Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

EML4-ALK

fuusio geeni löytyy vain pieni joukko (2-6%) ei-pienisoluinen keuhkosyöpä. On kiireesti toteuttaa järkevää diagnostinen algoritmi tunnistaa tätä harvinaista, mutta tärkeä fuusio keuhkosyövässä.

Methods

Me tehdään kattava analyysi

EGFR /KRAS

mutaatio ja

ALK

uudelleenjärjestelystä yhteensä 360 kirurgisesti resekoituun keuhkosyövässä.

ALK

uudelleenjärjestely tutkittiin 3 analyysit: multiplex käänteistranskriptio-PCR, loisteputki

in situ

-hybridisaatio (FISH), ja immunohistokemia (IHC) kanssa intercalated vasta-ainetta parannettu polymeeri menetelmällä. Pisteytysjärjestelmää käytettiin IHC (iScore). Testipakkauksen (202 potilasta, joilla valitsematta keuhkosyöpä) käytettiin ehdottaa diagnostinen algoritmi. Tämä diagnostinen algoritmi on validoitu 158 potilaalla on

EGFR

ja

KRAS

mutaatio-negatiivinen adenokarsinooman.

Tulokset

ALK

uudelleenjärjestelyn tunnistettiin 2 potilaalla (1,0%) ulos testipakkauksesta ja molemmat adenokarsinoomista olivat negatiivisia

EGFR

ja

KRAS

mutaatioita. Tulokset FISH ja RT-PCR olivat täysin sovitettu. Korkeimmat iScore 3 todettiin ainoastaan ​​2 positiivisia tapauksia. Diagnostinen algoritmi ehdotettiin: IHC seulonta

ALK

uudelleenjärjestely seuraa vahvistava FISH. Vuonna validointi asetettu, 8 tapausta (5,1%) oli iScore 3 ja olivat positiivisia FISH, kun taas toisissa tapauksissa oli iScore 0 ja olivat negatiivisia FISH.

Johtopäätökset

seulonta

ALK

uudelleenjärjestely IHC seurasi uudistettuun FISH on järkevä diagnostinen algoritmi. Tarvittaessa potilaat voivat valita seulontaan

ALK

uudelleenjärjestely niiden

EGFR

ja

KRAS

mutaatiostatus.

Citation: Takamochi K, Takeuchi K Hayashi T, Oh S, Suzuki K (2013) Valitse elokuva Diagnostic algoritmi varten tunnistaminen

ALK

uudelleenjärjestely in Lung Cancer: kattava tutkimus hoidetuista japani Potilaat. PLoS ONE 8 (8): e69794. doi: 10,1371 /journal.pone.0069794

Editor: Anthony WI. Lo, Kiinan University of Hong Kong, Hongkong

vastaanotettu: 02 huhtikuu 2013; Hyväksytty: 17 Kesäkuu 2013; Julkaistu: 01 elokuu 2013

Copyright: © 2013 Takamochi et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tuettiin osittain Grant-in-Aid for Cancer Research terveysministeriön, Labour and Welfare of Japan (10103778, ja että tupakointi Research Foundation. rahoittajat ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tietojen keruu ja analysointi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen. ylimääräistä ulkoista rahoitusta saanut tätä tutkimusta.

Kilpailevat edut: Kengo Takeuchi on maksanut honorarium palvelemaan neuvonantajana on Nichirei valmistavan ALK Detection Kit ja neuvonantajana ja Mitsubishi, mainitaan käsikirjoituksen, ja saada rojalti sarjasta. muiden kirjoittajien mikään ilmoitettu. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Merkittävä edistyminen molekyylitason täsmähoitoihin ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) on tehty viimeksi kuluneiden 10 vuoden aikana. Vuonna 2004 tunnistaminen somaattisten mutaatioiden

epidermaalisen kasvutekijän reseptori

(

EGFR

) geeni, kunhan ensimmäisen välähdyksen kliinisesti merkittävästä NSCLC onkogeeni [1], [2]. Tällä hetkellä EGFR tyrosiinikinaasin estäjät (TKI), kuten gefitinibi ja erlotinibi, ovat ensilinjan hoitoja potilaille, joilla on edennyt

EGFR

mutatoitunut NSCLC. Vuonna 2007 ensimmäinen fuusio onkogeeni,

piikkinahkaisten microtubule- liittyvän proteiinin kaltainen 4

(

EML4

) –

anaplastinen lymfooma kinaasia

(

ALK

) geeni, tunnistettiin NSCLC [3].

