Krooninen sairaus

tiivistelmä

MUC1 liittyy solutransformaatioon ja tuumorigeenisyystesti ja pidetään tärkeänä kasvaimeen liittyvä antigeeni (TAA) syöpähoitoa varten. Olemme aiemmin raportoitu, että anti-MUC1 monoklonaalinen vasta-aine C595 (MAb C595) ja doketakselin (DTX) lisääntynyt tehokkuus DTX yksin ja aiheutti ihmisen viljellyissä epiteelin munasarjasyöpä (EOC) solujen apoptoosiin. Lisätutkimuksia mekanismeja tämän yhdistelmän välittämän apoptoosin, tutkimme tehokkuutta tämän yhdistelmähoidon

in vivo

käytettäessä intraperitoneaalinen (i.p.) EOC hiirimallissa. OVCAR-3 soluja istutettiin vatsaonteloon naisten atyymisissä nude-hiirissä ja annettiin kasvaa kasvain ja askites. Hiiriä käsiteltiin sitten yhdellä MAb C595, DTX, yhdistelmä testi (MAb C595 ja DTX), Yhdistelmäsäätöventtiilissä (negatiivinen MAb IgG

3 ja DTX) tai ajoneuvon hallinnan i.p. 3 viikkoa. Käsitellyistä hiiristä tapettiin 4 viikkoa hoidon jälkeen. Askites tilavuus, kasvaimen paino, CA125 tasoilla vatsaonteloon sekä selviytymisen eläimiä arvioitiin. Ilmaisu MUC1, CD31, Ki-67, TUNEL ja apoptoottisten proteiinien tuumoriksenografteja arvioitiin immunohistokemiallisesti. MAb C595 yksin estetty i.p. kasvaimen kasvun ja askites tuotannon annoksesta riippuvaisella tavalla, mutta ei tietenkään estä kasvaimen kehittymisen. Kuitenkin yhdistelmä testi vähensi askites volyymin, kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden, CA125 tasot vatsaonteloon sekä parantaa selviytymistä käsiteltyjen hiirten verrattuna monoterapiana saaneilla hiirillä, Yhdistelmäsäätöventtiilissä tai ajoneuvon hallinnan saaneilla hiirillä (

P

0,05). Aineisto oli hyvä kanssa, että viljellyistä soluista

in vitro

. Taustalla olevia mekanismeja havaitut vaikutukset voivat olla kohdistamalla MUC1 antigeenejä, tuumorin angiogeneesin ja apoptoosin induktio. Tuloksemme viittaavat siihen, että tämä yhdistelmä lähestymistapa voidaan tehokkaasti vähentää kasvaintaakkaa ja askites, pidentää elinaikaa eläinten kautta induktion kasvaimen apoptoosin ja nekroosin, ja se voi antaa mahdollisen hoidon kehittyneitä metastaattisen EOC.

Citation: Wang L, Chen H, Pourgholami MH, Beretov J, Hao J, Chao H, et al. (2011) Anti-MUC1 monoklonaalinen vasta-aine (C595) ja Docetaxel vähentää selvästi kasvaintaakkaa ja Askites, ja pidentää elinaikaa käytettäessä

in vivo

munasarjasyöpä Model. PLoS ONE 6 (9): e24405. doi: 10,1371 /journal.pone.0024405

Editor: Ilja Ulasov, University of Chicago, Yhdysvallat

vastaanotettu: toukokuu 23, 2011; Hyväksytty: 09 elokuu 2011; Julkaistu: 09 syyskuu 2011

Copyright: © 2011 Wang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus oli osittain tuettu kansainvälinen Collaborative Grant Henan Health Board, Kiina (LW, HMC ja HTC), joka on Cancer Instituten NSW Urakehitys Fellowship (YL) ja St George sairaala Munasarjojen Cancer Research Trust Fund (YL ja JK). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

epiteelikasvaimet munasarjasyöpä (EOC) on kaikkein vaarallisin naistentautien maligniteetti ja viidenneksi yleisin syy syöpään liittyvien kuolemien naisilla Yhdysvalloissa, mikä tarkoittaa arviolta 21880 uutta tapausta ja 13850 kuolemantapausta vuonna 2009 [1 ]. Potilailla, joilla on edennyt sairaus on vastausprosentti yli 80% leikkauksen jälkeen ja adjuvanttihoitoa platina-taksaanin, jossa mediaani etenemisestä vapaan välein 18 kuukauden [2]. Valitettavasti syöpä toistuu suurin osa näistä potilaista, ja koko 5 vuoden pysyvyys potilailla, joilla on pitkälle edennyt sairaus on vain 23-30% [3]. Tavanomaisten syövän kemoterapia aiheuttaa usein vakavia sivuvaikutuksia, jotka liittyvät epäspesifisen toimintatavat. Tutkimukset arvioida erilaisten sytotoksisten aineiden toistuva EOC ovat löytäneet hoitovasteen 10-28%, jos niitä seuraa progressiivinen lisääntyminen lääkkeille vastustuskykyisten kasvainten [4]. Siten uusia terapeuttisia strategioita tarvitaan kiireesti parantamaan lopputulokseen tätä tappavaa tautia. Lupaava lähestymistapaa, joka voi parantaa potilaan tulokseen on käyttää monoklonaalisia vasta-aineita (MAb: t), johon yhdistyy perinteinen kemoterapia.

