Krooninen sairaus

tiivistelmä

Colonic kryptat ovat stereotyyppisiä rakenteiden erilliset kantasolujen, jakautuvat, ja erottaa osastot. Kolorektaalisyövissä peräisin paksusuolen crypt epiteelissä vaan sen sijaan muodostaa morfologisesti disarrayed rauhaset. Tässä tutkimuksessa selvitettiin, missä määrin kolorektaalisyövissä phenocopy paksusuolen crypt arkkitehtuuri ja siten säilyttää organisaatiorakenne normaalin suolen epiteelin. Osajoukko koolonsyöpien osoitti krypta kaltainen osastoa korkea WNT aktiivisuus ja ydin- β-kateniinin johtavassa kasvaimen reuna, vieressä leviämisen, ja parannettu sytokeratiinivasta 20 ilmentymistä useimmissa eriytetty kasvain epiteelin kasvain keskustasta. Tämä arkkitehtuuri voimakkaasti riippuvainen kasvuolosuhteista, ja oli täysin toistettavissa hiiri ksenografteissa viljellyistä ja ensisijainen koolonkarsinoomasoluissa. Full krypta kaltainen järjestö liittyi matala kasvaimen ja oli itsenäinen prognostinen markkeri parempi eloonjäämisen kokoelma 221 peräsuolen syöpiä. Tulosten perusteella näyttää, että täydellinen aktivaatio säilynyt suoliston morfogeneettisen ohjelmia paksusuolensyöpä vaatii

in vivo

kasvun ympäristöissä. Lisäksi crypt kaltainen arkkitehtuuri oli yhdistetty vähemmän aggressiivisia tuumoribiologiassa, ja se voi olla hyödyllistä parantaa nykyistä paksusuolensyöpä luokittelu järjestelmiä.

Citation: Cernat L, Blaj C, Jackstadt R, Brandl L, Engel J, Hermeking H, et al. (2014) kolorektaalisyövissä Mimic organisaatiorakenne Normaali Colonic kryptissa. PLoS ONE 9 (8): e104284. doi: 10,1371 /journal.pone.0104284

Editor: Chunming Liu, University of Kentucky, Yhdysvallat

vastaanotettu: 06 huhtikuu 2014; Hyväksytty: 07 heinäkuu 2014; Julkaistu: 11 elokuu 2014

Copyright: © 2014 Cernat et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: tukemana avustusta Wilhelm Sander-Stiftung (DH) ja Euroopan sosiaalirahaston-projekti 107 /1,5 /S /78702 (ja LC). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on peräisin normaalista paksusuolen limakalvon hyvin tunnettu, vaiheittaista mutaatioiden jotka muuttavat normaalin epiteelisolujen kasvainsolujen pahanlaatuisen käyttäytymiseen [1]. Normaali paksusuolen limakalvo on yksinkertaisesti järjestetty, pohjimmiltaan levynä epiteelisolujen kanssa infoldings muodostavat stereotyyppisiä crypts [2]. Jokainen krypta sisältää erilliset toiminnalliset osastojen kantasoluja krypta pohja, joka vastaa jatkuvan uudistumisen vuotiaiden epiteelisolujen Lisääntyvä kauttakulku vahvistava ulottuva puolivälissä krypta, ja kehittynein epiteelisolujen kohti krypta kärkeen [3]. Kokeelliset tiedot, pääasiassa peräisin hiiren ohutsuolen crypts, ehdottaa korkea kanoninen WNT signalointi toimintaa kantasolujen klo krypta base [4], [5], kun taas kypsät solut krypta kärkeen on ominaista ilmentyminen erilaistumisen markkereita, kuten kuten sytokeratiinivasta 20 (CK20) [6].

