Krooninen sairaus

tiivistelmä

Reseptorityrosiinikinaasit (RTK), vastauksena niiden kasvutekijä ligandit, fosfory- ja aktivoi alavirran signaalit tärkeitä fysiologisia kehittämiseen ja patologinen muutos. Lisääntynyt ilme, aktivoivat mutaatiot ja uudelleenjärjestelyn fuusioista RTK aiheuttaa syöpää, tulehdusta, kipua, hermoston sairaudet ja muut sairaudet. Aktivointi tai yli-ilmentyminen ALK, ROS1, TRK (A, B, ja C), ja RET liittyy onkogeenisia fenotyypit niiden kudosten, mikä tekee niistä houkuttelevia terapeuttisina kohteina. Cancer cDNA array tutkimuksissa on osoitettu, yli-ilmentyminen TRK-A: n ja ROS1 erilaisia ​​syöpiä, verrattuna niiden normaalin kudoksen valvonta. Me syntetisoitu kirjaston pieniä molekyylejä, jotka estävät edellä mainittuihin RTK kanssa pikomolaariset on nanomolaarisia teho. Johtomolekyylin GTx-186 esti RTK-riippuvaista syöpäsolujen ja kasvaimen kasvua.

In vitro

ja

in vivo

kasvua TRK-A-riippuvaisen IMR-32 neuroblastoomasoluihin ja ROS1 yli-ilmentäviä NIH3T3-solut esti GTx-186. GTx-186 inhiboi myös tulehduksellinen signaaleja välittävät NFKB, AP-1, ja TRK-A ja voimakkaasti vähentänyt atooppista ihottumaa ja ilma-pussi tulehdusta hiirillä ja rotilla. Lisäksi GTx-186 esti tehokkaasti ALK fosforylaatiota ja ALK-riippuvaista syöpäsolujen kasvua. Yhdessä RTK-estäjän GTx-186 on ainutlaatuinen kinaasi profiilin mahdollisten syövän hoitoon, tulehdus, ja neuropaattista kipua.

Citation: Narayanan R, Yepuru M, Coss CC, Wu Z, Bauler MN, Barrett CM , et ai. (2013) Discovery ja Prekliiniset karakterisointi Novel pienimolekyylisiä TRK ja ROS1 tyrosiinikinaasiestäjiksi varten syövän ja tulehdus. PLoS ONE 8 (12): e83380. doi: 10,1371 /journal.pone.0083380

Editor: Irina U. Agoulnik, Florida International University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 11 lokakuu 2013; Hyväksytty: 02 marraskuu 2013; Julkaistu: 26 joulukuu 2013

Copyright: © 2013 Narayanan et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat ei ole tukea tai rahoitusta raportoida.

Kilpailevat edut: RN, MY, CCC, ZW, MB, CMB, MLM, YW, JK, LS, YH, DDM, ja JTD ovat työntekijöitä GTx ja ovat GTx optio. Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen kaikki PLoS ONE politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Reseptorityrosiinikinaasin (RTK) perhe koostuu 58 transmembraanisen jotka säätelevät monet solujen toimintoja, kuten solujen lisääntymisen, migraation ja solusyklin etenemisen [1]. Lisääntynyt ekspressio, aktivoivat mutaatiot, fuusio uudelleenjärjestelyt, tai koaktivaatio näiden proto-onkogeenien edistää syövän syntyyn niiden kudosten [2], [3]. Koska niiden toiminnallinen merkitys, RTK: t ovat kehittyneet terapeuttisina kohteina syövän, tulehduksen, kivun, hermostoa rappeuttavien sairauksien ja muiden [4]. Discovery pyrkimyksiä kehittää pienimolekyylisiä estäjiä tai vasta-aineita RTK ovat eksponentiaalisesti kasvanut viimeisten 10-15 vuoden aikana. Koska löytö BCR-Abl uudelleenjärjestelyn ja sen estäjä imatinibi muut RTK-estäjien, kuten crizotinib (ALK estäjä), afatinib (EGFR-inhibiittoria), ja lenvatinib (VEGFR-estäjä), on kehitetty onkologian merkintöjen [5] – [7 ].

