Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

syöpään liittyvän fibroblasteja (CAF) aktivoituvat fibroblastien syövän strooman ja tärkeä rooli syövän etenemiseen. Joidenkin raporttien ovat osoittaneet korrelaation ilmaisun CAF markkereita ja haitallisia ennusteen useissa syövissä. Kuitenkin raportteja ei tutkittu CAF fenotyypin ja sen kliinistä merkitystä ruokatorven okasolusyöpä (ESCC).

Methods

Tutkimme CAF fenotyyppi ESCC perustuu histologian ja immunohistokemiallinen ilmauksia viisi CAF merkkiaineiden kuten fibroblastien aktivoitumista proteiini (FAP), sileän lihaksen aktiinin (SMA), fibroblasti-spesifinen proteiini-1 (FSP1), verihiutaleperäisen kasvutekijän reseptori (PDGFRα), ja PDGFRβ 116 ESCC kudosnäytteistä. Lisäksi meillä on myös tutkinut korrelaation CAF ilmiasuun kliinistä merkitystä sekä muita syöpään microenvironment liittyvät tekijät.

Tulokset

histologisesti epäkypsä CAF fenotyyppi korreloi huonon ennusteen (p 0,001 ) ja liittyy lisääntynyt mikroverisuonitiheys, lisääntynyt kasvaimiin liittyviä makrofageja, ja epiteelin että mesenkymaalitransitioon. CAF markkereita ilmenivät ilmaistaan ​​strooman fibroblastien lähellä kasvainsoluja ja ekspressiokuviota 5 CAF markkereita oli hyvin heterogeeninen jokaisessa yksittäistapauksissa. Viiden CAF markkereita, SMA, FSP1, ja PDGFRα oli epäsuotuisa ennustetekijöiden indikaattorit ESCC. Positiivisten CAF merkkiaineiden oli suurempi ESCC epäkypsiä valuuttalisiin kuin niissä kypsä niistä.

Johtopäätökset

Tuloksemme osoittavat, että histologinen luokitus CAF fenotyyppi on luotettava ja merkittävä prognostisia ennustin vuonna ESCC. CAF markkereita on potentiaalia olla diagnostisia ja terapeuttisia kohteita ESCC.

Citation: Ha SY, Yeo S-Y, Xuan Y-h, Kim S-H (2014) ennustetekijöiden merkitys Cancer-Associated fibroblastien Ruokatorven Okasolusyöpä. PLoS ONE 9 (6): e99955. doi: 10,1371 /journal.pone.0099955

Editor: Jörg D. Hoheisel, Deutsches Krebsforschungszentrum, Saksa

vastaanotettu: 07 helmikuu 2014; Hyväksytty: 20 toukokuu 2014; Julkaistu: 19 kesäkuu 2014

Copyright: © 2014 Ha et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat myöntämisestä Korea Health Technology R Welfare, Korean tasavalta (lupanumeroon: HI11C17620000), ja Samsung Biomedical Research Institute apurahan SS1B30131. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Cancer liittyvien fibroblasteissa (valuuttalisiin) on aktivoituneiden fibroblastien syövän strooman ja ovat kärjessä monien kiinteiden kasvainten, kuten rinta-, paksusuoli-, ja melanooma. [1] – [5] valuuttalisiin ovat näkyvä solutyyppi sisällä kasvain strooman monien syöpien ja tärkeä toimija syöpää microenvironment joka koostuu dynaamisesta sekoitus fibroblastien, monosyyttien /makrofagien, endoteelisolujen, lymfosyyttien ja granulosyyttien. [2], [6] valuuttalisien ajaa kasvain etenemisen suoraan stimuloimalla kasvainsoluproliferaation läpi erityksen eri kasvutekijöiden ja sytokiinien, kuten hepatosyyttikasvutekijän, transformoiva kasvutekijä-β, stroomasolujen johdettu tekijä 1 ja interleukiini-6 sekä remodeling syöpä microenvironment kautta laskeuman soluväliaineen ja rekrytointi muiden toimijoiden, kuten erilaisten tulehdustautien ja endoteelisoluihin. [1] – [3] Lisäksi, aktivoitu valuuttalisiin edistää syövän etenemisen angiogeneesin. [1] – [3] aikana syövän etenemisessä, valuuttalisiin edistää invasiivisia syöpäsolujen kasvun erittämällä useiden proteaasien kuten matriksimetalloproteinaasin tai katepsiinit ja indusoi epiteelin ja mesenkymaalitransitioon (EMT) [1] – [3].

