Krooninen sairaus

tiivistelmä

Useita myelooma (MM) on klonaalinen sairaus plasman soluja, jotka on edelleen parantumaton vaikka kynnyksellä useita uusia hoitomuotoja. Tässä tutkimuksessa pyrittiin hahmotella vaikutusta käärmeen myrkky uutetaan

Walterinnesia aegyptia

(WEV) yksinään tai yhdessä piidioksidin nanohiukkasten (WEV + NP) on ensisijainen MM soluja eristettiin potilaista diagnosoitu MM samoin kuin kaksi MM solulinjoissa, U266 ja RPMI 8226. IC

50-arvot WEV ja WEV + NP, että merkittävästi vähentynyt MM solujen elinkelpoisuuden vaikuttamatta elinkelpoisuutta normaalien perifeeristen mononukleaaristen solujen (PBMC: t) määritettiin olevan 25 ng /ml ja 10 ng /ml, vastaavasti. Vaikka molemmat WEV (25 ng /ml) ja WEV + NP (10 ng /ml) vähensi CD54 pinnalla ilmenemisen vaikuttamatta ilmentymisen CXCR4 (CXCL12-reseptori) on MM-soluissa, ne vähensi kykyä CXC-kemokiini-ligandin 12 (CXCL12 ) aikaansaamiseksi aktiinisytoskeletonille uudelleenjärjestely ja edelleen alentamiseen kemotaksista. On todettu, että sitoutuminen CXCL12 reseptoriinsa CXCR4 aktivoi useita solunsisäisiä signaalintransduktioreitteihin jotka säätelevät MM solu kemotaksista, tarttuvuus, ja leviämisen. Olemme havainneet, että WEV ja WEV + NP vähensi selvästi CXCL12 /CXCR4-aktivaatio AKT, ERK, NFKB ja Rho-A käyttäen western blot -analyysiä; kumosi CXCL12 välittämää leviämisen MM-soluihin käyttäen CFSE määritystä; ja indusoi apoptoosin MM solussa määritettynä PI /anneksiini V kaksinkertainen värjäyksessä, mitä seurasi virtaussytometria-analyysi. Seuranta ilmentyminen B-solujen CCL /lymfooma 2 (Bcl-2) perheenjäsenet ja niiden rooli apoptoosin induktion hoidon jälkeen WEV tai WEV + NP paljasti, että yhdistelmä WEV NP voimakkaasti vähentynyt ilmentyminen apoptoosin vastaisen efektorit Bcl-2, Bcl

XL ja Mcl-1; päinvastoin lisääntynyt ilmentyminen pro-apoptoottisen efektoreja Bak, Bax ja Bim; ja muuttanut mitokondrion kalvon potentiaalia MM soluissa. Yhdessä meidän tiedot osoittavat biologisia vaikutuksia WEV ja WEV + NP ja taustalla olevien mekanismien myelooman vastaisen syöpäsoluja.

Citation: Badr G, Al-Sadoon MK, Abdel-Maksoud MA, Rabah DM, El- Toni AM (2012) Cellular and Molecular Mechanisms taustalla antituumorivaikutusten kohdistama

Walterinnesia aegyptia

Venom Yhdistettynä Silica nanohiukkasten vastaan ​​Multippeli myelooma syöpäsolutyyppien. PLoS ONE 7 (12): e51661. doi: 10,1371 /journal.pone.0051661

Editor: Jin Q. Cheng, H.Lee Moffitt Cancer Center Research Institute, Yhdysvallat

vastaanotettu: 18 elokuu 2012; Hyväksytty: 06 marraskuu 2012; Julkaistu: 10 joulukuu 2012

Copyright: © 2012 Badr et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat kansallinen suunnitelma Science and Technology (https://npst.ksu.edu.sa/index.php?module=news page=details_en id=40) rahoittama kuningas Abdulaziz kaupunki tiede ja teknologia (http : //www.kacst.edu.sa/en/Pages/default.aspx) kautta hanke numero 10 BIO969-02. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kaikki kirjoittajat lukenut ja sopineet sisältö käsikirjoituksen ja hyväksyi jättämisestä. Kirjoittajat julistaa ole eturistiriitoja, toteavat, että käsikirjoitus ei ole julkaistu tai toimitettu muualla.