Tropomyosin liittyvä kinaasi (TRK) on perheen kolme RTK (TRK-A, TRK-B, ja TRK-C) säätelevä useita signaalipolkuja ovat tärkeitä selviytymisen ja erilaistumista neuronien [8 ], [9]. Lisäksi niiden kriittinen toiminto neuronien, ne ja niiden ligandit (hermokasvutekijä (NGF), aivoperäinen kasvutekijä (BDNF), ja neurotrofiinit, vastaavasti) ovat tärkeitä ei-hermosolujen kasvua ja selviytymistä. Lisääntynyt ilmentyminen ja aktivaatio TRK-A havaitaan neuroblastooma, rintasyöpä, psoriasis, ja neuropaattista kipua, muutamia mainitakseni johtuvien sairauksien TRK-A toimintahäiriö [10] – [12]. Vaikka onkogeenisia fuusiot TRK-A ei ole tunnistettu tähän päivään mennessä, sen yli-ilmentyminen on riittävä lisäämään leviämisen ja invaasion soluja. Vaikka NGF vasta-aineet ovat kliinisissä tutkimuksissa kivun, K252a, vain pieni molekyyli TRK-A-estäjän klinikalla, arvioidaan parhaillaan hoitoa varten psoriaasin [13], [14].

ROS1 on esikasvaintekijän joka kuuluu samaan fylogeneettiseen sivukonttorin TRK-A [15]. Toisin TRK-A, aktivointi ROS1 ilmenee yleensä, kun se on fuusioitu kasvaimia fuusiokumppanit kuten sulatettua glioblastoma (kuvassa) ja liuotteen operaattorin perheen 34 osa 2 (SLC34A2) [2], [16]. ROS1 on osoitettu olevan yliekspressoitu glioblastooma, kolangiokarsinooma, keuhkosyöpä, ja muut [17] – [19]. Lisääntynyt ilmentyminen ROS1 erilaisissa syövissä on saanut kehitystä selektiivisiä estäjiä. Crizotinib kehitetty ALK positiivinen keuhkosyövän, estää myös ROS1 ja on kliinisessä tutkimuksessa varten ROS1- positiivinen keuhkosyöpään.

selektiivinen paine jatkuvalla RTK inhibitio johtaa syntyminen eri klonaalisen populaatioiden syövän soluja, joilla on hankittu vastustuskyky ja usein kiihtynyt leviämisen [20], [21]. Purkumekanismeja hyödyntää syöpäsolujen voittaa RTK eston sisältävät mutaatioita, onkogeeninen fuusio, ja aktivointi toissijaisten kinaasien ja signalointireitteihin. Siksi kehittäminen toisen ja kolmannen sukupolven RTK-estäjien on välttämätöntä käsitellä resistenttien fenotyypit joita väistämättä syntyy ensimmäisen sukupolven hoito. Inhibiittoreiden erottuva Farmakoforeja ja ainutlaatuinen kinaasia estoprofiileja tarjoaa tarpeelliset vaihtoehtoisia strategioita voittamiseksi vastarintaa.

On olemassa muutamia tutkimuksia, jotka osoittavat ROS1 tai TRK-A yliekspressio syöpiin, mutta yksittäiset tai yhdistetyt ilmaus ROS1 ja TRK- A monenlaisia ​​syöpiä oli toistaiseksi huonosti tunnettu. Käyttäen 381 cDNA näytteitä 22 syövät, osoitamme yli-ilmentyminen TRK-A: n ja ROS1 syöpiä, joita ei ole aiemmin kuvattu. TRK-A on yliekspressoitu 100%: n feokromosytooma ja valtaosa muista syövän analysoitujen näytteiden. GTx-186, uusi RTK-estäjän kanssa ainutlaatuinen kinaasia estävä profiili, estää TRK perhe, ROS1, ALK ja RET kinaasien pikomolaarisilla alhaiseen nanomolaarisia IC

50-arvot. GTx-186 tehokkaasti inhiboi syöpiä ohjaavat TRK-A ja ROS1 ilmaisun ja oli myös poikkeuksellinen poistamaan tulehdustautien kuten ihottumaa.

In vitro

tutkimukset osoittivat, että GTx-186 estää myös neuropaattista kipua signalointi välittyy TRK-ligandi, NGF, joten GTx-186 arvokas väline armamentarium torjua syöpää, tulehdusta ja kipua.

Materiaalit ja menetelmät

reagenssit

Kaikki vasta-aineet hankitaan Cell Signaling (Danvers, MA). Reaaliaikainen PCR-reagensseja ja TaqMan-alukkeita ja koettimia saatiin Life Technologies (Carlsbad, CA). Rotan sytokiini array-2 saatiin Ray Biotech (Norcross, GA). Syöpä tutkimus cDNA array (CSRT 103) oli peräisin Origene (Rockville, MD). Ihmisen rekombinantti NGF 2,5 s oli Milliporesta (Billerica, MA) ja deksametasonin saatiin LKT Labs (St. Paul, MN). Tuumorinekroositekijä α (TNF-α) ja lipopolysakkaridi (LPS) hankittiin R Normal-cDNA Non-syöpäkudokset. Numbers alle näytteet osoittavat normaaleissa näytteissä.