Vaikka fibroblastit ovat levinneet laajalti ja helposti tunnistettavissa, koska niiden fusiform tai kara kaltainen muoto, fibroblastit edelleen heikosti määritelty molekyyli- kannalta eikä ole tiedossa erityisiä ja luotettavia molekyyli- fibroblastien markkereita. [4] Siksi identiteetti CAF on myös huonosti ja CAF markkeri absoluuttisella spesifisyys ei ole tunnistettu. On olemassa useita vakiintuneita indikaattorit CAF kuten sileän lihaksen aktiini (SMA), fibroblasti stimuloiva proteiini-1 (FSP-1), verihiutaleiden kasvutekijän α (PDGFRα), ja PDGFRβ. [4] Kuitenkaan mikään niistä ovat molemmat yksin valuuttalisiin ja läsnä kaikissa valuuttalisiin. [4] sen sijaan, jokainen näistä CAF merkkiaineiden arvioidaan edustaa tiettyä ja eri fenotyyppi valuuttalisien. Lisäksi fibroblastit ovat hyvin erilaisia ​​ja fibroblastien eri anatomisia sivustot ovat huomattavasti erilaiset mentymisprofiili [7].

Yleisesti valuuttalisiin ovat olleet tiedossa on erilaiset morfologia luonnehtia suuri ja pullea solujen erottaa normaalien fibroblastien josta ovat ohuita, aaltoileva, ja pieni sukkulasolut. [4], [6], [8] olemme kuitenkin alustavasti todettu, että jotkut ESCC oli strooman fibroblasteja ottaa histologia suhteellisen normaali fibroblasti, kun taas jotkut oli selvä morfologiaa CAF.

luokittelu histologinen morfologiaa yksittäisten CAF ja sen kliinistä merkitystä ei ole tutkittu, vaikka edellinen raportit osoittivat, että histologisia luokittelun strooman fibroosia korreloi kliinisten tutkimusten tulosten kanssa paksusuolisyövän [9], rintasyövän [10], ja keuhkosyövän [11].

Ruokatorven levyepiteelisyöpä (ESCC) on yksi aggressiivinen pahanlaatuisia kasvaimia, joissa on 5 vuoden pysyvyys on vain 10%. [12] CAF on harvoin käsitelty ESCC huolimatta sen merkitys syövän etenemiseen. Vain hyvin harvat tutkimukset ovat tutkineet biologinen rooli kasvaimen strooman myös angiogeneesiä ESCC. [13] – [18] Koska fibroblastit eri ruumiinosat ovat luonnostaan ​​erilaisia, tuloksena CAF tutkimuksessa syövän eri elinten ei voida suoraan sovellettu ESCC.

Siksi tutkittiin kliinistä merkitystä CAF in ESCC histologiset luokittelun mukaan yksittäisten solujen morfologia ja immunohistokemiallinen tutkimuksia viiden CAF markkereita, kuten FAP, SMA, FSP-1, PDGFRα, PDGFRβ. Lisäksi arvioimme yhdistyksen välillä CAF ja muiden syöpään mikroympäristölle liittyvät tekijät, kuten mikroverisuonitiheys (MVD) ja kasvaimeen liittyvä makrofagi (TAM) tunkeutuminen tai EMT fenotyyppiä.

Materiaalit ja menetelmät

kudosnäytteitä

yhteensä 116 formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut kasvainnäytteestä potilailta, joille tehtiin parantava kirurginen resektio primääri ESCC at Samsung Medical Center, Seoul, Korea 1995-2008, olivat mukana. Tämä retrospektiivinen tutkimus hyväksyi Institutional Review Board Samsung Medical Center, ja suoritetaan noudattaen vuoden 1996 Helsingin julistuksen. Kaikki potilaat toimitti kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen hoitokäytännön mukaisesti. Yksikään potilas ei saanut ennen leikkausta kemoterapiaa tai sädehoitoa. Leikkauksen jälkeinen adjuvanttihoitoa suoritettiin 86,2% (100/116) potilaista: kemoterapiaa ja sädehoitoa 31 potilaalla, kemoterapia vain 51 potilasta, ja sädehoidon vain 18 potilasta. Kliiniset ja patologiset raportit tarkistetaan ikä, sukupuoli, kasvaimen koko, histologinen luokka, invaasio syvyys (pT), imusolmukestatuksesta (PN), ja etäpesäkkeiden (pM). Mediaani seuranta-aika oli 30 kuukautta (vaihteluväli 0-108 kuukautta). PTNM luokitus levitettiin ohjeiden mukaisesti vuoden 2010 American sekakomitean Cancer pysähdyspaikan käsikirja (AJCC 7

painos).

