Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

On hyvä näyttöä kirjallisuudessa että kannabinoidijärjestelmän häiriintyy peräsuolen syöpä. Tässä tutkimuksessa olemme tutkineet, onko CB

1 -reseptorin immunoreaktiivisia intensiteetti (CB

1IR intensiteetti) liittyy sairauden vakavuuden ja lopputulos.

Menetelmät /Principal Havainnot

CB

1IR arvioitiin formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut näytteet kerätään peräkkäistä tarkoituksessa aikana primaarikasvaimen kirurgista resektiota useista tapauksista diagnosoitu kolorektaalisyöpä. Kasvaimen keskus (n = 483) ja invasiivisia eteen (n = 486) CB

1IR pisteytettiin välillä 0 (poissa) 3 (voimakas värjäytyminen) ja analysoitiin kuten mediaani split eli CB

1IR 2 ja ≥2. Mikrosatelliitti vakaa, mutta ei mikrosatelliitti instable kasvaimet (kuten tuomittu perusteella immunohistokemiallinen määritys neljän mismatch korjaus proteiinit), oli merkittävä positiivinen yhteys kasvaimen luokan kanssa CB

1IR intensiteettiä. Ero mikrosatelliittimerkki vakaa ja epävakaa kasvaimia tämän yhdistyksen CB

1IR liittyi CpG-saarekkeen metylaatiostatuksen tapauksista. Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyyseissä osoitti merkittävästi CB

1IR että tautikohtaista eloonjäämisen mikrosatelliittimerkki vakaa kasvainten säädettäessä kasvainten vaiheessa. Tapauksissa vaiheen II microsatellite vakaa kasvaimia, oli merkittävä vaikutus sekä kasvaimen keskustasta ja edessä CB

1IR upon tautikohtaisia ​​selviytymistä. 5 todennäköisyydet vuoden aikajänteellä tapahtuman vapaa elinaika olivat: 85 ± 5 ja 66 ± 8%; kasvain sisustus, 86 ± 4% ja 63 ± 8% CB

1IR 2 ja CB

1IR≥2 ryhmiä, vastaavasti.

Johtopäätökset /merkitys

taso CB

1-reseptorin ilmentymisen kolorektaalisyövässä liittyy kasvaimen tavalla riippuvainen asteesta CpG hypermetylaation. Korkea CB

1IR indikoi huonompi ennuste II vaiheessa microsatellite vakaa kasvain potilailla.

Citation: Gustafsson SB, Palmqvist R, Henriksson ML, Dahlin AM, Edin S, Jacobsson SOP, et al. (2011) Korkea Kasvaimen kannabinoidiannos CB

1 -reseptorin immunoreaktiivisuus vaikuttaa negatiivisesti tautikohtaista Survival vaiheessa II mikrosatelliittimerkkien Stable peräsuolen syövän. PLoS ONE 6 (8): e23003. doi: 10,1371 /journal.pone.0023003

Editor: Joseph Alan Bauer, Bauer Research Foundation, Yhdysvallat

vastaanotettu: 29 joulukuu 2010; Hyväksytty: 11 heinäkuu 2011; Julkaistu: 25 elokuu 2011

Copyright: © 2011 Gustafsson et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Kirjoittajat kiitos Ruotsin tiedeneuvoston (Grant no. 12158, lääketiede, CJ Fowler); Ruotsin Cancer Society (Grant no. CAN2008 /856 R. Palmqvist, Grant no. CAN2010 /437, C. J. Fowler); ja tutkimuksen rahastojen lääketieteellisen tiedekunnan, Umeå University (C. J. Fowler) taloudellista tukea. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

G-proteiiniin kytkeytyvien kannabinoidin

1 (CB

1) reseptorit ovat parhaiten tunnettuja roolia välittäjänä psykotrooppisten vaikutukset halutuimmista vapaa-ajan käyttäjät kannabiksen. Kuitenkin CB

1-reseptoreihin ja niiden endogeenisten ligandien anandamidia (arachidonoylethanolamide) ja 2-arakidonyyliglyseroli välittävät monia vaikutuksia elimistössä säätely mukaan lukien kipu, luun muodostumista, energia homeostaasin ja ruuansulatuskanavan toiminnan [1] – [4]. Ihmisen paksusuolen, CB

1-reseptoreita löytyy crypt epiteelin sekä epiteelinalaisella tulehdussolujen, sileän lihaksen verisuonten ja limakalvonalaiskerroksen plexus [5], [6], jossa ne moduloivat, muiden toimintojen , nopeus suoliston ja paksusuolen käyttövoima [4].

