Krooninen sairaus

tiivistelmä

Glyoxalase 1 on huuhteluilman entsyymi voimakkaita lähtöaineiden reaktiivisia happiradikaaleja muodostumista ja on mukana esiintymiseen ja etenemiseen ihmisen syöpäsairauksia. Glyoxalase I A111E polymorfismi on ehdotettu vaikuttaa sen entsymaattinen aktiivisuus. Tämä tutkimus pyrittiin selvittämään yhdistyksen tämän polymorfismin hapettava stressi ja sen vaikutuksia eturauhassyövän etenemisen tai selviytymistä. Polymorfismi oli genotyyppi ihmisen eri aggressiivinen ja invasiivisen eturauhassyövän solulinjoissa, 571 eturauhassyöpä tai 588 eturauhasen hyvänlaatuisen liikakasvun potilaille, ja 580 terveillä koehenkilöillä polymeraasiketjureaktiolla /restriktiofragmenttipituuspolymorfismin. Glyoxalase 1-aktiivisuus, pro-hapetin Glyoxalase 1 liittyvät Argpyrimidine ja oksidatiivisen stressin biomarkkereita arvioitiin biokemiallisia analyysejä. Glyoxalase 1 polymorfismi liittyy kasvuun Glyoxalase 1 liittyvät pro-hapetin Argpyrimidine ja oksidatiivisen stressiä ja syövän etenemisessä. Mutantti alleelin koitui vaatimaton eturauhassyövän riskiä, ​​selvästi eturauhassyövän riskiä etenemisen ja alemman eloonjäämisaika verrattuna villin C-alleelin. Tulokset meidän kartoittavassa tutkimuksessa esiin merkittävä rooli Glyoxalase 1 eturauhassyövän etenemiseen, joka tarjoaa ylimääräisen ehdokas riskinarviointiin eturauhassyöpäpotilailla ja riippumaton ennustetekijä hengissä. Lopuksi mikäli todisteita biologinen uskottavuus Glyoxalase 1 polymorfismi, joko yksin tai yhdessä muiden niitä, jotka kaikki liittyvät oksidatiivisen stressin ohjaus, joka on keskeinen tapahtuma PCA kehittymistä ja etenemistä.

Citation: Antognelli C , Mezzasoma L, Mearini E, Talesa VN (2013) Glyoxalase 1-419C variantti liittyy hapettava stressi: Implications in Eturauhassyöpä Progression. PLoS ONE 8 (9): e74014. doi: 10,1371 /journal.pone.0074014

Editor: Rui Medeiros, IPO, Inst Port Oncology, Portugali

vastaanotettu: 24 huhtikuu 2013; Hyväksytty: 26 heinäkuu 2013; Julkaistu 10 syyskuuta 2013

Copyright: © 2013 Antognelli et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: No current ulkopuolisen rahoituksen lähteet tässä tutkimuksessa.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole

