Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

metylaatiotasoilla pitkien välissä nukleotidin elementit (LINE-1) ovat edustavia genominlaajuisten metylaatiostatuksen ja ratkaiseva ylläpitämisessä genomista vakauden ja ilme. Niiden ennustetekijöiden vaikutus paksusuolen saavilla syöpäpotilailla adjuvanttihoitoa ei ole vakiintunut. Arvioimme yhdistyksen välillä LINE-1 metylaatiostatuksen ja viittaavia tekijöitä ja postoperatiivista onkologian tulosten vaiheen III paksusuolen syöpäpotilaiden.

Materiaalit ja menetelmät

129 UICC vaiheen III paksusuolensyöpä potilailla, jotka olivat saaneet radikaali resektion ja FOLFOX adjuvanttihoitoa otettiin. Global metylaatio arvioitiin analysoimalla kasvaimen LINE-1 metylaatiostatuksen käyttäen bisulfiitti-polymeraasiketjureaktio (PCR) ja pyrosekvensointi määrityksessä. Väestönkehitys, kliinis tiedot, ja postoperatiivinen tulokset kirjattiin koulutettu vedenottamoita. Tulos mittauksissa leikkauksen jälkeisen uusiutumisen ja taudista vapaan eloonjäämisen. Univariate monimuuttujatestaus, ja selviytyminen analyysit tehtiin tunnistaa ennustetekijöiksi onkologian tuloksia.

Tulokset

LINE-1 metyloinnin kaikki 129 potilasta mitattiin 0-100 asteikko (keskiarvo 63,3 ; mediaani 63,7, keskihajonta 7,1), LINE-1 hypometylaatio oli yleisempää potilailla 65-vuotiaille ja yli (61,7% ± 7,6% vs. 64,6 ± 6,4,

p

= 0,019) ja ne, joilla jälkeisen terapeuttinen toistuminen (61,7 ± 7,4 vs. 64,3 ± 6,7,

p

= 0,041). Ottaen riskipainotuksessa, LINE-1 hypometylaatio todettiin olevan itsenäinen riskitekijä jälkeisen terapeuttisen toistumisen (säätää tai = 14,1,

p

= 0,012). Kaplan-Meier-analyysi osoitti, että potilailla matalan metylaation ryhmä oli lyhyempi taudista vapaan eloonjäämisen (

p

= 0,01). Vuonna kerrostunut analyysi, joka sisälsi 48 potilasta post-terapeuttinen toistuminen, todettiin, että ne, jotka kokivat lyhyemmässä taudista vapaan eloonjäämisen (≦ 6 kk) näytti olevan pienempi LINE-1 metylaatiotasoilla kuin potilas, jolla toistumisen 6 kuukauden kuluttua (56,68 ± 15,75 vastaan ​​63,55 ± 7,57,

p

= 0,041) B

Johtopäätös

oli merkitsevästi suurempi riski aikaisin leikkauksen jälkeisen uusiutumisen ja lyhyemmässä taudista elinaika vaiheen III paksusuolensyöpä potilaalla ilmenee LINE-1 hypometylaatio tilaan, kun hoidetaan radikaali resektio ja FOLFOX kemoterapiaa.

Citation: Lou YT, Chen CW, Fan YC, Chang WC, Lu CY, Wu IC, et ai. (2015) LINE-1 metylaatiostatuksen korreloi merkittävästi Post-terapeuttinen uusiutuminen vaiheessa III Colon saavilla syöpäpotilailla FOLFOX-4 adjuvanttihoitoa. PLoS ONE 10 (4): e0123973. doi: 10,1371 /journal.pone.0123973

Academic Editor: John Souglakos, University of Kreeta, Kreikka

vastaanotettu: 07 lokakuu 2014; Hyväksytty: 24 helmikuu 2015; Julkaistu: 28 huhtikuu 2015