lisäksi edellä kuvatut tehtävät, endokannabinoidijärjestelmä toimii ”vahinko rajoittava” järjestelmä vaikutusten lieventämiseksi patologisten tilanteiden. Tämä näyttää olevan erityisen totta ruoansulatuskanavan endokannabinoidijärjestelmä. Siten tulehduksen aiheuttama, kuten 2,4-dinitrobentseeni sulfonihappo, trinitrobentseeni sulfonihappo, sinappiöljy tai dekstraanisulfaatin natrium on voimakkaampi CB

1

– /- hiirissä kuin niiden villityypin littermates, kun taas käsittelemällä CB-reseptorin agonisti, tai yhdisteiden kanssa, estää solujen poistamista ja aineenvaihduntaa endokannabinoidit, lievittää tulehdusta [7] – [11]. CB

1 -reseptorin polymorfismi (1359 G /A) liittyy alentunut herkkyys haavainen paksusuolen tulehdus ihmisellä [12], vaikka meidän tietomme sitä ei vielä tiedetä, miten tämä yhden emäksen monimuotoisuus vaikuttaa kannabinoidin signalointi. Poikkeava crypt pesäkkeitä paksusuolessa, varhainen patologinen muutos adenooma-karsinooma-sekvenssin peräsuolen syövän kehitykseen, on muodostettu seurauksena azoxymethane hoito hiirissä, ja hoito liittyy tasojen nousu on 2-arakidonyyliglyseroli. Blockade aineenvaihdunnan tämän endokannabinoidijärjestelmä vähensi poikkeavan crypt foci, samoin käsittelemällä CB-reseptorin agonisti [13] ja ehkä yllättävästi, käsittelemällä CB

1-reseptorin käänteisen agonistin [14].

Kannabinoidit ja endokannabinoidit tuottaa mahdollisesti käyttökelpoisia johtuvat vaikutukset syöpäsolujen lisääntymistä, liikkuvuuteen ja invasiivisen käyttäytymisen (katso katsaukset [15], [16]). Kolorektaalisyövässä solulinjoissa, sekä CB

1 riippuvia ja riippumattaman vaikutuksia endogeenisen ja /tai synteettiset kannabinoidit, kun solujen elävyys on raportoitu [17] – [20]. Vuonna geneettinen malli paksusuolisyövän etenemisen (APC

Min /+ hiirillä), eläimet joilta puuttuu CB

1 -reseptorin osoittivat suuremman määrän ohutsuolen ja paksusuolen polyypit kuin vastaava CB

1

+ /+ hiirillä [21]. Kolorektaalisyöpä potilaille, jotka ovat joko homo- tai heterotsygoottinen 1359 G /A CB

1 -reseptorin polymorfismi esittävät lyhyempi elinaika kuin G /G villityypin potilaista [22]. Lopuksi alennettu ilmentyminen CB

1-reseptorin mRNA ja proteiini on raportoitu peräsuolen syöpä [17], [21], johtuu ainakin osittain korotettuun metylaatio promoottorialue reseptorin [21].

yllä olevat tiedot ovat yhdenmukaisia ​​ehdotusta, että endogeeninen kannabinoidijärjestelmän voi olla vahingollisia kolorektaalisyövässä, ja että tällainen toimintahäiriö voi vaikuttaa sairauden vakavuuden ja /tai tuloksesta. Yksi tapa tutkia tätä mahdollisuutta on määrittää taso CB

1 -reseptorin ilmentymisen suuren kohortin hyvin kuvattu tapauksia paksusuolisyövän pitkä seuranta-ajat. Tämä on tehty esillä olevassa tutkimuksessa. Koska peräsuolen syöpä on erittäin heterogeeninen, keskittyen erityisesti on tehty kun suhde CB

1 immunoreaktiivisia intensiteettiä keskeisten patologinen /molekyylikomponentit taudin [23]: vaihe, kasvaimen, mikrosatelliittien epävakaus seulonta tila, esiintyvyys nuppuja kasvaimen edessä, ja CpG-saarekkeen methylator fenotyyppi (CIMP).

Methods

Ethics lausunto

tutkimus eettinen komitea Uumajan yliopistollisessa sairaalassa (Regional Ethical Review Board Uumajassa) hyväksyi käsittelyä kudosnäytteiden ja potilastiedot esillä olevassa tutkimuksessa, mukaan lukien menettely, jossa potilaat suullisesti antoivat tietoisen suostumuksen. Tämä suostumus dokumentoitiin kussakin potilaskertomus, ja tätä pidettiin eettinen komitea riittäväksi. Tietokannassa analyyseissa käytetyn täällä, kudosnäytteiden annettiin asian numero ja vuosi, ja potilas nimitykset eivät ilmi tietokannasta.