Johdanto

Glyoxalase 1 (GLO1) on glutationi riippuva entsyymi osallistuu että huuhteluilman Methylglyoxal (MG), joka on voimakas sytotoksinen α-oxoaldehyde, joilla on vahva kyky cross-link proteiinia aminoryhmien, jotka muodostavat stabiileja tuotteita kutsutaan glykaation lopputuotteiden (AGE: t) [1], [2]. Niistä argpyrimidine (AP) on yksi tärkeimmistä tuotteista peräisin MG muutoksia proteiinien Arginiinitähteiden [3], [4]. Sekä MG ja AGE ovat tehokkaita esiasteita reaktiivisia happiradikaaleja (ROS) ja vapaiden radikaalien [5], [6], voimakkaasti osallisina syövän etenemisen, mukaan lukien eturauhassyöpä (PCA) [7] – [10]. Yksittäinen nukleotidin polymorfismi (SNP), -419C A (rs2736654), mikä aiheuttaa Ala111Glu (A111E) korvaamista, on tunnistettu eksonissa 4 GLO1 geenin [11] ja liittyy laskua GLO1 entsyymiaktiivisuuden [11] – [ ,,,0],13]. GLO1 A111E polymorfismi on tutkittu joissakin ihmisen sairauksia [11], [14] – [17], mukaan lukien syövän [18], [19], mutta parhaan tietomme mukaan sen rooli PCA ei ole koskaan aikaisemmin tutkittu . Esillä olevassa tutkimuksessa olemme arveltu, että GLO1 polymorfismi, joka liittyy laskua GLO1 entsymaattista aktiivisuutta, ja näin ollen, että kertyminen GLO1 liittyvät pro-oksidatiivisia AP, voisi liittyä oksidatiivisen stressin induktio, jolloin laskettiin uutena mekanismin PCA etenemiseen. Tämän tavoitteen GLO1 polymorfismi, AP ja oksidatiivisen stressin biomarkkerit (ROS, pelkistetty glutationi, GSH, malonyldialdheyde, MDA) [20] tasot olivat ensinnäkin, tutkittiin ihmisen eri aggressiivinen ja invasiivisia LNCaP ja PC3 eturauhassyövän solulinjoissa, ja toiseksi, virtsan sedimentit [21], [22] ja veren Eturauhassyövän ja eturauhasen hyvänlaatuisen liikakasvun (BPH) miehillä, tai terveen miehen samanikäisillä henkilöillä. Koska meidän alustavat tulokset muistutti rooli GLO1 PCA etenemisen, tarjoavat biologinen tausta mahdolliseen yhdistys GLO1 A111E polymorfismi PCA, me, lisäksi, tutki yhdessä etenemisen, arvioidaan vaiheessa ja arvosana. Tutkimus assosiaatiosta GLO1 polymorfismia PCa riskejä ja selviytymistä valittujen alaryhmien suoritettiin myös. Sitä paitsi näyttöä siitä PCa on tärkeä geneettinen komponentti on vakuuttava epidemiologisista, geneettisistä ja genomin laajuinen yhdistys tutkimukset [23] – [26]. Jotkut riski geenivarianttien on tunnistettu, joka voi altistaa harjoittajien kehittymistä ja etenemistä tällaisen taudin [24]; kuitenkin ristiriitaisia ​​tuloksia on saatu. Siksi tutkimus muiden polymorfisten geenien tarvitaan kiireesti. Lisätä tietämystä siitä, miten geneettiset tekijät vaikuttavat PCa eteneminen saattaa parantaa kliinisen hoidon tällaisten maailmanlaajuisesti neoplasia. Lopuksi, koska olemme sitä mieltä, että yhden alleeliset variantit itsessään eivät ole riittäviä ennustaa, monissa tapauksissa, taipumusta riski PCa, arvioimme GLO1 A111E polymorfismi yhdessä muiden oksidatiivisen stressin valvontaan liittyvät polymorfisia geenejä, jotka me aiemmin todettu liittyä riski PCA tapaus /kontrolli tutkimuksessa [27], jonka BPH ja PCa kohortteja on täällä sisällytetty uuteen laajentuneessa populaatiot. Lisäksi analyysi suoritettiin terveillä miespuolisilla samanikäisillä henkilöillä.

tulokset meidän parhaillaan tutkimusta huomauttavat merkittävä rooli GLO1 PCA etenemiseen, joka tarjoaa ylimääräisen ehdokas riskinarviointiin PCA potilaiden ja riippumattomat ennustetekijä hengissä.

Materiaalit ja menetelmät

solulinjat

Ihmisen eturauhassyöpä LNCaP ja PC3 solulinjat saatiin American Type Culture Collection (ATCC) ja ylläpidettiin rutiinisti 37 ° C: ssa 5% CO

2 RPMI 1640, johon oli lisätty 10% lämmöllä inaktivoitua FBS: ää, 1 x L-glutamiinia, 1 mM natriumpyruvaattia, 1 x ei-välttämättömiä aminohappoja, 100 yksikköä /ml penisilliiniä ja 0,1 mg /ml streptomysiiniä (Invitrogen).

Potilaat

yhteensä 1739 valkoihoinen Italian men otettiin tässä tutkimuksessa. Heistä 1423 (PCA, BPH, tervettä miestä) otettiin huhti 1999 ja kesäkuun 2005 Department of Urology (University of Perugia, Perugia, Italia), 316 (tervettä miestä) rekrytoitiin välillä heinäkuussa 2005 ja kesäkuu 2013 alkaen sama osasto. Tapaus ryhmä koostui 571 potilailla, joilla on aiemmin hoitamaton, histologisesti varmistettu PCA diagnosoida transrectal ultraääni-ohjattu koepaloja. Merkintä eturauhasen koepala oli joko epäilyttävän päätelmää eturauhasen tai kohonnut seerumin prostataspesifisen antigeenin (PSA), tai molempia. Tauti oli luokiteltu Maailman terveysjärjestön kriteerien ja lavastettuja mukaan Kasvainten etäpesäke (TNM) luokitus ja Gleason pisteytysjärjestelmä (Gleason). Erityisesti olemme ositettu analyysin mukaan kasvaimen vaiheesta (lokalisoitu: T1 /T2, paikallisesti edennyt: T3 /T4) ja histologinen arvosana (huono laatu: Gleason 2-6 tai hyvin eriytetty, kohtalainen laatu: Gleason 7 tai kohtalaisen eriytetty, korkea arvosana: Gleason 8-10 tai huonosti eriytetty) mukaan patologisten ja /tai radiologisia raportteja. Todisteet viittaavat siihen, että eturauhasen kasvaimia nimetty Gleason pisteet 7 eroavat melko selvästi osalta ennuste näitä kasvaimia kanssa Gleason pisteet 3 + 4 = 7 pidetään vähemmän aggressiivisia kuin kasvaimet, joiden Gleason pisteet 4 + 3 = 7 [28], [29]. Koska alustavien analyysien, emme löytäneet mitään merkittävää eroa GLO1 SNP assosiaatio 3 + 4 tai 4 + 3 kasvain laadut, päätimme koota ne yhteen ryhmään (Gleason pisteet 7). Vertailuryhmä koostui 588 ikä-, ethnicity- ja maantieteellisesti haun yksilöiden BPH, joiden diagnoosi perustui alemman virtsateiden oireita, vapaa uroflowmetry, näyttöä lisääntyneestä eturauhasen koon (saatu tunnustelemalla tai peräsuolen ultraäänellä) ja joille läsnäolo PCa huolellisesti ulkopuolelle kliinisesti ja hystologically (negatiivinen koepaloja PSA 4 ng /ml, ei T1a-T1b tauti). Vertailun vuoksi terveillä miehillä ryhmässä, mukaan lukien ikä-, ethnicity- ja maantieteellisesti haun yksilöitä, ei kärsi mistään eturauhasen sairaus, oli mukana tutkimuksessa. Osallistuminen hinnat olivat 98%, 95% ja 96% PCA, BPH ja terveillä miehillä vastaavasti. Kaikki henkilöt, jotka suostuivat osallistumaan tutkimukseen arvioitiin yksityiskohtainen kysely, joka osoittautui tietoa elämäntapaa ja suvussa syöpää.