Tissue Microarray (TMA) Reconstruction

hematoksyliinillä ja eosiinilla ( HE) -stained kudokset tarkistettiin vahvistaa histologiseen diagnoosiin ja valita edustavalla immunovärjäämistä. Yksi tai kaksi lieriömäinen sydän (halkaisija 2 mm) poistettiin formaliinilla kiinnitetyt ja parafiiniin upotettujen kudosten lohkoja vastaavat HE liukuu rakentaa kudoksen microarray. Jokainen ydin valittiin sisältämään sekä kasvainten (20-50%) ja tukikudosten (50-80%) komponenttia. Minimoida valinta bias, jokainen kudos ydin oli huolellisesti valittu sisältämään ainakin yhden tai useamman CAF: n ”hot spot” täynnä valuuttalisiin ja strooman soluja. Leikkuu mikrosi- lohkojen tuotetun 4 mm paksu osissa päätyttyä kudoksen array.

luokittelu valuuttalisiin mukaan histologia on hematoksyliinillä ja eosiinilla (HE) diat

valuuttalisiin jaettiin kahteen ryhmään niiden morfologia on HE liukuu, kaksi kokenutta patologit (YHX ja SHK) ilman aiempaa tietoa kliinis tuloksia, kuten alla: 1. kypsä kun fibroblastit osoittivat ohut, aaltoileva, ja pieni kara solujen morfologia kuin normaalien fibroblastien; 2. Keskenkasvuisia kun fibroblastit osoittivat suuria, pullea kara-muotoinen solu merkittävässä nucleoli (kuvio 1). Kun esiasteiden osuuden fibroblastien oli yli 50%, kun kyseessä on katsottava epäkypsä CAF fenotyyppi. Muutamissa tapauksissa erimielisyyttä, lopullinen tulkinta määritettiin yksimielisesti käyttämällä monen pään mikroskoopilla.

. Aikuinen tyyppi kun fibroblastit osoittavat ohut, aaltoileva, ja pieni kara solujen morfologia; normaalien fibroblastien; B. Keskenkasvuisia tyyppi kun fibroblastit osoittavat suuria, pullea kara-muotoinen morfologia; CD. Survival käyrät käyttäen Kaplan-Meier menetelmä log-rank testi histologisen alatyypin syöpään liittyvän fibroblastien.

immunohistokemiallinen värjäys Menettely

Osiot on microslides poistettiin parafiini ksyleenillä, hydratoitu käyttämällä laimennettu alkoholi sarja, ja upotettiin 0,3% H

2O

2 metanolissa sammuttaa endogeenisen peroksidaasin. Leikkeitä käsiteltiin TE-puskuria (10 mM Tris ja 1 mM EDTA, pH 9,3) 98 ° C: ssa 30 minuutin ajan. Vähentää ei-spesifistä värjäytymistä, kunkin osan blokattiin 4% naudan seerumin albumiinia PBS: ssä, jossa oli 0,1% Tween 20: ssa 30 min. Sitten leikkeitä inkuboitiin anti-SMA (1:100, Millipore, Billerica, MA, USA), anti-FAP (1:100, Abcam), anti-FSP1 (1:100, Millipore), anti-PDGFRα (1 :100, Cell Signaling Technology), anti-PDGFRβ (1:100, Abcam), anti-CD34 (1:100, Dako, Glostrup, Tanska) ja anti-CD68 (1:1000, Dako) PBST: ssä, joka sisälsi 3 mg /ml vuohen globuliinin (Sigma, St. Louis, MO, USA) 60 minuutin ajan huoneenlämpötilassa, mitä seurasi kolme peräkkäistä pesua puskurilla. Leikkeitä inkuboitiin sitten anti-hiiri /kani-vasta-ainetta (Envision plus, Dako) 30 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. Kromogeenin käytettiin 3,3′-diaminobentsidiiniä (Dako). Osiot vastavärjättiin Meyerin hematoksyliinillä. Jättämällä ensisijainen vasta-aine säädetty negatiivisten kontrollien immunovärjäystä.

