannehtivuus Tässä tutkimuksessa käyttämällä vain arkistoituja kudosta, ei tietoisella suostumuksella potilaiden vaadittiin ja saatu hyväksymien tarkastelun aluksella. Erityiset käytetyt näytteet tässä tutkimuksessa on jo käytetty aiemmissa julkaisuissa [4], [10] – [15].

Analyysi perifeeristen verihiutalearvo (PBPC) B

PBPC potilaista määritettiin rutiininomaisesti ennen leikkausta ja myös ennen aloittamista neoadjuvanttikemoterapian, jos sitä annetaan.

analyysi PBPC suoritettiin rutiininomaisesti vakio automatisoitu hematologian analysaattorit laitoksella laboratoriolääketieteen, Medical University of Vienna. Aikana observational vuodesta 1992 vuoteen 2011 seuraavat hematologian analysaattorit sovellettiin: vuoteen 1995 asti Coulter STKS (Coulter, Hialeah, FL), 1995-2001 Sysmex NE-8000 (TOA Medical Electronics, Kobe, Japani), vuodesta 2001 Sysmex XE- 2100 (Sysmex Corporation, Kobe, Japan).

Immunovärjäys

immunohistokemia (IHC) suoritettiin parafinoidut näytteet kiinnitettiin 4% puskuroituun formaliiniin, kolmella pm paksu histologisia kohdat.

tiedot imusuonten arvioi monoklonaalinen hiiren anti-podoplanin vasta-D2-40 (Ventana Medical Systems, Tucson, Arizona) oli saatavilla aikaisemmista tutkimuksista [4], [15].

havaitseminen trombosyyttien immunovärjäys suoritettiin käyttäen monoklonaalista anti-CD61-vasta-aine (NCL-CD61-308, Leica Biosystems, Newcastle, UK) kanssa laimennus 1:1600. Vertailustrategia Ultra immunostainer (Ventana Medical Systems, Tucson, Arizona) käytettiin immunohistokemiaa.

analyysi anti-podoplanin immunovärjäyksellä suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [16]:

Lyhyesti, määritykseen of LMVD, alueen sisällä tai välittömässä läheisyydessä kasvain muodostelmia eniten selvästi esiin mikroverisuonten ( ”hot spot”) valittiin pienellä suurennuksella. LMVD Sitten määritetään laskemalla kaikki immunovärjättiin aluksia yhteensä suurennos x200 loppututkintoon alueella 0,25 mm

2. Tapaus pidettiin positiivisena suhteen LVI ollessaan skannauksen koko immunovärjätty liukua kasvainsolun klusterin näkyi sisällä podoplanin koristeltu vaskulaaritilaa.

analyysi anti-CD61 immunovärjäystä, pinnallinen, exulcerated tai verenvuoto kasvain alueet jätettiin analyysin ulkopuolelle. Kasvaimen pisteytettiin positiiviseksi thrombocytic klustereita aluksiin (VTC), jos ainakin kaksi alusta niin klustereita havaittiin (Fig. 1A).

V: Vascular thrombocytic klusteri (VTC) käytettäessä ruokatorven syöpä yksilö (alkuperäinen suurennos X400). B: stroomakasvaimet thrombocytic klusteri (STC) käytettäessä ruokatorven syöpä näyte arvioitiin anti – CD61 immuunivärjäysmenetelmällä (alkuperäinen suurennos X400). C: Ruokatorven syöpä näyte korkea imusuonten mikroverisuonitiheys (LMVD) arvioi anti podoplanin immunovärjäyksellä (alkuperäinen suurennos x200). D: Lymphovascular hyökkäys syöpäsolujen arvioitiin anti-podoplanin immunovärjäys (alkuperäinen suurennos x200). E: Double värjäyksen imusuonten avulla (punainen, anti-podoplanin) ja trombosyyttien (ruskea, anti- CD61) (alkuperäinen suurennos X400). F-H: Virhepylväät osoittavat keskiarvot ± 2 x keskivirhe. Perifeerisen veren verihiutaleiden määrä (PBPC) olivat merkittävästi korkeammat näytteitä VTC (F). PBPC (G) ja LMVD (H) olivat merkittävästi korkeammat ruokatorven syöpään näytteitä STC.