Ethics lausunto

Kaikki potilaat antoivat tietoon perustuvan suostumuksen tutkimuksen joka hyväksyi bioetiikkakomitean yliopiston Perugia mukaisesti vahvistettujen periaatteiden Helsingin julistuksen.

GLO1-419C polymorfismin genotyypitys

DNA ääreisverenkierron leukosyyttien uutettiin kanssa NucleoSpin veren Pika Pure Kit (Macherey- Nagel). GLO1-419C SNP tunnistus perustui Polymerase Chain Reaction-Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) -analyysi, kuten aiemmin on kuvattu [18], PCR-monistamisen jälkeen. Kaikki genotyypitys suoritettiin laboratorion henkilökunta sokeita tapauskohtaisesti valvonta-asema, näytteet, jotka sisältyvät laadunvalvonta näytteiden vahvistettavaksi. Concordance laadunvalvontaan näytteitä oli 100%.

Oksidatiivinen Stress Control liittyvien geenipolymorfismien genotyypin

Yhden nukleotidin polymorfismien (SNP) ja oksidatiivisen stressin torjuntaan liittyviä geenejä Glutationi S-transferaasi 1 (GSTP1 Ile Val), paraoksonaasin 1 (PON1-192Q R, PON1-55 L M) ja sytokromi P450 17 (CYP17A1 A2) havaittiin kuvaamalla tavalla Antognelli et al. [27].

kokoelma virtsanäytteistä eturauhasen hieronta

kokoelma Virtsanäyteanalyysit suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [21], [22].

kokoelma Serum, plasma ja lymfosyytit verinäytteestä

seerumi, plasma ja lymfosyytit saatiin verinäytteistä ennen peräsuolen tunnustelu, sulkea pois mahdollisuus vaikuttaa tulosten takia eturauhasen manipulointia. Seerumi ja plasma saatiin standardimenetelmien mukaisesti ja käytettiin GLO1 tai MDA ja GSH mittauksia, vastaavasti. Lymfosyytit eristettiin Lymphoprep erotusliuos (Axis-Shield, Oslo, Norja) [30] ja käytetään ROS havaitsemiseen.

GLO1 Entsymaattinen ominaisaktiivisuuden

valmistaminen otteita solulinjoista ja GLO1 entsymaattisen spesifinen aktiivisuus oli mukainen Antognelli et ai. [31] ja Mannervik et al. [32], tässä järjestyksessä. Seerumin GLO1 arviointi suoritettiin, kuten ovat kuvanneet Chavan et al. [33].

Western Blot

Kokosolun proteiiniuutto ja western blot suoritettiin aikaisemmin kuvatulla [31], [34]. Sopiva laimennus hiiren anti-MG-AGE (Arg-pyrimidiini, AP) mAb (Antibodies-verkossa, GmbH) ja anti-β-aktiini mAb (Santa Cruz Biotechnology) käytettiin. AP mittaus plasmassa suoritettiin Raj et al. [35].

mittaus oksidatiivinen stressi Biomarkkerit (ROS, GSH ja MDA) B

ROS ja GSH havaittiin mukainen Szabados et ai. [36], tai Guzel et al [37], vastaavasti. MDA mitattiin OxiSelect ™ TBARS Assay Kit (MDA kvantitointi) (Cell Biolabs).