Johdanto

hematologisia syöpiä ovat yksi yleisimpiä tyyppejä ihmisen syövissä maailmanlaajuisesti ja aiheuttaa korkeaa kuolleisuutta hinnat. Koska toiseksi yleisin hematologinen syöpä [1], multippeli myelooma (MM) on maligniteetti plasman soluja, joka kärsii noin 20000 ja tappaa noin 10000 ihmistä Yhdysvalloissa vuosittain [2]. Kemokiinit ovat suuri perhe alhaisen molekyylipainon (8-10 kDa) sytokiinin kaltaisia ​​proteiineja, joilla on kemoattraktantti ominaisuudet kohti G-proteiiniin kytkeytyvien seitsemän transmembraani- reseptoreita leukosyyttien [3]. Useat tutkimukset ovat osoittaneet tärkeän roolin kemokiinien ja niiden reseptorien patogeneesiin MM-solujen [4]. Kemokiinireseptorit osoitettiin ilmentyvän syöpäsolujen ja toimimaan kaikissa vaiheissa syövän etenemisen, mukaan lukien neoplastisen transformaation, kemotaksista ja invaasio, angiogeneesi, kloonilaajenemisen ja kasvua [5]. MM-solut ilmentävät vaihtelevia määriä kemokiinireseptoreiden [6]. Lukuisia ilmaistuna kemokiinireseptorien, CXCR4 on eniten ilmaistaan ​​MM ja monia muita syöpäsoluja [7]. CXCR4-ligandi, CXCL12, ekspressoituu voimakkaasti keuhkoissa, maksassa, luuytimessä ja imusolmukkeiden, jotka kaikki ovat yhteisiä metastaattisen kohteita monien syöpien riskiä. Lisäksi säätelyä CXCR4 on usein havaittu eri syövissä, kuten paksusuoli- karsinooma, lymfooma, rintasyöpä, glioblastooma, leukemia, eturauhassyöpä, MM ja haimasyövän [6]. Lisäksi useat tutkimukset ovat osoittaneet, että CXCR4 on myös yleisin ja toiminnallinen kemokiinin reseptorien ilmaistaan ​​MM-solut, ja siksi voi olla tärkeä rooli sairauden patogeneesissä. Tuoreet tiedot viittaavat osallistumista CXCL12 /CXCR4 ylläpitoon ja selviytymistä MM solujen sekä in vivo ja in vitro -malleissa [8]. Kuitenkin seuraava stimulaatio CXCR4 kanssa CXCL12 MM soluissa, aktivointi alavirran signalointireittien epäselviä ja ymmärrykseen näistä signalointipolkujen on tärkeä molekyylikohteena MM hoitoon [9]. Nuclear tekijä-KB (NF-KB) ja AKT osallistuvat kaksi suurta solujen selviytymistä polkuja, jotka ovat usein konstitutiivisesti aktivoitua syöpäsoluissa ja edistää merkittävästi chemoresistance syöpäsolujen [10]. Kuitenkin inhibitio ERK-fosforylaation (toinen tärkeä solujen eloonjäämistä reitti) edistää dihydroartemisiniini-indusoitua apoptoosia in maksasyövän [11]. Viimeaikaiset tiedot osoittavat, että thymoquinone (luonnollinen kasviuutetta) indusoi MM solujen kasvun pysähtymisen kumoamalla CXCL12-välitteisen signaloinnin ja kemotaksista, sekä lisäämällä CD95 ekspressiotasot ja herkkyyden MM solujen Fas-välitteisen apoptoosin [12]. Monet tutkimukset ovat selvitetty, että epäonnistuminen apoptoosiin on liitetty kasvainten kehittymiseen ja kestävyys syövän hoidossa [13]. Näin ollen apoptoosin induktio MM-solut voivat johtaa niiden regression ja parantaa taudin ennusteen [14]. Näin ollen aineet, jotka kykenevät indusoimaan apoptoosin voivat olla käyttökelpoisia kemoterapeuttisia aineita vastaan ​​MM. Useimmissa kasvainsolut, apoptoosin tapahtuu kahta eri signalointireittien: ulkoista ja luontainen apoptoosin polkuja. Sisäisen reaktiotien liittyy muutoksia mitokondrion kalvon potentiaali (ΔΨm) [15], ja sen vuoksi, mitokondrion kalvon potentiaalia mittauksia voidaan käyttää erottamaan solut, jotka ovat apoptoottisiksi ja eloonjääneiden solujen. Kuitenkin, Bcl-2-perheen proteiinien koostuu näkyvä säätelijöitä apoptoosin signaloin- usein kavallettu monissa syövissä, mukaan lukien keuhkosyöpä, lymfooma, rintasyöpä ja MM [16]. Jäseniä tämän proteiinin perheen voidaan jakaa syöttämällä antagonistit, kuten Bcl-2, ja kuolema agonistit, kuten Bak: n ja Bax [17]. Bcl-2-perheen, Bcl-2 on prototyyppinen anti-apoptoottisen proteiinin, joka on usein yli-ilmentynyt useissa eri ihmisen syöpiä [18]. Bcl-2-yli-ilmentyminen on liitetty syövän chemoresistance, kun taas korkea pro-apoptoottiset proteiinit, kuten Bax, edistää apoptoosia ja herkistää kasvainsolut eri syövän hoitomuotoja.