Copyright: © 2015 Lou et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Kaohsiung Medical University Research Foundation (KMU-1M-30), Center for Biomarkers ja Biotech Drugs, Kaohsiung Medical University (KMU-TP103C03 , KMU-TP103H11), ja myöntämisestä BioSignature vuonna kolorektaalisyöpien, Academia Sinica, Taiwan. CWC ja JYW sai rahoitusta. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

on ollut tasaista nousua peräsuolen syöpä (CRC) tapauksessa maailmanlaajuisesti viime vuosina. Mukaan GLOBOCAN esitetyt arviot 2008 CRC on kolmanneksi yleisin syöpä miehillä ja toiseksi yleisin naisilla [1]. Koska leviämisen epäterveellisestä ruokavaliosta ja elämäntavat Taiwanissa, CRC on tullut kolmanneksi yleisin syy syöpään liittyvien kuolemien. Viime vuosina yli 4000 CRC potilaat ovat kuolleet vuosittain (https://www.doh.gov.tw/statistic/index.htm; näytetty joulukuussa 2013). Viimeaikaiset parannukset kasvainten havaitseminen ja adjuvanttihoito ovat kuitenkin lisänneet elinajanodotteet CRC potilaista [2]. Huolimatta parantava leikkaus ja adjuvanttihoitoa, on vielä huomattava määrä potilaita, jotka kohtaavat kasvaimen uusiutumisen aikana seurantajakson aikana. Monet postoperatiivinen seurantaohjelmia on ehdotettu havaitsemiseksi mahdollisuutta toistumisen varhaisessa vaiheessa. Lääketieteen tutkijat ovat päässeet yksimielisyyteen rutiiniseurantakäytäntöjä vaiheen II ja III CRC potilailla, jotka on hoidettu parantava leikkaus [3-5]. Samaan aikaan monet tutkijat edelleen etsiä hienostunut biomarkkerit kykenee tehokkaasti havaitsemaan oireeton uusiutumisen CRC leikkauksen jälkeen. Nykyisin jotkut biomarkkerit ovat lupaavia, mutta vielä läheskään arvioitavissa useimmilla potilailla. Samaan aikaan merkintöjä riskiryhmiin, jotka ovat alttiita uusiutumisen näyttää olevan toinen taktiikka joukossa intensiivinen leikkauksen jälkeisen seurannan strategioita käyttää näissä herkissä populaatioissa.

CRC kehittyy johtuu geneettisestä ja epigeneettiset muutokset. Viime vuosikymmenen aikana, monet tutkimukset ovat tutkineet roolia epigeneettiset tekijöiden kehittämisessä CRC potilailla [6,7]. Epigenetiikka, jota on kuvattu siltana genetiikan ja ympäristön, on havaittu olevan läheisessä suhteessa syöpäbiologian [8,9]. Epigeneettiset muutokset eivät voi olla perinnöllinen, mutta nämä tekijät ovat myös palautuvia ja voi osoittautua hyödylliseksi selvennettäessä monissa epäselvä näkökohtia syövän synnyn ja kasvaimen uusiutumisen CRC potilailla. Lisäksi koska epigeneettiset tapahtumat voivat olla päinvastainen, voimme säädellä prosessin kemiallisen muuntamisen, mukaan lukien mahdolliset antineoplastinen [7,10].

joukossa erilaisia ​​epigeneettiset tapahtumat, DNA: n metylaatio on keskeinen osa epigenetiikka nisäkkään genomissa, joka johtaa lisäämällä metyyli (CH

3) ryhmä hiili-5 asemaan sytosiini rengas. Kaksi suurta metylaation havaitaan usein CRC: yksi on hypermetylaation, joka sisältyy yleensä CpG-saarekkeiden, ja toinen on hypometylaatio, johon liittyy usein toistuvia DNA-sekvenssejä [6,8]. Vaikka raportit hypermetylaation pahalaatuisuuksis- outnumber raportteja hypometylaatio, jälkimmäinen näyttää tulleen aihe intensiivistä tutkimuksen viime vuosina [9,11]. Lisäksi metylaatiotasoilla saattaa vaikuttaa näytteenottomenetelmät, kasvain paikoissa, ympäristötekijät, ja potilaan ikä [9,12-15].

Global DNA hypometylaatio voi johtaa geneettinen epävakaus. Sen läheinen suhde monenlaisia ​​maligniteetteja, mukaan lukien CRC, on raportoitu aikaisemmissa tutkimuksissa [6,7,9]. Retroelements, toistuva sekvenssit pitkä välissä ydinaseiden elementtejä-1 (LINE-1), esiintyy lähes 18% ihmisen genomin [16]. Nämä retroelements voivat aiheuttaa vahingollisia vaikutuksia isäntäsolun, mutta se on yleensä estää ehkäisevästä mekanismeja. Kuitenkin retroelements voi myötävaikuttaa kasvaimien syntyyn eri ympäristöissä. Global metylaatio voidaan mitata epäsuorasti arvioimalla metylaatiostatuksen LINE-1 [17]. Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että pyrosekvensointi määritys LINE-1 metylaatio on kvantitatiivinen, tehokas, ja toistettavissa [18-20].