MUC1 on suuri molekyylipaino läpäisevä glykoproteiini, joka on yli-ilmentynyt useissa karsinoomissa [5], [6], mukaan lukien EOC [7] – [9], ja välittää signaalitransduktion tapahtumia motiliteettia stimuloivien, invaasio ja metastaasi syöpäsolujen [10]. MUC1 on yli-ilmentyy 90% EOC solujen pinnat [7], [8]. Kohonneiden tasojen MUC1 ilmentymisen syöpäsolut voivat peittää extra-cellular verkkotunnuksia immuunivalvonnan, annetaan selviytymisen etua pahanlaatuisia soluja ja jolla on tärkeä rooli tuumorien kykyä hyökätä ja etäispesäkkeitä [11]. Siten kasvaimeen liittyvät MUC1 on lupaava molekyylikohteena uudenlainen hoito EOC potilaille.

C595 on IgG

3, hiiren MAb nosti proteiinia vastaan ​​ydin ihmisen MUC1 (virtsan epiteelin mucin1) [ ,,,0],12]. Epitooppikartoitus on osoittanut, että C595 tunnistaa tetrapeptidi motiivi (RPAP) proteiinissa ydin MUC1 mucin, joka sisältää suuren domeenin kerrannaisina erittäin konservoitunut 20 aminohapon toistosekvenssi (PDTRPAPGSTAPPAHGVTSA) [12], [13]. MAb C595 on merkitty γ lähettävä radioisotooppi (

111In) testata sen kyky syövän lokalisointi ja tunnistaminen 19 potilaalla, joilla kliininen epäily munasarjojen maligniteetin, ja saavuttaa lopullinen tarkkuus 79% ja 64% verrattuna magneettikuvaus kuvantaminen ja ultraääni suhteessa lopulliseen kasvainhistologiaa [14]. Sen jälkeen leimausta α-emitteri (

213Bi),

213Bi-C595 α-konjugaatti (AC) on käytetty kohdistamaan yhden eturauhasen [15], haiman [16] ja munasarjojen soluista [17]

vuonna vitro

ja taantua haiman ihonalainen ksenografteja

in vivo

[18]. Nämä tulokset tukevat hypoteesia, että MAb C595 on käyttökelpoinen joko yksin tai yhdessä muiden hoitojen hoidon parantamiseksi kehittyneen EOC.

Vaikka paklitakselia käytetään ensivaiheen hoidolle, sen analogi dosetakseli (DTX) on etuja, kuten hitaampi solujen ulosvirtausta ja suurempi liukoisuus, mikä mahdollistaa suuremmat solunsisäisiä pitoisuuksia [19]. Kliinisissä tutkimuksissa DTX johti vastaava hoitovaste ja on osoittanut aktiivisuutta paklitakseli tulenkestävä karsinoomien [20], [21]. DTX on osoittanut merkittävää aktiivisuutta sekä prekliinisen ja kliinisissä tutkimuksissa hoitoon lukuisia kiinteitä maligniteetteja kuten EOC [22] – [25]. On uskottavaa, että DTX voi tulla osaksi ensilinjan hoitoa EOC. DTX yhdistettynä platinayhdisteellä (kuten karboplatiini) on tullut systeemistä kemoterapiaa valinta ensisijaisen EOC, korkea tehokkuus. Kuitenkin annoksesta riippuvaa toksisuutta ja lopulta resistenssin kehittyminen ovat merkittäviä kysymyksiä, jotka vaativat huomiota gynekologista onkologian ympäristössä. Tuloksena useimmat näistä potilaista kuolee etäpesäkkeitä. Säilyttää alhainen lääkkeen tasot verenkiertoon kautta paikalliseen syöttöön voidaan näin vähentää myrkyllisiä sivuvaikutuksia, ja lisätä paikallista lääkeainekonsentraatioille vatsakalvon, jossa munasarjojen kasvaimia ja askites oleskella. Tämä voidaan saavuttaa i.p. hallinto. National Cancer Institute on suositellut, että i.p. kemoterapian harkita edenneen munasarjasyövän [26]. Yhdistelmähoito erityisesti käyttämällä strategioita, kuten kemoterapeuttinen aine ja vasta-aineen kautta, i.p. anto voi tehokkaasti pienentää annosta rajoittava toksisuus ja parantaa hoidon tehoa.

