Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Keuhkojen etäpesäkkeet ovat yleisiä primaarisessa peräsuolen syöpä (CRC). Lämpöisku- proteiini 27 (Hsp27) on yliaktiivista aktivoituneiden fibroblastien aikana haavan paranemista ja systeemisesti koholla erilaisia ​​sairauksia. Syöpään liittyvän fibroblasteja (valuuttalisiin) ovat myös arvellaan olevan rooli ennustetekijöitä ja ennakoivan merkkiaineiden oli erilaisia ​​pahanlaatuisia kasvaimia, mukaan lukien CRC. Yllättäen ilmaus Hsp27 ei ole koskaan tutkittu valuuttalisien. Siksi tavoitteena oli tutkia ekspressiotason Hsp27 vuonna valuuttalisiin ja sen kliinistä merkitystä potilaille, joilla on CRC keuhkometastaaseista.

Methods

FFPE kudosnäytteitä 51 keuhkometastaasien (PM) ja 33 pariksi ensisijainen kasvaimet arvioitiin alfa-SMA, CD31, Hsp27 ja vimentiinistä ilmaisun immunohistokemiallisesti ja korreloi kliinispatologiset muuttujia. 25 maksametastaaseista toimi kontrolliryhmään. Lisäksi seeruminäytteet (n = 10) ennen ja jälkeen keuhkojen metastasectomy arvioitiin kierrättämiseksi fosfo-Hsp27 ja yhteensä Hsp27 ELISA.

Tulokset

stroomakasvaimet ilmentymistä Hsp27 havaittiin kaikissa PM ja osoittivat vahva korrelaatio alfa-SMA (

P

0,001) ja vimentiinista (

P

0,001). Vahva strooman Hsp27 liittyi suurempi mikroverisuonitiheys perusterveydenhuollossa CRC ja PM. Lisäksi korkea strooman Hsp27 ja αSMA ilmentyminen liittyy pienentynyt uusiutumista elinaika jälkeen keuhkojen metastasectomy (

P

= 0,018 ja

P

= 0,008, vastaavasti) ja kokonaiseloonjääminen (

P

= 0,031 ja

P

= 0,017, tässä järjestyksessä). Seerumin fosforia ja yhteensä Hsp27 putosi jälkeen metastasectomy tasolle verrattavissa terveisiin verrokkeihin.

Johtopäätökset

Tässä kuvaamme ensimmäistä kertaa, että Hsp27 on erittäin ilmaistaan ​​kasvaimen stroomaan CRC. Stroomakasvaimet α-SMA ja Hsp27 ilmaisuja korreloi kliinisten tutkimusten tulosten jälkeen keuhkojen metastasectomy. Lisäksi seerumin Hsp27 voisi aiheuttaa tuleva markkeri etäpesäkkeitä CRC.

Citation: Schweiger T, Nikolowsky C, Starlinger P, Traxler D, Zimmermann M, Birner P, et al. (2015) stroomakasvaimet Expression of Heat-Shock Protein 27 liittyy pahempaa kliinistä hyötyä potilailla, joilla on peräsuolen syövän keuhkometastaaseista. PLoS ONE 10 (3): e0120724. doi: 10,1371 /journal.pone.0120724

Academic Editor: Gabriele Multhoff, Technische Universität München, SAKSA

vastaanotettu: 17 elokuu 2014; Hyväksytty 26. tammikuuta 2015 Julkaistu: 20 maaliskuu 2015

Copyright: © 2015 Schweiger et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Christian Doppler laboratorio Sydämen ja rintakehä Diagnoosi ja Kierrätys ja jonka Medical University of Vienna. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Tämä tutkimus tukivat Christian Doppler laboratorio Sydämen ja rintakehä Diagnoosi ja Regeneration ja Medical University of Vienna. Alustavat tulokset, joissa on rajallinen määrä potilaita on esitetty vuosikokouksissa Itävallan Society of Cardiothoracic kirurgian ja Itävallan Society of Surgery. HJA julistaa kilpailevat taloudelliset edut (patentin numero WO 2010/000820 (seerumin Hsp27 keuhkoahtaumataudin diagnoosi) ja WO 2012/080303 (seerumin Hsp27 varten NSCLC diagnoosi)). Tämä ei muuta tekijöiden noudattaminen PLoS One politiikkaa jakaa tietoja ja materiaaleja. Toinen Kirjoittajat julistaa ole eturistiriitoja.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on loppujen keuhkosyöpä, toiseksi yleisin syy syöpään liittyvien kuolemien [1]. Yli viidesosa potilaista CRC läsnä etäpesäkkeitä jo diagnoosia tehtäessä ensisijaisen syövän ja samassa suhteessa kehittyy etäpesäkkeitä aikana sairauden [1, 2]. Keuhkot ovat toiseksi yleisin sivusto etäpesäkkeiden, joten keuhkometastaasien (PM) keskeinen tekijä korkeaan kuolleisuuteen CRC.