Viime aikoina monet epigeneettiset tutkimukset ovat selvitetty suhde LINE-1 metylointi ja syöpiä. On ehdotettu, että aste LINE-1 hypometylaatio toimii itsenäisenä tekijä epäsuotuisa onkologian tulosten CRC potilailla [18,21,22]. Ogino et ai. havaitsivat, että LINE-1 hypometylaatio on itsenäinen riskitekijä, joka osoittaa korkea syöpäkuolleisuus ja yleistä kuolleisuutta paksusuolen syöpäpotilaiden [21]. Sunami et ai. kertoi myös, että on olemassa lineaarinen suhde etenemistä LINE-1 metylointi ja syövän etenemistä [23]. Goel, et al. kertoi, että perinnöllinen polypoottinen peräsuolen syöpä (HPNCC) liittyi vähäisempi LINE-1 metylointi [24]. Lisäksi jotkut tutkimukset ovat osoittaneet, että varhain alkanut CRC liittyy alemman LINE-metylaation ja korostaneet sen mahdollisen aseman ennustetekijöiden biomarkkereiden nuoremmilla CRC potilailla [18,25]. Kuitenkin monet tutkijat ovat ehdottaneet LINE-1 on lupaava merkki ennustamiseen CRC ennustetta. Siksi enemmän potilaan ja hoitoon liittyviä sekoittavien tekijöiden tulisi ohjata tuottaa enemmän vakuuttavia johtopäätöksiä, erityisesti kun otetaan huomioon nykyajan strategioita, jotka korostavat räätälöityjä hoitoja eri vaiheissa CRC.

Näin ollen tässä tutkimuksessa olemme keskittyneet yksinomaan on vaiheen III paksusuolensyöpä väestöstä. Olemme tutkineet kasvainten LINE-1 metylaatiostatuksen vaiheen III paksusuolen syöpäpotilaiden jälkeen niitä käsiteltiin radikaali resektio ja FOLFOX adjuvanttihoitoa. Tässä tutkimuksessa kiinnitettiin erityistä huomiota niiden onkologian tuloksia esimerkiksi leikkauksen jälkeinen toistuminen ja syöpäkuolleisuuden. Ohjaamalla muut mahdolliset ennustetekijät, pyrimme tutkimaan ennustetekijöiden vaikutuksia LINE-1 metylaatio vaiheessa III paksusuolen syöpäpotilaiden.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

tutkimuksen hyväksyi Institutional Review Board of Kaohsiung Medical University Hospital (KMUHIRB-20120043) Kaohsiung, Taiwan. Kaikki osallistujat tässä tutkimuksessa allekirjoitti tietoisen-suostumuslomake.

Tutkittavat

takautuvasti tutustuneet kirjaa kaikista paksusuolen syövän potilaille, jotka olivat kirurgisesti käsitelty Kaohsiung Medical University Hospital välillä tammikuussa 2008 ja heinäkuu 2012. kaikkiaan 150 vaiheen III paksusuolensyöpä potilailla, joille tehtiin radikaali resektio ja myöhemmät FOLFOX adjuvanttihoitoa alun perin ilmoittautunut. Neljätoista potilasta suljettiin pois, koska optimaalinen kudosnäytteet olivat käytettävissä. Niistä jäljellä 136 potilasta, seitsemän oli sulkea pois, koska potilaiden kliiniset tiedot olivat puutteellisia. Siten yhteensä 129 potilasta päteviä kädessä (kuvio 1). Kaikki potilaat saivat säännöllisesti seurannat 2-3 kuukauden välein kunnes kuolema tai kesäkuun loppuun 2013

Leikkauksen jälkeinen adjuvanttihoitoa

Kaikki TET saivat adjuvanttia FOLFOX-4 kemoterapia mukaan keskustaan ​​n suuntaviivat syövän hoitoon. Seuraavia protokollan antamiseksi FOLFOX-4 kemoterapia: oksaliplatiini 85 mg /m

2 oli antaa infuusiona kahden tunnin ajan päivänä 1; Leucovorin 200 mg /m

2 annettiin infuusiona samanaikaisesti oksaliplatiinin sisällä kahden tunnin ajan päivänä 1. Tämän jälkeen boluksena 5-FU 400 mg /m

2; sitten jatkuvana infuusiona 5-FU 600 mg /m

2 annettiin yli 22 tuntia. Tämä protokolla toistettiin kahden viikon välein x 12 sykliä.