EML4

–

ALK

on onkogeenisessä kuljettaja ja aktivoi alavirran signalointireitteihin. Tuoreessa vaiheen I kliinisestä tutkimuksesta osoitti dramaattisen vastaus ALK estäjä (crizotinib) in

EML4

–

ALK

positiivisten NSCLCs: yleinen vastausprosentti oli 57% ja taudin torjumiseksi oli 90 % [4]. Tämä johti nopeutettua hyväksyntää crizotinib Food and Drug Administration edenneen NSCLC kanssa

ALK

uudelleenjärjestelyjä. Vaiheen 3 kliinisissä tutkimuksissa on meneillään kliinisiä tuloksia crizotinib hoidetuista potilaista verrataan saivat tavanomaista ensimmäisen ja toisen rivin hoitomuotojen kehittyneiden

ALK

-positiivinen NSCLCs.

EGFR

mutaatio on suhteellisen usein kuljettajan mutaatio keuhkoadenokarsinooma ja löytyy noin 10% valkoisia potilaista ja yli 40% Aasian potilaista [5]. Kuitenkin

ALK

uudelleenjärjestelyjä on löydetty vain pienessä määrässä NSCLC (2-5%) ja keuhkojen adenokarsinooma (4-6%) tapauksista, rodusta [6] – [14]. Useita menetelmiä käytetään nykyisin tunnistamaan

ALK

uudelleenjärjestelyt: käänteistranskriptio-PCR (RT-PCR), fluoresoiva

in situ

-hybridisaatio (FISH), ja immunohistokemia (IHC). Nämä menetelmät ovat erilaisia ​​etuja ja haittoja, ja se jää ratkaistavaksi, mikä on paras tapa laajamittainen seulonta

ALK

uudelleenjärjestelystä keuhkosyöpä kliinisessä ympäristössä.

Näin ollen ei kiireellinen tarve toteuttaa järkevää diagnostinen algoritmi tunnistaa tätä harvinaista, mutta tärkeä uudelleenjärjestelystä keuhkosyövän säännöllisesti kliinisessä käytännössä. Täällä raportoida, mitä menetelmiä ja mitä yhdistelmiä tulisi käyttää tarkkaa diagnoosia.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Tämä tutkimus suoritettiin näytteille tallennettu kudokseen pankki, jossa hyväksyntää Institutional Review board (IRB) on Juntendo University School of Medicine. Mukaan kudospankille protokollaa, jotta kerätä näytteitä tutkimuksista, jotka hyväksyvät IRB tulevaisuudessa, saimme kirjallinen suostumus potilailta ennen leikkausta keräämistä ja varastoinnin näytteiden leikkauksen aikana. Sisältö Tutkimuksen katsottiin eettisesti hyväksyttäviä, ja IRB luvan käyttää yksilöiden tallennetut kudospankki hankkimatta uutta lupaa.

Testi

Maaliskuun 2010 helmikuu 2011 , 231 primaarisessa keuhkosyöpä tehtiin keuhkojen resektio. Jäädytetyt ja formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotettuja (FFPE) kudosnäytteitä 202 potilailla, joilla on NSCLCs (148 adenokarsinoomat, 39 okasolukarsinoomia, 6 adenosquamous karsinoomat, 4 suuri solu neuroendocrine karsinoomat, 3 pienisoluinen karsinoomat, ja 2 pleomorphic karsinoomia) käytettiin koepaketti tunnistaa

ALK

uudelleenjärjestelyn. Kaikki tapaukset tutkittiin multiplex RT-PCR (käyttäen jäädytetty materiaalit), FISH, ja IHC (käyttäen FFPE kudokset). Tulkinnat näistä molekyyli analyyseja

ALK

uudelleenjärjestely tehtiin itsenäisesti tietämättä tuloksista kussakin kokeessa. Ehdotimme diagnostinen algoritmi tunnistamiseksi

ALK

uudelleenjärjestely yhdistelmän perusteella merkittävien patologinen ja molekyylitason ennustajia sekä hyödyllisiä diagnostisten menetelmien.