Potilaat

formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin -Embedded näytteitä käytetään esillä olevassa tutkimuksessa saatiin kudoksesta kerätään aikana primaarikasvaimen resektioleikkaukselle paksusuolisyövän (CRUMS (Paksusuolisyöpä Uumajassa tutkimus)). Näytteet kerätään peräkkäisen tarkoitus osastolla Kirurgian Uumajan yliopistollisen sairaalan, Ruotsi, vuosina 1995-2003 ja jos mahdollista, potilaan tilaa seurattiin enintään 113 kuukautta [24]. Lisäksi kliinis-patologisten ilmoitettujen tietojen [24], tiedot mikrosatelliittimerkki vakaus /epävakaus seulonta tila (määrittämiseksi immu- ekspression neljän yhteensopimattomuuden korjausjärjestelmän proteiinit) ja CIMP on kerätty ja aikaisemmin raportoitu [25]. Ilmaantuvuus silmut kasvaimen edessä arvioitiin vuonna [26]. Poissulkemisperusteet riittävä tai käytettävissä kasvainkudoksen näyte ja riittävästi kliinistä tietoa. Kaikkiaan 487 tapausta pisteytettiin joko kasvaimen keskelle tai kasvaimen edessä CB

1 -reseptorin immunoreaktiivisuus (katso alla). Kliiniset tiedot tietokantaan näillä potilailla oli seuraava: mediaani-ikä 71 vuotta (vaihteluväli 26-96, n = 487, joista 269 oli miehiä ja 218 naista); syöpä paikalla oikeassa paksusuolessa 31,1%, vasen paksusuolen 31,1%, peräsuolen 37,8% (n = 482); tauti vaihe I 15,5%, II 39,3%, III 21,0%, IV 24,2% (n = 476); kasvaimen hyvin /hyvin kohtalaisesti eriytetty 48.75%, kohtalainen-huono /huonosti eriytetty 51.25% (n = 480); mikrosatelliittimarkkereita vakaa 85,0%, mikrosatelliittimarkkereita epävakaa 15,0%; (N = 473); CIMP tila negatiivinen 50,4%, alhainen 37,2%, korkea 12,4% (n = 484). Edelleen 82,4% (483 tapausta) eivät saaneet ennen leikkausta sädehoitoa (joko 5 x 5 Gy tai 25 x 2 Gy); 75,0% (476 tapausta) oli radikaaleja; ja 13,7% (475 tapausta) saivat adjuvanttihoitoa.

mittaus CB

1 -reseptorin immunoreaktiivisuus (CB

1IR) tuumorikudokseen

parafinoidut kudosleikkeiden parafiinista ja rehydratoitiin ennen antigeenin hakua painekattilassa (2100 noutaja, Biocare Medical) in Diva Decloaker (biocare Medical). Näytteet sijoitetaan tämän jälkeen Ventana puoliautomaattisella immuunivärjäysmenetelmällä kone (Ventana Medical Systems Inc., Tucson, AZ). CB

1-reseptorin vasta-ainetta (Abcam kissa. No. 23703, Abcam plc, Cambridge, Iso-Britannia, laimennettu 1:50) ja toissijainen komponentit (iView DAB Detection Kit, Ventana Medical Systems Inc.) lisättiin sitten. Vasta-aine, kanin polyklonaalinen korotetun vastaavan peptidin C-pään aminohappoa 461-472 ihmisen CB

1-reseptoria, ja joka reagoi ristiin ihmisen, hiiren ja rotan CB

1-reseptorin tietojen mukaan valmistajat, on osoitettu aikaisemmin tutkijoiden Uumajan (mukaan luettuna vastaava kirjoittaja) tuottaa sopivan värjäysmallia ihmisen pikkuaivot, mutta ei tuottaa immuunivaste etuaivot CB

1

– /- hiirissä [27 ]. Expasy Blast (https://expasy.org/tools/blast/) peptidisekvenssin antoi CB

1 ja sen kaksi silmukointivariantit ainoana osumia ihmisellä. Useissa muissa lajeja, CB

1 reseptorit yksilöi myös ainoa ei-CB

1 osumaa ollessa proteiineista nimitystä ”karakterisoimattomat proteiini [Gene: CNR1]” (sian, koiran ja kana) sekä ” otaksuttu karakterisoimattomat proteiini [Gene: PANDA_015085] –

Ailuropoda melanoleuca

(isopanda) ”ja” kromosomi 14 SCAF15003, koko genomin shotgun järjestyksessä fragmentti ”in

pantteripallokala

(Green pufferfish).