Kliiniset tiedonkeruun

Patient ominaisuudet, kuten ikä, sukupuoli, kasvaimen sijainti, ja kliinis-, saatiin sähköiset potilastiedot ja kliinisen kaavioita . Kliinis-ja vaiheet primaarikasvainten määriteltiin käyttämällä ehdottamat perusteet theAmerican yhteisen komission syövän /Union for International Cancer valvonta (AJCC /UICC) [26]. Histologia laadut luokiteltiin seuraavasti: hyvin eriytetty (WD), kohtuullisesti erilaistunut (MD), tai huonosti eriytetty (PD). Kuten raportoitu edellisessä tutkimuksessa, kasvain paikoissa luokiteltiin proksimaalinen tai distaalinen pernan flexure [27]. Vascular invaasio, hermoa invaasio, kasvaimen invaasio syvyyttä, ja imusolmuke etäpesäke olivat tekijöitä erityisen luokiteltiin ennen verrataan edelleen sillä jokaisen tekijän pidettiin itsenäinen riskitekijä [28-31].

Perimän DNA eristys

Nämä formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut (FFRE) yksilöitä saatu 129 potilasta uudelleen tunnistaa edustaja sivustoja syövän. FFPE kudosblokeista oli microdissected hankkia 10 um: n osaa kustakin näytteestä. Bisulfiittikäsittelyn kasvainsolujen jälkeen DNA, joka suoritettiin EpiTech bisulfiitin kit (Qiagen, Valencia, CA) valmistajan protokollan.

pyrosekvensointi mittaamiseksi LINE-1 metylointi

Lisäksi edellä mainitun natriumbisulfiitti DNA uudistusprosessi (EpiTech bisulfiittimodifiointi Fast FFPE Kit, Qiagen, No.59844), The pyrosekvensointi määritykset kuuluivat myös polymeraasiketjureaktiolla (PCR) (Pyromark PCR Kit, Qiagen, No.978703) ja sekvensointi kohdesekvenssin synteettisesti määritys (Pyromark Gold Q24 Reagenssit, Qiagen, No.970802). Tämä määritys monistaa alueen LINE-1 elementti. PCR-olosuhteet olivat 45 sykliä 95 ° C 20 s, 50 ° C: ssa 20 s, 72 ° C: ssa 20 s, jonka jälkeen 72 ° C: ssa 5 min. LINE-1 metylointi tulokset saatiin jatkuvalla asteikolla 1-100 käyttäen pyrosekvensointi määritystä.

tulokset mittauksista

kehitys postoperatiivisen syövän uusiutumiseen ja sairauksien elinaika (DFS) käytettiin merkittävinä päätepisteiden varmistaa, että syy-päätelmiä havaittu tulokset johtuivat lähinnä syöpään. Kehittäminen uuden paikallisen uusiutumisen tai kaukaisia ​​etäpesäkeleesioita leikkauksen jälkeen pidettiin leikkauksen jälkeisiä toistuminen. Vaikka laskettaessa DFS tuloksia, tapauksia leikkauksen jälkeinen kuolleisuus esiintyi 30 päivän suljettiin pois. Yksilöt, jotka kuoli muista syistä kuin CRC jätettiin pois tuloksen analyysi. Mitä tulee hoitotuloksen FOLFOX hoito, DFS määriteltiin kulunut aika aloittamisesta FOLFOX kemoterapiaa uusiutumiseen.