arviointi immunohistokemiallinen analyysi

Kaksi patologeja (YHX ja SHK) arvioi immunohistokemiallinen tuloksia ei ole aiempaa tietoa kliinis tuloksia, ja niistä keskustellaan mahdolliset poikkeamat pistemäärien kunnes päästiin. Mukaan värjäytymisen intensiteettiä ja osuus positiivisten stroomasolujen, immunohistokemiallinen pisteet SMA, FAP, FSP1, PDGFRα, ja PDGFRβ mitattiin kaksi patologit (YHX ja SHK) ilman aiempaa tietoa kliinis tulosta, seuraavasti: 1, heikko värjäystä 50% tai kohtalainen värjäytyminen 20%: stroomasoluissa; 2, heikko värjäytyminen ≥50%, kohtalainen värjäytyminen 20-50% tai voimakasta värjäytymistä 20%; 3, kohtalainen värjäytyminen ≥50% tai voimakasta värjäytymistä ≥20% (yhteenvetona kuviossa 2). Tapaukset, joissa pisteet 2 ja 3 katsottiin positiivisuuden kunkin proteiinin ilmentymisen. MVD arvioitiin menetelmällä Weidner et al. [19] Lyhyesti, kaikki CD34 positiivinen yksittäisten pienten suonten laskee tehtiin 200 × kentän korkeimman alue tunnistettiin skannaus pienellä suurennuksella (40-100 x). MVD luokiteltiin kolmeen ryhmään: matala, kun MVD oli 40; väli- kun MVD oli 40-60; ja korkea, kun MVD oli 60. TAM tunnistettiin positiivisuus CD68 ja aste TAM tunkeutumisen määritettiin prosenttiosuutena CD68-positiivisten solujen kesken kaikkien stromasoluja: alhainen prosenttiosuus oli 20%; korkea, kun ≥20% [20].

V: Analyysi immunohistokemiallisella värjäyksellä perusteella suoritetuista sekä intensiteetti ja värjäyksen alue. B: osoittaminen immunohistokemiallisella värjäyksellä sileän lihaksen aktiinin (SMA), fibroblasti-spesifinen proteiini-1 (FSP-1), fibroblastien aktivaattoriproteiinin (FAP), verihiutaleperäisen kasvutekijän reseptorin (PDGFR) α, ja PDGFRβ.

tilastollinen analyysi

korrelaatiot tutkittiin käyttämällä Pearsonin khiin neliö -testi tai Fisherin testiä tarvittaessa. Kokonaiselinaika (OS) ja sairauksien elinaika (DFS) määritettiin käyttäen Kaplan-Meier menetelmällä ja verrattiin käyttäen log-rank-testi. Survival mitattiin alkaen leikkausta. Coxin suhteellisten riskien mallia käytettiin monimuuttujamenetelmin. Cinicopathologic tekijät, jotka olivat tilastollisesti merkitseviä univariated analyysi, sisällytettiin covariables sisään monimuuttujamenetelmin. Hazard suhde (HR) ja 95% luottamusvälit (CI) arvioitiin kunkin tekijän. Kaikki testit olivat kaksipuolisia, ja

P

≤0.05 katsottiin merkitseväksi. Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttäen SPSS tilasto-ohjelmalla (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