Tuoreessa tutkimuksessa osoitimme, että MAb C595 yksin voisi tappaa EOC solujen annosriippuvaisesti; tämä tappaminen oli myös riippuvainen MUC1 ekspressiotasoja. Pieniannoksisen MAb C595 yhdistää DTX lisääntynyt EOC herkkyys kemoterapia huumeiden ja vähensi tarvittava annos [27]. Tässä tutkimuksessa olemme arveltu, että tämä yhdistelmä hoito voidaan tehokkaasti työskennellä

in vivo

EOC eläinmallissa. Huomasimme, että MAb C595 voi estää i.p. kasvaimen kasvua ja askites tuotannon OVCAR-3 hiiren ksenograftimallissa ja parantaa terapeuttista tehoa DTX pitoisuutena riippuvaisella tavalla, ja että sen jälkeen i.p. injektio, tämä yhdistelmä hoito (testi) (MAb C595 ja DTX) voitaisiin huomattavasti vähentää kasvaintaakkaa ja askitesta ja siten pidentää eloonjäämisen hoidetuista eläimistä. Tuloksemme viittaavat siihen, että tämä uusi yhdistelmä lupaava mahdollisena terapiaa edenneen metastasoituneen EOC.

Materiaalit ja menetelmät

Drug

DTX ostettiin Sigma-Aldrich , Pty Ltd, Castle Hills, NSW, Australia. Lääke oli ensin laimennettiin [hydroperoxymethyl selluloosa (HPMC), valmistettu kuten 0,5% PBS: ssä], ja varastoitiin 4 ° C: ssa käyttöä varten.

Vasta-aineet

MAb C595 oli ystävällisesti Nottingham University ( Nottingham, UK). Hiiren anti-ihmis-IgG

3 isotyyppikontrolli-MAb oli ostettu Zymed Laboratories Inc. (South San Francisco, CA, USA). Kanin anti-humaani Ki-67, kaspaasi-3 (aktiivinen), ja PARP-1 (pilkkoutuu P85) MAb: tä, jonka Epitomics (Burlingame, CA, USA). Rotan anti-hiiri-CD31 MAb hankittiin BD Pharmingen (Bedford, MA, USA). Sian anti-vuohi, -hiiri, -rabbit IgG /biotinyloitua kanin anti-rotta IgG /biotinyloitu streptavidiini /piparjuuriperoksidaasi (HRP) ja hiiren IgG

1 negatiivinen kontrolli MAb ostettiin Dakopatts (Glostrup, Tanska).

Solun viiva ja eläinmallin

kaikissa kokeissa 6~8 viikkoa vanha nainen alaston kateenkorvattomiin BALB /c nu /nu-hiiriä (animal Resources Centre, Perth, Länsi-Australia) käytettiin. Hiiret majoitettiin ja ylläpidetään laminaarisen virtauksen kaappien erityisissä taudinaiheuttajista vapaissa olosuhteissa tiloissa hyväksymiä University of New South Wales (UNSW) Animal Care ja eettisen komitean (ACEC). Tutkimus hyväksyttiin ACEC, UNSW (ID: 08 /110A). Eläimiä pidettiin vähintään 1 viikko ennen kokeellista menettelyä.

ensisijainen OVCAR-3 EOC-solulinja saatiin laitoksesta American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA), ja osa-linja OVCAR-3 valittiin ja onnistunut käytettäessä ip ksenograftimallia käyttäen karvattomia hiiriä laboratoriossamme [28]. Tämä valinta voi lisätä tuumorigeenisyyteen on OVCAR-3-solujen

in vivo

. Lyhyesti, elinkelpoinen OVCAR-3-solut (5 x 10

6/500 ui DPBS: ssä) injektoitiin i.p. käyttäen 1 ml ruisku 26 gaugen neulalla ja annettiin kasvaa. Syövän etenemistä dokumentoitiin kerran viikossa 10 viikon ajan mittaamalla vatsan ympärysmitta vatsan kasvua pehmeällä hallitsija. Kun uhri, kasvaimet poistettiin painotettaessa ja etenee histologista testausta.