lisäksi syöpäsolujen itse, kasvain käsittää stroomasoluihin. Vuorovaikutuksia strooman ja syöpäsolujen ajatellaan olevan merkittävä tekijä kasvaimen käyttäytymisen ja hoitovaste [3, 4]. Solukomponenttien strooman ovat fibroblastit, endoteelisolut, immuunijärjestelmän solut ja perisyyteissä [5]. Syöpään liittyvän fibroblasteja (CAF), ja erityisesti aktivoituneiden fibroblastien, on tärkeä rooli kasvaimen strooman verkon kaltainen ihon fibroblasteista haavan paranemista. Tämä osaltaan kuvausta kasvainten kuin ”haavat jotka eivät parane” by Dvorak

et al

. 80-luvun lopulla n [6]. CAF edistää eri kasvaimen edistävillä ominaisuuksilla, kuten solunulkoisen matriisin liikevaihdon, kasvaimen kasvun, angiogeneesin ja metastaasin [7, 8]. Koska ilmaus α-sileän lihaksen aktiini (α-SMA), aktivoitu CAF kuvataan usein myofibroblasteja. Ne on myös osoitettu olevan positiivinen fibroblasti-aktivointia proteiini-α /seprase, palladinin ja vimentiinin [9-12]. Viime aikoina on pyritty kuvaamaan ”allekirjoitus” näiden fibroblastien proteomin ja geenin ilmentymisen profilointi [13, 14].

yhteydessä hyvänlaatuisten sairauksien, haavojen paranemisen ja keloidin muodostuminen on hyvin tunnettua, että aktivoituneiden fibroblastien ilmentävät korkeita lämpöä pösokkiproteiini 27 (Hsp27), joka on ratkaiseva fibroblastien tarttuvuus, contractility ja liikkuvuus [15-17]. TGF-beeta aiheuttama p38-MAPK-reitti on avain säädin induktioon Hsp27 sileän lihaksen soluissa ja myofibroblasteja [18, 19]. Kun syntetisoitiin kaksi päätehtävää of Hsp27 ovat kriittisiä haavan paranemista: edistäminen myofibroblastin liikkuvuutta ja angiogeneesiä. Hsp27 osallistuu vakauttaminen aktiinisäikeiden ja SNAIL, indusoija epiteelin-mesenkymaalitransitioon. Molemmat mekanismit edistää induktion myofibroblastic fenotyypin [20, 21]. Toinen funktio Hsp27 toteutetaan parakriinisesti on parantaa angiogeneesiä. On osoitettu, että ekstrasellulaarisen Hsp27 johtaa NFKB aktivaation ja sen jälkeen ilmentyminen proangiogeeninen tekijöiden VEGF ja interleukiini-8 (IL-8) endoteelisoluissa [22]. Yhdessä muiden ryhmämme voisi osoittaa, että yli-Hsp27 on vahvasti sidoksissa useisiin hyvänlaatuisia ja malign patologiat keuhkojen liittyy fibroblastien aktivoitumista, mukaan lukien keuhkolaajentuma /krooninen keuhkoahtaumatauti (COPD), idiopaattinen keuhkofibroosi ja ei-pienisoluisen keuhkosyövän syöpä [21, 23-26].

koska aktivoituneiden fibroblastien tärkeä rooli etenemistä pahanlaatuisen sairauden sekä erilaisia ​​ei-pahanlaatuiset sairaudet keuhkojen, pyrimme tutkimaan esiintyvyyttä of Hsp27 positiivinen kasvain strooman CRC keuhkometastaaseista ja vastaava ensisijainen kasvaimia. Lisäksi olemme pyrkineet kuvaamaan vaikutuksia kliiniseen tulokseen jälkeen metastasectomy ja läsnäolo solujen ja erittyy Hsp27 näillä potilailla.