Kasvaimen katsottiin sen osoittaminen thrombocytic klustereita sisällä kasvain strooman (STC), jos useampi kuin yksi yksiselitteinen CD61 immunovärjättiin klusteri oli näkyvissä kasvain stroman (Fig. 1 B).

analyysi immunohistokemia suoritettiin kaksi riippumatonta tutkijat (SFS, PB) sokkoutettu kliinisiä tietoja. Tapaukset, joissa toisistaan ​​poikkeavia tuloksia arvioitiin yhteen käyttämällä Monipäisen mikroskooppia.

Tilastollinen analyysi

T-testi, Mann-Whitneyn testi, Chi square testejä ja lineaarista regressiota käytettiin tarkoituksenmukaista. Kaikki luvut annetaan ovat keskiarvoja ± keskihajonnat, ellei muuta.

Kokonaiselossaoloaika (OS) määriteltiin välinen aika ensisijainen leikkauksen ja potilaan kuoleman, selviytyminen loppuun seurantajakso pidettiin sensuroitu havainto. Tautivapaa elinaika (DFS) määriteltiin aika leikkauspäivänä saakka ensimmäisen sairauden todetaan-etenemisen. Univariate analyysi selviytymisen suoritettiin käyttäen Breslow testi, Monimuuttuja-analyysissä käytetty Cox suhteelli- riskien mallia. Potilaat ikä, radicality of resektio, kasvain ja imusolmuke vaiheessa (mukaan nykyinen UICC luokitus), kasvaimen ja imusolmuke tila sisällytettiin osaksi Coxin regressio. Kahden pyrstö p-arvo ≤0.05 pidettiin merkittävinä, SPSS 19.0 käytettiin kaikissa laskelmissa.

endoteelisolujen eristäminen ja kulttuuri

Ensisijainen endoteelisoluja eristettiin ihmisen esinahan näytteistä proteolyyttinen digestio, ja puhdistettiin käyttäen anti-CD31-vasta-aine on kytketty magneettiset helmet (Invitrogen Corp., Carlsbad, CA). Isolaatit viljeltiin mikroverisuonten endoteelisolujen kasvua keskipitkällä EGM2-MV (Clonetics®, Lonza, Walkersville, MD), joka sisälsi 1 ug /ml fibronektiiniä, 5% FCS: llä ja ihmisen kasvu- tekijät ilman täydentäminen verisuonten endoteelin kasvutekijä (VEGF). Edelleen erottaminen imusuonten ja veren endoteelisolujen (LEC ja BECS), anti-podoplanin-vasta-aine on kytketty magneettiset helmet sovellettu. Kaikki isolaatit osoittivat ≥98%: n puhtaudella ja elinkelpoisuus.

Solut ympättiin tiheydellä 1 x 10

5 30 mm kuopissa 24 tuntia. Sen jälkeen kun oli pesty fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella, soluja inkuboitiin 10

5-10

7 geeli suodatettiin verihiutaleiden EBM-2 emäksinen väliaine (Lonza), joka sisälsi 0,5% FCS: ää. Estämiseksi kokeissa seuraavat reagenssit lisättiin co-viljelmät: vuohen anti-ihmisen PDGFR-β neutraloivat IgG 1 ug /ml (R 0,05, t-testi), PBPC jälkeen neoadjuvanttikemoterapian (välittömästi ennen leikkausta) käytettiin näille potilaille analysoitavaksi. STC oli läsnä 82 näytettä (25,6%; 36 AC, 46 SCC), VTC 56 (17,5%, 22 AC, 34 SCC). Kuvassa 1 näytteitä immunovärjäyksen. Yleensä STC (p = 0,004, Chi Square testi) ja VTC (p = 0,002, Chi square testi) olivat yleisempiä SCC verrattuna AC. Merkittävä assosiaatio läsnäolo näyttötulosseurannan ja STC nähtiin tutkimuksen kaikista tapauksista ja tutkinta AC ja SCC erikseen (p 0,001, vastaavasti, Chi square test).

Vaikka ei assosiaatiosta läsnäolo STC kanssa tuumorin luokitus ja histologista luokittelu nähtiin kaikissa tapauksissa ja AC, SCC kehittyneempien imusolmuke asema nähtiin kasvaimissa STC (mediaani PN1 molemmissa tapauksissa, p = 0,024, Mann Whitneyn testi).

läsnäolo VTC liittyi kehittyneempiä kasvain vaiheessa kaikissa tapauksissa (mediaani pT3 molemmissa tapauksissa suuntaa-antavasti suurempia lavastus potilailla, joilla VTC, p = 0,036, Mann Whitneyn testi), mutta tämä yhdistys ei nähty tutkiessaan AC ja SCC erikseen.

