Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

eturauhasen syöpä, kasvain ilmaus kannabinoidien CB

1 reseptoreihin liittyy huono ennuste. Yksi selitys tälle yhdistys tulee kokeista transfektoiduista astrosytoomasoluihin, joissa suuri CB-reseptorin ilmentymisen rekrytoi Akt signalointi selviytymisreittiin. Tässä tutkimuksessa olemme tutkineet yhdistyksen välillä CB

1-reseptorin ilmentymisen ja Akt väylän hyvin kuvattu eturauhassyövän kudoksen mikrosirun.

Menetelmät /Principal Havainnot

Fosfory- Akt immunoreaktiivisuus (Pakt-IR) tulokset olivat saatavilla tietokannassa. CB

1 -reseptorin immunoreaktiivisuus (CB

1IR) oli rescored aiemmin julkaistuihin tietoihin samalla asteikolla kuin Pakt-IR. Oli erittäin merkittävä korrelaatio CB

1IR ja Pakt-IR. Edelleen tapauksissa korkeat ekspressiotasot sekä biomarkkereiden olivat paljon todennäköisesti ankarampaa muodossa tauti diagnoosin kuin ne, joilla on alhainen ekspressiotasoja. Kaksi biomarkkerit oli additiivisten vaikutusten sijaan vuorovaikutuksen, kun tautikohtaisia ​​säilymiseen.

Johtopäätökset /merkitys

Tämä tutkimus antoi tietoja, jotka on sopusoinnussa hypoteesin, että suurella CB

1-reseptorin ilmentymisen, Akt signalointireitin tulee operatiivinen.

Citation: Cipriano M, Häggström J, Hammarsten P, Fowler CJ (2013) välisestä assosiaatiosta kannabinoidiannos CB

1 -reseptorin Expression ja Akt merkinanto in Prostate Syöpä. PLoS ONE 8 (6): e65798. doi: 10,1371 /journal.pone.0065798

Toimittaja: Vinod K. Yaragudri, Nathan Kline instituutti Psychiatric Research ja New Yorkin School of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: March 20, 2013; Hyväksytty: 02 toukokuu 2013; Julkaistu: 05 kesäkuu 2013

Copyright: © 2013 Cipriano et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat kiitos Ruotsin tutkimusneuvoston (Grant no. 12158, lääketiede); Ruotsin Cancer Society (Grant no. CAN2010 /437); Lion Cancer Research Foundation, Uumajan yliopiston ja tutkimus rahastojen lääketieteellisen tiedekunnan, Uumajan yliopiston taloudellista tukea. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

endokannabinoidijärjestelmä (EKP) järjestelmä, joka sisältää G-proteiiniin kytkettyjen CB

1 ja CB

2-reseptorien, niiden endogeenisten ligandien anandamidia ja 2-arakidonyyliglyseroli, ja niiden synteettiset ja catabolic entsyymejä, on ollut osoitettu olevan mukana valvonnassa jakaantumiseen, kulkeutumiseen ja invasiivisen käyttäytymisen monenlaisia ​​syöpäsoluja [1] – [5]. Ihmisen eturauhasen ilmentää funktionaalisesti aktiivinen CB

1-reseptoreihin [6], ja anandamidilla vähentää määrä epidermaalisen kasvutekijän (EGF) ja prolaktiini stimuloiman kasvun ihmisen eturauhassyövän solulinjoissa tavalla liittyy aktivaatio CB

1-reseptoreihin [7], [8]. Sitä vastoin sekä mitogeenisiä ja suurempina pitoisuuksina, antiproliferatiivisia vaikutuksia kannabinoidit on nähty stimuloimattomat syöpäsolujen [9] – [14], sekä vaikutuksia, jotka eivät liity vuorovaikutusta CB-reseptoreihin [2], [14] – [16]. Erilaisia ​​mekanismeja, kuten tuotannon keramidin, alas-säätely EGF-reseptorien (EGFR) ja prolaktiini reseptorit esto RhoA aktiivisuuden ja jatkuva aktivointi ekstrasellulaarisen signaalin säännelty kinaasien (Erk) ovat sekaantuneet estovaikutukset kannabinoidien upon eturauhasen syöpäsolujen kasvua tai motiliteettia [7], [8], [12], [17].

manipulointi tasojen 2-arakidonyyliglyseroli ja liittyvät homologit (mukaan saarto tai knockdovvn catabolic entsyymin monoasyyliglyserolilipaasit lipaasi, joka vastaa hydrolyysin näiden lipidien) vähentää selviytymistä, liikkuvuus ja invasiivisia ominaisuudet

in vitro

sekä kasvua

in vivo

androgeenista herkkä PC-3 eturauhasen syöpäsoluissa tavalla välittämä osittain CB

1-reseptoreihin [18], [19]. Toisaalta, inhibitio synteesi 2-arakidonyyliglyseroli tai solujen transfektio rasvahappoamidi hydrolaasi (FAAH), entsyymiä, joka huolehtii hydrolyysissä anandamidia, lisää invasivity PC-3-solujen in vitro [18], [20]. Nämä tiedot ovat kaikkien johdonmukaista sen havainnon kanssa, että EKP järjestelmä, sen lisäksi että runsaasti muita sääntelyyn ominaisuuksia kehossa [21], on rooli paikallisessa valvonnassa syöpäsolun leviämistä.