CB

1IR arvioitiin yksi tutkija (SBG), joka oli sokkoutettu kliinisen tilan potilaista. Näytteet arvostellaan perusteella hallitsevan CB

1 -reseptorin immunoreaktiivisia intensiteetti (CB

1IR) kasvaimen sisätilat ja kasvaimen invasiivisia rintamilla ja teki 0 (poissa) 3 (voimakas) soluille . Kun kaikki näytteet oli teki tutkijan toistuva menettely (ilman pääsyä edellisen tulokset) ja vertasivat sitten pistemäärän kahdesta laskusta. Tapaukset, tulokset olivat erilaiset arvioitiin sitten kolmannen kerran, jälleen ilman pääsyä edelliseen tulokset. Jotta kasvain edessä näytteet sijoitettiin esimerkiksi oli 53 kertaa, jossa ensimmäinen ja toinen tulokset eri mieltä, johtuu pääosin virheellisen pisteitä alkuvaiheessa ensimmäisen kierroksen. Lopulliset tulokset olivat sitten tuli toinen tutkija (CJF) tietokantaan analysoitaviksi.

Tilastolliset arviot

Kaplan-Meier selviytymisen analyysit, Fisherin testiä ja χ

2 kokeet toteutettiin käyttäen tilastollista pakettia rakennettu GraphPad Prism 5 tietokoneohjelma Macintosh (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Coxin suhteellisen vaarat ja binary logistinen regressio analyysit tehtiin käyttämällä IBM SPSS tilastot 19 ohjelmistoja Macintosh (IBM Inc., Somers, NY, USA). Hengissä analyysit, tautikohtaisia ​​tapahtumiksi määriteltiin kuolema tunnettuihin levitetään tai uusiutuva sairaus ( ”†

ca”). Muista syistä johtuvat kuolemat sensuroitiin, kuten myös silloin, kun potilas oli elossa viimeisimmän seurannan. Kesto tapahtuma-elinaika määritellään diagnoosista kunnes joko jona peräsuolen syöpä kuolema, kuolema muista syistä, tai jos kuolema tapahtui, saakka Viimeisimmässä seurannassa.

Tulokset

CB

1IR immunohistokemia

Alustavat tutkimukset tehtiin käyttäen samaa erää vasta kuin aikaisemmassa tutkimuksessa tutkijat Uumajassa käyttäen kudossiruina alkaen eturauhassyöpänäytteissä [27]. Huomasimme, että laimennuksella 1:300, CB

1IR havaittiin epiteelisoluissa kryptissa, hajanaisen positiivisuuden epiteelinalaisella tulehdussolujen (Fig. S1A), joka on löytää johdonmukainen tutkimusten CB

1IR normaalissa paksusuolessa [5], [6]. Esimerkiksi kasvainkudoksen värjättiin tämän erä on esitetty kuviossa. 1B. Johtuen rajallinen määrä vasta-ainetta jäljellä, käytimme myöhemmin erän Abcam vasta-ainetta (erä 761993) päätutkimusta, ja totesi, että alempi laimennus (1:50) vaadittiin hyvää immunovärjäyksen. Esimerkki värjäytymistä nähdään kuviossa. 1A, jossa on vastaava sarja jakso ilman ensisijainen vasta-kuvassa. 1B.

Osiot samasta tapauksessa käytettiin läsnä ollessa (paneeli A) ja poissa ollessa (paneeli B) primaarisen vasta-aineen. Tavoite suurennus on 10-kertainen.

Paras spesifisyys testi immunokemian pidetään käytön tyrmäys valvonnan [28]. Olemme havainneet, että sopiva immunokemiallinen värjäytymistä nähtiin aivoissa villityypin hiirissä, kun taas tämä puuttui aivoista CB

1

– /- hiirissä (Fig. S2). Ashton [29] on äskettäin väitti, että optinen tiheys histogrammien ovat käyttökelpoisia erottamaan muutoksen rakenteessa immunoleimaus (kuten olisi nähtävä tosi menetys signaloinnin Knockout) verrattuna vähenemiseen merkintöjä intensiteetti (mikä nostaa kysymys pätevyyttä vasta-aineen). Optinen tiheys histogrammit meidän villin tyypin ja CB

1

– /- kudosten selvästi erilainen (parhaiten nähdään varten suurennettuna dioja, Fig. S2), joka on hyvän vasta-spesifisyys [29].

yleinen tapa vasta-aineen testaamiseksi spesifisyyden on tutkia preadsorbtion vasta-aineen kanssa immunisoivaa peptidi, vaikka hyödyllisyys tätä toimenpidettä on kyseenalaistettu [30]. Kuitenkin sarja kokeita käyttäen esi-inkubointi vasta-aineen kanssa immunisoivaa peptidiä (Abcam, Cat. No. 50542) tehtiin myös. Kuitenkin, esi-inkubaatio immunisoivalla peptidillä lisääntynyt huomattavasti havaittu immunoreaktiivisuus sijaan estetty, ja antoi melko satunnainen kuvio immunoreaktiivisia värjäyksen (tuloksia ei ole esitetty). Immunisointi- peptidin (aminohapposekvenssi MSVSTDTSAEAL) on kaksi negatiivisesti varautuneita aminohappoja (aspartaatti ja glutamaatti), viisi polaaristen aminohappojen (kolme seriini, kaksi treoniini) ja ei positiivisesti varautuneita aminohappoja. On hyvin tunnettua, että negatiivisesti varautuneet peptidit sitoutuvat lasia, ja voimme päätellä, että pesumenetelmä Ventana tekniikassa, samalla kun riittävä hyvän spesifisyyden