Materiaalit ja menetelmät

Tutkimuskanta

Mistä huhtikuuta 2009 päivänä marraskuuta 2013 kaikki peräkkäisen tapauksissa keuhkojen metastasectomy primaarisista CRC ja asianmukaiset kudosnäytteet mukana tässä tutkimuksessa. Potilaat saivat diagnostinen työstämisen lukien rinta- ja vatsaontelon tietokonetomografia (CT). Jos potilaalla oli tehty keuhkojen metastasectomy ennen, näyte ensimmäinen metastasectomy tutkittiin myös ja ajoneuvon ensimmäinen metastasectomy käytettiin tuloksen laskennassa. Keuhkometastaasitestissä elinaika (LMFS) määriteltiin välinen aika diagnoosi primaarikasvaimen ja diagnoosi metastaattisen leviää keuhkoihin. R0 resektio saavutettiin kaikilla potilailla. 33 potilasta, yksilöitä vastaavan primaarikasvaimen voitaisiin saada. Follow-up tutkimukset suoritettiin 3-6 kuukautta välein. Toistuminen-elinaika (RFS) määriteltiin aikana ensimmäisestä keuhkojen metastasectomy todisteisiin uusiutuva sairaus tahansa sivuston varmistettiin TT. 10 peräkkäisen tapauksissa seeruminäytteet saatiin ennen metastasectomy ja seurannan aikana oli saatavilla. Seuranta seeruminäytteet kerättiin 3-6 kuukautta leikkauksen jälkeen. Lisäksi seeruminäytteistä ikä-, sukupuoli- ja tupakointi Tilanteeseen Hyväksytty terveiden vapaaehtoisten kerättiin. Kaikki potilaat antoivat kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen ennen veren keräämistä ja osallistumiseen. Tutkimus kohortti 25 peräkkäisen potilailla, joilla resektoidun CRC maksametastaaseihin toimi vielä yksi kontrolliryhmä. Tutkimuksen hyväksyi eettinen komitea on Medical University of Vienna (EK 91/2006, EK1194 /2011 ja EK1044 /2012) ja suoritettiin ilmoituksen mukaan Helsingin. Nykyinen tutkimus kohortti perustuu aikaisempien julkaissut teoksia ryhmämme. [27, 28]

immunohistokemia ja immunofluoresenssilla

immunohistokemiallinen värjäys suoritettiin vakioprotokolla. Pian formaliinikiinnitetyt, parafinoidut kudosnäytteet leikattiin 4 um: n paksuisia leikkeitä ja parafiini. Lämpöä välittämä antigeenin haku suoritettiin. Endogeeninen peroksidaasiaktiivisuus sammutettiin 0,3% vetyperoksidia. Leikkeitä inkuboitiin sopivan primaarisen vasta-aineen kanssa 1 h huoneenlämmössä. Immunohistokemiaa, toissijainen vaiheessa Muovi- ImmPRESS kit (Vector Laboratories, Burlingame, Kalifornia) käytettiin mukaisesti valmistajan protokollaa. 3,3′-diaminobentsidiini (DAB) käytettiin substraattina (Vector Laboratories, Burlingame, Kalifornia). Lopuksi leikkeet vastavärjättiin hematoksyliinillä. Vimentiinista värjäys suoritettiin Ventana ES Immunostainer System (Ventana Medical Systems Inc., Tucson, AZ, USA). Immunofluoresenssi-, tarvittaessa fluoresoivia sekundaarisia vasta-aineita käytettiin ja solujen tumat vastavärjättiin DAPI (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA). Negatiivisina kontrolleina, primaarisen vasta-aineen jätettiin pois. Positiiviset kontrollit olivat kudosnäytteitä, joiden tiedetään olevan läsnä kunkin kohdeproteiinin. Yksityiskohtainen luettelo vasta-aineiden ja laimennoksia palvelee lisätiedot (S1 taulukko).

pisteytys värjätään syöpäsoluja.

immunohistokemia värjäytymistä pisteet (IHC pisteet) laskettiin kuten aiemmin on kuvattu [29] . Niiden positiivisten kasvainsolujen voi saavuttaa arvoja välillä 0 ja 100%, ja ne kerrotaan värjäyksen intensiteetti (0-3). Siten IHC tulokset voivat vaihdella välillä 0 300. Kaksi sokaissut tarkkailijat arvioivat värjäystä. Siinä tapauksessa, että kaksi luokitukset erosivat, dia keskusteltiin ja arvioida uudelleen. Jatkuva IHC pisteet oli kaksijakoinen soveltamalla mediaanipisteet etäpesäkkeitä tai primaarikasvainten cut-off-arvo.

pisteytys värjätään stroomasolujen.