Päinvastaista sääntely roolin EKP edellä kuvatun järjestelmän on mahdollisuus, että EKP järjestelmä on vahingollista kasvaimissa ja sen edistävän taudin synnyssä. Useat tutkimukset ovat raportoineet, että merkkiaineiden EKP järjestelmä näyttää muuttuneen ilmentymisen syövän tyyppejä, kuten manttelisolulymfooman ja peräsuolen syövän [22] – [24], vaikka muutoksen suunta ei ole aina sama. Pienessä kohortin tapauksista hepatosellulaariseen syöpään, esimerkiksi alhainen ilmaus CB

1 reseptoreihin liittyy huonompi tulos kuin niissä tapauksissa, joissa on korkea ilmaus CB

1-reseptoreihin [25], kun taas päinvastainen pätee haimasyövän [26] ja vaiheen II mikrosatelliittimerkkien-vakaa kolorektaalisyöpä [24]. Kun kyseessä on eturauhasen syöpä, sekä CB

1-reseptoreihin ja FAAH yliekspressoituvat kasvainkudoksessa verrattuna ei-pahanlaatuinen luminaalisen epiteelin kudosten tai solujen [20], [27] – [29] ja iso hyvin tunnettu Potilaskohortti pitkän seurannan, olemme huomanneet korkeampaa taajuutta vakavia tapauksia (Gleason pisteet 8-10) joukossa tapauksia, joilla on korkea kasvain CB

1-reseptorin ja /tai FAAH immunoreaktiivisuus [27], [29] . Edelleen tapauksissa, minkä jälkeen odote diagnoosin jälkeen, kasvaimen CB

1 -reseptorin immunoreaktiivisuus (CB

1IR) tarjoaa vankan prognostista iteselleen tautikohtaisia ​​selviytyminen, joka on additiivinen antamat Gleason pisteet [27]. Siten esimerkiksi tapauksissa Gleason tulokset 6-7 diagnoosin, 15 vuoden todennäköisyydet tapahtumista vapaata aikaa varten CB1IR tulokset

vs.

≥ mediaanin pisteet saaneilla 85 ± 9% vs. 44 ± 9% [27].

Vaikka tutkimuksessa edellä selvästi yhdistää korkean CB

1 -reseptorin ilmaisutapoja sairauden vakavuuden ja lopputulos eturauhassyövässä, se antaa mitään mekanistista tietoa siitä, miksi näin on. Yksi mahdollinen mekanismi on, että EKP järjestelmä ”kytkimet” olemasta vahingollisia syöpäsolujen on lievä tai kohtalainen CB

1-reseptorin ekspressiotasot edistämään niiden selviytymistä suurista ekspressiotasot. Teoreettinen perusta tämä ehdotus on peräisin käyttäen hiiren astrosytoomasoluihin [30]. Tässä tutkimuksessa solut transfektoitiin plasmideilla, jotka sisältävät reportterigeenin (eGFP, vihreä fluoresoiva proteiini) ja yksikään, CB

1 tai CB

2-reseptoreihin. Kloonit, joilla on alhainen tai kohtalainen tai korkea-reseptorin tasot valittiin sitten ja käsiteltiin CB reseptoriagonisti CP55,940. Oli vähäinen tai kohtalainen reseptorin tasoilla, agonisti aiheutti apoptoosin johtuu osittain pitkittynyt stimulaation Erk signalointireitin. Kuitenkin kloonit, joilla on korkea-reseptorin ekspressiotasot osoitti lisäksi aktivoitumisen Akt signalointireitin vastauksena CB-reseptorin agonisti. Tämä polku on ”Survival” reitti säätelemällä solujen lisääntymistä ja apoptoosia, ja soluja, joilla on suuri CB-reseptorin ilmentymisen tasoa ei apoptose läsnä ollessa CB-reseptorin agonisti, ellei Akt annettiin samanaikaisesti esti [30].