Tilastollinen analyysi

Tietojen analysointi suoritettiin SPSS 11.0 for Windows. Tarkempi analyysi sisältyi määrittämisen keskihajonta (SD) sekä Studentin t-testiä. GLO1 seerumin olivat log-transformoitiin kuin alaryhmien (paikallinen, paikallisesti edennyt tai matala-, keski- ja korkea laatu) eivät näkyneet normaalijakaumaa datan kohti 1 näyte-KS testi. Jakelu metaboliittien oli normaali kussakin edellä mainittujen alaryhmien. Χ

2 testiä käytettiin vertaamaan genotyyppi /alleeli taajuuksilla PCa tapausten ja BPH tai terveillä koehenkilöillä valvontaa. Kerroinsuhde (syrjäisimpien alueiden) laskettiin arvioida Suhteellinen riski PCA mukaan ehdoton regressioanalyysimme ja oikaistu mahdollisten kulkuun tekijät, kuten ikä (jatkuva) ja eturauhasen antigeenin (PSA, jatkuva). Alleelifrekvenssit laskettiin suoraan geeni laskenta. χ

2 testiä käytettiin testaamiseen Hardy-Weinberg tasapaino (HWE). GLO1 SNP testattiin mahdollisista vaikutuksista oksidatiivisen stressin valvontaan liittyvät piirteet lineaariregressioanalyysillä alle lisäainetta mallia, joissa covariates iän ja PSA. Survival analysointi valittujen PCa tapauksista käytettiin testaamaan mahdollisesta vaikutuksesta genotyyppien riskiin kuolla PCa. Tätä tarkoitusta varten eloonjäämiskäyrät konstruoitiin käyttämällä Kaplan-Meier-menetelmää, ja ryhmien väliset erot testattiin log-rank-menetelmällä. Monimuuttuja analyysi todennäköinen ennustavat tekijät selviytymisen suoritettiin käyttäen Coxin suhteellista vaara regressioanalyysiä. Suhteellinen vaara suhteet (HR), jossa 95%: n luottamusväli arvioitiin säätämällä mahdollisille sekoittavia muuttujia, joten harkita, jos he muuttivat HRS jonkin perimä vähintään 5%. Elinaika laskettiin päivämäärät PCa diagnoosi päivämäärä PCa-erityisiä kuolema, kerätään tietokantoihin Regional Cancer Registry vuonna 2010. säätö useille testaus suoritettiin käyttämällä permutaatio perustuvia menetelmiä [38], [39]. Kaikkien tulokset, p-arvo on alle 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Ominaisuudet PCa asiat ja BPH tai terveillä verrokeilla

pääpiirteet Eturauhassyövän tapaukset ja BPH tai terveillä verrokeilla on esitetty taulukossa 1. tapausten ja kontrollien näytti hyvin yhteen iän, painoindeksin (BMI), juominen tai tupakointi ja liikunnan (p 0,05). Seerumin PSA-tasot olivat merkittävästi korkeammat PCA kuin BPH tai terveillä miehillä (p 0,0001). Kun stratifioitiin kliiniseen vaiheeseen, 52,0% ja 48,0%: lla potilaista oli paikallinen (T1 /T2) ja paikallisesti edennyt (T3 /T4) sairauden, vastaavasti. Kun stratifioitiin kasvaimen (Gleason), 44,7%, 28,2% ja 27,1%: lla potilaista oli matalat (2-6), kohtalainen (7) ja korkea (8-10) luokka tauti, vastaavasti.

Association of GLO1 polymorfismin hapettava stressi ja PCa Progression

jotta tutkia yhdistyksen GLO1 A111E polymorfismi hapettava stressi, olemme ensinnäkin tutkinut GLO1 genotyypit ja entsymaattinen spesifinen aktiivisuus kahdessa eri tavoin aggressiivisia ja invasiivisen ihmisen eturauhassyövän solulinjoissa. Olemme havainneet, että huonosti aggressiivinen, vähemmän invasiivisia ja androgeeniriippuvaisissa LNCaP-soluja homotsygoottisia C-alleelin (kuvio 1A) ja niillä oli GLO1 tietyn entsymaattinen aktiivisuus merkittävästi (p 0,03) korkeammat (keskiarvo ± SD, 1,47 ± 0,025 umol /min /mg proteiini) kuin erittäin aggressiivinen, enemmän invasiivisia ja androgeenin erottelua PC3-solut (keskiarvo ± SD, 0,84 ± 0,01 umol /min /mg proteiinia), omozygous A-alleelin (kuvio 1A). Koska GLO1 tarvitaan MG vieroitus, joka on, solunsisäisesti, nopeasti muuttuvat AGE [1], me analysoitiin sitten solunsisäisiä tasoja AP, suuret AGE saatu spontaaneista MG adduktio Arginiinitähteiden [3], [4], [40] todeten, että PC3-soluissa, kätkeminen Ala isoformin GLO1, he olivat merkitsevästi (p 0,001) kaksinkertaistui verrattuna LNCaP, ilmentävät Glu isoformin (kuvio 1 B). Lopuksi, koska AP: n on osoitettu olevan tehokas esiaste ROS ja vapaiden radikaalien tuotantoa [5], [6], [41], olemme analysoineet solunsisäisiä tasoja oksidatiivisen stressin biomarkkerit, löytää merkittävä kasvu MDA ja ROS tai vähennys in GSH solunsisäisiä tasoja PC3-soluissa verrattuna LNCaP (kuvio 1 C). Koska nämä