PBPC olivat korkeampia tapauksissa, joissa VTC on tutkimuksen kaikista tapauksista (275 ± 83 vs. 250 ± 79 g /l, p = 0,001, t-testi) (Fig. 1 F ), mutta tämä yhdistys nähtiin erillinen tutkimus kasvaintyypeille ainoastaan ​​SCC (282 ± 75 vs. 243 ± 81 g /l; p = 0,007, t-testi), mutta ei AC (p = 0,077, t-testi) . Ei yhdistys VTC kanssa LMVD nähtiin kaikissa tapauksissa ja AC ja SCC erikseen. (P 0,05, t- testi).

Läsnäolo STC liittyi korkeampi veren kantasolujen milloin tutkinta kaikista tapauksista verrattuna potilaisiin ilman STC (279 ± 88 g /l vs. 246 ± 76 G /l; p = 0,001, t-testi) (Fig. 1G). Klo tutkinta kasvaintyypeille erikseen Tällainen yhdistys löytyi vain SCC (282 ± 75 g /l vs. 243 ± 82 g /l, p = 0,007, t-testi), mutta jäi merkitys AC (274 ± 101 G /l vs. 247 ± 73 g /l, p = 0,077, t-testi). Läsnäolo STC liittyi korkeampi LMVD kaikissa tapauksissa (16 ± 7 vs. 12 ± 5 mikrosuonten /kenttä; p 0,001, t-testi) (Fig. 1 H) ja myös AC (16 ± 6 vs. 12 ± 5 mikro- suonten /kenttä, p 0,001, t-testi) ja SCC (17 ± 7 vs. 13 ± 6, p = 0,002, t-testi) erikseen.

Ei suoria yhdistys STC tai VTC kanssa LVI nähtiin (p 0,05, Chi square testi)., mutta lineaariregressiomallin kanssa LVI yhtä riippuvainen muuttuja ja myös PBPC, STC ja VTC osoitti, että veren kantasolujen (p = 0,035, kerroin regressio 0,001) ja VTC (p = 0,018, kerroin regressio 0175) liittyivät LVI.

toisessa lineaariregressiomallin käyttäen LMVD kuin riippuva muuttuja, mukaan lukien sama riippumattomia muuttujia, jälleen PBPC (p = 0,034, kerroin regressio -0,009) ja STC (p 0,001, kerroin regressio 5.415) vaikutti LMVD.

Survival Analysis

Mean havainto aika oli 50 ± 3 (keskivirhe) kuukautta, tänä seurantajakso, 154 potilasta (48,1 %) kehittyi uusiutuva sairaus, ja 131 (40,9%) kuoli.

läsnäolo STC liittyi lyhyempi DFS kaikista tapauksista, yhden muuttujan analyysiin, (p = 0,036, Breslow testi, Fig. 2A). Klo tutkinta kasvaintyypeille erikseen, ei tällaista vaikutusta havaittiin AC, mutta analyysi SCC (p = 0,037, Breslow testi, Fig. 2B). STC liittyivät lyhyempi DFS monimuuttujamenetelmin AC (p = 0,022, Coxin regressio, taulukko 2, kuva. 2C).

2A: Presence of strooman thrombocytic klustereiden (STC) liittyi lyhyempi DFS kaikissa tapauksissa. Klo tutkinta kasvaintyypeille erikseen, STC liittyi lyhyempi DFS okasolusyöpä (SCC) (Fig. 2B) sekä adenokarsinooma (AC) (Fig. 2C). Kuva. 2D: läsnäolo verisuonten thrombocytic klustereiden (VTC) liittyi lyhyempi DFS SCC. Kuva. 2E: Yllättäen VTC liittyi merkitsevästi pidempi DFS AC monimuuttujamenetelmin. Kuitenkin huomaa, että vain suhteellisen harvat tapahtumia nähdään VTC + käyrä, ja käyrät ovat ylittäessään toisiaan, täyttäviä tämä havainto. Kuva. 2F: VTC liittyi lyhyempi OS SCC.

Ei vaikutusta STC nähtiin OS klo tutkinta kaikissa tapauksissa, kuten hyvin tutkimus AC ja SCC erikseen (p 0,05 , Breslowin testin tai Coxin regressio, vastaavasti; taulukko 2).