Käsittelyprotokollat ​​

Toksisuutta nude-hiirissä ilman kasvaimia: Toksisuus tutkimukset suoritettiin määrittämiseksi enimmäisvirhepoikkeamaan annos (MTD) in hiiret yhden MAb C595, hiiren IgG

3 negatiivinen kontrolli MAb, DTX, yhdistelmä testi (MAb C595 ja DTX) ja Yhdistelmäsäätöventtiilissä (negatiivinen MAb IgG

3 ja DTX). Annos-toleranssi suhde tutkittiin nude-hiirissä (ilman kasvaimia) yhden i.p. anto MAb C595, DTX ja yhdistelmähoitoa (testi) verrattuna Yhdistelmäsäätöventtiilissä hoitoon. Viiden ryhmissä hiiret saivat yhteensä injektoitiin pitoisuus on 1, 5, 10, 15, 20 mg /kg MAb C595, tai 3, 5, 7, 10, 15 mg /kg DTX sekä yhdistettynä MAb C595 (1 /3 MTD eli 5 mg /kg) tai 5 mg /kg MAb IgG

3, 3, 5, 7, 10 mg /kg DTX varten 3 viikkoa. Valitut annokset MAbeja perustuu MTD yksittäisten MAb C595 ja DTX. Hiiren painoja verrattiin päivänä 0 (ensimmäinen päivä hoidon aloittamista) määrittämään prosentuaalinen painon muutos. Annosta rajoittava toksisuus määriteltiin loppupisteet: 15% painon menetys tai ahdistunut käyttäytyminen (ts ruokahaluttomuus ja toiminnan, selän asento). MTD määriteltiin korkein annos, jolla kolmasosa kohortin saavutti annosta rajoittava toksisuus loppupisteet [29]. 10 viikon jälkeen, terve hiiret lopetettiin. Seuraavat kokeet perustuvat MTD alkaen toksisuustutkimukset.

Tehoa tutkimukset OVCAR-3 EOC eläinmallissa: kehittämisen jälkeen askites, vatsaontelo pestiin 2 ml: lla steriiliä normaalia suolaliuosta. Vatsakalvon sisällöt sekoitettiin hallitsemalla varovasti ja sitten täysin vapaasti hengittävä [28]. Hiiriä sitten satunnaisesti jaettiin joko MAb C595 tai DTX yksin yhden hoitoryhmän tai yhdistelmä testi (MAb C595 ja DTX) ja Yhdistelmäsäätöventtiilissä (MAb IgG

3 ja DTX) (n = 10, per ryhmä). Erilaiset hoito aloitettiin heti toiveet askitesnesteestä.

a). Yhden MAb C595 hoito, pieni annos (LD) (5 mg /kg) tai suuren annoksen (HD) (15 mg /kg) MAb suspendoitiin 1 ml: aan suolaliuosta, ja sama tilavuus suolaliuosta 15 mg /kg hiiren MAb IgG

3 (kontrolli) annettiin kerran /viikossa 3 viikon ajan.

b). Yhden DTX hoitoon, LD (5 mg /kg) tai HD (10 mg /kg) DTX suspendoitiin 1 ml: aan HPMC (valmistettu kuten 0,5% PBS: ssä), kuten ajoneuvon ja sama tilavuus HPMC kontrollina.

c). Yhdistelmälle testi (MAb C595 ja DTX) ja Yhdistelmäsäätöventtiilissä (MAb IgG

3 ja DTX) ryhmät, seuraavaa käytettiin. Yhdistelmä testi kuului yksi kerta-annos MAb C595 (1/3 annos MTD, eli 5 mg /kg suspendoitiin 0,5 ml: aan suolaliuosta) yhdistettynä yhden annoksen DTX (10 mg /kg DTX suspendoitiin 0,5 ml: aan HPMC). Yhdistelmä ohjaus sisältyy yksi kerta-annos MAb IgG

3 (5 mg /kg suspendoitiin 0,5 ml: aan suolaliuosta) yhdistettynä yhden annoksen DTX (10 mg /kg DTX suspendoitiin 0,5 ml: aan HPMC). Yhdistelmähoitoa (testi ja kontrolli) ylläpitäjä peräkkäin alkaen MAb C595 tai MAb IgG

3 DTX.

Kaikki käsittelyt tehtiin i.p. ja tarkoitettu Hoito kesti 4 viikkoa perustuu aiempiin tutkimuksiin. Käsittelyjen jälkeen, jos eläimen vatsan ympärysmitta saavutti 9,5 cm tai jos ne odotetaan tulevan kuolemaisillaan lyhyessä ajassa, eläimet tapettiin. Elinaika kunkin eläimen laskettiin päivien kului hoidon aloittamisesta ja eutanasiaa. Lopussa kokeiden, hiiret lopetettiin katkaisemalla kaula alaisena urethrane anestesiassa.

Näytteiden kerääminen

Ennen eutanasiaa, verinäyte kerättiin sydänpunktion nukutuksessa. Lopussa kokeiden, 2 ml fysiologista suolaliuosta injektoitiin i.p. ja vatsaonteloon oli täysin pesty ja hengittävillä varten CA125 havaitsemiseen. Askites volyymit vatsaonteloon kirjattiin. Askitesnesteestä pesu, kasvaimet leikattiin vatsaonteloon, ja plasma, olivat kaikki säilytettiin -80 ° C: ssa myöhempää analyysiä varten. Kumulatiivinen todellinen tilavuus Askites kerättiin jokaisen toive laskettiin vähentämällä 2 ml alkaen kerätty kokonaistilavuus.