Validation Set

Seuraavaksi ehdotetun diagnostinen algoritmi

ALK

uudelleenjärjestely validoitiin käyttämällä ylimääräistä 158 peräkkäistä potilasta, joilla

EGFR

ja

KRAS

mutaatio-negatiivinen adenokarsinooma, joille tehtiin kirurginen resektio välillä maaliskuussa 2011 ja huhtikuu 2012.

ALK

uudelleenjärjestely analyysit tehtiin kaikille näytteille sekä FISH ja IHC. Tulkintoja FISH ja IHC tehtiin itsenäisesti tietämättä tuloksista kussakin kokeessa.

ALK

uudelleenjärjestelyn arvioitiin myös RT-PCR

ALK

positiivisia tapauksia FISH tai IHC, kun riittävä RNA-näytteet uutetaan kasvainkudoksista olivat saatavilla.

molemmat , tapaukset positiivinen

ALK

uudelleenjärjestely FISH ja /tai multiplex RT-PCR määriteltiin olevan ALK-positiivisia. Kumpikaan kemoterapia, sädehoito, eikä molekyylikohteena terapia EGFR-TKI tai ALK estäjä suoritettiin ennen leikkausta millään tutkimuspotilaat.

ALK

Multiplex RT-PCR

vuonna leikkaussaliin, 3-5 mm

3 kuutiot tuoreita keuhkosyöpään kudosten leikeltiin ja välittömästi laitettiin 1,0 ml RNAlater RNA Stabilization Reagent (Qiagen, GmbH, Saksa, Hilden) 24-48 tunnin ajan 4 ° C RNA vakauttamiseen. Sen jälkeen, kasvaimen näytteet säilytettiin -80 ° C: ssa, kunnes RNA. Kokonais-RNA uutettiin jäädytetyistä kudosleikkeiden standardin protokollan. Multiplex RT-PCR suoritettiin havaitsemiseen

EML4

–

ALK

fuusio variantit, kuten variantti 1, 2, 3a, ja 3b [15]. Jos mikä tahansa PCR-tuotteiden kuin nämä 4 variantteja tunnistettiin geelielektroforeesilla, niiden sekvenssit tutkittiin 3130xl Genetic Analyzer (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA).

ALK

FISH

FISH-analyysi suoritettiin 4 um: FFPE kudosleikkeiden käyttämällä

ALK

break-toisistaan ​​antureista [Vysis LSI ALK (2p23) Dual Color, hajota uudelleenjärjestely Probe; Abbott Molecular, Chicago, IL, USA], ja 3

’

(punainen) ja 5

’

(vihreä) signaalit erotetaan ≥2 signaali halkaisijat katsottiin split (kuvio 1). Näytteet pidetään positiivisena

ALK

uudelleenjärjestely, kun yli 15% syöpäsoluja osoitti split signaaleja tai yksi punainen signaaleja. Vähintään 50 kasvainsoluja tutkittiin kussakin yksilössä.

Erilliset punainen (paksu nuoli) ja vihreät (ohut nuoli) hajota signaalit osoittavat

ALK

uudelleenjärjestelyn, ja fuusio signaali (nuoli pää) edustaa villityypin

ALK

geeni.

ALK IHC

valmistettiin 4 um: FFPE kudosleikkeiden IHC analyysiä, ja ne on saatettu silaanilla päällystettyä dioja . ALK Detection Kit (Nichirei Bioscience, Tokio, Japani), joka perustuu intercalated vasta-ainetta parannettu polymeerin (iAEP) menetelmällä [16] ja se sisältää 5A4-klooni, kuten anti-ALK primaarinen vasta-aine, on käytetty IHC. Tämä erittäin herkkä menetelmä mahdollistaa luotettavan havaitsemisen eri ALK fuusioproteiinien FFPE kudosnäytteistä, kun se on yleensä vaikea havaita EML4-ALK tavanomaisella IHC menetelmän vuoksi heikko aktiivisuus

EML4

promoottorin joka ohjaa ilmentymistä

EML4

–

ALK

mRNA.