in vitro

tulokset näyttivät tukevan mahdollisia yhdistys GLO1 polymorfismi etenemiseen, suoritimme mittauksia samat parametrit verinäytteistä ja solujen virtsasta sedimenteistä potilaiden paikallisluonteisia ja paikallisesti edennyt tai matala-, keski- ja korkealaatuista PCa. GLO1 toimintaa, AP ja oksidatiivisen stressin indeksit, sekä veren tai solujen virtsan sedimentissä, olivat merkittävästi erilaiset joukossa PCa potilaiden ositettu vaihe ja laatu, kuljettaa SERT, CA ja AA-genotyypin GLO1 polymorfismi (kaikki p 0,05) (taulukko 2) , mikä suuntaus saatu tutkittu eri aggressiivinen solulinjoissa.

(A) GLO1 -419C homotsygoottinen villityypin (CC) LNCaP ja homotsygoottinen mutantti tyyppi (AA) PC3-solut; (B) Argpyrimidine (AP) solunsisäisiä tasoja ja densitometrinen analyysi Western blot -menetelmän avulla. Western blot käyttäen mAb hiiren anti-AP. Blotti riisuttu sidotun Ab ja uudelleen koetettiin hiiren anti-β-aktiini, vahvistaa yhtäläiset lastaus. Western blot esitetty on tyypillinen kolmesta erillisestä kokeesta. (C) reaktiivisia happiradikaaleja (ROS), malonidialdehydi (MDA) ja pelkistettyä glutationia (GSH) solunsisäisiä tasoja. Histogrammit osoittavat keskiarvoja ± SD kolmesta eri kulttuureissa kukin yhden testattiin neljänä ja ilmaistiin kertainen muutos. ** P 0,001, ** P 0,001.

GLO1 polymorfismi ja PCa progression

Taulukko 3 raportit vaikutuksista GLO1 polymorfismin vaikutus PCa etenemistä arvioitiin kliinisessä vaiheessa ja histologisia laatu. Yksilöt, joilla on vähintään yksi vaihtoehto A alleeli (CA + AA) oli kohtalaisen suurempi riski sairastua paikallinen PCa (OR = 1,57, 95% CI = 1,17-2,11, p = 0,002), kun taas voimakas yhteys löydettiin paikallisesti edennyttä PCa vaiheessa (OR = 8,97, 95% CI = 5,77-14,02, p 0,0001) verrattuna yksilöiden CC genotyyppi. Samoin yksilöt joilla on vähintään yksi vaihtoehto A alleeli (CA + AA) oli kohtalaisen suurempi riski sairastua huono laatu PCa (OR = 1,46, 95% CI = 1,07-1,98, p = 0,013), kun taas voimakas yhteys löydettiin kohtalainen ja korkean asteen PCa (OR = 7,20, 95% CI = 4,28-12,20, p 0,0001 ja OR = 10,28, 95% CI = 5,64-19,05, p 0,0001, vastaavasti), verrattuna yksilöiden CC genotyyppi.

GLO1 polymorfismi ja PCa Risk

tutkimus assosiaatiosta GLO1 polymorfismin ja PCa riski oli myös performed.The genotyyppi ja alleelifrekvenssien GLO1 -419C polymorfismi PCa tapauksissa ja BPH tai terveillä verrokeilla on esitetty taulukossa 4. genotyyppi taajuuksia BPH ja PCa potilailla eikä terveillä miehillä kaikki sopeutui HWE (p 0,05). Huomasimme, että esiintyvyys villityyppisen CC-genotyyppi oli pienempi PCA (43,3%) kuin BPH (50,5%) tai terveillä miehillä (52,2%) väestöstä, ja että taajuus CA genotyypin oli yleisempää PCA (46,2% ) kuin BPH (41,7%) tai terveillä miehillä (40,7%) ryhmässä. Yleisyys mutantti AA genotyyppi oli yleisempää PCA (10,5%) verrattuna BPH (7,8%) tai terveillä miehillä (7,1%) ryhmässä. Ero taajuuksilla jakeluun C ja A-alleelin keskuudessa PCa ja BPH potilailla eikä terveillä miehillä oli myös merkitsevä (p = 0,010). Useissa tutkimuksissa on raportoitu, että taajuudet mutantti alleelin eri tavanomaisen väestön maailmanlaajuisesti osoitti arvojen välillä 27,2% ja 51,7% [11], [17], [18], [42], [43]. Tuloksemme A-alleelin taajuus BPH tai terveillä miehillä ryhmät olivat myös raportoitu välillä. Koska mitään merkittäviä eroja ei havaittu terveiden ja BPH miesten BPH valittiin vertailuryhmään. Yksilöiden CA ja AA genotyyppien oli marginaalinen, mutta merkittävästi lisätä alttiutta PCa esiintyminen verrattuna yksilöiden CC genotyyppi (OR = 1,34, 95% CI = 1,06-1,70, p = 0,013; OR = 1,57, 95% CI = 1,01 -2,44, p = 0,035, vastaavasti). Lisäksi vaihtoehto A alleeli liittyi myös vaatimaton merkittävä suurentunut PCA, verrattuna C-alleelin (OR = 1,26, 95% CI = 1,05-1,51, p = 0,010).