In vitro karakterisointi GTx-186

GTx186 on imidatso [4,5-f] isoindoli johdannainen liittyvät aiemmin esitettyihin romaani RTKI GTx -134 [28]. Hyödyntää onkologian, tulehduksellinen, ja nociceptive roolit TRK-A ja ROS1 tyrosiinikinaasien, rakensimme kirjasto pienten molekyylien, joka selektiivisesti estää kinaasien fylogeneettiseen haara sisältävän TRK-A ja ROS1. GTx-186 selektiivisesti inhiboi TRK-A, TRK-B, TRK-C, ROS1, ALK ja RET-välitteisen fosforylaation IC

50 arvot pikomolaariset alhaisen nanomoolialueella (taulukko 1). Toisaalta, GTx-186 inhiboi IGF-1 R ja EGFR-välitteisen fosforylaation paljon suurempina pitoisuuksina (yli 100-1000 nM), mikä osoittaa sen selektiivisyys vain osaa kinaasien. Koska ALK ja RET ilmentymistä normaaleissa kudoksissa ovat minimaaliset ja tyrmäyseläinten on merkityksetön fenotyyppejä [29], [30], ristireaktiivisuus nämä kaksi kinaasien ovat pieniä huolta mahdollistaa GTx-186 hoitoon TRK-A ja ROS1 riippuvaisiin tauteihin, joissa minimaalinen riski ei-toivottuja vaikutuksia.

GTx-186 Estää TRK-A-riippuvaisen IMR-32 neuroblastoomasolu- ja Vieraslajisiirteen Growth

Koska IMR-32 neuroblastoomasoluihin ilmentävät TRK isoformeja ja ovat riippuvaisia on TRK-A niiden kasvua [31], käytimme tätä linjaa mallina tutkia vaikutuksia GTx-186 TRK-A fosforylaation ja kasvua sekä

in vitro

ja

in vivo

. Erittäin voimakas GTx-186 inhiboi NGF-indusoitua fosforylaatiota p42 /44 MAPK, kinaasi alavirtaan TRK-A, joka välittää lisääntymistä ja tulehdusta vasteena NGF: [32], jonka konsentraatio oli niin alhainen kuin 10 nM (kuvio 2A). Toisaalta, 10 kertaa heikompi analoginen esti NGF aiheuttaman p42 /44 MAPK fosforylaatio vain pitoisuus on suurempi kuin 100 nM. Sen jälkeen, IMR-32-soluja käsiteltiin kasvavilla pitoisuuksilla GTx-186 määrittää vaikutus solujen kasvuun 72 tunnin jälkeen. Kuten on esitetty kuviossa 2B, GTx-186 annosriippuvaisesti esti kasvua IMR-32-solujen IC

50-arvo on noin 100 nM. GTx-186 inhiboi myös täy- NGF-riippuvaisia ​​kulkeutuminen IMR-32-soluissa (kuvio 2C), mikä osoittaa, että inhiboimalla TRK-A on sekä anti-proliferatiivisia ja anti-invasiivisen. Samanlaisissa olosuhteissa, GTx-186 ei ollut vaikutusta kasvuun SH-SY5Y soluja, neuroblastoomasolulinjasta että puuttuu TRK-A [26].

. GTx-186 estää NGF aiheuttaman ERK (p42 /44 MAPK) fosforylaatiota. IMR-32-neuroblastoomasolujen olivat ilman seerumia ja 2 päivää, esikäsitelty 2 tuntia osoitetuilla pitoisuuksilla GTx-186 ja käsiteltiin 200 ng /ml NGF: ää 30 minuutin ajan. Solut kerättiin ja Western blot suoritettiin fosfo-ERK ja koko-ERK. B. GTx-186 estää leviämisen IMR-32-soluissa. IMR-32-solut maljattiin kasvualustaan ​​ja käsiteltiin ilmoitetun pitoisuuden GTx-186 3 päivää. Solut kiinnitettiin ja värjättiin sulforodamiini B (SRB) ja optinen tiheys (OD) mitattiin 535 nm: ssä. C. GTx-186 estää migraation IMR-32-soluissa. IMR-32-solut maljattiin vesinokkaeläin migraatiokokeessa levy ja sai vehikkeliä, NGF, tai yhdistelmä NGF ja GTx-186. Kuvat otettiin alle valomikroskoopilla 12 tunnin hoidon jälkeen. D-G. GTx-186 estää IMR-32 neuroblastooma vierassiirrettä kasvua. IMR-32-soluja ihon alle istutettiin paljaisiin hiiriin (10 miljoonaa solua /hiiri). Kun kasvaimet olivat saavuttaneet 100-200 mm