sinänsä

(kuten nähdään hiirissä,), ei ole riittävät poistamaan vasta-sitoutuneen positiivinen kontrolli peptidi kiinni epäspesifisesti lasi- ja /tai kahtaisionisista lipidejä.

Jakelu CB

1IR tulokset kasvaimen keskelle ja rintamalla

yhteensä 483 (kasvain sisä-) ja 486 (kasvain edessä) tapausta pisteytettiin CB

1IR intensiteetti ja syötetty tietokantaan. Sekä plasma ja sytoplasman CB

1IR pisteytettiin, joten arvot edustavat kokonaiserään CB

1-reseptoreihin. Tumavärjäystä CB

1IR (löytyy 42 tapausta) ei teki. Taajuus jakaumat CB

1IR varten kasvaimen keskustasta ja rintamalla olivat samanlaisia, tuloksella 0 palauttamista varten 77 ja 60 tapausta; pisteet 1 196 ja 185 tapausta; pisteet 2 140 ja 156 tapausta; ja pisteet 3 70 ja 85 tapausta (numerot ovat kasvain keskus ja etuosat, vastaavasti). Ei ollut merkittävää eroa jakaantumiskuvio kahdet tulokset (p 0,1, χ

2 -testi). Todettiin, että tulokset kahdelle alueelle eivät aina sama tietyssä tapauksessa. Todellakin, että 482 tapauksia teki sekä kasvaimen keskustasta ja edessä, tulokset olivat samat vain 319 (66%) tapauksista, on korkeampi kasvaimen edessä 110 (23%) tapauksista ja korkeampi kasvaimen keskus 53 (11%) tapauksessa. Tämän seurauksena koko tämän tutkimuksen, sekä kasvaimen keskusta ja kasvaimen edessä tulokset on analysoitu erikseen. Hyvänlaatuisen kudos ei lasketa, mutta yleensä sen tason immunoreaktiivisuus näytti olevan pienempi sijaan suuremmat kuin nähneet kasvainkudoksen.

Association of CB

1IR kanssa potilasryhmät leikkauksen

Koska frekvenssijakautuman CB

1IR, analyysit tehtiin käyttämällä yksinkertaista mediaani split eli CB

1IR 2 ja ≥2. Käyttämällä koko data asettaa etsimään muuttujien binäärisen logistinen regressio parametreilla sukupuoleen, sivusto (ts oikea paksusuoli, vasen paksusuoli, peräsuoli), sädehoito (ennen leikkausta), sairauden vaihe, kasvaimen histologinen luokka (ts eriyttäminen), kasvain tyyppi (ts mucinous tai ei-mucinous), mikrosatelliittien epävakaus seulonnan tila [vakaa (MSS) tai vaikeahoitoinen (MSI)], määrä lymfosyyttejä kasvaimen etu- ja taajuus kasvain silmut (pienet aggregaatit syöpäsolujen kasvaimen invaasio edessä, [31]) suoritettiin. Näistä muuttujista, vain kasvain histologinen arvosana (p 0,005) ja mikrosatelliittien epävakaus seulonta tila (p 0,05) liittyi merkittävästi CB

1IR (tuloksia ei ole esitetty). Nämä vaikutukset voidaan yksinkertaisesti visualisoida jakamalla aineisto neljään ryhmään sen perusteella, kahden merkittävät muuttujat (Fig. 2). Suurin osa tapauksista luokiteltiin MSS, ja yksityiskohtaiset CB

1IR jakaumat MSS tapaukset, jotka eivät saaneet sädehoitoa ennen leikkausta on yhteenveto taulukossa 1. Sekä kasvaimen keskustasta ja kasvaimen rintamalla, on enemmän tapauksia CB

1IR≥2 MSS tapauksia on keskivaikea-huono /huono kasvain eriyttäminen kuin hyvin /hyvin kohtuullisesti erilaistunut kasvaimia. MSI tapauksissa tämä vaikutus kasvaimen histologinen arvosana ei ole nähty, ja tapaukset on samanlainen CB

1IR jakelu kohtalaisen huono /huonosti eriytetty MSS tapauksessa (Fig. 2). Edelleen analyysi 62 tapausten MSI teki CB

1IR jotka eivät saaneet sädehoitoa ennen koepalan ei paljastanut mitään merkitsevää yhteyttä kasvaimen keskelle tai eteen CB