GLO1 Polymorfismi ja PCa Survival in Selected Alaryhmät kasvaimen vaiheesta ja Grade

Koska merkittävä osa potilaista, joilla oli paikallinen (60,6%, taulukko 3) tai huono laatu (58,8%, taulukko 3) PCa sisälsi riskin alleelin , me arveltu, että näissä ryhmissä potilaat kantaen vaihtoehto a alleeli saattaa olla suurempi riski myöhemmän taudin etenemiseen verrattuna potilaisiin kuljettaa CC. Kun log-rank ja Coxin regressioanalyysiä käytettiin arvioimaan assosiaatioita GLO1 polymorfismin ja elinaika, yksilöiden CA /AA genotyyppien osoitti pienempi elinaika kuin yksilöiden CC genotyyppi sekä paikallisesti tai huono laatu alaryhmiin ( Taulukko 5, kuva 2).

yksilöiden variantti CA /AA genotyyppien osoitti huomattavasti pienempi eloonjäämisaste kuin yksilöiden CC genotyyppi sekä lokalisoitu (A) tai huono laatu (B) alaryhmiä.

lisäksi monimuuttujamenetelmin käytetään hahmotella merkittäviä ennustetekijät hengissä, osoitti molemmissa alaryhmissä että riski alleelin oli itsenäinen ennustetekijä olemassaolostaan ​​oikaistu iän ja PSA (lokalisoitu PCa: oikaistu HR = 2,48, 95% CI: 1,91-3,19; huono laatu PCa: säätää HR = 2,35, 95% CI: 1,79-3,08) (taulukko 5).

Yhdistelmä GLO1, GSTP1, PON1-192 , PON-1 5, CYP17 polymorfismit kuten Ennakoiva Factor PCA ja Association hapettava stressi

tapauksessa /verrokkitutkimuksessa joiden ikäluokat on nyt sisällytetty esillä laajentuneessa väestö, olemme aikaisemmin havainneet, että polymorfismit oxidative- stressiin valvontaan liittyvät GSTP1, PON1-192, PON-1 55 ja CYP17 geenit liittyivät riskiin Eturauhassyövän. Siinä työssä, ei yhdistys saman geenipolymorfismien löydettiin syövän etenemisen tai eloonjäämistä [27]. Täällä me ensinnäkin vahvisti aiemmin havaittu tuloksia integroimalla ne vertailun, jossa on tervettä miestä ryhmä (taulukko 6). Toiseksi, koska uskomme, että yhdistettäisiin entistä polymorfismien kussakin yksittäisessä tapauksessa, suhteessa ainoatakaan, voi olla enemmän ennakoivaa tekijä yhdistyksen riski PCA arvioimme tällainen yhdistelmä, sisältäen myös GLO1 polymorfismi. Taulukko 7 osoittaa, että havaitseminen GSTP1Ile /Ile-PON1 /192RR-PON1 /55LL-CYP17A2A2-GLO1CC tai GSTP1Ile /Ile-PON1 /192QQ-PON1 /55LM-CYP17A1A2-GLO1CA tai GSTP1Ile /Val-PON1 /192QR-PON1 /55MM-CYP17A1A1-GLO1AA genotyypin yhdistelmä yksilötasolla, saattaa johtaa tunnistamiseen potilaalla on matala, keskitason ja korkean riskin PCA, vastaavasti. Merkittävä (p 0,05) yhdistys Low, Intermediate ja korkea riski genotyypit kanssa tasot ROS, GSH ja MDA oksidatiivisen stressin biomarkkereita veressä ja soluissa virtsasta sedimenteistä havaittiin (taulukko 7).

monivertailuja

monivertailuja tarpeen ennen yleisen lopullisesti, kuinka suuri merkitys meidän havaintoja voidaan tehdä. Kaikki tulokset, lukuun ottamatta tietoja yhdistys GLO1 polymorfismi PCA riski, kesti korjaus useiden testaus (p 0,05).