Vaikka maisema MM hoito on nopeasti muuttuvassa, tämä tauti on pitkälti parantumaton [19]. Useat kemoterapeuttiset aineet (esim. Vinkristiini, deksametasoni ja melfalaani) on nykyisin käytetään hoitamaan MM. Kuitenkin nämä lääkkeet on se haitta, kasvaa riski kehittää toissijaisia ​​hematologisia maligniteetteja, kuten hoitoon liittyvistä myelodysplastista oireyhtymää [20]. Siksi on ratkaisevan tärkeää tarvetta tunnistaa biologisia tekijöitä ja mekanismeja, jotka ovat vastuussa MM solujen eloonjäämistä, kasvaimen kehittymisen ja lääkeresistenssin [12].

luonnollisia yhdisteitä on käytetty adjuvantteina yhdessä kemoterapian vähentämiseksi sivuvaikutuksia ja tehostaa syöpähoitojen [21]. Viime vuosina lukuisia luonnon tuotteet on tutkittu niiden käyttöä syövän hoidossa [22], [23]. Käärmeen myrkky on monimutkainen seos monista aineet, joilla on laaja kirjo biologisia vaikutuksia, mukaan lukien toksiinit, entsyymit, kasvutekijät, aktivaattoreita ja inhibiittoreita. Luonnollinen myrkkyjä, erityisesti subletaali annokset käärmeen myrkky, on potentiaalia pienentää kiinteiden kasvainten ja estää angiogeneesiä [24]. Meidän viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että anti-kasvain potentiaalia käärmeen myrkky

Walterinnesia aegyptia

(WEV) ihmisen rintasyöpä MDA-MB-231, sekä sen vaikutus normaalin hiiren perifeerisen veren mononukleaarisissa soluissa (PBMC: t) [25], [26]. Lisäksi muut tiedot ovat osoittaneet, että

Vipera lebetina turanica

käärmeen myrkky nanogrammoina pitoisuusalueella estää hormoni-tulenkestävien ihmisen eturauhasen syöpäsolujen kasvua, ja vaikutus liittyy NFKB signaali-välitteisen apoptoosin induktion [27] . Nanohiukkasten kuljettaa kemiallisia terapeuttisia ovat osoittaneet erittäin lupaavilta syöpäpotilaiden hoitamiseksi. Kun ladattu syöpälääkkeiden, nanohiukkaset voivat menestyksekkäästi lisätä lääkeainekonsentraatioille syövän kudoksissa ja toimivat solutasolla parantamaan antituumoriteholla. Nanohiukkasten voidaan endosytoidut ja /tai fagosytoituvat soluja, jolloin sisäistämisen kapseloidun lääkeaineen [28]. Ei ole saatavilla tietoja vaikutukset käärmeen myrkky yhdessä nanohiukkasten MM syöpäsoluja. Siksi tässä tutkimuksessa selvitimme vaikutuksia