Tilastollinen analyysi

Aineisto analysoitiin käyttämällä Statistical Package for Social Sciences, versio 17,0 (SPSS. Inc., Chicago, IL). Studentin t-testi, Pearson chi-neliö testi, Fisherin testiä, ja Kruskal-Wallisin testiä käytettiin vertaamaan demografiset ja kliinis-ryhmien välillä niiden eri lopputulokseen mittauksia. Kaikki muuttujat olivat edelleen kahtia tuottamiseksi oikaisemattomat kertoimet suhde yhden muuttujan analyysiin, joka tehtiin myöhemmin. Useita regressioanalyysimme suoritettiin tunnistaa muuttujia, joita on huomattavasti liittyvät todennäköisyys kasvaimen uusiutumisen tai syövän erityisiä selviytymisen. Regressiomalleja hallinnassa vaikutuksiin sekoittavia muuttujia. Tulokset regressioanalyysimme ilmoitettiin odotusarvo (OR), jossa 95%: n luottamusväli (CI). Vertaileva arviointi pitkän aikavälin tuloksia tehtiin analysoimalla eloonjäämiskäyrien käyttämällä Kaplan-Meier-menetelmällä. Käyrät DFS verrattiin Log-rank-testi. Kaikki testit merkitystä oli kaksisuuntaisia, ja

P

-arvot 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

kliinis ominaisuuksista potilasryhmässä

keski-ikä leikkauksen näille 129 potilasta oli 61,6 vuotta (vaihteluväli, 30-87 vuotta ), ja 81 potilasta oli miehiä (62,8%). Kliinis esitetään taulukossa 1. Kaikki potilaat hoidettiin FOLFOX adjuvanttihoitoa. Mediaani seuranta-aika oli 24 kuukautta (IQR: 16,9-36). Kasvaimen uusiutumisen raportoi 48 potilaalla, kun taas 34 potilasta kuoli aikana seurantajakson aikana.

LINE-1 metylointianalyysi

Vaikka LINE-1 metylaatiotasoilla vuonna 129 koolonikasvainten (kuvio 2) on laajalti (alue, 37,4-77,9 on 0-100 asteikko), ne oli vielä normaalijakaumaa (Kolmogorov-Smirnov testi;

P

0,05). Keskimääräinen LINE-1 metylointi tason nousevassa, poikittainen, laskeva, sigmoid paksusuolen ja peräsuolen, oli 66.41 ± 5,23%, 60,71 ± 7,26%, 61,53 ± 10,45%, 63,32 ± 6,34%, 61.33 ± 8,05%, tässä järjestyksessä. Metylointi taso oli merkittävästi korkeampi nousevassa paksusuolessa verrattuna muihin sivustoihin. (

p

= 0,042) Keskimääräinen LINE-1 metylaation tason säilymisen ryhmässä oli 63,8 ± 6,6% vs. 61,9 ± 8,2% kuolleisuuden ryhmän (

p

= 0,164). Mitä tulee postoperatiivisen kasvaimen uusiutumisen keskimääräinen LINE-1 metylaatio taso oli merkitsevästi pienempi uusiutuminen ryhmässä verrattuna ei-toistuminen ryhmä (61,7 ± 7,4% vs. 64,3 ± 6,7%;

p

= 0,041) . Koska ei ole yleisesti hyväksyttyä kynnysarvoa määritellä, onko LINE metylaatio taso on optimaalinen tai epänormaali, jaoimme tasoja metylaation kahteen ryhmään käyttäen toimivan vastaanottimen (ROC) analyysi ottaa tasapainoinen herkkyys ja spesifisyys. Kynnysarvo oli 70,15%, kun pinta-ala (AUC) oli 0,593.

Univariate analyysi LINE-1 metylointi tason

Tutkimme LINE-1 metylaatiotasoilla vuonna eri ryhmien luokiteltuna muuttujien taulukossa 1. paremman vertailun, ikä oli kaksijakoinen kahteen ryhmään, joiden cut-pistearvo 65 vuotta. Kuten taulukosta 2, että yhden muuttujan analyysissä sisältää yhdeksän muuttujaa, LINE-1 metylaatiotasoilla osoitettiin olevan merkitsevästi erilainen ryhmä 65-vuotiaat ja yli ja ryhmän Alle 65 vuotta (64,6% vs. 61,7%, tässä järjestyksessä;

p

= 0,019).