3, eläimet (n = 8) satunnaistettiin ja hoidettiin päivittäin ajoneuvon tai 20 mg /kg /vrk i.v. GTx-186. Kasvaimen tilavuus (D) ja paino (F) mitattiin joka päivä 4 päivän ajan. Eläimet tapettiin, kasvaimet punnittiin (E), varastoidaan formaliinilla ja käsitellään TUNEL immunohistokemia (G-määrä TUNEL positiivisten solujen (vasen paneeli) ja intensiteetti TUNEL värjäyksen (oikea paneeli)). Arvot ilmaistaan ​​Avg ± S.E. NGF-Nerve Growth Factor; Avoin palkit ovat ajoneuvon saaneista ja täydet pylväät ovat GTx-186-käsiteltyjen näytteiden. * -statistically Merkitsevä p 0,05; ** – Tilastollisesti merkitsevä p 0,01.

Sen osoittamiseksi, että antiproliferatiivisia vaikutuksia GTx-186 ovat toistettavissa

in vivo

on -tuumoriksenografti malli, IMR-32 solut istutettiin nude-hiirissä, ja kasvaimen suuntaan eläimiä käsiteltiin ajoneuvon tai GTx-186 suonensisäisesti. Johtuu nopeasti proliferatiivisia ja erittäin invasiivisia luonteeltaan IMR-32-soluissa, kasvaimet kasvoivat 200 mm

3 2000 mm

3 4 vuorokauden kuluessa. GTx-186 tehokkaasti ja vähensi merkitsevästi kasvaimen kasvua (kuvio 2D) alkaen päivänä 1, kunnes tutkimuksen loppuun, mikä johtaa yli 80% kasvaimen kasvun inhibitio. Nämä vaikutukset tulivat esiin ilman näkyviä myrkyllisiä vaikutuksia, mukaan lukien kaikki muutokset kehon paino (kuvio 2F). GTx-186 vähensi merkitsevästi myös kasvaimen paino (kuvio 2E) yli 50% verrattuna vehikkelillä käsiteltyihin eläimiin. Jotta voidaan määrittää mekanismin tämän kasvaimen vastaisen vaikutuksen, formaliinilla kiinteän kasvaimen kudokset olivat immunohistokemiallisesti värjättiin TUNEL ja määrä TUNEL-positiivisia soluja ja TUNEL värjäys voimakkuus arvioitiin. GTx-186 lisääntynyt kasvainsolujen apoptoosin yli kaksinkertaiseksi verrattuna vehikkelillä käsiteltyihin eläimiin, kuten on esitetty sekä useita TUNEL-positiivisia soluja ja TUNEL-värjäyksen intensiteetti (kuvio 2G). Nämä vaikutukset kohtaan tulivat esiin vakaan tilan pitoisuus on noin 50 nM GTx-186, joka on verrattavissa

in vitro

IC

50-arvot.

GTx-186 saa aikaan tulehdusta estäviä in vitro

TRK-A: n ja sen ligandin NGF ovat välittäjiä tulehdussairaudet kuten dermatiitti, psoriasis ja nivelreuma. NGF on ilmaistu makrofagien ja