CA125 tasoilla askiittinesteessä

tuumorimarkkeri tasoilla (CA125 Ku /L) solussa vapaa askitesneste yksinkertaisesta MAb C595, DTX ja yhdistelmähoidot (testi ja kontrolli) määritettiin ELISA-määrityksellä ohjeita noudattaen St George Hospital Biokemian Laboratories. Pitoisuus CA125 vuonna askitekseen normalisoitiin todelliseen määrään askites kerättiin.

Hiiri kudosten ja histologia

tuumorikudoksista yksinkertaisesta MAb, DTX, yhdistelmä tai auton hallinnan hoidettujen eläinten oli joko välittömästi snap jäädyttää jääleikkeille tai kiinnitetty 10% formaliinilla 24 tuntia, upotettiin parafiiniin lohkossa H positiiviset solut näyttivät ruskea. Ohjaus liukuu käsiteltiin samalla tavalla, ja värjättiin isotyypin MAb tai laiminlyönti ensisijaisen vasta-negatiivisena kontrollina. Positiiviset kontrollit valittiin riippuen eri MAbit, paksusuolen syöpä kudosta MUC1, kielen kudosta Ki-67 ja DTX-käsitellyn OVCAR-3 solulinja kaspaasi-3 (aktiivinen) ja PARP-1 (pilkkoutuu P85).

CD31-värjäys, jäädytetyt leikkeet sulatettiin, ilmakuivattiin ja fiksoitiin kylmässä asetonissa 10 minuuttia huoneenlämpötilassa. Kun nopea kuivua ja pesu TBS: llä, leikkeitä inkuboitiin rotan anti-hiiri-CD31 MAb (1:100 laimennus) O /N 4 ° C: ssa. Huuhtelun jälkeen TBS: llä, leikkeitä inkuboitiin kaniinin anti-rotta-biotinyloitua lgG: tä (1:200 laimennos) 45 min, ja sitten konjugoitua streptavidiinia /HRP (1:200 laimennos) vielä 30 minuutin ajan. Osiot kehitettiin käyttämällä DAB liuosta (Sigma-Aldrich, Pty Ltd, Castle Hills, NSW, Australia), ja vastavärjättiin hematoksyliinillä. Ohjaus liukuu käsiteltiin samalla tavalla, ja värjättiin isotyypin MAb tai laiminlyönti ensisijaisen vasta-negatiivisena kontrollina.

TUNEL määritys apoptoottisten solujen

in vivo

Apoptoosi arvioitiin kasvaimen Ksenograftikudoksista käyttämällä TUNEL-menetelmää ja TdT-fragEL in situ apoptoottisen detektioreagenssipakkaus (Calbiochem, San Diego, CA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Spesifisyys TUNEL reaktiivisuus vahvistettiin sopivilla negatiivinen (TdT jätetty pois merkinnöistä mix) ja positiivisia (käsitelty HL-60 liukuu yrityksen toimittamat) valvontaa. Objektilasit tutkittiin käyttämällä Leica valomikroskoopilla (Nussloch, Saksa).

Arvio immunovärjäyty-

Värjäys voimakkuus (0-3) arvioitiin valomikroskoopilla (Leica mikroskooppi, Saksa) at a × 40 objektiivinen – (negatiivinen), + (heikko), ++ (kohtalainen), ja +++ (voimakas). Arviointi kudosvärjäyksellä tehtiin itsenäisesti kaksi kokenutta tarkkailijaa (LW ja HMC). Kaikki näytteet pisteytettiin sokea ja keskimäärin laadut otettiin. Jos ristiriitainen tulokset saatiin, erot ratkaistiin yhteisen tarkastelun ja kuulemisen kolmannen tarkkailija, kokenut immunohistokemiallinen patologian.

Tilastollinen

Kaikki numeeriset tiedot ilmaistiin keskiarvona saatujen arvojen ja keskihajonta (SD) laskettiin. Tiedot käsitellään ja kontrolliryhmiin verrattiin käyttäen kaksisuuntainen opiskelijan t-testiä. Kaikki

P

arvot olivat 2-puolinen. Yksisuuntainen ANOVA, jota seurasi Dunnettin post hoc Testi suoritettiin määrittämiseksi merkittäviä eroja keskimääräisessä hiirillä painon muutoksia toksikologisissa tutkimuksissa. Survival laskettiin päivien kului hoidon aloittamista ja eutanasiaa, ja% hiiristä elossa oli eläinten määrän jäljellä kussakin ryhmässä (x 10) lopussa kunkin viikon kuluttua hoidon aloittamisesta.