Vaikka edellä tutkimus tarjoaa tyylikkään selitys sille, miksi korkean CB reseptorin ilmentyminen voi olla haitallista, se perustuu valitaan transfektoidut astrosytooma kloonien sijaan eturauhassyöpä. Raportissa kuitenkin, että kannabinoidin reseptorin agonistit Δ

9-tetrahydrokannabinoli ja

R

– (+) – methananandamide lisätä tuotantoa fosforyloidun Akt (Pakt) PC-3 soluja tavalla estänyt CB

1 reseptorin käänteisen agonistin rimonabantille ja että pitoisuus Δ

9-tetrahydrokannabinoli käyttää (100 nM) kasvaa PC-3 solujen lisääntymistä [10] osoittaa ”Akt-kytkin” (eli kytkentä CB

1 reseptoreiden Akt signalointireitin) on operatiivinen tässä solulinjassa käytetyissä olosuhteissa näiden kirjoittajien.

Jos yhdistys korkean CB

1-reseptorin ilmentymisen eturauhasen syöpään sairauden vakavuuden ja lopputulos on seurausta kytkin Akt-välitteisen signaloinnin, tietyt ennusteet voidaan tehdä: Ensinnäkin tapaukset, joilla on korkea kasvain CB

1-reseptorin ilmentymisen odotettaisiin olevan suurempi aktiivisuus Akt-reitillä ja siksi pitäisi olla positiivinen korrelaatio CB

1IR tulokset ja Pakt-IR tulokset tuumorikudokseen. Toiseksi kasvain leviämisen maksujen tulisi olla korkeampia tapauksissa, joissa korkea CB

1IR ja Pakt-IR (eli jos ”kytkin” voi olla operatiivinen) kuin silloin, kun jompikumpi tai molemmat näistä kaksi muuttujaa on alhainen. Näin ollen tässä tutkimuksessa olemme käyttäneet tietoja meidän eturauhassyöpäkudoksen microarray tutkia vuorovaikutusta CB

1-reseptoreihin ja Akt signalointireitin.

Methods

Patient materiaali ja immunokemiassa

kasvain pEGFR-IR ja Pakt tulokset, joita käytetään tässä tutkimuksessa otettiin meidän tietokantaan ja on julkaistu aiemmin [31], [32]. Kudokset (formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut näytteet) kerättiin klo Regional Hospital, Västerås, Ruotsi, vuodesta 1975 vuoteen 1991 alkaen kaikkiaan 419 potilasta diagnosoitu eturauhasen syöpä höyläysleikkaus alempien virtsateiden oireet [33]. Potilaita seurattiin vuoteen 2003 asti kudossiruina rakennettiin ja yleensä välillä 1 ja 8 ydintä (tavallisesti 5, mukaan lukien sekä ensimmäisen että toisen Gleason luokka alueilla kasvainkudoksen) ja 1-4 ytimet (ei- pahanlaatuinen kudos) voitaisiin lasketa kyseinen parametri. Ytimet pisteytettiin perusteella intensiteetin ja jakelu antaa komposiitti arvo vaihtelee välillä 0-4 varten Pakt-IR ja 0-5 pEGFR-IR 0-5 [31], [32]. Tähän asti julkaisemattomia tietoja kasvainten ErbB2-IR (vaihteluväli 0-4) oli myös saatavilla tietokannassa. Kaikissa tapauksissa ytimet tekee tutkijat, jotka olivat sokea potilastietoja. Kliiniset tiedot (Gleason pisteet, paikallinen kasvain pisteet, läsnäolo etäpesäkkeitä diagnoosin arvioimana luukuvaus, ja prosenttiosuus näytteen, joka sisälsi kasvain (% ca)) sekä Ki67 indeksi, jolla mitataan solujen lisääntymistä oli kaikki saatavilla tietokannassa (katso [33], [34] varten julkaistut raportit joitakin tämän materiaalin). Tutkimuksen eettinen komitea Uumajan yliopistollisessa sairaalassa (Regional Ethical Review Board Uumajassa) hyväksyi tutkimuksen ja luopua tarvetta tietoisen suostumuksen.

Koska alkuperäisessä CB

1IR tulokset palautettiin jonka yhden tutkijan käyttäen 0-3 mittakaavassa [27], me valittiin rescore immunovärjättiin kasvain ytimet ( ”NCB