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa arvioitiin, ensimmäistä kertaa tietojemme mukaan yhdistyksen välillä GLO1 -419C polymorfismi ja oksidatiivista stressiä PCA etenemiseen.

Itse asiassa, kuten aiemmin ehdottanut, A E korvaaminen takia GLO1 SNP voi määrittää konformaation muutos on entsyymi, joka johtaa isoentsyymin alemman vieroitus kapasiteetti [11] – [13]. Kuten hyvin tiedetään, GLO1 on tehokas antiglycation puolustus, joka vähentää pitoisuus reaktiivisia karbonyyli- yhdisteitä, kuten MG, yksi voimakkaimmista esiasteita karbonyyli stressiin liittyvät AGE: [1]. Näin ollen lasku tämän entsyymin aktiivisuutta voi johtaa kertymistä AGE ja puolestaan ​​ROS ja vapaiden radikaalien ihmisen PCa soluissa. Itse asiassa, kuten hyvin tiedetään, MG-johdetut AGE ovat myös erittäin tehokkaita pro-hapetin-molekyylien [5], [6], että kaikkea edistää oksidatiivisen stressin puhkeamista, keskeinen tapahtuma PCa synnyssä ja etenemisessä [7]. Itse asiassa, kertyminen AP, joka on yksi runsaimmin MG-johdettu AGE: [3], [4], on todettu, että esillä olevassa tutkimuksessa, joko eri aggressiivinen ja invasiivisia PCa solulinjoja malleja, tai biologisista nesteistä potilailla, joilla on eri aggressiivinen ja invasiivisia PCA jos kertymistä hyvin sovitettu läsnäollessa vähemmän toimintaa GLO1 entsyymiä sekä merkittävä ehto oksidatiivisen stressin. Lisäksi MG aiheuttama posttranslational vastanäyttöä valitut kohdeproteiinit [44], [45] on nopeasti kehittymässä uusi mekanismi syövän solujen eloonjäämistä signalointi, ehto liittyy tyypillisesti syövän etenemisessä. Tuloksemme hyvin korreloi niiden kanssa Hermani et al. osoittaneet, että ilmentyminen liukoisen muodon AGE-reseptorin (sRAGE), joka herkästi heijastaa AGE taakkaa [42], on parannettu ja liittyy vahvasti eturauhasen karsinoomien etenemiseen [46]. Sitä paitsi, RAGE-AGE vuorovaikutus laukaisee aktivoitumisen useita signalointireittien kiinteästi sidoksissa kasvaimien syntyyn [47] ja olennainen PCA kehittämiseen [48] ja etenemiseen [49]. Tulokset roolista GLO1 polymorfismi hapettava stressi LNCaP ja PC3 solulinjoissa, ja ennen kaikkea, että biologisia näytteitä potilaista PCA eri luokittelua ja lavastus, ehdotti tärkeä biologinen rooli tällaisen entsyymin ja sen polymorfismi on yhdistys PCA etenemiseen. Siksi oli kohtuullista odottaa, että läsnäolo alemman aktiivisuuden muoto GLO1- GLO1 alleelin – voi olla ennakoivaa noin vakavia seurauksia yksilön PCa etenemisen riskiä. Itse asiassa huomasimme, että mutantti alleelin koitui dramaattinen riski Eturauhassyövän eteneminen verrattuna villin C-alleelin, joko BPH tai terveillä miehillä valvonnan katsottiin vertailuryhmään. Vähemmän tärkeä oli yhdistys GLO1 polymorfismi riskiin Eturauhassyövän kehitystä. Itse asiassa huomasimme, että mutantti alleelin koitui vaatimaton riski Eturauhassyövän esiintymisen verrattuna villin C-alleelin, jälleen joko BPH tai terveillä miehillä valvonnan katsottiin vertailuryhmään. Näin ollen meidän tulokset viittaavat siihen, merkittävä rooli GLO1 etenemisen eikä kehittämiseen PCa. Viime aikoina on osoitettu, että myös muut SNP GLO1 lokuksen tulokseen liittyvän GLO1 toimintaa [13]. Esillä olevassa valmistelevassa tutkimuksessa olemme analysoineet yhteisen koodaus GLO1 -419C polymorfismi, kohtuullisen olettaen että se voisi olla todennäköisempää ja suoraan korreloi GLO1 aktiivisuutta. Itse asiassa, on kuvattu, että korvaaminen Ala111Glu on GLO1 johtuen-419C SNP, saattaa aiheuttaa konformationaalisia muutoksia proteiinin, hyvin todennäköisesti häiritse sen 3D-rakennetta ja vaikuttavat entsyymin aktiivisuus [14]. Varmasti, emme voi sulkea pois mahdollisuutta, että muut SNP tai useita tagSNPs peräisin GLO1 lokuksesta, voi vaikuttaa GLO1 entsyymiaktiivisuus. Siksi valinta ylimääräisiä SNP on pakollista tulevissa tutkimuksissa, jotta voidaan paremmin arvioida vaikutus geneettisten muunnelmia PCa etenemiseen.