yhden ja usean analyysin tulosten mittaamisen

taulukossa 3 esitetään tulokset yhden ja usean analyysin suhteen tulosten mittaamisen jälkeisen terapeuttisen toistumisen. Histologia laadut jaettiin kahteen ryhmään, joista toinen sisältää hyvin erilaistunut (WD) ja kohtuullisesti erilaistunut (MD) yksilöt, ja toinen käsittää huonosti eriytetty (PD) yksilöitä. Johtuen rajoitettu määrä T1 tapauksissa T-vaiheisiin oli kaksijakoinen osaksi ”T1 + T2” ja ”T3 + T4” ryhmittymiä. LINE-1 metylaatiotasoilla oli kaksijakoinen osaksi ”low” vs. ”korkea” ryhmien mukaan raja-arvo 70,15% tuottaman edellisessä ROC-analyysi. Sen jälkeen, logistinen regressio levitettiin eteenpäin valinta. LINE-1 metylointi näytti olevan ainoa riippumaton ennustetekijä varten onkologian tulokseen jälkeisen terapeuttisen kasvaimen uusiutumisen (säätää tai = 14,1,

p

= 0,012).

Survival analyysi

Follow-up data oli saatavissa kaikille 129 osallistujaa. Eloonjäämisaika aikana oli 25 (IQR: 19-40) kuukautta potilailla, jotka selvisivät, 19,1 (IQR: 12,9-26,7) kuukautta potilailla, jotka kuolivat, ja 24 (IQR: 16,9-36) kuukautta yleisestä kohortin. Arvioidaan ennustetekijöiden vaikutuksia LINE-1 metylointi, keskityimme leikkauksen jälkeisiä toistuminen ja DFS otettuaan huomioon havainnot monimuuttujamenetelmin. Kaplan-Meier menetelmällä osoitti, että enemmän tapauksia leikkauksen jälkeisen uusiutumisen ja lyhyempi keskimääräinen DFS havaittiin alhaisen LINE-1 metylointi ryhmä (kuvio 3,

p

= 0.010).

Käyrät kuvaa vaikutuksia leikkauksen jälkeisiä toistumisen LINE-1 metylointi kun jaettu potilailla, joilla on ”matala” vs. ”korkea” metylaatio.

Influence of LINE-1 metylointi tasolla DFS potilaiden post-terapeuttinen toistuminen

perusteella näyttöä lyhyempi keskimääräinen DFS matalan LINE-1 metylointi ryhmä, me arveltu, että on olemassa jonkin yhdistyksen välillä LINE-1 metylointi tason ja DFS toistumiseen ryhmässä. Jotta voidaan havaita kynnystä DFS aiheuttaa merkittäviä eroja LINE-1 metylaatiotasoilla toimme neljä empiiristä kynnysarvot DFS (3, 6, 9, ja 12 kuukautta) ja kahtia kaikki uusiutumisen potilaita ”varhainen uusiutuminen” (DFS lyhyempi tai yhtä suuri kuin kynnys), ja ”myöhäinen recurrence2010043 (DFS pidempi kuin kynnys) ryhmät. Kun kynnys DFS on kuusi kuukautta, varhainen uusiutuminen ryhmä näytti olevan huomattavasti alhaisempi keskimääräinen LINE-1 metylointi tason (taulukko 4).

Keskustelu

keskeiset havainnot tässä tutkimuksessa

tässä tutkimuksessa osoitimme, että LINE-1hypomethylation liittyy suurempi leikkauksen jälkeisen uusiutumisen ja lyhyemmän DFS vaiheessa III paksusuolensyöpä potilaalla, jotka on tehty radikaaleja ja myöhemmät FOLFOX kemoterapiaa. Aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että CRC potilaiden syövän etenemiseen, selviytyminen, tai toistumista voivat vaihdella tasolle LINE-1 metylointi [21,23,32]. Kuitenkin, kuten näissä tutkimuksissa mukana eri väestöryhmien ja eri käsittelymenetelmät, oli ilmeinen heterogeenisyys havainnoistaan. Olemme vain arvioinut ennustetekijöiden vaikutuksia LINE-1 metylaatiotasoilla on homogeenisen populaation, joka sisältää vaiheen III paksusuolensyöpä potilasta, jotka olivat saaneet radikaali resektio ja FOLFOX adjuvanttihoitoa. Tuloksemme vahvistivat aiemmin raportoitu havaintoja Ahn et al. on ennustetekijöiden vaikutuksesta LINE-1 hypometylaatio on resektoitiin vaiheen III CRC potilaille [33]. He korostivat, että DNA hypomethyaltion oli toteutettavissa biomarkkereiden uusiutumisen proksimaalisen mutta ei distaalisen CRC tapauksissa. Sisällyttämällä sekoitin säätöjä, kuten kasvaimen sijainti (proksimaalinen vs. distaalinen) tutkimuksessamme, huomasimme, että matalan LINE-1 metylaatiotasoilla (alle 70.15) vielä edelleen vankka riskitekijä ottaa noin kahdeksan kertaa leikkauksen jälkeisen uusiutumisen riski.