1IR joko taudin vaiheessa (tässä vaiheet I ja II yhdistettiin koska vain 4 tapauksissa vaiheen I pisteytettiin kasvaimen keskustasta CB

1IR), kasvaimen, ovatko kasvaimet olivat mucinous tai ei-mucinous, ilmaantuvuus lymfosyyteillä kasvaimen etu- tai CIMP tila (p 0,1, Fisherin testiä tai χ

2 testiä, tarvittaessa tuloksia ei ole esitetty). Sukupuolen, p arvot CB

1IR jakaumat olivat 0,069 ja 0,18 kasvaimen keskustasta ja edessä, vastaavasti (Fisherin tarkka testi), ja ilmaantuvuus silmut kasvaimen edessä, p-arvot (χ

2-testi) oli 0,086 ja 0,073, vastaavasti (tuloksia ei ole esitetty).

paneeli A, kasvain keskus; Paneeli B, kasvain edessä. Tiedot on ryhmitelty kasvaimen histologinen arvosana (w-m, hyvin /hyvin kohtuullisesti erilaistunut, m-p, kohtalaisen huono /huonosti eriytetty) ja microsatellite vakaus (MSS, vakaa, MSI, epävakaa). Χ

2 ja siten p-arvot ovat tietojen ryhmitelty 4 x 2 matriisi (jossa 2 on CB

1IR). n tarkoittaa tapausten kokonaismäärä kullekin bar.

Yksi merkittävä ero MSS ja MSI on suurempi esiintyvyys korkea CpG-saarekkeen metylaation jälkimmäisessä [32]. Meidän tietokokonaisuus, 467 tapauksista laukauksellaan mikrosatelliittien epävakautta seulontaan tila, CIMP tila ja kasvaimen keskusta CB

1IR, The CIMP jakaumat olivat: MSS (n = 396), negatiivinen 225 (57%), matala 153 (39 %) ja korkea 18 (4,5%); MSI (n = 71), negatiivinen 15 (21%), alhainen 17 (24%) ja korkea 39 (55%) (p 0,0001, χ

2 -testi). Kun CIMP tilan näytteet lisättiin binääriseen logistinen regressio koko aineisto parametrien edellä on kuvattu, merkittävää vaikutusta kasvaimen histologinen luokka säilyi (p 0,005) sekä kasvaimen keskustasta ja edessä CB

1IR , mutta vaikutus mikrosatelliittimerkki epävakauden seulonta tila menetettiin kasvaimen keskusten (p 0,1), mutta ei tuumorin etuosat (p 0,05) (aineistoa ei esitetty). Tutkiakseen tätä lisäksi tietojen näytteitä jaettiin kolmeen CIMP ryhmään: negatiivinen, matala ja korkea riippumatta Mikrosatelliittimarkkerien epävakauden seulonnan tila vai potilaat olivat saaneet sädehoitoa ennen leikkausta. Oli selvä vaikutus CIMP tila tuloksista, jossa vaikutus kasvaimen histologisen arvosana nähtiin tapauksissa, joissa on CIMP-negatiivisen pisteet, mutta ei tapauksissa, joissa on CIMP korkea pisteet, CIMP-low tapaukset esiin jossakin keskellä (Fig. 3). Tämä analyysi ei ota huomioon mikrosatelliittimerkki epävakaus seulonnan tila tapauksista saavuttamiseksi riittävän ryhmäkokoja. Kuitenkin samanlainen kuvio nähdään, kun MSS ja MSI tapaukset analysoidaan erikseen, vaikka kuten varoitus on todettava, että jotkut ryhmäkoot ovat hyvin pieniä (kuvio. S3).

Paneeli A, kasvain keskus; Paneeli B, kasvain edessä. Tiedot on ryhmitelty kasvaimen histologinen arvosana (w-m, hyvin /hyvin kohtuullisesti erilaistunut, m-p, kohtalaisen huono /huonosti eriytetty) ja CIMP tila. Niistä 473 tapausta teki kasvaimen keskustasta CB

1IR, 389 luokiteltiin MSS, 71 MSI ja 13 ei ole luokiteltu tietokantaan. Vastaavat numerot kasvaimen etu- CB

1IR olivat 392, 71 ja 13, tässä järjestyksessä. P-arvot ovat Fisherin testiä. Kokonaismäärä (eli CB

1IR 2 ja ≥2) tapausten lukumäärä on esitetään suljettuna kussakin bar.