Ei merkitystä VTC on DFS nähtiin tutkimuksen kaikista tapauksista. Klo tutkimus AC ja SCC erikseen, VTC liittyi lyhyempi DFS Yksiulotteisissa analyysi SCC (p = 0,025, Breslow testi, mediaani DFS 506 ± 82 vs. 794 ± 139 päivää; Fig. 2D), mutta liittyy pidempi DFS monimuuttujamenetelmin AC (p = 0,008, Coxin regressio, mediaani DFS 2928 ± 990 vs. 700 ± 141 päivää; kuvio 2E). Läsnäolo VTC liittyi myös huomattavasti lyhyempi OS SCC (p = 0,049, Breslow testi, Fig. 2F).

PBPC ei liittynyt DFS tai OS uni-tai monimuuttujamenetelmin (p 0,05, yksi- tai Coxin monimuuttuja regressio, vastaavasti).

Cell Culture

LEC ympättiin 1 x 10∧5 per 30 mm hyvin, ja 24 tunnin kuluttua eristettiin verihiutaleita lisättiin 3 x 10 ∧7, 10∧6 tai 10∧5 kuoppaa kohti ja soluja viljeltiin vielä 48 tunnin ajan. Kuten kuvassa 3A-E, LEC solumäärä kasvoi määrää lisätään yksittäisiä verihiutaleiden, mikä osoittaa, että LEC lisääntymistä tehostetaan yhdessä viljelemisen ihmisen verihiutaleiden annoksesta riippuvaisella tavalla.

V: LEC leviämisen on parannettu yhdessä viljelemisen ihmisen verihiutaleiden annoksesta riippuvalla tavalla. LEC ympättiin 1 x 10∧5 per 30 mm hyvin. 24 tunnin kuluttua eristettiin verihiutaleita lisättiin 3 x 10∧7, 10∧6 tai 10∧5 kuoppaa kohti ja soluja viljeltiin vielä 48 tunnin ajan. Määrän määrittämisestä solujen lisääntymistä, LEC count määritettiin (mustat palkit, oikea asteikko) ja metabolinen aktiivisuus mitattiin tetratsoliinikokeella määrityksellä (valkoiset pylväät, vasen asteikko). B-E: Vastaava mikroskooppinen kuvat A: B: valvonta; C: EY + Px10∧7, D: EY + Px10∧6, E: EY + Px10∧5. F: LEC leviämisen tehostetaan yhdessä viljelemisen ihmisen verihiutaleiden ajasta riippuva tavalla. LEC ympättiin 1 x 10∧5 per 30 mm hyvin. 24 tuntia tämän jälkeen eristetty verihiutaleita lisättiin 1 x 10∧7 kuoppaa kohti ja soluja viljeltiin vielä 24, 48 ja 72 tuntia. Solulaskennat määritettiin LEC verihiutaleiden co-viljelmät (yhtenäinen viiva) verrattuna LEC ilman verihiutaleiden lisäksi (katkoviiva). G + H: Kasvu tekijä vapautuminen yhdessä viljelemisen aikana on LEC ja ihmisen verihiutaleissa. LEC ympättiin 1 x 10∧5 per 30 mm hyvin. 24 tunnin kuluttua eristettiin verihiutaleita lisättiin 7 x 10∧7, 10∧6 tai 10∧5 kuoppaa kohti ja soluja viljeltiin vielä 48 tunnin ajan. Viljelmän supernatantti otettiin talteen, sentrifugoitiin (solukomponenttien poistamiseksi), ja sitten määritettiin pitoisuus PDGF-BB: tä (G) ja VEGF-C (H) entsyymi-immunologinen määritys. I: Verihiutaleiden aiheuttama LEC leviämisen välittyy PDGFRβ, VEGFR-2 ja -3. LEC ympättiin 1 x 10∧5 per 30 mm hyvin. 24 tunnin kuluttua eristettiin verihiutaleita lisättiin 7 x 10∧7 kohden hyvin tai ei estävien reagenssien vastaan ​​PDGFRß, VEGFR-2 ja /tai VEGFR-3. Soluja viljeltiin vielä 48 tuntia ennen määrittämistä LEC laskee.

Toisessa kokeessa tutkimme jos LEC lisääntymistä on parannettu ihmisen verihiutaleiden ajasta riippuva tavalla. Tätä tarkoitusta varten, verihiutaleita 1 x 10∧7 kuoppaa kohti lisättiin eristetty LEC (1 x 10∧5 per 30 mm kuoppa), ja soluja viljeltiin vielä 24, 48 ja 72 tuntia. Kuva. 3F osoittaa, että LEC lisääntymistä tehostetaan yhdessä viljelemisen ihmisen verihiutaleita on ajasta riippuva tavalla verrattuna LEC ilman verihiutaleiden lisäksi.