1IR”), mutta tällä kertaa käyttäen digitoitua kuvaa, kaksi riippumatonta tutkijat (MC, CJF) ja samalla intensiteetillä kuin käytetään Pakt-IR [32]. Jakaumia kussakin intensiteetti pisteytettiin 0, 25, 50, 75 tai 100%. Siten esimerkiksi ydin sijoitettiin 25% intensiteetti 1, 25% voimakkuus 2 ja 50% intensiteetti 3 varten biomarkkereiden kyseessä olisi pisteet 0,25 × 1 + 0,25 × + 0,5 x 3 = 2,25. Yksi tutkija (MC) myös saivat ei-pahanlaatuinen ydintä. Sillä 2594 ytimien tekee molemmat tutkijat (myös joitakin ei-pahanlaatuinen ytimien tahattomasti tekee CJF), sisäinen luokan korrelaatio analyysi käyttäen sekoitettua mallia ja testaus johdonmukaisuutta antoi Chronbach alfa 0,94, ja 1837 (71%) ytimet pisteytettiin ≤0.5 yksiköt toisistaan. Ottaen huomioon, että ytimet ja värjäämällä jonnekin intensiteetin yksikköinä (0, 1, 2, 3 ja 4) ja jakelu erien (0, 25, 50, 75 ja 100%) käytettiin eivät ole harvinaisia, eroa tulokset jopa 1 voidaan hyväksyä. Kaikkiaan 95 (3,7%) hylsyjen oli eroja tulokset suurempi kuin 1. Erot näissä tapauksissa voi johtua esimerkiksi painovirheiden tai kuvioita immunoreaktiivisuuskuvion jotka olivat vaikea pisteet. Tämän seurauksena nämä olivat rescored jälleen itsenäisesti ja ilman päästä edellisestä tulokset. Jälkeen rescoring, 6 sydämiä hylättiin huonon laadun (eli ei katsota pisteet-pystyy sekä tutkijat), 88 ytimet oli nyt saanut kuluessa 1 yksikkö toisistaan, ja vain 1 ydin tuloksella ero on suurempi kuin 1 säilyi. Tämä ydin on siis tule kyseeseen. Suuri määrä sydämiä analysoitu heijastuu se, että useita dioja värjättiin enemmän kuin kerran, koska teknisen virheen (puute värjäys) epäiltiin kolmen ensimmäisen neljä riviä ensimmäisen joukon hylsyjä kunkin dian. Tämä vahvistettiin, kun yksittäiset pistemäärät analysoitiin: jakelu pistemäärät positioiden 1-4 ensimmäisen sarjan ytimien oli huomattavasti vasemmalle siirtynyt (ts monta tulokset 0-1 palauttamisesta) ensimmäisen ajon verrattuna myöhemmin kulkee, kun taas jakaumat pisteiden kantoja 5-end (joko 7 tai 8, riippuen dia) olivat hyvin samanlaisia ​​ensimmäisen ja myöhempien ajoja. Näin ollen tulokset kaikkien kannat ensimmäisen kierroksen ja ensimmäiset tulokset hylättiin. Mediaaniarvot määritettiin sitten pisteiden kunkin tutkijan (vain ytimet ollessa tekee molemmat tutkijat tarkasteltiin), ja tulokset olivat sitten keskiarvo ennen lisäämistä tietokantaan. Korrelaatio alkuperäisen CB

1IR kasvaimen tulokset (asteikko 0-3) ja kansallinen

1IR kasvaimen tulokset (asteikko 0-4) oli erittäin korkea (Spearmanin rho = 0,81, P 0,0001, n = 364) , ja optimaalinen (Youdenin) pisteet tunnistetaan Reporter Ylläpitäjä Characteristic (ROC) käyrä NCB

1IR tietoja potilaista hoidettiin odote diagnoosin jälkeen, jossa 15 vuotta cut-off oli jaetun at tulokset ≤2.75 ja 2,75.

tilastot

kolme tilastollisia ohjelmistoja käytettiin. Intraclass korrelaatiokertoimet, Coxin suhteellisen vaarat regressio ja kaksivaiheinen klusterin analyysit tehtiin käyttämällä IBM SPSS ohjelmistoversiot 20 ja 21. ordinal Regressioanalyysistä tehtiin ohjelmistolla puitteissa R projektin tilastollisiin tietojenkäsittely (versio 2.15.2) [ ,,,0],35]. Kaikki muut tilastolliset laskelmat tehtiin käyttämällä tilastollista pakettia rakennettu GraphPad Prism 5 ja 6 tietokoneohjelmia Macintosh (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Hengissä analyysit, tapahtuma määriteltiin kuolema johtuu eturauhasen syöpä ja syötetty tietokantaan ”event = 1”, jolloin määrittämiseksi tautikohtaisia ​​selviytymistä. Muista syistä johtuvat kuolemat sensuroitiin, koska oli tapauksia, joissa potilas oli elossa päivänä, jona viimeinen seurannan. Kolme tapaukset, joissa tauti tulos oli tuntematon jätettiin selviytymisen analysoi.