Kasvain solujen sytoplasmassa, jotka värjäytyivät voimakkaammin kuin negatiivisen kontrollin solut määriteltiin IHC positiivinen. Semi-kvantitatiivinen arviointi tehtiin arvioimalla prosenttiosuus IHC-positiivisia kasvainsoluja. ALK IHC tulokset käyttäen iAEP menetelmällä (iScore) jaettiin seuraavasti: 0 = ei värjätään solut; 1 = 0-50% värjättyä kasvainsoluja; 2 = 50-80% värjätään kasvainsoluja tai 80% värjätään kasvainsoluja huomattavista vaihtelevuus värjäytymisen intensiteetti ( ”tarkistin board kuvio”); 3 = 80% värjätään kasvainsoluja ilman merkitty vaihtelua värjäystä intensiteetin.

EGFR

ja

KRAS

Mutaatio Analyysit

Perimän DNA uutettiin 3-5 mm

3 kuutiot jäädytettyä tuoretta keuhkosyöpä kudosnäytteitä kirurgisesti resekoitu yksilöitä. Peptidi nukleiinihappo-lukittu (PNA-LNA) PCR puristin menetelmä [17], käytettiin tunnistamaan

EGFR

mutaatioita. PNA-välitteinen PCR kiristys menetelmällä [18] saatiin selville

KRAS

mutaatio kodoneissa 12 ja 13. Molecular analyysit

EGFR

ja

KRAS

mutaatioita ja

ALK

uudelleenjärjestely tehtiin Mitsubishi Chemical Medience Corporation Tokiossa, Japanissa.

TILASTOANALYYSI

kliinis tekijät kuten ikä, sukupuoli, preoperatiivinen seerumin karsinoembryonaalisesta antigeeni (CEA) taso , histologia, patologinen vaiheessa kasvaimen koon, imusolmukestatuksesta, imusuonten läpäisevyyden ja verisuonten invaasio verrattiin toisiinsa koepaketin ja validointi asettaa välillä sekä potilailla, joilla on

ALK

positiivisten ja

ALK

-negatiivinen adenokarsinoomat. Chi-square test tai Fisherin testiä käytettiin tilastolliseen analyysiin.

P

-arvo 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin SPSS tilastollista ohjelmistopaketti (versio 20.0, SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

Tulokset

vertailut kliinis ja molekyylitason ominaisuudet potilaiden välillä testin set ja validointi asetettu esitetty yhteenvetona taulukossa 1. Siellä oli enemmän potilailla, joilla on patologinen vaiheessa I tauti validoinnissa joukko kuin Koepakettia (

P

= 0,004). Niiden potilaiden osuus, joiden kasvain on suurempi kuin 30 mm (

P

= 0,015) ja potilailla, joiden kasvain imusuonten läpäisyä (

P

= 0,023) tai verisuonten invaasio (

P

= 0,011) olivat merkittävästi korkeammat koepaketin verrattuna validointi asettaa.

Ehdotus on Rational Diagnostic algoritmi

ALK

uudelleenjärjestely

ALK

uudelleenjärjestelyn tunnistettiin 2 näytettä (1,0%) ulos testipakkauksesta ja molemmat tapaukset olivat adenokarsinooma (2/148 adenokarsinooman; 1,4%).

ALK

uudelleenjärjestely johdonmukaisesti tunnistaa kaikki 3 menetelmillä. Tulokset olivat täysin Hyväksytty välillä RT-PCR ja FISH. iScores olivat 3, 2 ALK-positiivisten tapausten, 2 in 1 negatiivinen asia, ja 1 2 negatiivinen tapauksissa (kuva 2).

ALK

uudelleenjärjestelyjä ja

EGFR

ja

KRAS

mutaatioita havaittiin poissulkevalla tavalla raportoitu monilla papereita [6], [7], [9], [ ,,,0],12], [13], [19]. Siksi katsoimme, että diagnostinen prosessi

ALK

uudelleenjärjestely voitaisiin yksinkertaistaa seuraavasti: seulonta IHC kanssa iAEP menetelmällä seurasi vahvistavia kaloja

EGFR

ja

KRAS

mutaatio -negatiivinen keuhkojen adenokarsinooman.

P3 ja P7 (A ja B, vastaavasti), adenokarsinoomat kanssa mucinous seulamaisessa kuvio, osoitti iScore 3 (E ja F, tässä järjestyksessä); N1 (C), okasolusyöpä osoitti iScore 1 (G); N3 (D), pienisoluinen karsinooma osoitti iScore 2 (H).