Koska seuraava askel, tutkimme jos pro-imusuoniston tekijöitä vapautuu yhdessä viljelemisen aikana of LEC ja verihiutaleiden. Eristetty verihiutaleita lisättiin 7 x 10∧7, 10∧6 tai 10∧5 kuoppaa kohti LEC (1 x 10∧5 per 30 mm kuoppa) 24 tunnin kuluttua, ja soluja viljeltiin vielä 48 tunnin ajan. Viljelmän supernatantti otettiin talteen, sentrifugoitiin solukomponenttien poistamiseksi, ja sitten määritettiin pitoisuus PDGF-BB: n ja VEGF-C entsyymi-immunologinen määritys.

Kuvio 3G ja 3H osoittavat, että verihiutaleiden pitoisuus 10∧ 6, PDGFR-β ja VEGF-C vapautettiin, ja tämä vapautuminen kasvutekijöiden voimakkaasti nousseet verihiutaleiden pitoisuus 10∧7.

viimeisenä vaiheena esto kokeita suoritettiin:

LEC ympättiin 1 x 10∧5 per 30 mm hyvin. 24 tunnin kuluttua eristettiin verihiutaleita lisättiin 7 x 10∧7 kohden hyvin tai ei estävien reagenssien vastaan ​​PDGFRß, VEGFR-2 ja /tai VEGFR-3. Soluja viljeltiin vielä 48 tuntia ennen määrittämistä LEC laskee. Kuva. 3I osoittaa, että LEC proliferaatiota osittain vähentää lisäämällä yksittäisten yhdisteiden verrattuna LEC /verihiutaleiden yhdessä viljelemisen tukkimatta aineita. Inhibitio VEGFR-3 (esto VEGF-C signalointi) oli voimakkain ja vähensi verihiutaleiden välittämää LEC proliferaatiota 90%. Tätä vaikutusta ei voida vielä parantaa yhdessä anti-PDGFRß ja anti-VEGFR-2-vasta-aineita.

Keskustelu

Verihiutaleet tärkeä rooli ihmisen pahanlaatuinen sairaus: Niin on osoitettu monet tutkimukset, jotka preoperative kohonnut ääreisverenkierron verihiutalearvo ennustaa huonon ennusteen erilaisissa ihmisen syövissä [17] joukossa myös mahasyövän [18].

ruokatorven syöpä (SCC ja AC), kasvua trombosyyttiarvo jälkeen yhtenä ryhmänä resektion on raportoitu liittyvän paremmin ennusteeseen yhdessä tutkimuksessa [19], ja tutkimuksessa Pakistanista, pieni ennen leikkausta verihiutalemäärä oli yhteydessä huonoon ennusteeseen [20]. Sen sijaan toisessa tutkimuksessa todettiin, että ennen leikkausta Trombosytoosin ilmoitettu huonon ennusteen ruokatorven SCC [20].

Kuitenkin se ei ole täysin selvää, kohonnutta trombosyyttitasoa aiheuttama aggressiivisempi fenotyypin kasvaimia, tai edistää itse kliininen käyttäytyminen kasvaimia. Todennäköisesti kasvaimet voivat aiheuttaa thrombopoesis suoraan esim. kautta tekijä kuten IL-6 [21].

Verihiutaleet näyttävät myös edistää etäpesäkkeiden, mutta tarkka mekanismit ovat vielä epäselviä [22], [23].

Verihiutaleet pelata myös rooli tuumoriangiogeneesissa aktivoinnin jälkeen, esim vastauksena endoteelisolujen vahingot [24]. Tämä vaikutus näyttää indusoituvan paitsi verihiutaleiden tekijä eritystä, mutta myös suoraan stimuloimalla angiogeneesiä [25].

On hyvin tunnettua, että reuna-ihmisen verihiutaleet kykenevät erittämään pro-imusuoniston tekijöitä, kuten VEGF-C ja PDGFR-B, jotka vapautuvat verihiutaleaktivaatiota [26]. Lisäksi, verihiutaleiden tärkeä rooli alkion kehityksen ja imunestejärjestelmän [7]. Joten ne on raportoitu estävän proliferaatio ja migraatio imusuonten endoteelisoluissa alkionkehityksen aikana aktivoitaessa vuorovaikutus CLEC2 ja podoplanin, joka ilmentyy imusuonten endoteelisoluissa [27].

pahanlaatuinen sairaus, vuorovaikutusta verihiutaleet ja podoplanin kautta CLEC-2 indusoi useita reittejä osallisena kasvainsolun muuttoliike ja kasvua [28].