Tulokset

Korrelaatio CB

1IR ja Pakt-IR eturauhasen syöpä kudos microarray näytteitä

taulukossa 1 Spearmanin rho arvot annetaan välinen korrelaatio NCB

1IR ja Pakt-IR tulokset kasvaimen näytteissä. Jos korkea kasvain CB

1-reseptorin ilmentymisen johtaa siirtyä Akt-reitin [30], positiivinen korrelaatio NCB

1IR ja Pakt-IR voisi odottaa. Tämä oli todellakin havaittu (Spearmanin rho = 0,29, P 0,0001, n = 274) ja kasvaimet. Hyvin samankaltainen arvo nähtiin (Spearmanin rho = 0,27), kun alkuperäinen CB

1IR tulokset [27] käytettiin sijasta NCB

1IR. Teoriassa tämä korrelaatio, vaikkakin merkittävä, voitiin indusoida kahden itsenäisen muuttujat kolmasosa tekijä, jos parametri A, esimerkiksi indusoi sekä Pakt (käyttämällä sen alavirran signalointia molekyyli), ja samaan aikaan lisääntynyt synteesi CB

1-reseptoreihin, korrelaatiota Pakt-IR ja NCB

1IR nähtäisiin. Ilmeinen ehdokas tässä suhteessa olisi EGF-reseptoreihin ja läheistä sukua ErbB2 reseptoreihin, koska ne pari Akt signalointia eturauhassyövän soluissa [36], [37]. Itse asiassa kudoksessa microarray, The pEGFR-IR ja ErbB2-IR tulokset korreloivat Pakt-IR tuumorikudokseen (taulukko 1 ja [32]). Kuitenkin ensimmäisen ja toisen kertaluvun Korrelaatiokertoimet Pakt-IR ja CB

1IR laskettuna kuvatulla [38] edelleen merkittäviä, kun valvottuja pEGFR-IR ja ErbB2-IR (taulukko 1). Ei ollut mitään merkittävää korrelaatiota ei-pahanlaatuinen Pakt-IR ja NCB

1IR tulokset (Spearmanin rho = 0,066, n = 232, P = 0,32).

Yksittäiset pisteet käytetään tässä korrelaatio saatiin 1-8 kasvaimen ydintä kohden tapauksessa (katso menetelmät). Ottaen kuitenkin huomioon, että ytimet, joissa kasvaimen tapauksessa koostuvat sekä ensimmäisen että toisen Gleason grade alueilla [33], on mahdollista, että korrelaatio saatetaan nähdä tasolla ydin eli että ydin tietyssä tapauksessa on alhainen CB

1IR on pienempi Pakt-IR kuin toinen ydin samasta tapauksessa korkea CB

1IR (kts. 1A esimerkkejä kaksi ydintä samasta tapauksessa dramaattisesti erilainen CB

1IR) . Näin ollen tutkimme korrelaatio NCB

1IR ja Pakt-IR yksittäisten ydintä. Ottaen huomioon suuri määrä sydämiä teki molempien parametrien (n = 892), voisimme jakaa tietoja sattumanvaraisesti testi joukko (n = 594) ja validointi asettaa (n = 298) hylsyjen. Kummassakin, merkittävä korrelaatio nähtiin, jossa hylsyjen parhaaseen neljännekseen CB

1IR olleen huomattava suurempi Pakt-IR kuin pohjassa kaksi kvartiilit (Fig. 1 B, C).

paneeli A esittää kahden kasvaimen ydintä samasta asia (Gleason pisteet 7) osoittaa suurta vaihtelua CB

1IR intensiteettiä. Heillä oli asemissa 1 ja 5 kasvaimen sarjan nuolella. Vasemmassa ydin pisteytettiin 0,75 (50% pisteet 0, 25% pisteet 1, 25% pisteet 2) yksi tutkija, ja 1 (25% pisteet 0, 50% pisteet 1, 25% pisteet 2) muiden. Oikea ydin pisteytettiin 2,75 sekä tutkijat (50% pisteet 2, 25% pisteet 3, 25% pisteet 4 yhden tutkijan; 25% pisteet 2, 75% pisteet 3 muiden tutkija). Paneeli B ja C esittävät Pakt tulokset yksittäisten hylsyjen testissä (n = 595, paneeli B) ja validointi (n = 297, paneeli C) aineistoja, jaettu likimääräinen NCB

1IR neljännestä. Tapausten määrä kussakin neljänneksessä esitetään kaaviossa yhdessä mediaani ja kvartiiliväliä. * P 0,05, ** P 0,01, *** P 0,001 vertailuja osoittaneet, muuten ole merkittäviä (Dunnin monivertailutesti seuraavat merkittävät (P 0,0001) Kruskal-Wallisin testiä. Spearman Rho varten korrelaatiot ytimen NCB

1IR ja ydin Pakt-IR olivat 0,29 ja 0,28 (molemmat P 0,0001) testissä ja validointi sarjoiksi, vastaavasti.