toisin kuin normaalissa paksusuolen limakalvolle, organisaatiorakenne CRC on paljon vähemmän hyvin ymmärretty. CRC muodostavat kasvain massoja sijaan arkkia soluja, vaihtelevalla morfologisesti disarrayed epiteelin rauhaset [7]. Nämä kasvaimet eivät näytä olevan täysin järjestäytymätön. Gradientti välillä vähemmän eriytetty kasvainsolujen johtavassa kasvain reuna, ja runsaammin erilaistuneita soluja kasvaimen keskelle voidaan havaita useimmilla CRC [8], [9]. Lisäksi kasvainsolut johtavassa kasvain reuna tyypillisesti ilmaista vahva ydin- β-kateniinin, mikä osoittaa korkea WNT signalointi aktiivisuutta, ja on kiistetty edustamaan progenitorisolupopulaatioon on toiminnallisesti määritellään paksusuolensyöpä kantasolujen [10], [11]. Päinvastoin, ilmaus CK20 ehdotettiin leimata eriytetympien paksusuolen syöpäsoluissa, koska sen ilmentyminen oli sulkevat toisensa pois otaksuttu paksusuolensyöpä kantasolujen merkkiaineita [11], [12]. Yhdessä nämä tiedot viittaavat siihen jonkinasteista organisaatiorakenteesta sisällä CRC, syövän kantasoluja johtavan kasvaimen reuna ja erilaistumista kohti kasvain keskustaa.

Kun otetaan huomioon näiden havaintojen ja tunnettujen osastoa suoliston crypts, me tässä tutkitaan, jotta Missä määrin CRC phenocopy on normaalia koolonin crypts. Me kategorisoida aste crypt kaltaisten arkkitehtuurin peräsuolen syövän tapauksessa kokoelma pitkän aikavälin seurannan tiedot ja osoittaa, että

in vitro

ja

in vivo

kasvuolosuhteissa vaikuttavat voimakkaasti tähän organisaatiorakenteesta .

Materiaalit ja menetelmät

Histologia ja immunohistokemia

Formaliinifiksoidusta, parafiiniin upotetut normaalin ihmisen paksusuolen limakalvo, ensisijainen CRC kudokset, ksenograftikasvaimissa, ja matrigeelin sulautettujen kasvainsolun pallosia leikattiin osaksi 5 um: n leikkeet, poistettiin parafiini, ja antigeenejä haettiin vuonna TRS6 (Dako Cytomation) 20 min mikroaaltouunissa. Adherentteja viljelmiä Caco2 ja SW1222 soluja kasvatettiin peitinlaseja, kiinnitettiin formaliiniin, ja läpäiseviksi 2% Triton X-100. Dioja tai kansi liukuu sitten inkuboitiin peräkkäin hiiren anti-β-kateniinin (BD Transduction Laboratories, 1:200), kanin anti-Ki67 (Cell Signaling, 1:200) ja vuohen anti-CK20 (Santa Cruz Biotechnology; 01:50 ) 1 h kulloinkin huoneen lämpötilassa, pestiin PBS: llä, ja sen jälkeen FITC-konjugoidulla aasin anti-vuohi (Jackson ImmunoResearch, 1:200), AlexaFluor 555 konjugoitua vuohen anti-hiiri, ja AlexaFluor 405 konjugoitua vuohen anti-kani (Invitrogen; 1:500). Visualisointiin ydinaseiden β-kateniinin normaalissa paksusuolen crypts, tumat vastavärjättiin DAPI (Vector Laboratories). Konfokaaliset fluoresenssi kuvat otettiin sijoitukset LSM 700 laserkeilauksen mikroskoopin avulla ZEN ohjelmisto (Carl Zeiss). Perinteisissä ja immunohistokemiallisen, esilaimennettu hiiren anti-β-kateniinin (Ventana Medical Systems) ja /tai hiiren anti-CK20 (Progen; 1:200) käytettiin, ja värjäys suoritettiin Ventana Benchmark XT Autostaineriin kanssa Ultraview Universal DAB ja AFOS detektiovälinepakkaukset (Ventana Medical Systems). Isotyyppi-ohjaimet olivat mukana kaikki antigeenejä.