Koska selviytymiseen analyysi, huomasimme, että GLO1 -419 alleelin merkitsevästi liittynyt epäsuotuisa eloonjäämisennuste potilailla, joilla oli paikallinen (T1 /T2) tai huono laatu (GS 2-6) PCa. Siksi, jos vahvistettu lisätutkimuksia, tämä polymorfismi, edullisesti yhdessä muiden, saattaisi auttaa erottamaan kliinisesti merkittävä ja veltto eturauhasen syöpiä ja ennustaa kliinistä alkuvaiheessa PCa. Valitettavasti ylimääräinen polymorfismit tutkittu Tässä työssä, joko yksittäin tai yhdistelminä, eivät osoittaneet mitään merkittävää yhteyttä PCA säilymisen tai etenemistä. Yhdistelmä oli kuitenkin merkittävä yhdistys PCA riski ja korreloi positiivisesti oksidatiivisen stressin tila näkyy kuuluvien potilaiden erityinen riski luokkiin, jolloin saadaan biologinen uskottavuus. Itse asiassa tällaiset geenit koodaavat proteiineja, jotka liittyvät valvontaan oksidatiivisen stressin, se voi puhdistaa vapaita radikaaleja (PON 1 ja GSTP1) tai vähentää mahdollisia substraatteja niiden tuotantoon (CYP17). Samoin GLO1, polymorfisen variantteja voi määrittää konformationaalisia muutoksia, jotka johtavat isoentsyymit, jolla on muuttunut toimintakykyä ja siten edistää puhkeamista merkitty oksidatiivisen stressin kunnossa kuin todellakin täällä, totesi geneettisen yhdessä veren tai virtsan tasot oksidatiivisen stressin indeksit.

nyt on yleisesti hyväksytty, että geneettinen yhdistys tutkimukset ovat auttaneet parantaa ymmärrystämme patogeneesissä ihmisen syövissä, mukaan lukien Eturauhassyövän. Kuitenkin perustamisesta kliininen hyöty näistä SNP ovat osoittautuneet haastava johtuen pääasiassa vaikeuksista suorittaessaan SNP-analyysi (puute toistettavuus, riittämätön otoskoot, julkaisu bias, geneettinen tausta) [50]. Toinen ylimääräinen kysymys koskee SNP-analyysi on biologinen uskottavuus geneettisen -alueella. Mahdollisuus, että merkitseviä, vaikka vaikuttava alhaisen p-arvot, ovat todella totta, riippuu pitkälti siitä, onko yhdistys on biologinen uskottava [51]. Haluamme korostaa, että nykyinen työ, joka tarjoaa biologiseen uskottavuuteen assosioitumista GLO1 polymorfismi kanssa etenemisen tai yhdistelmä kaikkien analysoitiin polymorfismien kanssa riski PCA esiin pätevä panos tutkimuksen geneettisen yhdistysten. Koska huomattava määrä riippumattomia tilastollisten testien sovellettiin tutkimuksessa, Monivertailuja tarpeen ennen yleisen lopullisesti, kuinka suuri merkitys meidän havaintoja voidaan tehdä. Lukuun ottamatta tietoja jo havaittu heikko yhdistys GLO1 polymorfismi PCA riski, joka ei kestä korjausta useita testaus, siis varmasti viittaa lisätutkimuksia, löysimme todisteita vastaan ​​nollahypoteesi (

p

arvo jäi edelleen merkittäviä 0,05 korjauksen jälkeen useita testejä käyttämällä permutaatio perustuvia menetelmiä) kaikille muille analyysit, osoittaa tulosten luotettavuus.

Lopuksi meidän tutkimuksessa todettiin merkittävä rooli GLO1 PCA etenemistä ja että GLO1 -419A riski alleeli voi olla itsenäinen ennustetekijä hengissä. Lopuksi mikäli todisteita biologinen uskottavuus tällaisen polymorfismi, joko yksin tai yhdessä muiden niitä, jotka kaikki liittyvät oksidatiivisen stressin valvontaa että, kuten tunnettua, on keskeinen tapahtuma PCA kehittymistä ja etenemistä. Koska tämä on ensimmäinen tutkimus, jossa tarkastellaan yhdistyksen välillä GLO1 -419C polymorfismi ja PCA lisätutkimusta tarvitaan.

Kiitokset

Kirjoittajat kiittää rouva Roberta Frosini erinomaisesta teknistä tukea.