kohdat pisteytettiin semikvantitatiivisesti kuten aiemmin on kuvattu [10 ]. Lyhyesti, objektilaseja seulottiin pienellä suurennuksella, ja arvioitiin niiden värjäytymisen intensiteetti strooman solujen kasvaimen keskustasta. Sidekudosmateriaali värjäytyminen arvioitiin arvosana 0 (negatiivinen, 1% positiivisia stroomasolut), grade 1+ (matala, 1-10% positiivisia stroomasolut), grade 2+ (väli, 10-50% positiivisia stroomasoluissa ) ja arvosana 3+ (vahva, 50% positiivisia stromasoluja) kahdella sokaissut tarkkailijaa. Siinä tapauksessa, että kaksi luokitukset erosivat, dia keskusteltiin, uudelleen ja päästiin kaikkien dioja.

määritys mikroverisuonitiheys.

mikroverisuonitiheys (MVD) mitattiin käyttämällä ”hotspot” menetelmä, joka on julkaistu muualla [30]. Lyhyesti, diat seulottiin pienellä suurennuksella tunnistamaan alue eniten CD31-positiivisten pienten verisuonten ( ”hotspot”). MVD määritettiin laskemalla kaikki mikrosuonten 200x suurennuksella (vastaa 0,95 mm

2). Keskiarvot laskettiin kahden itsenäisesti lasketaan tiheydet. Mikäli vahva välisten tarkkailija ristiriita, dia oli reevaluated.

Entsyymi-immunologinen määritys (ELISA) B

Seeruminäytteet arvioitiin kaupallisesti saatavissa ihmisen Hsp27, fosfori-Hsp27 ja Interleukin 8 ELISA (kaikki R mediaani /katkaista 30). Ei ollut mitään korrelaatiota kasvainten ja strooman Hsp27 ilmaisun keuhkometastaasien (Chi square testi;

P

= 0,237). 33 vastaava ensisijainen kasvaimia oli saatavilla. Strooman Hsp27 ilmentyminen primäärikasvaimissa 0 (0%), 6 (18%), 15 (46%) ja 12 (36%), pisteytettiin 0, 1+, 2+ ja 3+, vastaavasti. Määritetään Hsp27 värjäytyminen kasvainsolut ensisijainen kasvainkudoksessa, 14 (42%) tapauksista pisteytettiin Hsp27 positiivisia ja 19 (58%) kuin matalan /negatiivinen (IHC pisteet alueella 5-100; mediaani /katkaista 70 ).

stroomakasvaimet fibroblasteja edelleen tunnistettiin vimentiinista värjäystä. (DAB substraatti, sama tuumorinäytesylinterin per rivi, 200x suurennos).

Hsp27 on koekspressoitiin α-SMA ja vimentiinista stroomaan PMS

Aktivoidut kasvain strooman on ollut kuvailla erittäin α-SMA positiivinen primaarinen ja metastaattinen CRC [12, 31]. Siksi näytteet värjättiin α-SMA. Ilmaisu on α-SMA stroomassa oli mitoitettu samalla semikvantitatiivinen tavalla kuin Hsp27 värjäystä. 0 (0%), 13 (25,5%), 24 (51%) ja 13 (25,5%) tapauksista pisteytettiin 0, 1+, 2+ ja 3+, vastaavasti. Värjäytyminen pisteet jakautuminen mukaan kliinis muuttujat on esitetty taulukossa 1. Expression tasojen α-SMA korreloivat merkitsevästi Hsp27 ilmaisua PM (

P

0,001, Fig. 2A). Tämä havaittiin myös maksassa etäpesäkkeitä (S2 Kuva). Arvioidaan tarkemmin strooman ilmentäminen rinnakkain α-SMA ja Hsp27, edustava dioja ensisijainen ja etäpesäkkeitä oli co-leimattiin α-SMA ja Hsp27 immunofluoresenssilla. Vahva koekspressio voitiin havaita etenkin PM (Fig. 2D). Kasvain strooman voimakkaiden Hsp27 ja α-SMA värjäytymistä oli myös erittäin positiivinen vimentiinista (S3 taulukko).

CD31-positiivisia pienten verisuonten ympärillä kasvain stroman vieressä kasvainsolujen (tähti) (B). MVD oli lisääntynyt ensisijainen kasvaimia ja etäpesäkkeitä vahvojen strooman Hsp27 lauseke (C). Immunofluoresenssikoe osoitti koekspressio strooman Hsp27 ja α-SMA erityisesti PM (400x suurennos) (D).