Walterinnesia aegyptia

myrkky (WEV), yksin ja yhdessä piidioksidin nanohiukkasten (WEV + NP). Me kiinnitti erityistä huomiota solu- ja molekyylitason mekanismit anti-kasvain toimintaa kohdistuu maahanmuuttoa, invaasio, proliferaatio ja apoptoosi ensisijaisen MM soluja eristettiin MM potilaista sekä 2 ihmisen MM solulinjoissa (U266 ja RPMI 8226).

Materiaalit ja menetelmät

valmistaminen Walterinnesia Aegyptia Venom

Walterinnesia aegyptia

käärmeet kerättiin keskialueella Saudi Arabia (Ei erityistä luvat olivat tarpeen kuvatun kenttätutkimuksia sekä mitään erityisiä oikeuksia edellytettiin näille kohteille /toimintaa, koska sijainti ei ole yksityisessä tai suojattu millään tavalla ja kenttätutkimuksia ei liity uhanalaisia ​​tai suojeltuja lajeja). Käärmeet säilytettiin Serpentarium vuonna eläintieteen laitos College of Science King Saud yliopiston. Käärmeet lämmitettiin päivittäin yhdeksän tuntia käyttäen 100 watin lamppu, ja vesi oli aina saatavilla. Käärmeet syötettiin kasvatettujen hiiret joka 10 14 päivän ajan. Kaikki eläin menettelyt olivat standardien mukaisesti esitetty suuntaviivoja hoitoa ja käyttöä koe-eläinten käsittelevä komitea tarkoitus valvonta eläinkokeiden (CPCSEA) ja National Institutes of Health (NIH) protokollaa. Tutkimuksen protokolla hyväksyi eläinten eettisen komitean on eläintieteen laitos, College of Science, Kuningas Saudin yliopisto. Myrkky oli lypsettävä aikuisten käärmeitä, lyofilisoitu ja saatettu 1X fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) ennen käyttöä.

yhdistelmä Snake Venom kanssa Silica nanohiukkasten

Silica nanohiukkasten ja niiden yhdistäminen käärme myrkky oli valmisteltu kuningas Abdullah Institute for Nanoteknologia king Saud yliopiston. Double mesohuokoisella core-silika nanopalloihin kuoret muodostettiin noin piidioksidia ytimien käyttäen anionista pinta-aktiivista ainetta on prosessi, jossa kiinteällä silika-ydin oli muuttunut mesohuokoisen yhteen. Ensimmäinen, synteesiä varten kiinteällä silika-ytimien, 0,875 ml ammoniakin vesiliuosta lisättiin liuokseen, joka sisälsi 18 ml etanolia ja 2,6 ml deionisoitua vettä, minkä jälkeen lisättiin 1,5 ml tetraetyyliortosilikaatti (TEOS) liuokseen voimakkaasti sekoittaen. Saatua seosta kuumennettiin 30 ° C: ssa 60 min, ja piidioksidi sakka kerättiin sitten sentrifugoimalla ja pestiin kolme kertaa vedellä. Molaarinen koostumus suspension oli seuraava: TEOS: EtOH: NH

3: H

2O = 1:46.9:3.2:20.5.

Toiseksi, synteesiä varten mesohuokoisella ydin-kuori- nanospheres käyttäen anionista pinta-aktiivista, piidioksidi SiO