P

0,05 pidettiin merkittävänä. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttämällä GraphPad Prism 4,00 paketti (GraphPad, San Diego, CA, USA).

Tulokset

toksisuusarviointeihin yhden MAb C595, DTX ja yhdistelmähoidot

kerta-annoksena MAb C595 1, 5, 10, 15 mg /kg ja DTX 3, 5, 7, 10 mg /kg ensimmäisen 3 viikon ajan ei pääse myrkyllisyyttä loppupisteet 70 päivän ajan käsittelyn jälkeen (Fig. 1A ja B). Yksittäinen antaminen MAb IgG

3 15 ja 20 mg /kg ensimmäisen 3 viikon ajan ei pääse myrkyllisyyttä loppupisteet 70 päivän ajan käsittelyn jälkeen (tuloksia ei ole esitetty). Hiiret käsiteltiin 20 mg /kg MAb C595 /viikko tai 15 mg /kg DTX /viikko alkoi laihtua ja olivat lopetettiin 4 viikkoa hoidon jälkeen, koska merkkejä hätä; histopatologisia tutkimuksia osoitti lievää nefropatia näissä ryhmissä. Tulokset viittaavat siihen, että MTD yhden annoksen MAb C595 välissä 15 ja 20 mg /kg, kun taas MTD kerta-antoa varten DTX välissä 10 ja 15 mg /kg.

Prosentuaalinen painon muutokset verrattuna päivä 0 (eli päivä yhden tai yhdistelmän annon). A. Annos-toleranssi suhde hiirissä yhdellä MAb C595. ▪: MAb C595 (1 mg /kg); ▴: MAb C595 (5 mg /kg); ▾: MAb C595 (10 mg /kg); ♦: MAb C595 (15 mg /kg); •: MAb C595 (20 mg /kg). Merkittävä ero havaittiin 20 mg /kg MAb C595-käsitellyn ryhmän ja muiden MAb C595-käsiteltyjen ryhmien (5-15 mg /kg) (

P

0,05). B. Annos-toleranssi suhde hiirissä yhdellä DTX. ▪: DTX (3 mg /kg); ▴: DTX (5 mg /kg); ▾: DTX (7 mg /kg); ♦: DTX (10 mg /kg); •: DTX (15 mg /kg). Merkittävä ero havaittiin 15 mg /kg DTX-käsitellyn ryhmän ja muiden DTX-käsiteltyjen ryhmien (5-15 mg /kg) (

P

0,05). C. Annos-toleranssi suhde hiirissä yhdistelmänä testi [MAb C595 (5 mg /kg) + DTX (3-10 mg /kg)]. ▪: MAb C595 + DTX (3 mg /kg); ▴: MAb C595 + DTX (5 mg /kg); ▾: MAb C595 + DTX (7 mg /kg); ♦: MAb C595 + DTX (10 mg /kg). D. Dose-toleranssi suhde hiirissä Yhdistelmäsäätöventtiilissä [MAb IgG

3 ohjaus (5 mg /kg) + DTX (3-10 mg /kg)]. ▪: MAb IgG

3 + DTX (3 mg /kg); ▴: MAb IgG

3 + DTX (5 mg /kg); ▾: MAb IgG

3 + DTX (7 mg /kg); ♦: MAb IgG

3 + DTX (10 mg /kg). Points, keskiarvo (n = 5 kussakin ryhmässä); bar, SD.

yhdistelmähoidot, käytimme 1/3 MTD MAb C595 (eli 5 mg /kg) testinä ja 5 mg /kg negatiivinen MAb IgG3 kontrollina yhdistettynä erilaisia ​​DTX (1~10 mg /kg) arvioitava edelleen myrkyllisyyden yhdistelmän hoitoja. Myrkyllisyyttä ei havaittu yhdistelmähoidot (Fig. 1 C ja D). Ei ollut makroskooppista merkkejä kroonista myrkyllisyyttä tärkeimpien elinten mistään hiirillä. Valkosolujen määrä oli masentunut ääreisverenkierrossa käsitellyissä hiirissä 2 viikon kuluttua injektion, jossa talteenotto esiintyvien 4 viikkoa normaalia hematologian nähtiin 70 päivää. Nämä tulokset viittaavat siihen, että yhdistelmähoidot MAb C595 ja DTX tai kontrolli MAb IgG

3 ja DTX voidaan turvallisesti käyttää eläinmalleissa tutkia tehoa.