MVD lisääntyy kudosnäytteistä kanssa Hsp27-positiivinen kasvain strooman

Äskettäin on osoitettu, että Hsp27 välittää angiogeneesiä [22]. Siksi määritti MVD mukaan CD31 värjäys ja korreloi sen kanssa Hsp27 ilmaisuja (Fig. 2B ja 2C). PM, löysimme suuntaus kohti korkeampia MVD näytteissä korkean Hsp27 tasolla. MVD oli 33,0 ± 2,9, 40,1 ± 3,8 ja 43,0 ± 4.7 1+, 2+ ja 3+ Hsp27 intensiteetti (keskiarvo ± SD). Tämä suuntaus ei yltänyt merkitsevyystaso (

P =

0,081). Vastaavasti ensisijainen CRC korkean strooman tasoja Hsp27, huomattavasti enemmän mikrosuonten löytyisi (27,7 ± 3,2, 37,2 ± 4,0 ja 46,4 ± 5.2 1+, 2+ ja 3+ Hsp27 intensiteetti, vastaavasti;

P =

0,031). Yksityiskohtainen kuvaus MVD ositettu kliinis ominaisuuksista annetaan S2 taulukossa.

stroomakasvaimet Hsp27 liittyy huono tulos, kun keuhkojen metastasectomy

arvioinut yhdistys asiaa kliinis muuttujien LMFS, RFS ja OS jälkeen metastasectomy (taulukko 2). Ei muuttuja oli merkittävä vaikutus LMFS. Naispotilaat oli vahva suuntaus kohti lyhyemmän aikaa hiukkaset (

P =

0,091). Sidekudosmateriaali ilmentyminen ei α-SMA eikä Hsp27 liittyi merkittävästi vähentynyt LMFS. Kuitenkin molemmat histologiset markkereita oli merkittävä ennustetekijöitä vaikutus RFS jälkeen keuhkojen metastasectomy (

P =

0,018 ja

P =

0,008 varten strooman Hsp27 ja α-SMA, vastaavasti) (Fig. 3 ). Jälleen naispotilaiden osoitti vahva trendi kohti väheni RFS. Lisäksi potilaat, joilla on ollut aiempien maksametastaaseista oli vähentynyt RFS verrattuna potilaisiin ilman maksametastaaseja historiassa. Kuitenkin molemmat muuttujat, sukupuoli ja aiemmat maksametastaaseista, ei ollut merkittävää vaikutusta RFS. Lisäksi sen, että laajoja strooman Hsp27 strooman Hsp27 ja α-SMA liittyi vähentyneeseen kokonaiselinaikaa jälkeen metastasectomy (

P =

0,031 ja

P =

0,017 varten strooman Hsp27 ja α-SMA, vastaavasti). Koska suuri määrä konkordanssin, strooman Hsp27 ja α-SMA ei ollut itsenäistä tekijöitä tuloksen analyysi lisätessään molemmat muuttujat Monimuuttuja-analyysissä (tuloksia ei esitetty).

Liukoinen Hsp27 on systeemisesti suurentunut potilailla ennen keuhkojen metastasectomy

Kohonneita liukoista Hsp27 voidaan havaita systeemisesti eri pahanlaatuiset ja ei-pahanlaatuiset sairaudet. Alaryhmässä 10 potilaamme pariksi seeruminäytteitä (ennen ja jälkeen metastasectomy) oli saatavilla (Fig. 4). Vertasimme seerumin kokonais Hsp27 ja fosfo-Hsp27 Hyväksytty terveillä vapaaehtoisilla (S3 taulukko). Seerumin kokonais Hsp27 tasot olivat 2276 ± 905, 3245 ± 1684 ja 2064 ± 1226 pg /ml (keskiarvo ± SD) valvontaa, ennen ja jälkeen metastasectomy näytteet, vastaavasti. Yhteensä Hsp27 väheni merkittävästi jälkeen metastasectomy (

P

= 0,016). Seerumin fosfo-Hsp27 tasot olivat 84 ± 63, 156 ± 82 ja 88 ± 114 pg /ml (keskiarvo ± SD) valvontaa, ennen ja jälkeen metastasectomy näytteet, vastaavasti. Merkittävä ero välillä havaittiin terveiden verrokkien ja ennalta metastasectomy näytteet (

P

= 0,041). Vaikka tasot laskivat, kun metastasectomy, ero ei ollut merkittävä. IL-8, joka on proangiogeeninen sytokiini osallistuu Hsp27 signalointi, havaittiin hyvin pieninä pitoisuuksina 15 ± 8, 45 ± 58 ja 9 ± 8 pg /ml (keskiarvo ± SD) seeruminäytteistä. Erot systeemisen IL-8-tasojen kolme ryhmää eivät poikkea merkittävästi toisistaan. Mitään korrelaatiota välillä havaittiin ekspression tason tukikudosten Hsp27, kasvaimen Hsp27 ja systeemisiä tasoja (tietoja ei esitetty). Lisäksi mitään merkittävää korrelaatiota kokonaan tai fosfo-Hsp27 ja standardi tulehdusmarkkereiden (CRP ja fibrinogeeni) havaittiin (S1B ja S1C kuvassa).