2 hiukkasia dispergoitiin 15 ml: aan H

2O ultraäänikäsittelyllä 10 minuuttia. Tukahduttaa piidioksidi ydin taajamassa, 1 g /l polyvinyylipyrrolidonia lisättiin jatkuvasti sekoittaen 60 min. Sen jälkeen, 0,1 ml, 0,2933 g (1 mmol) ja 1,5 ml 3-aminopropyylitrimetoksisilaania (jalkaväkimiinojen), N-lauroyylisarkosiinia natriumia (Sar-Na) ja TEOS lisättiin, vastaavasti, reaktioseokseen jälkeen sekoitettiin 50 ° C: ssa 2 h. Lopullinen kiinteä aine otettiin talteen sentrifugoimalla, pestiin deionisoidulla vedellä ja kuivataan uunissa 60 ° C: ssa 12 h Malline poisto saatiin aikaan lämpökäsittelemällä ilmavirrassa 550 ° C: ssa 6 tunnin ajan. Tuloksena moolisuhde oli TEOS: H

2O: jalkaväkimiinojen: Sar-Na: HCl: PVP = 1:331.6:0.08:0.14:0.06:5 x 10

-3. Sitten yhteensä 25 mg mesohuokoisella silika nanohiukkasten lisättiin liuokseen, joka sisälsi 50 mg /ml myrkkyä veteen. Suspensiota sekoitettiin 2 tunnin ajan; veden haihtuminen estettiin. Mesohuokoisella piidioksidi nanohiukkasten ladattu myrkky otettiin talteen käyttämällä nopeita sentrifugoimalla ja kuivattiin tyhjöuunissa 60 ° C: ssa. Transmissioelektronimikroskopia (TEM) analyysi suoritettiin käyttämällä JEOL JSM-2100F elektronimikroskoopilla (Japani) käytettiin 200 kV. Typpi sorptio Isotermien mitattiin 77 K, Quantachrome NOVA 4200 analysaattori (USA). Ennen mittaamista, näytteitä poistettiin kaasut tyhjiössä 200 ° C: ssa vähintään 18 tuntia. Brunauer-Emmett-Teller (BET) -menetelmällä on käytetty laskemaan ominaispinta-ala (

S

BET) käyttäen adsorptiota dataa suhteellinen paine välillä 0,05-0,35. Käyttämällä Barrett-Joyner-Halenda (BJH) malli, huokosten määrä ja huokoskoko jakaumat olivat peräisin adsorptio oksat Isotermien ja koko huokostilavuuksia (

V

t) estimoitiin adsorboituneet summan suhteellinen paine

P Twitter /

P

0 of 0,992.

Mitä vaikutus reaktioajan vuorovaikutuksesta piidioksidi nanohiukkasten ja käärmeen myrkky, vaihtelu synteesi reaktioaika kiinteällä silika-ytimien tuloksena muodostumiseen kahden mesohuokoisella ydin-kuori piidioksidi aloilla, kuten on esitetty kuviossa S 1. sekä 1 ja 6 h reaktioaika, homogeeninen mesohuokoisella silika kuoret havaittu. Kuitenkin 1 tunnin reaktioaika, piidioksidi ytimet näytti olevan melko tiheä. Lisäämällä reaktioaikaa jopa 6 h johti selkeästi ja äännettävissä säteittäin suunnattu mesohuokosissa jotka ankkuroitiin sisällä ydin ja laajennettu ytimestä keskustasta asti kuori, kuten kuvassa S 1B. Hajoaminen ydin toisin kasvaa reaktioaika 1-6 h ehdotti ankkuroiminen enemmän mesohuokosista ja menetys ytimen tiheys, jota myös osoitetaan korkea huokostilavuus. Kuitenkin kuoren paksuus on noin 50 nm ei muuttunut merkittävästi virittämällä reaktioaikaa. Analyysi hiukkaskokojakauman osoittivat, että molemmat näytteet näytetään hiukkaskoko noin 300 nm. Kuitenkin 6 h reaktion näyte hallussaan kapeampi jakauma kuin 1 h näytteessä, kuten kuviossa S 2. N

2 adsorptio-desorptio isotermi kuviossa S 3, isotermien eri pinta-aktiivisen aineen reaktioajat näytteillä tyyppi IV isotermi ominaisuus mesohuokoisella materiaaleja yhteensä huokosten tilavuudella 0,342 ja 0,416 cc.g

-1 on 1 ja 6 h reaktioajat, vastaavasti. Havainto kolmion hystereesisilmukan välillä adsorptio- ja desorptio oksat voivat johtua rinnakkaiselo kuusikulmainen ja lamellivalurauta vaiheissa. BET-pinta-alat olivat 304,08 ja 440,73 m

2 /g klo 1 ja 6 h reaktioajat, vastaavasti. On selvää, että rakenteen ominaisuudet, että mesohuokoisella ydin-kuori-rakenteet parannettu lisäämällä reaktioaikaa.