suhde LINE-1 metylaation ja alisivustoa sijainnit kasvainten

kahden paksusuolen käsite tavanomaisesti käytetään osoittamaan erillisiä molekyyli- piirteitä kautta dikotomista luokittelu proksimaalisen ja distaalisen paksusuolen kasvaimia. Aiemmissa tutkimuksissa, kromosomi epävakaus (CIN) on yleisimmin havaittu distaalisessa CRC [34]. Toisaalta, mikrosatelliittien epävakaus (MSI) ja

BRAF

mutaatiot ovat yleisempiä proksimaalisessa CRC [35-37]. Kuitenkin, Yamauchi et ai. äskettäin todennut, että taajuudet suuren CpG-saarekkeen methylator fenotyyppi (CIMP), MSI-korkea, ja

BRAF

mutaatiot asteittain kasvavan peräsuolen nousevassa paksusuolessa [38]. Tämä havainto syvästi haastoi perinteisen käsitteen kahden paksusuolen mallia, jota on käytetty useita vuosikymmeniä. Meidän omat tiedot, vaikka meidän vertailu LINE-1 metylaatiotasoilla in oikeanpuoleista ja vasemman puoleinen paksusuolen syöpäpotilaiden ilmoitti rajatapaus tilastollista merkittävyyttä, havaitsimme, että keskimääräinen metylaatio taso oli merkittävästi korkeampi nousevassa koolontuumoreissa verrattuna muilla sivustoilla . Suosittelemme, että paikkasidonnainen sekoittavien tekijöiden tulisi aina otettava huomioon, kun tekee tutkimusta tutkimuksia geneettisiä tai epigeneettiset muutokset.

määritelmä hypermetylaation tai hypometylaatio

Vaikka yhä enemmän todisteita tukee ennustetekijöiden merkitys LINE-1 metylointi, kynnys määritellään, onko mitattu metylaatio taso on hypermetyloitunut tai hypometyloidut on vielä vahvistettu. Saito et ai. havaittu ennustetekijöiden vaikutus LINE-1 metylointi ei-pienisoluinen keuhkosyöpä pitää korkea kynnys on 90% [39]. Antelo et ai. määritelty LINE-1 hypometylaatio nuorilla CRC potilailla käyttäen cutoff-arvo on 65%, ja totesi, että ne potilaat, joilla oli 65% LINE-1 metylointi oli huonompi eloonjäämiseen [18]. Tutkimuksessamme olemme luokiteltu LINE-1methylation tasoilla osaksi korkean ja matalan tason ryhmien perustuu aikaisempien tutkijoiden käsitteitä [40,41]. Jotta tarkasti tunnistaa optimaalinen sulku arvo LINE-1 metylointi potilaalla esiintyy kasvaimen uusiutumisen jälkeen radikaali CRC kirurgian, me sitten toteutettiin ROC-analyysi. Jatkuvan saadut tiedot näistä näytteistä, alue käyrän alla (AUC), havaittiin olevan 0,593, ja 70,15% pidettiin kynnysarvon metylaation oli tasapainotettu herkkyys ja spesifisyys. Joilla on korkeampi raja-arvo ja huonompi syrjivää suorituskyky, meidän tulos oli hieman erilainen kuin raportoitu edellisessä tutkimuksessa Baba et ai [25]. Vuonna heterogeeninen populaatio käsittää CRC kaikissa vaiheissa, ne saavutettiin parempi AUC 0,62 harkitsemalla raja-arvo on 60%. Tästä huolimatta on parantamisen varaa diagnostinen suorituskykyä enemmän suuren mittakaavan tutkimuksia on perustuttava ositettuun populaatiot ja eri kasvainten paikoissa.