stroomakasvaimet Hsp27 ilmentyminen keuhkometastaasien merkittävästi lisääntynyt verrattuna maksan etäpesäkkeitä

Arvioimme lisäksi strooman ilmaus strooman Hsp27 ja α-SMA maksan etäpesäkkeiden 25 potilasta. Mitä strooman Hsp27 lauseke 0 (0%), 12 (48,0%), 11 (44,0%) ja 2 (8,0%) tapauksista pisteytettiin 0, 1+, 2+ ja 3+, vastaavasti. Stroomakasvaimet α-SMA ilmentyminen arvioitiin ilmaus 0 (0%), 8 (32,0%), 11 (44%) ja 6 (24,0%) tapauksista pisteytettiin 0, 1+, 2+ ja 3+, vastaavasti. Löysimme vahvan korrelaation strooman Hsp27 ja α-SMA (P 0,001). Lisäksi strooman Hsp27 positiivisuus oli merkitsevästi useammin löytyy keuhkometastaasien verrattuna maksametastaaseista (P = 0,014), kun taas tämä ero ei ollut merkittävä α-SMA (P = 0,625). Lisäksi ilmentyminen Hsp27 kasvainsoluissa (mediaani 120 (vaihteluväli 0-270)) oli merkittävästi lisääntynyt maksassa etäpesäkkeitä verrattuna keuhkometastaasien (P = 0,037). Olemme edelleen analysoineet eloonjäämisaste potilaiden maksametastaaseja riippuen strooman Hsp27, α-SMA ja kasvaimen Hsp27 ilme, mutta merkittäviä eroja ei havaittu (S3 kuvassa).

Keskustelu

etäispesäkkeitä ovat suurin syy syöpään liittyvää kuolleisuutta. Nykyään kasvain microenvironment ja erityisesti fibroblastien tullut kasvavaa kiinnostusta, joka tarjoaa lisätietoja kasvaimen käyttäytymisen ja mahdollisten terapeuttisten kohteiden [32]. Myofibroblasteja löytyy mikroympäristössä erilaisten kasvainten ja laaja fibroblasti-aktivointi voitaisiin yhdistää nopeasti taudin etenemistä pahanlaatuinen sairaus [32].

Tässä voisimme osoittaa hyvin määriteltyjä tutkimuskohortissa että vimentiinista

+ αSMA

+ stromasoluja ovat erittäin läsnä keuhkometastaasien ensisijaisen CRC. Wikberg

et al

. hahmoteltu että myofibroblasteja kasvaimen keskusta ovat paremmat prognosticator varten huono ennuste kuin fibroblastien kasvaimen raja [33]. Olemme näin ollen rajoitettu pisteytys oletetun fibroblastien aktivoitumista keskiosaan kasvain. Verrattuna Henry

et al

., Joka tunnistaa myofibroblasteja by FAP-värjäyksellä ensisijainen paksusuolensyöpä, löysimme samanlainen jakauma strooman pisteytyksen (0%, 20%, 38% ja 35% negatiivinen, matala , väli- ja vahva värjäytyminen, vastaavasti). Lisäksi ne kuvataan yhdistys suuria määriä aktivoitua fibroblastien kanssa pieneni selviytymisen potilailla, joilla on paksusuolen syöpä, etenkin metastasized tilanteessa [10]. Tämä menee linjassa havainnot osoittavat alentunut RFS jälkeen keuhkojen metastasectomy.

Mielenkiintoista, α-SMA positiivinen fenotyyppi kasvaimeen liittyvien strooman mukana oli ilmaus Hsp27. Yhtäältä, tämä pieni lämpösokkipromoottereista proteiini on tutkittu CRC kasvainsoluissa itse [34-36]. Lisääntynyt ilmentyminen Hsp27 kasvainsoluissa ensiarvoisen CRC kuvattiin negatiiviseksi prognosticator olemassaolostaan ​​[37, 38]. Toisaalta, Hsp27 ilmentävät fibroblastit tutkittiin yhteydessä haavan paranemista ja fibroosia. Parhaan tietomme mukaan strooman Hsp27 ei ole kuvattu mahdollisena prognostinen markkeri CRC. Mielenkiintoista, vahva strooman Hsp27 ilmentyminen liittyi korkea MVD primäärikasvaimissa (P = 0,031) ja PM (P = 0,081). Vahvan korrelaatiota Hsp27 kanssa α-SMA vakiintuneena merkkiaine fibroblastien aktivoitumista, yli-ilmentyminen Hsp27 liittyi merkitsevästi huonompi kliiniseen tulokseen jälkeen keuhko- metastasectomy (mediaani RFS 19, 17 ja 8 kuukautta 1+, 2+ ja 3+, vastaavasti), verrattavissa prognostisen vaikutuksen strooman α-SMA ilme. Lasku RFS myös käännetty merkittävästi eri käyttöjärjestelmä välillä matala-, keski- ja korkea strooman Hsp27 tai α-SMA, vastaavasti (Fig. 3). Samoin Tsujino