Tulokset

histologinen luokitus CAF korreloi ennustetta ESCC

Viisikymmentä kahdessa tapauksessa (44,8%) luokiteltiin kypsä CAF fenotyyppi ja 64 niistä (55,2%) kuin kypsymättömiä fenotyyppi (kuvio 1A-B). Korrelaatiot näiden luokkien ja viittaavia tekijöitä on esitetty yhteenvetona taulukossa 1. epäkypsät CAF fenotyypit olivat merkittävästi liittyy lisääntynyt MVD (p 0,001) ja suurempaa tunkeutumista TAM (p = 0,003) verrattuna kypsän strooman fenotyypin. Sekä lisääntynyt MVD ja soluttautumista TAM korreloivat huonoon ennusteeseen of ESCC (kuva S1). Tämä histologinen luokittelua liittyi myös EMT fenotyyppiä ESCC (p = 0,002), joka määriteltiin edellisessä tutkimuksessa immunohistokemiallisella ilmaus mesenkymaalisten merkki ja E-kadheriinin. [21] Täydellinen EMT fenotyyppi, jolle on ominaista menetys E- kadheriiniekspressiota kanssa acquirement mesenkymaalisten merkki ilmaisun, oli merkittävästi yleisempää kehittymätön CAF fenotyyppejä kuin muissa fenotyyppejä. Kehittymätön CAF fenotyyppi oli vahvasti korreloi vähentynyt OS ja DFS (p 0,001) (kuvio 1 C-D), ja oli vahva itsenäinen ennustetekijä OS (HR: 5,23 (95% CI: 2,57-10,65), p 0,001 ) ja DFS (HR: 3,05 (95% CI: 1,66-5,59), p 0,001) (taulukko 2).

ilmaisujen CAF markkereita, kuten SMA, FSP1, FAP, PDGFRα, ja PDGFRβ vuonna stroomakasvaimet Fibroblastit ovat yleisiä ESCC ja SMA FSP1 liittyvät vahvasti kliinisiä tulokset

validoitu vasta-ainetta FSP1, FAP, PDGFRα, ja PDGFRβ, paitsi SMA, jota käytetään laajasti päivittäisessä toiminnassa (kuva S2 ja teksti S1) ja esiintyi myöhemmin IHC menettelyä. Yhdistyksen ilmaisun viisi CAF merkkiaineiden kanssa kliinis on yhteenveto taulukossa S1. SMA, FSP1, FAP, PDGFRα, ja PDGFRβ ilmaistiin 82,8%, 72,4%, 61,2%, 88,8%, ja 54,3% peruskudoksen fibroblastien potilailla, joilla on ESCC, vastaavasti (kuvio 2). SMA ilmentyminen syövän strooman fibroblastien havaittiin useammin kasvaimia, joiden koko on yli 4 cm (p 0,001), kehittynyt T vaiheessa (p 0,001) ja N vaihe (p 0,001), mutta harvemmin niitä, joilla on hyvin eriytetty kasvaimet (p 0,001). Se liittyi myös EMT fenotyyppiin (p = 0,005). FSP1 ilmentyminen useammin löytyi vanhuksilla (≥65 vuotta) (p = 0,037). PDGFRβ ilmentyminen liittyi huonosti eriytetty kasvaimet (p = 0,010). Kuitenkaan ei ole merkittäviä korrelaatioita FAP, PDGFRα ja ennusteeseen viittaavia parametreja.

Kaplan Meier eloonjäämiskäyrien mukaan ekspressiokuviota 5 CAF markkereita on esitetty kuviossa 3. Ilmaus AML ja FSP1 korreloi merkitsevästi lyhyempi OS ja DFS hinnat potilaista. Erityisesti 5-vuoden OS ja DFS nopeudella strooman SMA-positiivisten ryhmässä (41% ja 34% vastaavasti) oli merkittävästi alhaisempi kuin AML-negatiivisten ryhmässä (88% ja 75%) (OS: p = 0,005 ; DFS: p = 0,004). 5 vuoden OS ja DFS hinnat strooman FSP1-positiivisten ryhmässä (39% ja 35% vastaavasti) olivat myös huomattavasti alemmat kuin vuonna on FSP1-negatiivisten ryhmässä (79% ja 58%) (OS: p = 0,002; DFS: p = 0,044). Lisäksi 5 vuoden OS korko strooman PDGFRα-positiivisten ryhmässä (43%) oli merkittävästi pienempi kuin vuonna PDGFRα-negatiivisten ryhmässä (100%) (p = 0,003). Potilaat, joilla on FAP ilme näytti lyhyempi 5 vuoden yleinen eloonjäämisaste (41% vs. 63%) ilman tilastollista merkitystä (p = 0,070). Eikä merkittävää yhteyttä välillä havaittiin PDGFRβ ilmaisun ja OS tai DFS hinnat. On Monimuuttuja-analyysissä FSP1 ilme oli itsenäinen ennustetekijä OS (HR: 4,86 ​​(95% CI: 1,90-12,40), p = 0,001) ja DFS (HR: 2,77 (95% CI: 1,37-5,51), p = 0,004 ).