Association of CB

1IR sairauden lopputulokseen

tapaukset tietokannassa olisi noudatettu enintään 113 kuukautta [24] sallii vaikutuksen CB

1IR pisteet diagnoosin yhteydessä sairauden lopputulos on määritettävä. Käyttämällä koko aineisto (eli myös ne tapaukset, joissa CB

1IR ei sijoitettiin, joka on muuttujan Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyysi koko aineisto osoitti, että hallinto sädehoidon ennen leikkausta oli yllättävää, liittyy tautiin tulos (Exp ( B) 0,60 [95% CI 0,40-0,91] p 0,05), joissa tapausten määrä ei saa /sai sädehoitoa oli 441/102. Coxin suhteellisten riskien regressioanalyysi on testi käytetään määrittämään osuus parametrin (t) tutkittavana upon tautikohtaisia ​​eloonjäämisen tekemättä olettamuksia luonteesta selviytymisen käyrän. toimenpide Exp (B), jota joskus kutsutaan vaaroja suhde, kertoo muutoksen riskin parametri tutkittavana on muuttunut default parametri (tässä ei sädehoito) näytteeseen parametri (tässä sädehoito). Tällöin sädehoidon vähensi kuoleman riskiä johtuen sairauden jälkeen Exp (B) arvo oli huomattavasti pienempi kuin yksi. Poistaakseen vaikuttaa tämän parametrin, CB

1IR analysoitiin vain tapauksissa, jotka eivät saaneet sädehoitoa. Lisäksi MSS ja MSI tapaukset analysoitiin erikseen.

MSS tapauksissa muuttujan Coxin suhteellisen vaarat regressioanalyysiä pystynyt osoittamaan merkittävää vaikutusta joko kasvaimen sisä- tai edessä CB

1IR upon taudista erityisiä selviytymistä. Kuitenkin, kun kahden muuttujan analyysi tehtiin sairauden vaiheessa toinen parametri, erittäin merkittävä osuus CB

1IR nähtiin (taulukko 2). Tämä vahvistettiin Kaplan-Meier selviytymisen tontteja: koko datajoukon, ei ollut merkittävää osuutta kasvaimen sisätilojen CB

1IR (Fig. 4A), kun taas kasvaimen vaiheen II (jossa kasvaimet ovat soluttautuneet muscularis propria paksu- tai peräsuolen, mutta eivät ole aiheuttaneet imusolmuke etäpesäke), ja kasvaimen vaiheessa IV (jossa kasvaimet ovat levinnyt muihin elimiin), tapaukset CB

1IR≥2 on huonompi tautikohtaisia ​​selviytyminen kuin tapauksia CB

1IR 2 (kuviot. 4B ja D; määritelmiä taudin lavastus annettu [33]). Eroa ei ollut kasvaimen vaiheen III, vaikka onkin pidettävä mielessä, että tämä on erittäin heterogeeninen ryhmä, että tapausten määrä oli pienempi kuin taudin vaiheissa II ja IV ja se alaryhmäanalyyseissa kärsivät pienitehoisia. Oli vain kolme potilasta diagnosoitu vaiheen I peräsuolen syöpä (kun kasvain on vasta soluttautunut submukosaalisen kerroksen paksusuolen tai peräsuolen ja ei ole levinnyt imusolmukkeisiin tai muihin elimiin), jotka kuolivat seurauksena niiden syövän aikana seuraavat up aikana esteenä analyysi vaikutuksesta CB

1IR upon tautikohtaista lopputulos tässä potilasryhmässä. Siinä tapauksessa, että kasvain edessä CB

1IR, merkittävä vaikutus kasvaimen tulos vaiheessa II potilaille havaittiin myös, mutta ei vaiheessa IV potilaat (Fig. 4 ja tietoja ei ole esitetty, vastaavasti). Vuonna vaiheessa II tapauksissa 5 vuotta todennäköisyydet tapahtuman vapaa elinaika olivat: 85 ± 5 ja 66 ± 8%; kasvain sisustus, 86 ± 4% ja 63 ± 8% CB

1IR 2 ja CB

1IR≥2 ryhmiä, vastaavasti. Voidaan todeta, että jotkin vaiheen II tapaukset kuoli kuukauden kuluessa leikkauksesta. Kuitenkin, kun nämä tapaukset jätettiin, merkittävää panosta CB

1IR että tautikohtaisia ​​tulos säilyi (tuloksia ei ole esitetty). Jatketun jakamalla vaiheen II tapaukset mukaan syöpämuodon, merkittävä osuus sekä kasvaimen keskustasta ja edessä CB

1IR upon tautikohtaisia ​​eloonjäämistä havaitusta peräsuolen syöpiin, mutta ei paksusuolen syöpiin, vaikka suunta ( eli köyhempi selviytymisen korkeaa CB

1IR) oli sama. On tärkeää huomata kuitenkin, että tulosten tulkinta näillä alaryhmiä rajoitetaan pienitehoinen ja ei tue Coxin analyyseissä (katso jäljempänä).