et al

. kuvataan α-SMA positiivinen fibroblastit kykenevät ennustamaan sairauden uusiutumisen kohortin potilaista vaiheen II ja III ensisijainen CRC [12]. Kahlert

et al

. osoittaa mikrodissektion ensisijaisen CRC, keuhkojen ja maksan metastaasit, että paneelin pro-angiogeenisten tekijöiden ilmentyvät differentiaalisesti kasvainsolujen ja strooman osastoon. Sidekudosmateriaali ilmentyminen angiopoietiini-2 keuhkojen etäpesäkkeet oli itsenäinen prognosticator köyhien selviytymisen leikkauksen jälkeen monimuuttujamenetelmin (

P

= 0,044), vaikka melko pieni tutkimuskohortissa (n = 25) [39]. Nämä havainnot tukevat työmme tulokset, joissa voisimme kuvata Hsp27 uutena proangiogeeninen, strooman umpeenmenoa ennustetekijöiden vaikutus jälkeen metastasectomy. On myös tärkeää mainita, että Sato

et ai

. kuvattu suuri strooman ilmentymisen kuvauksen tekijät ETS1 ennustajana CRC keuhkometastaaseja [40]. Mielenkiintoista, ETS1 on vahvasti vuorovaikutuksessa pienen lämpöisku- proteiini verkko [41].

analyysi verinäytteiden alaryhmässä potilaiden paljasti, että metastaattinen CRC on relevantti induktori jopa systeemisen Hsp27 ilmaisuja. Liukoisen koko Hsp27 ja fosfo-Hsp27, polymeroitua muoto Hsp27, merkittävästi vähentynyt jälkeen täydellistä poistamista PM. Lisäksi verrattuna Hyväksytty kontrolliryhmään terveillä vapaaehtoisilla, ennen leikkausta yhteensä Hsp27 ja fosfo-Hsp27 kohoamiseen ja putosi leikkauksen jälkeen vertailukelpoisia alhaiselle tasolle. Samanlainen kuin meidän havaintoja, Zhao

et al

. voisi osoittaa lisääntynyt seerumin Hsp27 munasarjasyövän vatsakalvon etäpesäkkeitä. Samassa työssä osoitettiin myös, että tasot laskivat kemoterapian jälkeen [42]. IL-8, jonka ajatellaan välittävän paikallisesti proangiogeeninen vaikutusta Hsp27, oli myös kohonnut ennen metastasectomy pääsemättä merkitystä [22]. Nontheless, verenkierrossa tasoja Hsp27 ei korreloinut strooman tai kasvain ilme. Lisäksi se ei korreloinut systeemistä CRP tai fibrinogeenia. Siten kiertävä Hsp27 voisi vaikuttaa muut tekijät, kuten eritystä, hajoamista ja poistamista. Perustuen näiden alustavien tulosten lisätutkimuksia riittävä kohortin koot on tarpeen selventää edelleen mahdollista ennustetekijöiden ja ennakoiva rooli kiertävän Hsp27 määrinä potilailla, joilla CRC.

Jos potilaalla on CRC maksametastaaseja kasvain strooman Hsp27

+ vimentiinista

+ αSMA

+ fibroblastit olivat vähemmän ilmeisiä kuin keuhkojen etäpesäkkeet. Toisin Tämän Hsp27 ekspressio tuumorisoluissa oli merkittävästi korkeampi resektoidun maksan etäpesäkkeitä verrattuna keuhkometastaasien. Tämä menee linjassa havainto, että p38 MAPK signalointi, keskeinen kinaasi Hsp27 fosforylaation ja aktivaation, on vaimentua CRC keuhkometastaasien verrattuna maksametastaaseista [43].