in vitro

, NGF indusoi TNF-α synteesi ja synergistisesti interferoni-γ ekspressoitumisen lisäämiseksi inflammatoristen sytokiinien [33]. Nämä vaikutukset voidaan kumota TRK-A-estäjät. Lisäksi, NGF ja TRK-A on liitetty erilaisia ​​tulehdus- ja allergisten tilojen, mukaan lukien astma ja polymorfonukleaaristen leukosyyttien kemotaksista [34]. Ymmärtää vaikutuksen GTx-186 tulehduksen indusoima erilaisten sytokiinien ja kasvutekijöiden, PC12-soluja esikäsiteltiin GTx-186 tai deksametasoni ja sen jälkeen käsiteltiin PMA: lla tai NGF: n indusoida tulehduksellisten sytokiinien. Vaikka GTx-186 esti tehokkaasti MMP-3-, matriisin metalloproteinaasi, indusoi sekä PMA: lla ja NGF, deksametasonia inhiboi MMP-3: n ekspressio indusoi vain PMA, mutta ei NGF (kuvio 3A). Tämä osoittaa, että NGF ja PMA välittävät tulehdusta läpi erillisiä polkuja, ja glukokortikoidien, kuten deksametasonia, ovat tehokkaita vain ei-NGF-tulehduksen. Määrittämään laajempi anti-inflammatoriset vaikutukset GTx-186, jos sellainen on, IMR-32-soluissa (kuvio 3B), normaalin ihmisen keratinosyyttejä (NHEK, kuvio 3C), LADMAC makrofageissa (kuvio 3D), ja RAW 264.7 hiiren makrofageissa (kuvio 3E) oli esikäsitelty GTx-186, ja tulehduksellisten sytokiinien indusoitiin NGF: n, TNF-α, tai LPS. GTx-186 esti tehokkaasti tärkeää tulehduksellisten välittäjäaineiden, kuten cFos, IL-8 ja IL-1β, jossa teho on verrattavissa sen vaikutuksia kinaasiaktiivisuuden.

Soluja seerumia ja 2 päivää, esikäsitelty ilmoitettuina pitoisuuksina GTx-186: ssa 30 min ja käsiteltiin kasvutekijöiden tai sytokiinien 12-16 tuntia. RNA uutettiin, cDNA syntetisoitiin, ja ilmentyminen tulehduksellisten geenien mitattiin reaaliaikainen PCR: llä käyttäen Taqman-aluke ja antureista. Kaikki kokeet suoritettiin kolmena kappaleena ja toistettiin ainakin kolme kertaa. Arvot ilmaistaan ​​Avg ± S.E. DEX-Deksametasoni; PMA-forbolimyristaattiasetaatti; NGF-Nerve Growth Factor; TNF-α-tuumorinekroositekijä; LPS-Lipopolysaccharide; MMP3-Matrix Metalloproeinase 3; IL-8-interleukiini 8; PC-12-Feokromosytooma solut; IMR-32-neuroblastoomasolujen; NHEK-Normal ihmisen orvaskeden Keratinosyyttejä; LADMAC-Macrophage /monosyytit; RAW-264.7-Mouse makrofagisoluissa.

GTx-186 Estää Croton öljyn aiheuttama atooppisen ihottuman Hiiret

Koska TRK-A on liitetty psoriasiksen [12] ja ihottuma [ ,,,0],35] ja GTx-186 inhiboi IL-8, yksi kriittisistä sytokiineja, jotka välittävät ihon tulehdus [36] (kuvio 3C), arvioimme GTx-186 on krotoniöljyllä mallin atooppinen ihottuma. Croton öljy kasvattaa punoitus, korva paino, ja uudissuonivuotoihin, fenotyyppi samanlainen atooppisen ihottuman [37]. Soveltaminen krotoniöljyllä turvotuksia ja painoa korvat, jotka oli annoksesta riippuen vähensi GTx-186 (kuvio 4A). RNA korvan lyöntejä eristettiin ja ilmentyminen eri geenien tulehduksellinen reitit mitattiin (kuvio 4B). Croton öljy lisääntynyt ilmaus kaikkien mitattujen tulehduksellinen reitin geenit kuten NGF, jotka kaikki inhiboivat merkittävästi GTx-186 ja deksametasoni.

. C57BL /6-hiiriä (20-25 g; n = 3) annettiin kahdesti ilmoitettu annos GTx-186 (sc) tai deksametasoni (sc), 16 tuntia ja 2 tuntia, ennen kuin siihen krotoniöljyllä (20 ui 10 % krotoniöljyllä asetonissa kummallakin sisäkorvan). Kuusi tuntia sen jälkeen, kun krotoniöljyllä sovellus, eläimet tapettiin, korva lyöntejä punnittiin ja säilytettiin RNA: n eristämistä. * Tarkoittaa merkitsevyyden P 0,05 asetoni soveltaa apuaineella hoidettuihin eläimiin. # Osoittaa merkitsevyyden P 0,05 krotoniöljyllä sovellettu ajoneuvon hoidettujen eläinten. B. RNA eristettiin korvan lyöntejä ja eläinten paneeli A ja ilmentyminen osoitetaan geenien mitattiin reaaliajassa PCR: llä ja normalisoitiin GAPDH käyttäen TaqMan-alukkeita ja koettimia. Arvot ilmaistaan ​​Avg ± S.E. DEX-deksametasoni; 186-GTx-186; NGF-Nerve Growth Factor; IL-interleukiini; CCL-Kemokiini ligandi; MMP-Matrix Metalloproteinase; MCSF-makrofagikasvutekijä.