Association eivät osoita syy-yhteyttä, mutta tietoa tästä voidaan poimia tietoja käyttämällä epäparametrinen regressiotekniikoita. näyte (80%) ja aineisto valittiin sattumanvaraisesti ja epälineaarinen useita regressio (npreg R tilastollinen paketti) ajettiin sitten mitkä muuttujat oli merkitystä ja joita ei. Tämä prosessi toistettiin 1000 kertaa, tunnistaa vahvasti asiaan liittyvistä muuttujista. Kun Pakt-IR oli riippuva muuttuja vastauksena NCB

1IR ja pEGFR-IR, kaksi riippumatonta muuttujaa ei koskaan pois. sama päti kun Pakt-IR oli riippuva muuttuja vastauksena NCB

1IR ja ErbB2-IR, ja kun NCB

1IR oli riippuva muuttuja ja Pakt-IR ja joko pEGFR-IR tai ErbB2-IR olivat riippumattomia muuttujia. Nämä tiedot eivät lisää tietoa syy. Kuitenkin, kun NCB

1IR oli riippuva muuttuja ja Pakt-IR, pEGFR-IR ja ErbB2-IR olivat riippumattomia muuttujia, Pakt-IR jätettiin 100%: ssa tapauksista (kahta muuta muuttujaa ei koskaan pois). Käänteisessä analyysi (kun Pakt-IR oli riippuva muuttuja ja NCB

1IR, pEGFR-IR ja ErbB2-IR riippumattomia muuttujia), NCB

1IR suljettiin 80% tapauksista, kun taas kaksi muuta muuttujia ei koskaan pois. Koska syrjäytyminen oli suurempi Pakt-IR NCB

1IR kuin riippuva muuttuja kuin NCB

1IR kanssa Pakt-IR riippuva muuttuja, data viittaavat siihen, että tilanne, jolloin aktivointi Akt on alavirtaan CB

1-reseptoreihin on todennäköisempää kuin päinvastaiseen suuntaan.

Association of kasvain NCB

1IR ja Pakt-IR kanssa sairauden vaikeusasteen diagnoosin

Olemme aiemmin raportoitu, että sekä kasvain CB

1IR ja Pakt-IR tulokset tässä potilaalla materiaali liittyvät vakavuudesta taudin diagnoosi [27], [32]. Yhdistelmä kahden parametrin, kuitenkin, ei ole tutkittu. Kuviossa. 2, yksittäiset arvot tapauksia teki sekä CB

1IR ja Pakt-IR ovat värikoodatut perusteella niiden kliinisten /histopatologiset tulokset (Gleason tulokset, ilmaantuvuus etäpesäkkeitä diagnoosin, kasvaimen vaiheen ja Ki67 indeksi [toimenpide solujen lisääntymisen]). Käyrät jaetaan neljänneslohkoihin perustuvat mediaani tulokset kahden parametrit. Hajonta tontteja palvelevat lisäksi tarkoitus osoittaa, että vaikka korrelaatiokerroin CB

1IR ja Pakt-IR on erittäin merkittävä (katso edellä), se on pitkä matka todellakin selittämättä biologisesta varianssi aineisto. Tapauksia ryhmitellään Gleason tulokset 4-5, 6 tai 7, ei ollut selvää suhdetta Gleason pisteet ja asento kaaviossa. Kuitenkin tapauksissa Gleason tulokset 8-10 kerääntyneet oikeassa yläkulmassa neljänneksessä kuvaajan (Fig. 3A). Samoin tapauksissa, joissa etäpesäkkeet löydettiin diagnoosi myös taipumus kokoontua yläkulmassa oikeanpuoleinen osa kuvaajasta (Kuva. 2B), samoin kuin tapaukset, joissa on korkeampi solujen lisääntymistä (Fig. 2C) ja kasvaimen (kuvio . 2D).

Ki67 indeksi on jatkuva muuttuja vaihtelee 0-48% vuoden aineisto [34]. Erien valittiin tässä havainnollistamistarkoituksessa mutta edustaa pohja 50% ( ”Ki67 Low”), The 50-75% ( ”Ki67 väli”) ja ylin 25% ( ”Ki67 korkea”). Katkoviivat luvut osoittavat mediaani pistemäärät NCB

1IR ja Pakt-IR varten aineisto.

Paneeli A esittää sirontakuvaajan yksittäisten tapausten, niin että ryhmä nimet muut paneelit on helpompi seurata. Vuonna Kaplan-Meier tontteja esitetään Paneelit B-D,

† Pca viittaa potilaiden määrä, jotka kuolivat seurauksena niiden eturauhassyöpä aikana seurantajakson aikana. Tunniste

2 arvot ovat log-rank (Mantel-Cox) testeille P-arvot on esitetty. Paneeli B, kaikissa tapauksissa; Paneeli C, Gleason pisteet 4-6 tapauksissa; Paneeli D, Gleason pisteet 7-10 tapausta.

neljännesten lukuihin perustuvat mediaani jakaa kahden parametrien ja valmiussuunnitelmien analyysit viittasivat siihen, että jakauman kliinisten parametrien oli merkitsevästi erilainen kvadranteissa (taulukko 2). Siten esimerkiksi%: ssa tapauksista, joissa Gleason tulokset 8-10 vaihteli 19% (alhaalla vasemmalla neljänneksessä) 59% (ylhäällä oikealla neljännesympyrä) ja samankaltainen nähtiin ilmaantuvuuden etäpesäkkeitä diagnoosin, kasvain vaiheessa prosenttiosuus yksilöitä, jotka sisälsivät kasvain (% ca) ja Ki67-indeksi (taulukko 2).