Soluviljely ja hiiri ksenografteissa

Caco2 soluja hankittiin American Type Culture Collection ja SW1222 solut saatiin Ludwig Institute for Cancer Research (New York, USA). Kiinnittyneet soluviljelmät kasvatettiin Dulbeccon modifioitu Eaglen väliaine (DMEM, Biochrom), johon oli lisätty 10% naudan sikiön seerumia, 1% glutamiinia ja 1 x penisilliini-streptomysiiniä. Sferoidiviljelmiä kasvatettiin StemPro hESC SFM väliaineessa 20 ng /ml EGF: ää ja 10 ng /ml bFGF (Life Technologies) ultra-low kiinnitys pulloissa (Corning). Vitaalikudoksen vain ajoittaisia ​​ensisijaisen koolonadenokarsinooma hankittiin Stiftung Human Tissue Cell Research (HTCR, München, Saksa), eriteltynä yksisolususpensioi- käyttäen kollagenaasia IV (Worthington Biomedical) ja DNaasi I (Sigma-Aldrich), kuten aiemmin on kuvattu [10], ja laajennettiin sferoidiviljelmiä. Jatkotutkimuksiin, pallosia solulinjojen ja primaarikasvaimen solut otettiin talteen sentrifugoimalla 200 g, suspendoitiin uudelleen Matrigel, kiinnitettiin paraformaldehydillä, ja sitten väliin HistoGel kerrosten (ThermoScientific) parafiiniupotusta. Sillä ksenografti kasvu, 10

6 solua kiinnittyvistä soluviljelmistä tai 10

5 pallomainen johdettu ensisijainen paksusuolen syövän solut suspendoitiin 100 ul: aan 01:01 seokseen, jossa oli PBS: ää ja kasvutekijä-köyhdytettyä matrigeeliin (BD Bioscience) ennen ihonalainen injektio 6-8 viikkoa vanhoja NOD /SCID (NOD.CB17-Prkdc

scid, The Jackson Laboratory) hiirillä. Eläimiä pidettiin taudinaiheuttajista vapaa mikro-eristimen häkeissä ja tapettiin kun ksenografteissa saavutti halkaisija on 1 cm. Ksenograftikasvaimissa sitten poistettiin, formaliinia kiinteä, ja parafiiniin. Kolme riippumatonta ksenograftit tehtiin lisätutkimuksia kunkin solulinjan tai primaarikasvaimen. Kokeelliset menetelmät käyttäen eläimiä tarkistettiin ja hyväksyttiin Regierung von Oberbayern.

CRC näytteenotosta ja tilastojen

CRC näytteitä potilaista, jotka tehtiin tarkoituksella parantava kirurginen resektio vuosien 1994 ja 2006 LMU vedettiin arkistoista instituutin patologian. Seuranta tietoja on tallennettu Münchenin Syöpärekisteri. Näytteet ja tietoja anonymisoidaan, ja tarve suostumus on luopunut institutionaalisten eettinen komitea lääketieteellisen tiedekunnan LMU. Sisällyttämiskriteerit olivat paikallisia peräsuolen adenokarsinooman kanssa ilman solmukohtien (N0) tai kaukaisia ​​etäpesäkkeitä (M0) aikaan diagnoosin (UICC vaiheen I ja II). Kasvaimen kudokset koottiin kudossiruina (TMA) 6 edustava 1 mm ytimiä, kuten kasvain reunat ja kasvaimen keskuksia tapauskohtaisesti. Lopullinen kokoelma koostui 221 CRC-asiat, joiden 41 tapauksessa (19%) potilaista oli kuollut heidän kasvaimen sisällä seurantajakson aikana. Survival tiedot sensuroitiin kun kyse seurantaa lopetettiin tai potilasta oli kuollut muista syistä kuin CRC. Asia ominaisuudet on esitetty taulukossa 1. TMA liukuu sitten tehtiin yhden ja kahden hengen värjäykset varten β-kateniinin ja CK20, kuten edellä on kuvattu. Koko kudosleikkeiden yksittäisiä tapauksia heterogeeninen β-kateniinin ja CK20 jakelu käytettiin kolminkertainen immuuni fluoresenssin analyysejä. Syöpä erityisiä eloonjääminen analysoitiin Kaplan-Meier menetelmä ja ryhmiä verrattiin log-rank-testi. Tilastot laskettiin SPSS (IBM).