GTx-186 Estää Karrageeni-indusoitu tulehdus rotan Air pussi Malli

NGF-aineet ovat kliinisesti onnistunut hoidettaessa nivelkivun [38]. Kuitenkin mahdollisesti hoidetaan systeeminen tulehdus yhdessä kipua ei arvioitu. Koska GTx-186 inhiboi inflammatoristen sytokiinien eri solulinjojen, mukaan lukien makrofagit, testasimme GTx-186 karrageenin aiheuttaman systeemisen tulehduksen käyttämällä ilmaa pussin malli. Ilma pussi malli on fysiologisesti ja mekanistisesti verrattavissa niveltulehdus, ja siksi tätä mallia käytettiin arvioimaan GTx-186 [25], [39]. Anto karrageeni lisääntynyt leukosyyttien ja makrofagien tunkeutumista ilma-pussi, verrattuna suolaliuoksella käsiteltyjen eläinten (kuviot 5A ja 5B). Ihonalainen ja sisäinen pussi anto GTx-186 vähensi merkittävästi valkosolujen ja makrofagien infiltraatiota. Sisäinen pussi anto GTx-186 herättänyt paremman vasteen kuin ihonalainen anto, joka osoittaa positiivinen korrelaatio lääkealtistuksen paikalla tulehdusta ja anti-inflammatorisia vaikutuksia.

A-C. Pussi luotiin ihon alle yksi kylkeen rottien (n = 3) ruiskuttamalla 20 ml ilmaa neljä päivää ennen ja 10 ml ilmaa kaksi päivää ennen käsittelyä. GTx-186 (ks paneeli A ja sisäisen pussi tai sc paneelissa B, 40 mg /kg), deksametasonia (30 mg /kg sc), tai indometasiinin (30 mg /kg sc) annettiin kolmesti, 48 tuntia, 24 tuntia, ja 1 tunti, ennen antamista karrageenia (1 ml 2%). Kuuden tunnin kuluttua karrageenin antamisen jälkeen eläimet tapettiin, 5 ml suolaliuosta injektoitiin pussiin huuhtele pussin nestettä ja leukosyyttien ja makrofagien tunkeutui pussi laskettiin mikroskoopilla. TNF-α mitattiin käyttämällä ELISA pussissa eritteiden kokeilun paneelissa B. (C). D. Effect of GTx-186 tulehduksellisten sytokiinien karrageenin aiheuttaman ilmataskun tulehdus mitattiin pussissa eritteitä käyttäen sytokiinin array. Key sytokiinien määrä määritettiin ja ilmaistiin pylväskaaviot oikealla. Arvot ilmaistaan ​​Avg ± S.E. n = 3. 186-GTx-186; Indom-Indomethacin; DEX-Deksametasoni; TNF-Tuumorinekroositekijän; IL-interleukiini; CINC-Sytokiini aiheuttama Neutrofiilien-kemoatraktanttina proteiinia.

Air pussi eritteitä alistettiin sytokiinien array määrittää vaikutus GTx-186 ja indometasiinin maailmanlaajuisten sytokiinien proteiinin ilmentymisen (kuvio 5D ja taulukko S2) . Mielenkiintoista, GTx-186 ja indometasiinia erosivat vaikutuksiltaan estää sytokiineja. Vaikka molemmat GTx-186 ja indometasiini inhiboivat karrageeni-indusoidun TNF-α, IL-1β, fraktalkiini, IL-13, ja leptiini, vain GTx-186 inhiboi CINC-1, CINC-2, IL-6, ja LIX. Toisaalta, ei GTx-186 tai indometasiinia esti karrageeni-indusoidun CINC-3, TIMP-1, PDGFa, MMP-8, ja MCP-1, joka osoittaa, että nämä sytokiinit voi olla kriittinen tulehduksen välittäjäaineiden ilmassa pussin mallin .

TNF-α on tärkeä välittäjäaine tulehduksen karrageenin aiheuttama akuutti tulehdus ilmassa pussissa nivelkalvon malleja. Paikallisella tasolla TNF-α korreloi turvotusta ja tulehduksen laajuus, joka palautettiin anti-TNF-α-vasta-ainetta [25].