Vaikka dramaattinen, data kuvassa. 2 ja Taulukko 2 ei käy ilmi, onko yhdistysten välillä biokemiallisia markkereita ja kliiniset tiedot ovat yksinkertaisesti lisäaine vai onko vuorovaikutus läsnä. Tämä tutkittiin kolme parametrien (Gleason,% ca ja Ki67-indeksi) käyttäen järjestysluku regressio (kumulatiivinen logittimalli). Saat taantumat ilman vuorovaikutusta parametri, panokset Pakt-IR ja NCB

1IR olivat merkittäviä, odotetusti (taulukko 3). Kuitenkin merkittävän panoksen vuorovaikutuksen termi Pakt-IR × NCB

1IR myös nähty Gleason pisteet ja% ca kun he olivat mukana analyysissä (taulukko 3).

Association of NCB

1IR ja Pakt-IR tiettyyn tautiin selviytyminen

Noin kaksi kolmasosaa tapauksista tietokannassa oli seurannut odote diagnoosin jälkeen, mikä on tavanomaista hoitoa protokollaa tuolloin Ruotsissa. Nämä tapaukset voivat antaa hyödyllistä tietoa suhteessa yhdistyksen tietyn biomarkkereiden tiettyyn tautiin selviytymistä. Tämä on raportoitu aikaisemmin sekä Pakt-IR ja alkuperäinen CB

1IR tulokset [27], [32]. Vuorovaikutus kahden muuttujan ei kuitenkaan ole tutkittu. Voidakseen tehdä tämän, olemme käyttäneet optimaalinen raja-arvot kahden parametrien ( 2,75 ja ≥2.75 varten Pakt-IR [32] ja Youdin cut-off-arvo NCB

1IR (≤2.75 ja 2,75). kaikkien 196 potilasta seurasi odote ja teki niin NCB

1IR ja Pakt-IR (Fig. 3A esittää jakauma-arvot), oli selkeä kuvio, jolloin tapauksia pistein sekä parametrien yläpuolella cut-off-arvojen oli huonompi ennuste kuin muut kolme ryhmää (Fig. 3B). kaksimuuttujainen Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyysi osoitti, että ennustetekijöiden toimittamat tiedot NCB

1IR oli additiivinen tarjoamia Pakt-IR (taulukko 4). tämä ei kuitenkaan ole yllättävää, sillä ryhmät ovat eri suhteissa tapauksissa eri Gleason tulokset (kts. 2A). kuitenkin Gleason tulokset (kuten mediaani split) otettiin huomioon, kahden parametrit säilyttivät additiivisuuteen (Trivariate tärkeimmät vaikutukset analyysi, taulukko 4), ja tämä näkyy Kaplan-Meier käyrät Gleason pisteet 7-10 tapausta (Fig. 3D). Vuorovaikutus Termi Pakt-IR × NCB

1IR kuitenkaan ollut merkittävä joko bivariate tai trivariate analyysit (taulukko 4).

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa olemme tutkineet suhdetta Pakt ja CB

1 eturauhassyövässä kasvaimia ja solulinjoissa selvittääkseen mahdollisuutta, että on olemassa ”Akt kytkin” eturauhassyövässä. Aluksi on ehkä syytä kantaa siihen, että aktivaatio CB

1-reseptoreihin pidetään tässä suhteessa syöpäsolun selviytymisen, kun taas monet (mutta eivät kaikki) tutkimukset solulinjoissa viitata vahingollisia vaikutuksia kannabinoidien upon syöpä solut [1] – [5], [39]. Kuitenkin vaikutukset kannabinoidien yhteydessä kasvainsolujen voi olla monimutkaisempi. Tämä on osoitettu elegantisti seerumin puutteessa NCI-H292 keuhkosyöpäsoluissa: 300 nM Δ