Tulokset

Crypt kaltainen toiminnallinen osastoja ja akselin muodostumista kolorektaalisyövässä

visualisoida erilaisia ​​toiminnallisia osastoja normaalin paksusuolen kryptissa ja CRC, loimme kolminkertainen immuuni fluoresenssi värjäykset varten β-kateniinin, proliferation- liittyvät Ki-67-antigeenin (Ki67) ja sytokeratiinivasta 20 (CK20). Kuten odotettua, konfokaali kuvantaminen normaalin paksusuolen kryptissa osoitti WNT aktiivinen osastoa ydin- ilmaus β-kateniinin klo krypta pohja, Ki67 ilmentävät kauttakulku vahvistava alue lisääntyvien epiteelin esisolujen, ja useimmat eriytetty epiteelisolujen ilmentävät CK20 kohti crypts ”kärkiä (Kuva 1A). Erityisesti visualisointi heikko mutta erillisiä ydin- β-kateniinin klo krypta pohjan tarvittavat suurennoksilla ja lievää ydin- counterstaining (kuvio 1A, Kuva S1). Sitten altistetaan ensisijainen CRC samaan kolminkertainen värjäystä protokollaa. Edellisiin havaintoja [8], [9], vahva ydinvoima ilmentyminen β-kateniinin rajoittui kasvainsoluihin johtavassa kasvaimen reuna ja mukana morfologisesti eriytymättömiä koolonkarsinoomasoluissa soluttautua ympäröivän strooman kudokseen (kuvio 1 B). Mielenkiintoista, ja päinvastoin ydinaseiden β-kateniinin, CK20 värjäytyminen oli kovinta enemmän Keski-ja rauhas eriytetty kasvain epiteelin, viereisen tuumorinekroosi (kuvio 1 B). Ki67 havaittiin näiden vyöhykkeiden välillä ja väheni kasvainsoluissa, joilla on vahva CK20 ilmentymistä (kuvio 1 B). Nämä havainnot osoittivat, että vaikka disarrayed rauhanen muodostuminen, paksusuolen syövät säilyttää jonkinasteista organisaatiorakenteesta ja akselin muodostumista havaittu normaalissa paksusuolen crypts.

Triple immuuni värjäyksen β-kateniinin (βCat), Ki67 ja CK20. (A) Colonic crypts osoittavat ydinvoiman β-kateniinin ilmentymistä niiden perusta, Ki67 ulottuu puoliväliin krypta, ja CK20 kärkeen. Visualisointi ydinaseiden β-kateniinin vaadita counterstaining DAPI ja korkea suurennus (

vasen paneeli upotettavat

). Punainen ja siniset palkit rajaavat krypta osien kanssa ja ilman ydin- β-kateniinin, vastaavasti. (B) kolorektaalisyövissä näyttää vastaavan organisaation ydin- β-kateniinin kasvaimen reuna (

nuolenpäät

), CK20 ilmentyminen kasvaimen keskelle (

nuolet

), ja Ki67 välillä.

Mittaviivat

, 100 pm.

ksenograftimalleja koolonsyöpien jäljentää koko kirjon crypt kaltainen organisaatio

Seuraavaksi analysoimme ensisijainen paksusuolensyöpä ja koolonsyöpäsolulinjaa erilaisissa kasvuolosuhteissa

in vitro

ja

in vivo

. Adherentteja

in vitro

soluviljelmissä SW1222 ja Caco2 koolonsyöpäsolulinjaa paljasti jonkin verran kasvainsolun heterogeenisyys ydinvoiman β-kateniinin, Ki67 ja CK20 että oli huomattavampi alhainen tiheys kuin konfluenteissa kulttuureissa (kuviot 2A D). Alhainen tiheys SW1222 kulttuureissa myös näytteillä joitakin alkeellisia keskihakuisia akselin muodostumista hieman parannettu CK20 ilmaisua ja vähentää Ki67 leviämisen kannan puitteissa keskuksissa, ja vahvempi ydin- β-kateniinin värjäys klo siirtomaa reuna (kuvio 2A). Vuonna Caco2 soluissa, tasauspyörästö ilmaus CK20 ja ydinvoiman β-kateniinin ilmestyi enemmän satunnaisesti jakautuneet (kuvio 2C). Sen arvioimiseksi, kolmiulotteinen kasvu antaisi korkeamman asteen organisaatiorakenteesta ja kasvainsolun heterogeenisuus