Korrelaatio CAF Marker Expression kanssa Histologinen luokittelu

Viisi CAF markkereita, kuten SMA, FSP1, FAP, PDGFRα, ja PDGFRβ oli heterogeenisesti ilmaistu stroomasoluissa 116 ESCCs (kuvio 4). Kuitenkin nämä viisi CAF merkkiaineiden määrä markkereita osoittaa positiivisuuden CAF oli suurempi ESCC epäkypsiä valuuttalisiin kuin ne kypsä niistä (keskiarvo 3,89 ± 1,09 vs. 3,21 ± 1,23, p = 0,002). Erityisesti FSP1, PDGFRα tai PDGFRβ ilmentyminen useammin löydetty ESCCs epäkypsiä valuuttalisiin kuin ne kypsä niitä (taulukko S2).

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa ensin tutkittu ekspressiomallin ja kliininen merkitys CAF markkereita sekä histologista luokat ja muiden syöpää mikroympäristöjen in ESCC. Histologisesti kehittymätön CAF, määritellään suuri, pullea kara-muotoinen morfologia, liittyi lisääntynyt MVD, merkitty TAM ja täydellinen EMT fenotyypin. Se oli myös vahva itsenäinen ennustetekijä. Viisi CAF markkereita heterogeenisesti ilmaistu yksittäistapauksessa, mutta kokonaismäärä korkeasti ilmaisi CAF markkereita oli suurempi epäkypsä CAF tyyppi kuin kypsillä yhdessä.

Sidekudosmuodostussolujen näyttävät olevan monipuolisin sidekudoksen-kudoksen soluista, näytetään huomattavaa kykyä erilaistua muihin perheenjäseniin kuten rasvasolut, rusto soluja, ja luun soluja. ”Mature” fibroblastien kanssa kyettiin muutos voi esimerkiksi rinnakkain kanssa ”epäkypsiä” fibroblasteja (kutsutaan usein mesenkymaaliset solut), joka voi kehittyä erilaisia ​​kypsän solutyyppejä. Yleensä epäkypsä fibroblastit tiedetään näyttää tyypillisesti suuri pullea ja euchromatic ydin yhdellä tai kahdella nucleoli ja karkea endoplasmakalvoston ja näkyvästi Golgin laitteiston Mikroskooppitutkimus havainnoista. Tässä tutkimuksessa olemme luokiteltu CAF of ESCC niin kypsä ja kehittymätön tyypin perusteella histologisia ominaisuuksia. Tämän seurauksena surkastuneet tyyppi havaittiin 55,2% of ESCC ja liittyi haitallisia kliiniseen tulokseen. Lisäksi se oli yhteydessä lisääntyneeseen MVD ja täydellinen EMT fenotyyppi, joiden tiedetään olevan mekanismi syövän etenemisen. [1] – [6], [22] Lisäksi olemme huomanneet TAM kuten osoitetaan CD68 ilme oli huomattavasti enemmän yleisempää ESCC epäkypsiä tyyppi CAF. Yleensä TAM pidetään M2 fenotyyppi makrofagien, jotka edistävät angiogeneesiä, kasvua, invaasio, muuttoliike, ja etäpesäkkeitä. [23] – [25] Infiltroiva TAMeja korreloivat huonon ennusteen rintasyövän. [23] kanssa tässä raportissa, suurempaa tunkeutumista TAM vuonna ESCC myös korreloi haitallisia kliinisiä lopputulokseen. Kuitenkin lisätutkimuksia tarvitaan määrittämään tarkemmin suhdetta CAF fenotyypin ja M2 fenotyypin TAM in ESCC. Nämä tulokset viittaavat siihen, että meidän histologisia luokittelu strooman fibroblastien on luotettava ja kliinisesti merkittävä puuttumisesta huolimatta yksityiskohtainen käsitys sen molekyylitason mekanismin.

Valitsimme SMA, FSP-1, FAP, PDGFRα, ja PDGFRβ kuten CAF markkereita perustuva aiempiin tutkimuksiin. [1], [2], [4] Tämä on ensimmäinen tutkimus tutkia ilmaisu ja merkitys SMA, FSP-1, FAP, PDGFRα, ja PDGFRβ vuonna ESCC sikäli kuin tiedämme. Paitsi SMA, jota käytetään yleisesti jokapäiväisessä käytännössä loput neljä vasta-aineet ovat suhteellisen uusia ja niitä on käytetty lähinnä tutkimustarkoituksiin. Siksi yritimme vahvistaa nämä neljä vasta-aineita ja totesi, että kaikki neljä vasta-aineet olivat spesifisiä sekä Western-blottauksella ja immunohistokemia formaliiniin ja parafiiniin kudoksen (kuva S2).