Solut ja reagenssit

Ihmisen MM solulinjat RPMI8226 ja U266 saatiin American Type Culture Collection (ATCC) (Rockville, MD). Nämä MM-soluja ylläpidettiin rutiinisti R-10 viljelyväliaineeseen (RPMI 1640, joka sisälsi 10% naudan sikiön seerumia ja 1% L-glutamaattia), ja viljelmät perustettiin 5 x 10

5 elävää solua /ml. Suurin solutiheys perustettiin 1-2 x 10

6 solua /ml. Soluviljelmät olivat vapaita

Mycoplasma

, kuten arvioitiin käyttäen entsyymi-immunosorbenttimääritys (ELISA) (Boehringer, Mannheim, Saksa).

Luuytimen (BM) imemiseksi näytteiden 70 potilasta MM saatiin Etelä Egypti Cancer Institute ja Assiut yliopistosairaalassa Assiut yliopistossa Egyptissä. Luuytimen mononukleaarisia soluja eristettiin Ficoll-Hypaque-tiheysgradienttisentrifugoinnilla (Pharmacia LKB Biotechnology, Uppsala, Ruotsi) heparinisoidusta BM aspirate peräisin MM potilaista. Plasma-solut puhdistettiin edelleen BM mononukleaarisoluissa positiivinen valinta anti-CD138-vasta-aine-pinnoitettu immunomagneettisia helmet mukaan valmistajan ohjeiden (MACS, Miltenyi Biotech). MACS puhdistus johdonmukaisesti johti 95%: n puhtaudella ensisijainen MM solupopulaation (seuraamalla solun pinnan ilmentyminen CD38 ja CD45) ja elinkelpoisuus 90% (jota trypaanisinieksluusiolla menetelmä).

PBMC: t terveistä luovuttajista puhdistettiin käyttäen standardia Ficoll-Paque-gradienttisentrifugoinnilla mukainen menetelmä valmistajan ohjeiden (Amersham Pharmacia, Uppsala, Ruotsi). Lyhyesti, heparinisoitua verta, joka oli laimennettu 1:01 fosfaatilla puskuroituun suolaliuokseen (PBS), varovasti kerrokseksi Ficoll-Paque-gradientilla, ja sentrifugoitiin 20 min ajan 1,020 x

g

. Solurajapinta kerros huolellisesti talteen ja solut pestiin kaksi kertaa PBS: ssä ja suspendoitiin uudelleen RPMI 1640

anti-proliferatiivista vaikutusta WEV, WEV + NP tai NP yksin U266 ja RPMI 8226-solulinjat ja eristetty normaalin PBMC: t määritettiin käyttäen 3- (4,5-dimetyylitiatsol-2-yyli) -2,5-difenyylitetratsoliumbromidia (MTT) oton menetelmällä. Solut maljattiin 1 x 10

6 solua /ml 2 ml kasvatusliuosta kuudessa-kuoppaisille Costar-levyille (Corning, Corning, NY). Soluja käsiteltiin eri pitoisuuksilla WEV tai WEV + NP 1, 2, 6, 12, 24, 36 tai 48 h, ja sytotoksisuus ilmaistiin suhteellisena prosenttiosuutena OD-arvot mitattiin ohjaus käsittelemättä (0), NP-, WEV- ja WEV + NP-käsitellyt solut. Morfologisia muutoksia havaittiin altistuksen jälkeen NP, WEV ja WEV + NP käyttäen vaihe-kontrastin käänteinen mikroskooppi (Olympus, Japani).