in vitro

, me viljellä molemmissa solulinjoissa ja ensisijainen koolonkarsinoomasoluissa kuin tarttumattoman pallosia. Samanlainen kuin meidän löydökset kiinnittynyt kulttuureissa, havaitsimme joitakin kasvainsolun heterogeenisyys kaikkien kolmen merkkiaineita (kuviot 2E-G). Vaikka ensisijainen paksusuolensyöpä pallojen lieviä keskihakuisia akselin muodostumista tiiviimmän Keski CK20 värjäyksen (kuvio 2G), ei täydellinen rakenteellinen organisaatio, koska olimme löytyi ensisijainen paksusuolisyöpäkudoksessa, havaittiin. Sitten pistetään molemmissa solulinjoissa ja ensisijainen koolonkarsinoomasoluissa osaksi immuunikatopotilaiden hiiriin ihon alle kasvaimen muodostumisen

in vivo

. Päinvastoin meidän

in vitro

havaintojen nämä kasvaimet muodostivat rauhasrakenteet täysin astetta kasvainsolun heterogeenisyys ja erilliset ydin- β-kateniinin, Ki67 ja CK20 positiivinen osastojen (kuviot 2H-J), matkien niitä löytyy ensisijainen CRC, ja muistuttaa normaalin paksusuolen crypt arkkitehtuuria. Yhdessä nämä havainnot osoittivat, että kolmiulotteinen kasvu ja ympäröivän strooman kudosta tarvitaan paljastaa koko kasvainsolun heterogeenisyys ja akselin muodostumista CRC.

Triple immuuni värjäys paljastaa puutteen täydellinen rakenteellinen organisaatio kudoksesta viljelmistä (A) alhainen tiheys ja (B) konfluentteja SW1222, ja (C) alhainen tiheys ja (D) konfluentteja Caco2 paksusuolen syöpäsoluja, sekä sferoidiviljelmiä (E) SW1222, (F) Caco2, ja (G) ensisijainen koolonsyöpäsoluja . Päinvastoin, ihonalainen ksenografteja of (H) SW1222, (I) Caco2, ja (J) ensisijainen koolonkarsinoomasoluissa muodostavat rauhaset järjestäytyneeseen ilme ydin- β-kateniinin kasvaimen reuna (

nuolenpäät

) ja CK20 ilmentyminen kasvaimen keskelle (

nuolet

).

Mittaviivat

, 100 pm.

Luokittelu ja kliininen merkitys crypt kaltainen organisaatio kolorektaalisyövissä

Voit selvittää taajuuden crypt kaltainen organisaatio CRC käytimme tapaus kokoelma 221 primaarikasvainten ja sovellettu kaksinkertainen immuuni värjäyksen β-kateniinin ja CK20, merkintä molemmat ääripäät normaalin paksusuolen crypt osastoja. Analyysit näistä tapauksista paljastui 5 erilaista paksusuolen syövät: Suurin ryhmä (tyyppi A) osoitti järjestäytyneen ilmentymistä ydin- β-kateniinin on johtava kasvaimen reuna ja parannettu CK20 sisällä kasvaimen keskustasta (kuvio 3). Huomionarvoista kuitenkin Tutkiessaan tämän tyyppisiin leikesarjojen, havaitsimme lisäksi parannettu CK20 ilmentymistä useimmissa infiltratiivinen kasvainsolut johtavan kasvaimen reuna, päällekkäin ydin- β-kateniinin useimmissa näistä tapauksista (kuva S2). Muut kasvaimet puuttui organisaation jonkin verran (kuvio 3), joko ilman ydin- β-kateniinin (tyyppi B), ei ole parannettu CK20 kasvaimen keskustasta (tyyppi C), ei ole vähentynyt ydin- β-kateniinin kasvaimen keskusta (tyyppi D), tai puuttuminen sekä ydin- β-kateniinin ja CK20 ilmaisun (tyyppi E). Sitten tutkitaan tämäntyyppisiä yhdistysten kasvaimen erityisiä selviytymistä. Mielenkiintoista, Kaplan-Meier tonttien paljasti parhaan tuloksen CRC täysin krypta kaltainen organisaatiorakenteesta, joka perustuu ydin- β-kateniinin ja CK20 ilmaisun (tyyppi A), joka oli huomattavasti parempi, kun tilastollisesti testattiin kaikkien muiden yhdistetyn (kuva 4). Sitten tutkittiin tyypin kasvaimet yhdistysten muita kliinisiä muuttujia ja löysi merkittävää korrelaatiota alhainen kasvaimen, vaikka ei ollut merkittävää yhteyttä muiden muuttujien kuten ikä, sukupuoli ja T-luokan (taulukko 1). Lopuksi, kun testataan tyypin kasvaimet toisia hengissä ennustuksen monimuuttuja analyysit, täydellinen rakenteellinen organisaatio osoittautui riippumaton ennustetekijöitä merkkiaine paremman syövän tautivapaalle (taulukko 2). Nämä havainnot osoittavat, että CRC jäljittelevät krypta kaltainen osastoja ja akselin muodostuminen vaihtelevasti ja sotkea että korkea rakenteellinen samankaltaisuus normaaliin paksusuolen crypts voi liittyä vähemmän aggressiivisia kasvain käyttäytymistä.