Tulokset paljastivat, että SMA ilmaisun ESCC strooman fibroblasteissa liittyi suurempana, kehittyneet T vaiheessa, imusolmuke etäpesäke, ja huono ennuste. Huolimatta ero elimissä ja syövän tyyppejä, tämä tulos on erittäin yhdenmukainen aiempien tutkimusten, joissa potilaalla on runsaasti strooman myofibroblasteja ilmentävät SMA osoitti huonompi ennuste suun, peräsuolen ja rintasyöpiä. [26] – [29] Tuloksemme osoittivat myös, että potilaat ilmentävät FSP1 olivat vanhempia ja oli lyhyempi eloonjäämisluvut, mikä oli myös yhdenmukainen aiempien tutkimusten perusteella rintasyövän. [30] PDGFRβ ilmentyminen liittyi huonosti eriytetty kasvaimet (p = 0,010), mutta ei liittynyt ennustetta. PDGFRα ilmentyminen CAF on olennainen tekijä etenemisessä keuhkosyövän [31] ja tämä tulos oli osittain yhdenmukainen tulokseemme. Potilaat FAP ilme osoitti hieman vähennetty OS (p = 0,070) ja FAP ilmentyminen aiheuttaa useammin kuolemaan (p = 0,030). Nämä tulokset ovat osittain linjassa aiempien tutkimusten tulokset haiman ja peräsuolen syöpiä. [32], [33] Mitä tulee ennustetekijöiden arvo PDGFRβ, on jonkin verran eri mieltä tuloksemme ja niitä aiempien kahdesta tutkimuksesta, joka huomautti yhdistyksen strooman PDGFRβ ilmaisun ja huonon ennusteen eturauhasen ja haimasyöpä, vastaavasti. [34], [35] Tämä ero voi johtua eri syöpätyyppejä tai elimiin. Tuloksemme osoittivat, että jotkin yksittäiset CAF merkkiaineet olivat merkittävästi prognostisia ennustavat ESCC. Ilmaisulla kuvio CAF merkkiaineiden oli hyvin heterogeeninen jokaisessa yksittäistapauksessa, mikä heterogeenisyys CAF väestöstä. Ottaen huomioon erilaiset solujen alkuperästä CAF ja valtava heterogeenisyys CAF fenotyyppien, lisää CAF markkereita, joilla on hyvä spesifisyys vaaditaan [2].

Koska heterogeenisuus CAF fenotyypin, arviointi CAF markkereita kudoksen microarray ( TMA) voi olla mahdollinen rajoitus verrattuna arvioinnin koko lohkomuutoksista immunovärjäyksellä. Olemme kuitenkin havainneet, että valuuttalisiin jakautuivat tasaisesti riippumatta heterogeenisuus CAF fenotyypin yli puolet ESCC tapauksista (kuva S3A-B) alustavassa tutkimuksessa tarkastellaan ilmaus FSP1 edustaja CAF merkki, koko lohkoissa 10 ESCC tapauksista. Muissa tapauksissa, CAF jakelu osoitti alueellinen keskittyminen noin monipuolinen sijainti, kuten valtaavat edessä, pinta kuolion tai lihasten kerros (kuva S3C-E), ilman erityistä korrelaatio anatominen sijainti tai syvyyttä hyökkäystä. Ja CAF: n ”hot spot” voimakkaasti täynnä valuuttalisiin ja stroomasolujen oli helposti kirjattu H & E-osassa. Minimoida valinta bias, käytimme suurikokoisten kudoksen ydin (2,0 mm halkaisijaltaan) ja TMA rakentaminen ja kudos- ydin valittiin sisältämään ainakin yhden tai useamman CAF: n ”hot spot”.