Ethics lausunto

käärme kokoelma keskialueelta Saudi Arabia mitään erityisiä lupia olivat tarpeen kuvattu kenttätutkimuksia sekä mitään erityisiä oikeuksia edellytettiin näille kohteille /toimintaa, koska sijainti ei ole yksityisessä tai suojattu millään tavalla ja kenttätutkimuksia ei liity uhanalaisia ​​tai suojeltuja lajeja. Koska käärmeet syötettiin kasvatettujen hiiret joka 10 14 päivään, kaikki eläinten menettelyt olivat standardien mukaisesti esitetty suuntaviivoja hoitoa ja käyttöä koe-eläinten käsittelevä komitea tarkoitus valvonta eläinkokeiden (CPCSEA) ja National Institutes of Health (NIH) protokollaa. Tutkimuksen protokolla hyväksyi eläinten eettisen komitean on eläintieteen laitos, College of Science, Kuningas Saudin yliopisto. BM aspirate näytteet saatiin potilailta tunnistetaan MM at Assiut yliopistollisessa sairaalassa. Kaikessa Tutkimuksen hyväksyi Assiut yliopiston eettisen komitean, ja kaikki potilaat toimitti kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen vastaavasti Helsingin julistuksen.

virtaussytometria

Solun pinta-antigeenin ilmentyminen määritettiin single -parametrin fluoresenssi-aktivoitujen solujen lajittelija (FACS) käyttäen seuraavia monoklonaalisia vasta-aineita (mAb: t): (i) PE-konjugoitu anti-CCR1, anti-CCR3, anti-CCR5 (klooni +45531,111), anti-CCR7: (klooni 150503), anti-CCR6 (klooni +53103,111), anti-CXCR3, anti-CXCR4 (klooni +44717,111) ja anti-CXCR5, kaikki hankittiin R ja (ii) PE-konjugoitu anti-CD38, anti-CD44 ja anti-CD138 (lgG1), FITC-konjugoitu anti-CD62L, anti-CD49d, anti-VLA4, anti-α4β1, anti-α4β7 ja anti-CD54, ja FITC- ja PE-konjugoidulla hiiren isotyypin kontrolli-mAb: t, kaikki ostetaan BD Biosciences. FACSCalibur virtaussytometrillä väline (BD-Pharmingen), käytettiin tiedonkeruu ja analyysi. Sen jälkeen elävien solujen ruiskutus, 15000 tapahtumaa näytettä kohti analysoitiin. Kunkin markkerin, kynnys positiivisuus määritettiin kuin epäspesifinen sitoutuminen havaitaan, kun läsnä on asiaan isotyyppikontrolli-mAb: lla.

F-aktiini Polymerointi määritys

MM soluja viljeltiin 12 tunnin ajan viljelyalusta täydennettynä tai ilman NP, WEV tai WEV + NP ennen F-aktiini polymerisaatiokoestuksessa. Solunsisäistä F-aktiini polymerointi arvioitiin kuten aiemmin on kuvattu [29]. Lyhyesti, solut kerättiin ja suspendoitiin uudelleen (4 x 10

6 /ml), HEPES-puskuroidussa RPMI 1640 37 ° C: ssa tai ilman CXCL12 (250 ng /ml). Ilmoitettuina aikoina, solususpensioita (100 ui) lisättiin 400 ul: aan määrityspuskuria, joka sisälsi 4 x 10

-7 M FITC-leimatun -falloidiinia 0,5 mg /ml L-α-lysofosfatidyylikoliini (molemmat valmistajalta Sigma-Aldrich) ja 4,5% formaldehydiä PBS: ssä. Kiinnitetyt solut analysoitiin käyttämällä virtaussytometriaa, ja keskimääräinen fluoresenssi-intensiteetti (MFI) määritettiin kullekin näytteelle. Prosentuaalinen muutos MFI laskettiin kullekin näytteelle kussakin aikapisteessä käyttäen seuraavaa kaavaa: (1- (MFI ennen kuin lisättiin CXCL12 /MFI lisäämisen jälkeen CXCL12) x 100.