vaikutus yhden MAb C595 ja DTX kasvaimen kasvun estäminen ja askites tuotanto

ensinnäkin verrattuna antituumorivaikutuksen yhden MAb C595, MAb IgG

3 ohjaus, yhden DTX ja ajoneuvon hallinnan (HPMC) kehittymisen jälkeen vatsaonteloon sekä alustava pyrkimys 3 viikkoa. Kumulatiivinen tilavuus askitesnesteen tuotettua eläintä kohti on esitetty kuviossa. 2A. Ajoneuvon-käsitellyt hiiret jatkoi tuottaa askites on useammin korko ja oli imetään toistuvasti aikana hoidon (28 päivää), kun taas MAb C595-käsitellyistä hiiristä tuottivat vähemmän askites yhteydessä annokseen MAb C595 (4 ± 1 ml HD ja 5 ± 1 ml LD, vastaavasti) verrattuna MAb IgG3 verrokkihiiriin (7 ± 2 ml) (Fig. 2A). DTX-käsitellyillä hiirillä kehittyi askites hitaasti verrattuna HPMC-ohjaus (6 ± 1 ml), ja tuotanto Askites liittyvät annoksen DTX (2 ± 1 ml HD ja 4 ± 1 ml LD, vastaavasti) (Fig. 2A ). HD DTX (10 mg /kg) vähensi merkittävästi kehitystä askites (P 0,05, Fig. 2A). Sen lisäksi, että askites tuotantoa, arvioitiin myös koko kasvaimen painon muutos kunkin ryhmän lopussa kokeiden (4 viikkoa hoidon jälkeen). Kasvaimen painon muutos on yhdenmukainen muutos askites tuotannon (Fig. 2B). Yhden MAb C595 vain osittain inhiboi kasvua OVCAR-3 kasvaimet, mistä on osoituksena kasvaimen paino 380 ± 80 mg LD (5 mg /kg) ja 260 ± 76 mg HD (150 mg /kg) verrattuna 560 ± 77 mg hiirillä, jotka saivat negatiiviset MAb IgG3 kontrolli (15 mg /kg) (P 0,05), vastaavasti, kun taas yhden DTX ilmeisesti inhiboi kasvua OVCAR-3 kasvaimet, mistä on osoituksena kasvaimen paino 230 ± 66 mg LD (5 mg /kg ) ja 75 ± 14 mg HD (10 mg /kg) verrattuna 540 ± 96 mg hiirillä, jotka saivat saman määrän HPMC (P 0,05), vastaavasti (Fig. 2B). Nämä tulokset viittaavat siihen, että sekä MAb C595 ja DTX voi aiheuttaa regression OVCAR-3 tuumorin kasvua annoksesta riippuvaisella tavalla, ja että anti-kasvain aktiivisuus DTX on tehokkaampi kuin MAb C595.

jälkeen eutanasia vatsaonteloon kunkin hiiren pestiin 2 ml: lla normaalia suolaliuosta, ja sen jälkeen imu, tilavuus askites läsnä on tallennettu. A. kumulatiivinen määriä Askites kerättiin jokaisesta eläimestä hoidon aloittamista [MAb C595 (H ja L), MAb IgG

3, DTX (H ja L) esitetään. Ilmeinen ero nähtiin välillä DTX (H) hoidettujen ryhmässä ja muut käsitellyn ryhmän (

P

0,05). B. Kasvaimen painot (mg) lopussa kokeita kerta MAb C595, MAb IgG

3, DTX tai ajoneuvon hoitoja eri annoksilla. Kasvain painaa oli ilmeisesti pienempi MAb saaneilla ja DTX-käsiteltyjen ryhmien verrattuna MAbIgG

3 käsiteltyä ja HPMC-käsiteltyjen kontrolliryhmien (

P

0,05). C. Vaikutus yhden MAb C595, MAb IgG

3, DTX tai ajoneuvo tukahduttaa kasvun tuumorimarkkeri ca125 (CA125 Ku /L) on askitesnesteessä (vatsakalvon pesu) lopussa kokeita. Taso CA125 oli ilmeisesti pienempi MAb C595 (H) hoidettujen ja DTX-käsiteltyjen ryhmien verrattuna MAbIgG

3 käsiteltyä ja HPMC-käsiteltyjen kontrolliryhmien (

P

0,05). H: suuri annos; L: pieni annos. Edustavia kuvaajat esitetään.

vaikutus yhdistelmän MAb C595 ja DTX syöpäkasvainten kasvuun, askites tuotanto ja selviytymisen

vertasi antituumorivaikutuksen yhdistelmä 1/3 MTD MAb C595 (5 mg /kg) tai kontrolli-MAb-IgG