Validation ehdotetusta Diagnostic algoritmi

ALK

uudelleenjärjestely

158

EGFR

ja

KRAS

mutaatio-negatiivinen adenokarsinoomat, 8 tapausta (5,1%), jossa iScore 3 ja 150 tapausta, joissa iScore 0 tunnistettiin. FISH olivat positiivisia kaikissa 8 iScore 3 tapausta, ja negatiivinen muissa tapauksissa. Läsnäolo

ALK

uudelleenjärjestely arvioitiin RT-PCR 5 8 oikeita positiivisia tapauksia. Kaikki 5 tapauksessa olivat positiiviset RT-PCR: llä. Nämä tulokset on esitetty yhteenvetona kuviossa 3. korrelaatiot IHC ja FISH kaikissa 360 potilasta (testi ja validointi sarjat) on esitetty taulukossa 2.

Euroopan kliinis Ominaisuudet ALK-positiivisten Adenokarsinooma

kliinis ominaisuudet adenokarsinooma mukaan

ALK

uudelleenjärjestelyn tila on esitetty yhteenvetona taulukossa 3. Vaikka koko kasvain oli pienempi (

P

= 0,034), ALK-positiivinen adenokarsinooma osoitti aggressiivisempia biologiset ominaisuudet verrattuna ALK-negatiivisten adenokarsinooma: pitemmälle tauti (

P

= 0,014) ja useammin imusolmuke osallistuminen (

P

= 0,002).

ALK

uudelleenjärjestelyjä havaittiin vain adenokarsinooma histologia; kuitenkin eri hallitseva histologisia alatyyppejä havaittu joukossa. Ei erityisiä morfologiset ominaista ALK-positiivisten adenokarsinooman tunnistettiin meidän tapauksissa. Lisäksi kasvaimensisäistä histologinen heterogeenisyys havaittiin myös jokaisen kasvain (taulukko 4).

Keskustelu

tarkka, luotettava, toistettava menetelmä havaitsemiseksi

ALK

uudelleenjärjestely on välttämätöntä tunnistaa NSCLC potilaille, jotka ovat ehdolla hoito ALK estäjä (crizotinib), huume, joka on osoittanut dramaattinen kliinisen vasteen tuoreessa kliinisessä tutkimuksessa [4]. Koska esiintyvyys

ALK

uudelleenjärjestelyn on alhainen valitsemattomat pienisoluista keuhkosyöpää (2-5%) [6] – [14], on tarpeen selvittää kliinis ja molekyylitason ominaisuudet ALK-positiivisia keuhkosyöpä parantaa seulonta tehokkuutta.

ALK

uudelleenjärjestely on raportoitu liittyvän nuorempien potilaiden iän, ei koskaan tai valon historia tupakoinnin ja adenokarsinooma histologia [7] – [9], [12] – [14], [19]. Lisäksi useimmat ALK-positiivisia keuhkosyöpä on poissulkevia

EGFR

ja

KRAS

mutaatioita [6], [7], [9], [12], [13], [19 ]. Esillä olevassa tutkimuksessa havaitsemismäärä

EML4-ALK

-fuusiogeenin kasvoi 1,0% (2/202 potilaalla on valitsematta keuhkosyöpä) testissä asetettu 5,1% (8/158 potilaalla on

EGFR

ja

KRAS

mutaatio-negatiivinen adenokarsinooma) in validointi asetettu. Meidän tiedot osoittivat, että ottaen huomioon histologian ja

EGFR

ja

KRAS

mutaatio statukset rikastaa ALK-positiivisten väestön pienellä riskillä kohtuuttomaan poissulkeminen mahdollisesti positiivisten potilaiden.

esitämme sarja, ei ollut merkittäviä eroja iän ja tupakoinnista välillä ALK-positiivisten ja ALK-negatiivisilla potilailla. Siksi uskomme, että kliinisiä tekijöitä, kuten ikä ja tupakointi asema, ei tulisi käyttää valitsemaan potilaiden ALK seulontaan. Histologisesti, kiinteä, acinar, seulamaisessa kasvumalli tai ilman sinettisormus solujen ominaisuuksia on raportoitu olevan morfologisiin ominaisuuksiin ALK-positiivisten keuhkosyövässä [7], [14], [19]. Havaitsimme kuitenkin, ei ole erityisiä morfologisia ominaisuus ALK-positiivisia adenokarsinoomia, ja useimmat olivat histologisesti heterogeeninen, eli sekoitus eri kasvutavat (taulukko 3). Siksi morfologiset ominaisuudet myös ei tulisi käyttää esikarsintaa.