Double immuuni värjäyksen β-kateniinin (

ruskea

) ja CK20 (

punainen

). (Tyyppi A) Täysi rakenteellinen organisaatio ydin- β-kateniinin kasvaimen reuna (

nuolenkärki

) ja CK20 sisällä kasvaimen keskusta (

nuoli

). (Tyyppi B) puuttuminen ydin- β-kateniinin. (C-tyyppi) puuttuminen Keski CK20. (Tyyppi D) puuttuminen laski ydin- β-kateniinin kasvaimen keskelle. (Tyyppi E) puuttuminen sekä ydin- β-kateniinin ja CK20. Taajuudet tämäntyyppisiä on annettu taulukossa.

(A) Kaplan-Meier kuvaaja erityyppisten peräsuolen syöpiä, kuten kirjaimin kaarteissa. (B) A-tyypin peräsuolen syövän potilaista (

ylempi käyrä

) osoittavat merkitsevästi (log-rank-testi) parempi eloonjääminen verrattuna muihin (

alempi käyrä

). Tunnusluvut kaarteissa ilmaisevat tapahtumien määrä yli potilaiden lukumäärä ryhmää kohti.

Keskustelu

Tässä osoitamme, että CRC phenocopy normaalin paksusuolen krypta arkkitehtuuria. Toisin kuin normaali crypts nämä kasvaimet kasvavat invasiivisesti ja muodostavat morfologisesti disarrayed rauhaset [7]. Kuitenkin erillistä osastoa korkea WNT aktiivisuus johtavan kasvaimen reuna, vieressä leviämisen, ja parannettu CK20 ilmaisun kohti kasvain keskustaa voidaan tunnistaa. Koska normaali paksusuolen crypts on tunnettu WNT ajettu kantasolujen tukikohtaansa, erääntyy osaksi epiteelisolujen vahva CK20 ilme kärkeen [4] – [6], meidän havainnot tukevat ajatusta koolonsyöpien matkimalla näiden toiminnallisten osastojen, paksusuolen syövän kantasoluja johtavan kasvaimen reuna, ja keskihakuisessa kasvainsolujen erilaistumisen, kuten on aiemmin hypoteesin, [13]. Kuitenkin meidän tiedot osoittavat myös merkittäviä poikkeamia normaaliin paksusuolen crypt arkkitehtuuri, koska kaikki CRC osoitti täyden valikoiman crypt kaltainen eristämisen. Lisäksi CRC kanssa havaittavissa lokeroa usein osoitti parannettu CK20 paitsi keskustassa kasvaimen aloilla, mutta lisäksi on johtava kasvaimen reuna, jolloin myös vahva ydin- β-kateniinin ja korkea WNT aktiivisuus. Vaikka nämä Pääteltiin, että morfogeneettinen ohjelmat suolen epiteelisolujen toimivat edelleen kolorektaalisyövissä jossain määrin merkkiaineita terminaali eriyttäminen normaalissa suolessa ei välttämättä rajoitu täysin eriytetty kasvainsoluihin suoliston kasvaimet.