ESCCs, äskettäin Monet tutkimukset ovat osoittaneet kliinistä merkitystä ja roolia kasvainten strooman lukien CAF syövän etenemiseen. Wang et ai. raportoitu, että kasvaimeen strooman suhde määritetään mikroskooppisen arviointi oli itsenäinen ennustaja selviytymisen ESCC. [13] Liu et al. osoitti, että tiheydet myofibroblasteja, lymfosyyttien, makrofagien ja pienten verisuonten korotettiin tyypillisesti kasvaimen stroomaan ESCC ja olivat yleensä liittyy imusolmuke osallistumista. [14] Zhang et al. verrataan geeniekspressioprofilointi kasvaimen fibroblasteista ESCC kuin normaalien fibroblastien ja havaitsi, että geenit liittyvät soluproliferaatioon, soluväliaineen ja immuunivastetta ilmentyvät eri. [16] Nämä tulokset ovat yleensä yhdenmukaisia ​​tuloksemme, että läsnäolo aktivoitua valuuttalisiin oli liittynyt epäsuotuisa lopputulos ESCC. Kuitenkin, tämä on ensimmäinen tutkimus, joka on arvioinut tarkka kliinis merkityksellinen kukin CAF markkereita käyttämällä suurta kohortin potilaista, joilla ESCC. Lisäksi tämä on ensimmäinen analysoidaan strooman fibroblastien ESCC perustuu histologian ja osoittaa sen ennustetekijöiden vaikutus suuren kohortin potilaista, joilla ESCC.

Yhteenvetona tuloksemme osoittavat, että histologinen luokitus CAF on voimakas ennustetekijöitä ennustaja ESCC ja liittyy lisääntynyt MVD ja TAM sekä täydellinen EMT fenotyyppi. Tuloksemme viittaavat myös siihen, että CAF markkereita on potentiaalia olla diagnostisia ja terapeuttisia kohteita ESCC.

tukeminen Information

Kuva S1.

Eloonjäämiskäyrät käyttäen Kaplan-Meier menetelmä log-rank testi syöpään microenvironment liittyvät tekijät. (A-B) mikroverisuonitiheys (C-D) Kasvain liittyy makrofageihin.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0099955.s001

(TIF) B Kuva S2.

validointi fibroblastien aktivaattoriproteiinin (FAP), fibroblasti-spesifinen proteiini-1 (FSP-1), verihiutaleista johdettu kasvutekijä-reseptori (PDGFR) α ja PDGFRβ vasta-aineita. A, B: tulokset Western blotting ja mRNA tasolla RT-PCR. Kaikki vasta-aineet tunnistivat proteiinin, jolla on odotettu molekyylipaino (A) ja nämä tulokset olivat erittäin yhdenmukaisia ​​mRNA-tasot näiden proteiinien (B). C: tulokset immunohistokemiallisella värjäyksellä solun korttelin päässä 293T, NIH3T3, ja HeLa-solut. Vasta-aineet FSP1, PDGFRα, ja PDGFRβ värjättiin NIH3T3-soluissa (positiivinen kontrolli), mutta ei 293T ja Hela-soluja (negatiivinen kontrolli). Vasta-aine FAP värjättiin myös HeLa-soluissa (positiivinen kontrolli), mutta ei 293T tai NIH3T3-soluja (negatiivinen kontrolli).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0099955.s002

(TIF)

Kuva S3.

tuloksena alustava tutkimus, jossa tarkastellaan ilmaus FSP1 edustaja syöpään liittyvän fibroblasti (CAF) merkki, koko lohkoissa 10 ruokatorven okasolusyöpä (ESCC) tapauksissa. (A-B) valuuttalisiin on tasaisesti riippumatta heterogeenisuus CAF fenotyypin yli puolet ESCC tapauksista. (C-E) Loput tapaukset osoittavat CAF jakaumaa alueellinen keskittyminen noin monipuolinen sijainti, kuten valtaavat edessä (C), pinta kuolion (D) tai lihakseen kerros (E).

Doi: 10,1371 /journal.pone.0099955 .s003

(TIF) B Taulukko S1.

vertailu ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia mukaan ekspressiokuviota SMA, FSP1, FAP, PDGFRA ja PDGRB.

doi: 10,1371 /journal.pone.0099955.s004

(DOCX) B Taulukko S2.

Korrelaatio histologisen alatyypin ja ilmentymistä 5 syöpään liittyvän fibroblastien markkereita.

doi: 10,1371 /journal.pone.0099955.s005

(DOCX)

Text S1.

validointi FAP, FSP1, PDGFRα, ja PDGFRβ vasta.

doi: 10,1371 /journal.pone.0099955.s006

(DOCX) B