Vaikka FISH määritystä on käytetty ilmoittautumalla potilaille, joilla ALK-positiivisia kasvaimia kliinisissä kokeissa [4], todellinen kultakanta mitoitusmenetelmästä

ALK

uudelleenjärjestely ei ole vahvistettu. Tähän mennessä on ollut vain muutamia raportteja tarkastellaan

ALK

uudelleenjärjestelystä keuhkosyöpä samanaikaisesti IHC, FISH, ja RT-PCR, jolloin suora vertailu näiden määritysten [20]. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme suorittaa samanaikaisesti IHC, FISH, ja RT-PCR kaikille potilaille testin asetettu, ja esiintynyt sekä IHC ja FISH kaikille potilaille validointi asetettu. 10 positiivista ja 350 negatiivisia tuloksia kaloissa olivat täysin sovitettu iScore 3 ja 0, tässä järjestyksessä. Siksi vahvistava FISH voitaisiin ohitetaan tapauksissa iScore 3 tai 0, vaikka saattaisi olla tarpeen tapauksissa, joissa iScore 2 tai 1. Jos asia ei-adenokarsinooma katsotaan iScore 3, vahvistavaa testiä pitäisi tehdä. Keuhkosyövässä ilman

ALK

uudelleenjärjestely näyttää joskus positiivisuuden erittäin herkkiä anti-ALK IHC, kuten iAEP, erityisesti tapauksissa, joissa neuroendocrine erilaistumista (pienisoluinen, iso-solu neuroendokriini, ja muut syövät kanssa fokaalisesti neuroendocrine eriyttäminen) [21].

esillä olevassa tutkimuksessa, immunohistokemiallinen tunnistus ALK-positiivisia keuhkosyöpä suoritettiin pisteytysjärjestelmä. Järjestelmä, iScore, kehitettiin anti-ALK immuunihistokemiallisesti iAEP menetelmällä. Sitä käytettiin potilaan valinnan kliinisessä tutkimuksessa ALK estäjä (AF802 /CH5424802), joiden objektiivinen hoitovaste 93,5%, mikä osoittaa kliinisestä hyödyllisyydestä iAEP menetelmän (pisteytysjärjestelmään kliinisessä tutkimuksessa ei ollut vielä kutsuttu iScore at aikaan oikeudenkäyntiä, mutta oli sama pisteytys kriteerit) [22]. Siten tulokset IHC, FISH ja RT-PCR-kokeet täysin sovitettu läpi eri variantit tässä tutkimuksessa, kun taas tutkimus työllistää muut asetukset IHC ja RT-PCR osoitti, että tulokset 3 määrityksissä olivat yhtäpitäviä vaihtoehdossa 3 of EML4-ALK mutta ei variantti 1 [20]. ALK-positiivisuusasteet tässä tutkimuksessa, 2,8% koko väestöstä ja 5,1% ryhmässä

EGFR

ja

KRAS

mutaatio-negatiiviset adenokarsinooman ovat yhdenmukaisia ​​saatu monet aikaisemmat opinnot. Mitä ALK-negatiivinen tapauksissa kaikki tapaukset, joissa iScore 0, 1 tai 2 havaittiin negatiivisiksi

ALK

uudelleenjärjestelyn, jolloin tuloksena on 100% negatiivinen ennustearvo. Yhdessä anti-ALK IHC kanssa iAEP menetelmällä arvosteli iScore on kliinisesti validoitu luotettava seulontakokeista työkalu.

iScore järjestelmä voi olla samanlainen kuin HER2 rintasyövässä [23]. Kuitenkin toisin kuin määrä epäselviä tuloksia HER2 IHC jotka vaativat vahvistava FISH (-10%), määrä iScore 2 ja 1 oli vain 0,83% (3 360) esillä olevassa tutkimuksessa. Lisäksi tapauksissa, joissa iScore 3, lähes kaikki kasvainsolut immunovärjättiin, joka on yhdenmukainen sen kanssa, että kaikki syöpäsolut on