havainnot Tässä työssä ovat translaation merkityksellinen, koska kaksi asiaa: ensinnäkin, Hsp27, systeemisesti tai rajoittuu kasvain strooman saattaa hallussaan potentiaali prognoosi- ja ennustearvo. Keuhkojen metastasectomy on laajalti tarjotaan hoitovaihtoehto potilaille, joilla on CRC PM. Kuitenkin tunnistaminen potilailla, jotka hyötyvät leikkauksesta yksin tai lisävarusteena adjuvanttihoitoa on kysymys nykyinen tutkimus [44]. Biomarkkerit kuten Hsp27 voisi auttaa tunnistamaan potilaita, joilla on suuri riski varhainen taudin uusiutumisesta leikkauksen jälkeen. Adjuvanttihoitoa ja tiukan seurannan voitaisiin tarjota näille potilaille. Aikana seurantaan potilailla, joilla on pahanlaatuinen sairaus, seerumimarkkereiden, esim. CEA, CA19-9 ja beeta-HCG, käytetään rutiininomaisesti nykyään ja ylimääräisiä markkereita saattaa voimistaa tarkkuus on vakiintuneet markkereita. Rajoituksena Tutkimuksen on, että CEA ja CA19-9 tasot eivät rutiininomaisesti määritetty ennen metastasectomy. Korrelaatio on vakiintuneet kasvainmerkkiaineet joiden seerumin Hsp27 käsitellään tulevassa tutkimuksessa.

Toiseksi Hsp27 on lupaava lääke kohde. Apatorsen (OGX-427, Oncogenex, Bothell, Washington, USA), joka on modifioitu antisense-oligonukleotidi, sitoutuu Hsp27 mRNA-transkriptin ja tämän vuoksi se estää Hsp27 ilmentymistä [45]. Parhaillaan vaiheen II tutkimuksia rekrytoida joilla on pitkälle edennyt eturauhassyöpä, virtsarakon, haiman ja ei-pienisoluinen keuhkosyöpä [46]. Kohonnut ekspressiotasot Hsp27, että kasvaimeen liittyvän strooman antaa perusteet käyttää Hsp27 myös potilailla, joilla on primaarinen CRC. Koska ei vain CRC keuhkoetäpesäkkeet, mutta myös maksassa ja imusolmukemetastaaseja on voimakas myofibroblastin rekrytointi, erityisesti potilailla, joilla on metastaattinen sairaus saattavat hyötyä Hsp27 esto.

Yhteenvetona voisimme osoittaa, että Hsp27 koekspressoituu kanssa αSMA kasvaimen strooman CRC keuhkoetäpesäkkeet ja lisäksi, että sen yli-ilmentyminen liittyy huonompi kliinisen tuloksen jälkeen metastasectomy. Huomattavaa on, että liukoinen Hsp27 oli myös systeemisesti mitattavissa, joten seerumin Hsp27 potentiaalinen tulevaisuuden seerumimarkkerin CRC.

tukeminen Information

S1 Taulukko. Vasta-aineet ja laimennoksia käytetään immunohistokemiaa ja immunofluoresenssilla.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0120724.s001

(DOCX)

S2 Taulukko. Tarkempi tieto potilaan, primäärikasvain ja etäpesäkkeitä ominaisuudet ositettu MVD ja vimentiinista (N = 51).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0120724.s002

(DOCX)

S3 Taulukko. Ominaisuudet Hyväksytty potilaiden ja terveiden verrokkien.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0120724.s003

(DOCX) B S1 Kuva. Hsp27 ekspressio havaittiin myös kasvaimen soluihin itsessään (anti-Hsp27, DAB alustalle; 200x suurennos) (A).

Korrelaatio ennen leikkausta Hsp27 ja C-reaktiivisen proteiinin (CRP) tai fibrinogeenin (n = 10) (B ja C). Kumpikaan yhteensä Hsp27 (B), eikä fosfori-Hsp27 (C) korreloi merkitsevästi CRP tai fibrinogeenia.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0120724.s004

(TIF)

S2 Kuva. CRC maksametastaaseihin strooman Hsp27 ja α-SMA pisteytys korreloi merkitsevästi (n = 25) (A).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0120724.s005

(TIF)

S3 kuviossa. Jakelu strooman Hsp27 (A) poikkesi merkittävästi maksan metastaaseja (n = 25) verrattuna keuhkojen metasatses (n = 51).

Ero ei ollut merkitystä strooman α-SMA (B). Hsp27 ilmentymistä tuumorisoluissa oli merkittävästi korkeampi maksan etäpesäkkeitä verrattuna keuhkometastaaseja (C). Merkittäviä eroja ei havaittu alaryhmiin koskien kokonaiselinaika (D-F).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0120724.s006

(TIF) B