Yllättäen tietomme ole tietoa roolista verihiutaleiden lymfangiogeneesiä ihmisen pahanlaatuinen sairaus on olemassa niin pitkälle.

meidän esillä olevassa tutkimuksessa tutkittiin suuren joukon ruokatorven syöpien yhdistyksen PBPC kanssa verihiutaleiden tuumoriverisuoniin, sisällä kasvain strooman ja imusuonten.

Perioperative PBPC liittyivät läsnäolo verihiutaleiden sisällä kasvainkudoksen, ja verihiutaleet sisällä kasvainkudoksessa oli yhteydessä lisääntyneeseen imusuonten. Vaikka mitään suoraa yhdistys STC tai VTC kanssa LVI kasvainsolujen nähtiin, PBPC ja VTC vaikutti LVI regressiotestauksessa analysis.This osoittaa, että monimutkainen vuorovaikutus PBPC, VTC ja STC edistää LVI syöpäsolujen.

tutkia meidän havaintoja yksityiskohtaisesti

in vitro

, suoritimme soluviljelmäkokeita, joka osoittaa, että verihiutaleet edistävät kasvua LEC annoksesta ja ajasta riippuvaisella tavalla. Tämä induktio LEC kasvu näyttää indusoituvan eritystä pro-imusuoniston tekijöitä, kuten VEGF-C ja PDGF-BB.

Joten havainnoista saattaisi olla mahdollinen selitys, miksi lisääntynyt preoperative PBPC liittyy vähentynyt ennusteeseen on erilaisia ​​ihmisen syövissä, vaikka tämä ei ollut selvää tutkimuksessamme. Vaikka podoplanin vuorovaikutuksessa verihiutaleiden kehityksen aikana, välinen vuorovaikutus imusuonten endoteelisoluissa ja verihiutaleiden ei ole kuvattu aikaisemmin. Tämä voidaan selittää sillä, että trombosyyttien ei ole löydetty imusuonten verisuonistossa. Kuitenkin verihiutaleiden helpottaa ekstravasaatiota vapauttamisen matriksin metalloproteinaasien ja stimuloimalla kasvaimen ja endoteelisolujen [28]. Kuten ilmeistä Tutkimuksessamme verihiutaleiden klustereita voidaan myös todettu ei ainoastaan ​​verisuonia, mutta myös sisällä kasvain strooman, mikä osoittaa vuotaa aluksia. Koska verisuonten ja strooman verihiutaleiden klustereita korreloi, migraatio verihiutaleiden ulos alusten näyttää indusoida verisuonten klustereita. Imusuoniston erittämiä tekijöitä sisällä stroomaan ekstravasatoituneen verihiutaleet voisi aiheuttaa kasvua imusuonten endoteeliin, mikä tukee muodostumista vastaperustetun imusuonten.

näkyy meidän soluviljelmäkokeita, tämä stimulointi leviämisen LEC verihiutaleet näyttää indusoituvan aika- ja annoksesta riippuvaisella tavalla pääasiassa VEGF-C: n ja PDGF-BB, jotka erittyvät verihiutaleita. Esto kokeet osoittavat hallitseva rooli VEGF-C tässä prosessissa.

Kuten raportoitu erilaisia ​​tutkimuksia, kasvu imusuonten korreloi todennäköisyys kehittää LVI ja myöhemmin imusolmukemetastaaseja. [29] – [34], että verihiutaleet edistävät ekstravasaatio tuumorisolujen on tunnettu [17], mutta perustuvat tietoihin näyttää erittäin todennäköistä, että verihiutaleiden kasvaimen strooman edistävät myös hyökkäyksen kasvainsoluja lymphovascular järjestelmään.

Yhteenvetona osoitamme ensimmäistä kertaa suurina sarjoina ihmisen syövän potilaiden ja myös

in vitro

että ääreisverenkierron verihiutaleet tärkeä rooli ruokatorven syöpään lymfangiogeneesiä ja LVI, vaikuttaen siten ennustetta potilailla. Joten häiriöitä signalointipolkujen verihiutaleiden, kasvainsolujen ja lymfaattiseen endoteeliin saattaa olla hyötyä potilaille.