3 (5 mg /kg) ja yksi annos DTX (10 mg /kg) kehittymisen jälkeen vatsaonteloon sekä alkuperäisen pyrkimys 3 viikkoa. Yhdistelmä-testi (5 mg /kg MAb C595 ja 10 mg /kg DTX) voisi merkittävästi kehittymisen estämiseksi askites verrattuna yhdistelmä-ohjaus (5 mg /kg MAb IgG3 ja 10 mg /kg DTX) ja vehikkeliä (Fig. 3A) . Kuvio askites tuotannon yhdistelmä kontrolliryhmässä on samanlainen kuin yhden 10 mg /kg DTX hoitoon, kuten edellä on kuvattu. Kumulatiivinen tilavuus askitesnesteen tuotetun eläintä kohti on esitetty yhdistelmä-testi (0,4 ± 0,2 ml), yhdistelmä-ohjaus (2 ± 1 ml) ja vehikkeliä (7 ± 2 ml) on esitetty. 3B (P 0,05). Neljä viikkoa käsittelyn jälkeen yhdistelmä testi hoito esti merkitsevästi kasvua OVCAR-3 kasvaimet, mistä on osoituksena kasvaimen paino 15 ± 11 mg vs 65 ± 16 mg yhdistelmä kontrolliryhmässä ja 560 ± 100 mg vehikkelikontrolliryhmään (P 0,05) (Fig. 4C).

. Lopussa kokeissa, ei selviä merkkejä askites muodostumisen nähdään yhdessä testissä (5 mg /kg MAb C595 + 10 mg /kg DTX) hoidettujen hiiret (a); merkkejä Askites muodostumista havaittiin yhdistelmänä ohjaus (5 mg /kg MAb C595 + 10 mg /kg DTX) hoidettujen hiiriä (b); selviä merkkejä Askites muodostumista havaittiin ajoneuvon (1/2 suolaliuos + 1/2 HPMC) käsiteltyä hiiriä (c). B. Kumulatiivinen askites määriä yhdistelmä testi, Yhdistelmäsäätöventtiilissä tai ajoneuvon käsitellyissä hiirissä esitetään (

P

0,05). C. Vaikutus yhdistelmä testin Yhdistelmäsäätöventtiilissä tai ajoneuvo tukahduttaa kasvun tuumorimarkkeri tasolla (CA 125 Ku /L) on askitesnesteessä (vatsakalvon pesu) lopussa kokeilut (

P

0,05 ). Edustavia kuva ja kuvaajat esitetään.

. Kasvaimen painon muutokset lopussa kokeiluja jälkeen yhdistelmän testin Yhdistelmäsäätöventtiilissä tai ajoneuvon hoitoja eri annoksilla (

P

0,05). B. kasvaimen tilavuus yhdistettynä testi-hoidetut hiiret oli huomattavasti pienempi kuin auton hallinnan käsitellyissä hiirissä (

P

0,01). C. kaikki eläimet, aiotun hoidon kesto oli 4 viikkoa. Hiiret (10 per ryhmä) suoritettiin eutanasia jos johtuu huonosta terveydestä, niiden odotettiin tulla kuolemaisillaan lyhyessä ajassa. Survival laskettiin päivien kului hoidon aloittamista ja eutanasiaa, ja% hiiristä elossa oli eläinten määrän jäljellä kussakin ryhmässä (x 10) lopussa kunkin viikon kuluttua hoidon aloittamisesta. Eloonjäämisaste eläinten yhdistelmän testiryhmässä oli paljon parempi kuin että yhdistelmä kontrolliryhmässä tai ajoneuvo ryhmä (

P

0,05). Kuvat ovat ja pylväsnäyttönä.

Yhden tai yhdistelmähoito vaikuttaa tuumorimarkkeri CA125 tasoilla

Lopussa kokeiden muutos keskimääräisessä CA125 tasoilla yhden MAb C595 LD ei ollut merkittävästi erilainen verrattuna MAb IgG

3 ohjaus, kun taas muutos keskimääräisessä CA125 tasoa yhden CA125 HD tai yhden DTX oli tietenkin erilainen verrattuna MAb IgG

3 tai HPMC ohjaus, vastaavasti (

P

0,05) (Fig. 2C). On ilmeistä, että yhdistelmä testi oli merkittävästi inhiboitu CA125 tasoilla verrattuna yhdistelmä kontrolliryhmään (

P

0,05) tai vehikkelikontrolliryhmän (

P

0,01) (kuvio. 3C). Tällä eutanasia, ca125 ajoneuvon arvot olivat 68000 ± 12000 Ku /L, verrattuna yhdistelmän testin ja yhdistelmä valvontaa 14030 ± 5022 Ku /L ja 28306 ± 11403 Ku /L, tässä järjestyksessä. Väheneminen soluvapaa askitesneste CA125 tasoilla on sopusoinnussa väheneminen askites tilavuus ja tuumorin paino.

Histologinen muutoksiin tuumoriksenografteja jälkeen yhdistelmähoito

Jos haluat vertailla histologiaa kunkin ryhmän,