9-tetrahydrokannabinoli (THC) tuottaa vahva kasvu solujen lisääntymisen, kuten arvioinut tymidiininsisällytysmääritys, kun taas suuremmat pitoisuudet THC ( 4-10 uM) tuottavat merkittävän apoptoosin [40]. Mitogeenisella vaikutus submikromo- laarisena pitoisuus on 50 ja 100 nM THC upon tymidiinin nähtiin PC-3 syöpäsolujen taas 500 nM THC eteen vaikutus [10]. Korkeammat pitoisuudet THC tuottaa apoptoosin näissä soluissa, vaikkakin tämä näyttää välittyvän CB reseptori-riippumaton mekanismi [15]. On huomattava, että tutkimukset tutkivat antiproliferatiivisia vaikutuksia kannabinoidien usein mikro- sijaan nano-moolipitoisuuksien ligandien (keskustelua, katso [2], [39]). Lopuksi, antiproliferatiivisia vaikutuksia CB

1 -reseptorin antagonistit /käänteiset agonistit kuten rimonabantille on myös raportoitu syövän solulinjoissa [41], [42], vaikka se ei ole selvää, ovatko tällaiset vaikutukset johtuvat saarto CB

1-reseptoreihin tai off-tavoite toimia yhdisteiden.

on kaksi pääasiallista Selvityksen, joita käsitellään vuorollaan:

CB

1-reseptorin ilmentymisen ja Pakt ilme ovat korreloivat positiivisesti eturauhassyövän

Yksi ennusteet Pakt kytkin malli on, että ilmaus CB

1-reseptoreihin olisi korreloi positiivisesti Pakt kasvainsoluissa. Pakt on alavirran efektorimolekyylin monenlaisia ​​signalointireittien. Tämä nostaa riskiä väärän negatiivisen, jossa yhdistyksen välillä CB

1-reseptoreihin ja Pakt menetetään melua. Kuitenkin erittäin merkittävä positiivinen korrelaatio CB

1IR ja pAktIR nähtiin ja korrelaatio säilytettiin tasolla yksittäisten hylsyjen. Lisäksi korrelaatio pysyi merkittävän vaikka ohjataan kahden muun reseptorien tiedetään pari Akt eli pEGFR ja ErbB2 [36], [37].

CB

1IR ja Pakt-IR liittävät sairauden vakavuuden diagnoosin

Useat tutkimukset ovat tutkineet yhdistys Pakt-IR sairauden vaikeusasteen arvioituna Gleason pisteet, kasvain vaiheessa ja Ki67 indeksin [32], [43] – [46]. Yleensä korkea Pakt-IR liittyy ankarampaa muodossa tauti diagnoosin, joskin erot kohortteja (keskustelua, katso [32]). Mitä CB

1IR kaksi ikäluokat on tutkittu. Tutkimuksessamme käyttäen esillä suuri kohortti saatuja näytteitä diagnoosin seuraavat höyläysleikkaus alempien virtsateiden oireita, selvää yhteyttä Gleason pisteet ja muita histopatologisia toimenpiteet todettiin [27]. Sen sijaan on paljon pienempi (n = 35) kohortin saatuja näytteitä eturauhasen, ilman selvää yhteyttä välillä CB

1-reseptorin ilmentymisen (arvioitiin Western blot kokeissa ja QT-PCR) ja Gleason arvosana nähtiin, vaikka ilmaisu taso oli korkeampi kuin nähty ohjattu kudoksen [28] Riippumatta siitä, onko potilaat saivat muita hoitoja ennen eturauhasen ei ilmoitettu.

Koska sekä CB

1IR ja Pakt-IR liittyy tautiin vakavuudesta meidän kohortin, olisi odotettavissa, että tapaukset, joissa huippupisteet sekä merkkiaineiden olisi yliedustettuina Gleason tulokset 8-10 ja muita histopatologisia parametrit sairauden vakavuudesta. Tämä oli todellakin löydetty. Kuitenkin suhteessa Gleason pisteet ja prosentteina näytteestä, joka oli kasvaimeen liittyviä, vuorovaikutusta NCB

1IR ja Pakt-IR nähtiin. Aktivointi Akt tuottaa erilaisia ​​solujen vaikutuksia, mukaan lukien inaktivaatio pro-apoptoottisen proteiinin BAD ja lisääntynyt kasvu eturauhasen syöpäsolujen ksenograftimallia [47], [48]. Meidän havainnot ovat yhdenmukaisia ​​sellaista mallia, että korkea CB

1-reseptorin ilmentymisen ruokkia lisätä Akt signalointi [30] ylittämällä jotka johtuvat muun signaalinvälitysreittien, mikä lisää patologinen luonnetta kasvainsolujen ja siten sairauden vakavuuden . Kuinka CB

1-reseptorin aktivoitumisen syötteet vaikuttamaan Akt signalointia parhaiten tutkitaan syöpäsolulinjoissa. Kuitenkin, kiinalaisen hamsterin munasarjasoluissa, jotka oli transfektoitu CB

1-reseptoreihin, CB-reseptorin agonistit, kuten THC: tä (1 uM), CP55,940 (25 nM) ja HU-210 (25 nM) tuottaa vahvan aktivointi Akt.