Kaplan-Meier tontit tautikohtaisia ​​selviytyminen että kasvain alueiden ja taudin vaiheissa on esitetty. Kuvioiden ovat tapausten lukumäärä (n), jota seuraa joukko niitä, jotka kuolivat seurauksena peräsuolen syöpä (†

ca). Χ

2 arvo annetaan luvut on peräisin log-rank (Mantel- Cox) testi verrataan käyriin; ** P 0,01, * p 0,05,

† 0,05 p 0,1;

NSP 0,1. Vastaava χ

2 arvot kasvaimen etu- vaiheet III ja IV olivat 0,24

NS ja 1,44

NS, vastaavasti.

Se, että MSS potilaiden CB

1IR liittyy kasvaimen histologinen luokalla leikkaus voi tietenkään tarkoita, että yhdistys edellä kuvattu on yksinkertaisesti heijastaa vaikutuksen kasvaimen histologinen arvosana kun tauti lopputulokseen. Tätä mahdollisuutta tutkittiin monimuuttujamenetelmin Coxin suhteellisen vaarat Regressioanalyysistä (taulukko 2), jossa todettiin, että kasvaimen histologinen arvosana edellyttäen lisäaine ennustetekijöiden tietoa mitä havaittiin kasvaimen keskustan CB

1IR kun tauti vaiheessa myös sisällytettävä parametri. Sen sijaan kasvaimen edessä CB

1IR parametri menetetty merkitys. Kuitenkin, kun ilmaantuvuus silmut kasvaimen edessä oli myös (sinänsä ennustetekijä), vaikutus kasvaimen histologinen arvosana upon tauti tulos aleni, kun taas vaikutus sekä kasvaimen keskustasta ja edessä CB

1IR oli merkittävästi (taulukko 2). Nämä tiedot viittaavat siihen, että ennustetekijöiden merkitys kasvaimen keskustan ja mahdollisesti myös kasvaimen edessä CB

1IR ei ole toissijainen sen yhdessä kasvaimen histologinen arvosana. Tarkempi analyysi osoitti, että ennustetekijöiden merkitys CB

1IR pysyi kun CIMP tilan, sukupuolen ja kasvaimen alueen sisällytettiin monimuuttujamenetelmin (kasvain keskus, Exp (B) 1,77 [95% CL 1,16-2,72, p 0,01; kasvain edessä Exp (B) 1,67 [95% CL 1,11-2,50] p 0,05).

MSI tapauksissa ei voitu tehdä johtopäätöksiä siitä CB

1IR vaikutti hänen tautikohtaisia ​​selviytyminen toisessa vaiheessa tapauksissa, yksinkertaisesti siksi, että 32 tapausta, jotka kuuluvat tähän ryhmään (kun poissulkeminen tapauksissa vastaanottaa sädehoitoa ennen leikkausta), vain yksi kuoli syöpään aikana seuranta-ajan.

keskustelu

Tämä tutkimus motiivina oli tietoja molemmista viljellyistä soluista ja potilaan näytteitä viittaa siihen, että huonosti endokannabinoidijärjestelmä järjestelmä on mukana joko synnyssä ja /tai sen seurauksena paksusuolisyövän [13], [14], [17 ], [21], [22]. Aluksi on syytä kommentoida sille tosiasialle, että sekä solun pinnan ja soluliman CB

1 reseptoreita pisteytettiin. CB

1 reseptorit ovat usein pidetään solun pinnan reseptoreja, mutta se on vakiintunut monissa soluissa ja kudoksissa, jotka niiden on todettu solun sisällä [34] – [37], koska voidaan odottaa, reseptoreja, jotka sisäistää seuraavat jatkuvaa agonistin stimulaation [38], [39]. On ehdotettu, että nämä solunsisäiset reseptorit ovat aktiivisia ja pari ekstrasellulaarisen signaalin säädelty kinaasi [35], vaikka muut kirjoittajat eivät ole nähneet solunsisäistä kolokalisaation CB

1 reseptorit kanssa Ga-alayksiköiden [39]. Luonnossa esiintyviä ligandeja CB

1-reseptorit ovat erittäin lipofiilinen, ja siten solukalvon ei ole esteenä niiden solujen tunkeutumista. Ekstrasellulaarisen signaali säädelty kinaasi on tärkeä signalointi molekyyli, ja on ollut mukana antiproliferatiivisia vaikutuksia kannabinoidien useissa eri syöpäsolulinjojen [40], joten se ei ole kohtuuton (ja teknisesti huomattavasti helpompi) pisteet yhdistetyn intensiteettiä solukalvon ja solunsisäiset CB

1-reseptoreihin. On olemassa kolme pääasiallista tuloksia tutkimuksesta, ja niitä käsitellään vuorollaan.

1.