In vitro Kemotaksisanalyysit

kemokiini-riippuvainen kulkeutumista MM-solujen mitattiin käyttämällä in vitro 2-kammion migraatiokokeessa (käyttäen Transwell levyt hankittiin Costar, Cambridge, MA), mitä seurasi virtaussytometria-analyysillä. Kaikki kemotaksismäärityksiä suoritettiin pre -warmed muuttoliike puskuri (RPMI 1640, joka sisälsi 1% FCS). kaikkiaan 600 ui muuttoliikkeen puskuria yksin tai täydennetty CXCL12 (250 ng /ml) (R 0,05. * P 0,05, WEV saaneista vs. kontrolli; # P 0,05, WEV + NP-käsitelty vs. kontrolli; + P 0,05, WEV + NP saaneilla vs. WEV saaneista.

Tulokset

WEV ja WEV + NP kasvua estäviä MM Cells

elektronimikroskooppitutkimukset kuvia double mesohuokoisella ydin-kuori piidioksidi nanospheres (DMCSSs) ennen (A) ja sen jälkeen (B) myrkky lastaus on esitetty. Nämä kaksi kuvaa osoittaneet todisteita lastaus käärmeen myrkky osaksi mesohuokosissa of DMCSSs. Venom-vapaa DMCSSs (A) osoittivat selvän mesohuokosissa tai mesochannels. Kuitenkin, kuten kuviossa 1B on esitetty mesohuokosten ja DMCSSs on tukossa myrkky molekyylejä ja näin ollen mesohuokosten venom ladattu DMCSS ei voi selvästi nähdä että olemassa venom sisällä niiden kanavia. Lisäksi, myrkky molekyylit voidaan myös havaita ympäri ulkopinnan DMCSSs. Zhao

et al.

, Ovat raportoineet, että hiukkaskoko nanocarriers käytetään lääkeaineen järjestelmien pitäisi olla välillä 50 ja 300 nm [30]. Kirjoittajat kuvattu hiukkasten koko on yli 300 nm, merkittävä osa hiukkasista jää loukkuun keuhkoihin ja maksaan, kun taas liian pieni partikkelikoko ei ole tehokasta huumeiden lastaus- tai lääkeannostelun. Näiden kriteerien perusteella, DMCSSs-6h näyte on valittu lastaamiseen käärmeen myrkky, koska sillä oli ylivoimainen rakenneominaisuuksien, pinta-ala 440 m

2 /g ja kokonaishuokostilavuus 0,416 cm

3 /g, paksumpi piidioksidia kuori (40 nm) ja hyväksyttävä partikkelikoko. Lisäksi olemme viime aikoina tunnettu optimaalinen ominaisuuksien piidioksidin nanohiukkasten mallia käytimme toimittaa luonnontuotteita osaksi MM solulinjaan sekä normaaliin soluihin [31].

elektronimikroskooppitutkimukset kuvia kaksinkertaisen mesohuokoisella ydin-kuori piidioksidi nanopalloina (DMCSSs) ennen (A) ja sen jälkeen (B) myrkky lastaus. Solujen elinkelpoisuus arvioitiin käyttäen MTT-määritystä. RPMI 8226-solut (C), U266-soluja (D) ja normaaleissa PBMC: t (E) käsiteltiin yön yli eri pitoisuuksilla (0, 1, 5, 10, 25, 50, 100 ja 1000 ng /ml), NP (avoimet ympyrät) , WEV (harmaat kolmiot) tai WEV + NP (suljettu musta neliö). RPMI 8226-soluja (F), U266-solujen (G) ja normaaleissa PBMC: t (H) käsiteltiin 25 ng /ml NP (avoimet ympyrät), 25 ng /ml WEV (harmaa kolmiot) tai 10 ng /ml WEV + NP (suljettu musta neliö) eri inkubaatioaikoja (0, 1, 2, 6, 12, 24, 36 ja 48 h). Kerätyt tiedot itsenäisestä kokeesta (n = 5) on esitetty, ja tulokset on esitetty keskimääräisenä elinkelpoisten solujen prosentuaalinen ± SEM.

Näiden nanohiukkasten malli, Ensin tutkittiin kyky WEV ja WEV + NP indusoimaan kasvun pysähtymistä MM soluissa.