LINE-1 metylointi vaihtelua CRC ja ilman toistumisen

Monet tutkijat ovat innokkaasti jatkanut tutkia mekanismia, jolla LINE-1 metylaatio liittyy onkologisiin tuloksia. Hypometylaatio LINE-1 aiheuttaa transkription aktivaation mahdollisia syövän synnyn [9,16]. Laajennetun ilmentyminen LINE-1 jälkeen hypometylaatio voi aiheuttaa kromosomi epävakauteen (CIN), joka on kutsutaan ominaisuutena fenotyypin invasiivisia syöpiä ottaa huonompi ennuste [13,16]. Lisäksi Hur et al. raportoi äskettäin, että on ollut näyttöä siitä, että LINE-1 hypometylaatio toimii ratkaiseva ominaisuus CRC etäpesäkkeitä, erityisesti maksan etäpesäkkeiden [42]. Tämä on hyvä kanssa tilastollisesti merkitsevää eroa LINE-1 metylaatiotasoilla uusiutumisen ja ei-toistuminen ryhmät Tutkimuksemme (taulukko 2). Niistä 48 paksusuolensyöpä toistuminen tutkimuksessamme kohortissa oli 14 tapausta maksametastaaseja. Kuitenkin LINE-1 metylaatiotasoilla paksusuolen syövän potilaiden maksan etäpesäke eivät osoittaneet merkittävää eroa verrattuna muihin toistuminen. Toisin näkökulmat aiempien tutkijoiden, olemme osoittaneet keskeinen havainto, että LINE-1 hypometylaatio on jonkin verran vaikutusta varhaisen toistumisen (DFS lyhyempi kuin 6 kuukautta) kohortin että lopulta kokenut toistuminen. Nämä tulokset korostavat keskeistä roolia LINE-1 metylointi kehittämisessä paksusuolen syövän uusiutumiseen, varsinkin aikaisin toistumisen. Siksi on välttämätöntä suunnitella usein ja varhain valvonta strategioita ohjaamiseksi leikkauksen jälkeisen seurannan potilaiden kuuluvien hypometylaatio ryhmään.

Rajoitukset

Useat rajoitukset on otettava huomioon, kun tulkittaessa havainnot tutkimuksemme. Ensinnäkin, jotkut vaikuttavien tekijöiden globaalin metylaation ei ohjata. Koska tutkimus väestö ei prospektiivisesti palvelukseen, tiettyjen ympäristötekijöiden tai potilas liittyvää tietoa ei voitu kirjata leikkausta. Esimerkiksi ionisoiva säteilytys, tupakointi, ja fyysinen aktiivisuus on raportoitu aiheuttavan muutoksia LINE-1 metylointi [43-45]. Jotta vältettäisiin enemmän recall harhojen, emme yritä hallita näitä mahdollisia sekoittavien tekijöiden tutkimuksessamme. Lisäksi perusteella Tässä tutkimuksessa saattaa olla eettisesti hyväksyttävää tekemään tutkimuksen, joka randomizes potilaalla ei ole hallinnon FOLFOX adjuvanttihoitoa. Olemme ehdottaneet, että metylaatiostatuksen voitaisiin käyttää kerrostuminen tekijä. Toiseksi määrä tutkimukseen osallistuneista on rajallinen, ja syrjäytyneen väestön on edelleen huomattava. Taulukosta pois jätetty osuus saattaa hallussaan joitakin vaikutuksia kokonaistulokset jos ne myös ilmoittautunut. Lisäksi seurannan kestoa voitaisiin laajentaa valottaa ennustetekijöiden vaikutus syöpäkuolleisuuden. Näistä rajoituksista huolimatta pystyimme osoittamaan, että viittaavia tekijöitä olivat erillisiä ja ennusteet olivat erilaisia ​​Metylointilaitteistoon alaryhmiä muodostuu homogeeninen Aasian väestöstä.

Johtopäätös

Tuloksemme osoittavat, että vaikka hoidettavan jossa radikaaleja ja FOLFOX adjuvanttihoitoa, vaiheen III paksusuolensyöpä potilaalla on LINE-1 hypometylaatio kohdanneet varhain leikkauksen jälkeisiä toistuminen ja lyhyempi DFS.

tukeminen Information

S1 Dataset. Tiedot 129 tutkimukseen osallistuneista.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0123973.s001

(XLS) B

Kiitokset

Tekijät Kiitokset Ming-Yii Hwang tarjota hyödyllisiä ehdotuksia aiemmat versiot tämän käsikirjoituksen.