ALK

jäsensi syöpien satama

ALK

-fuusiogeenit, vaikka alaraja positiivisia kasvainsoluja asetettiin 80%, iScore 3. Toisin kuin muut pisteytysjärjestelmät anti-ALK IHC, värjäyksen voimakkuus, joka voi olla vähemmän tavoite indikaattori kuin positiivinen kasvainsolujen määrä, ei ole periaatteessa huomioon iScore, lukuun ottamatta tapaukset osoittavat ”tarkistin board malli”. Nämä piirteet iScore helpottavat tutkijat pisteet näytteet värjättiin ALK mukaan iAEP menetelmällä.

RT-PCR on teoreettisesti luotettavin määritys mutanttien toteamiseksi selostukset, koska se voi osoittaa suoria todisteita translokaatioprosessin [ ,,,0],3], [15], [24]. Kuitenkin NSCLC, on monia muunnelmia

EML4

–

ALK

fuusio, ja

ALK

voi joskus olla muita fuusiokumppanit kuten

TFG

[25],

KIF5B

[16], [26] ja

KLC1

[27]. Siksi RT-PCR voi jäädä

ALK

fuusioita, joita ei ole erityisesti testattu. Siksi on 3 analyysien, uskomme RT-PCR ei pitäisi tehdä yksin, kun kudos on saatavilla IHC tai FISH.

Mielenkiintoista, vaikka koko

ALK

-positiivisille adenokarsinooma oli huomattavasti pienempi kuin

ALK

-negatiivinen adenokarsinooma, osuus imusolmuke osallistuminen oli huomattavasti useammin. Tämä havainto oli yhdenmukainen laajamittaisen kohortin tutkimuksessa, jossa tutkittiin kliinis seuraus

ALK

uudelleenjärjestelyn kirurgisesti resektoitiin keuhkosyövän [28]. Kuten Paik

et al.

Kuvattu [28],

ALK

positiivisten adenokarsinoomat voi etäpesäkkeitä imusolmukkeissa alussa, vaikka pieni koko primaarikasvaimen.

diagnostisia algoritmi ehdotettiin tietojen pohjalta käyttäen kirurgisesti resekoitu näytteitä. Siksi on ehdottoman hyödyllistä saada

ALK

tila edelleen terapeuttinen suunnittelu potilailla, joilla on leikkauksen jälkeisiä toistuminen. Sakairi

et al.

[29] ilmoitti, että

EML4

–

ALK

-fuusiogeenin arviointia IHC, FISH, ja RT-PCR oli mahdollista käyttää pieniä näytteitä saatu endobronkiaalinen ultraääni-ohjattu transbronchial neula toive imusolmukkeista kanssa etäpesäkkeitä. Siksi meidän algoritmi on erittäin todennäköisesti sovellettavissa potilailla, joilla on pitkälle edennyt tai käyttökelvottoman sairaus, jolle vain pieniä näytteitä (biopsia tai sytologia) ovat yleensä saatavilla.

Yhteenvetona, sikäli kuin anti-ALK immunohistokemia suoritetaan erittäin herkkä menetelmä kuin iAEP ja värjäys tulos on asianmukaisesti tulkitaan, seulonta

ALK

uudelleenjärjestely IHC seurasi vahvistava FISH on luotettava diagnostinen algoritmi (kuva 4). Lisäksi jos se on tarpeen, kapenee down potilaille, joilla on

EGFR

ja

KRAS

mutaatio-negatiivinen adenokarsinoomat näyttää järkevä, jolloin minimaalinen riski sopimattoman poissulkeminen mahdollisesti positiivisten potilaiden.

tapauksissa iScore 3 tai 0, vahvistava FISH tai RT-PCR voidaan ohittaa. Jos tapaus ei-adenokarsinooma katsotaan iScore 3, vahvistavaa testiä pitäisi tehdä. Keuhkosyövässä ilman

ALK

uudelleenjärjestely näyttää joskus positiivisuuden erittäin herkkiä anti-ALK IHC, kuten iAEP, erityisesti tapauksissa, joissa neuroendocrine erilaistumista (pienisoluinen, iso-solu neuroendokriini, ja muut syövät kanssa fokaalisesti neuroendocrine eriyttäminen) .