vertailu erilainen kulttuuri ja kasvuolosuhteet paksusuolen syövän soluja, havaitsimme täysin kehittyneet ja lokeroitu rauhasrakenteet in

in vivo

ksenograftikasvaimissa vain. Kertaus rakenteiden jäljitellen normaalia paksusuolen crypt arkkitehtuuri ja täynnä kaltevuus muodostumista vähiten ja eniten eriytetty paksusuolen syöpäsoluissa, voi siis vaatia signaloinnin kasvaimesta mikroympäris- [8], [14], puuttuu standardi kulttuuriin järjestelmissä. Nämä havainnot ovat tärkeitä myös tutkimuksia, jotka keskittyvät tiettyyn kasvain solualapopulaatioiden, koska tuumorisolujen koostumusta säännöllisesti tai sferoidiviljelmiä ehkä ota riittävästi huomioon tilannetta ensisijainen kasvaimia. Mielenkiintoista on kuitenkin, kun se on kasvanut ksenograftikasvaimina, jopa perustettu koolonsyöpäsolulinjoissa muodostettu täysin kehittynyt crypt kaltaisia ​​rakenteita ja eristämisen, joka on samanlainen ensisijainen paksusuolen syöpiä. Tämä viittaa siihen, että huolimatta odotetaan geneettisten muutosten siirtyneiden solulinjoissa [15], käyttämällä koolonisyöpäsolulinja ksenograftien voi olla huonompi käytön ensisijainen paksusuolen syöpien tutkimukset kasvainsolun alapopulaatiot, kuten paksusuolen syövän kantasoluja, [12] , [16]. Tässä yhteydessä kasvuolosuhteet

in vivo

voi olla merkityksellisempi kuin lähde paksusuolisyöpäsolulinjassa joko johdettu perustettiin viljelmät tai ensisijainen kasvaimia.

Kun tarkastellaan yhdistysten kliinisten parametrien, me liittyy krypta kaltainen hallinto on järjestetty CRC parantuneen selviytymisen ja matala kasvaimen. Vaikka ennusteen kasvaimia voidaan parhaiten arvioitu lavastus, joka kuvaa taudin levinneisyys [17], histopatologiset kasvain luokittelu on itsenäisesti ollut yhteydessä tautiin tulokseen ja heijastaa yleistä astetta tuumorisolun erilaistumisen [18]. Useat luokitukset perustuvat eri näkökohtia kasvain morfologia on ehdotettu kuitenkin huonon toistettavuus, yksinkertaistettu kaksiportainen järjestelmä, tarkastellaan vain rauhanen muodostuminen, on tällä hetkellä suositaan, ja luokittelee nämä kasvaimet matalan ja korkean asteen kasvaimet [19] . Vaikka tämä pisteytysjärjestelmä on laajalti hyväksytty ja pidetty johdonmukaisesti ennustetekijä College of American patologi, se ei integroida olemassaoloa ja jakelu erillisiä kasvain solualapopulaatioiden joka saattaa vaikuttaa ennusteeseen. Toisaalta, viime aikoina esille lähestymistapoja arvioida CRC ennustetta, kuten kantasolu merkki ilmaisun [20], [21] tai microRNA profilointia [22], toistaiseksi joko puuttuu yleisen hyväksynnän tai on varoitus olla kallista ja teknisesti vaativa. Koska tutkimuksessamme, krypta kaltainen organisaatio toimi hyvin ennustaa sairauden lopputulokseen, ehdotamme, että tämä lähestymistapa voi sisällyttää morfologiset näkökohtia rauhasen muodostumisen merkkiaineiden osoittaa toiminnallinen kasvain osastoja. p-kateniinin ja CK20 ilmaisua voidaan voimakkaasti arvioida paksusuolensyöpä yksilöitä ja yhdistämään ne parametreja rutiinidiagnostiikassa voi siis parantaa histopatologiset paksusuolensyöpä luokitusta. Lisäksi nämä seikat, meidän havainnot voi myös selittää aikaisemmat ristiriitaisten tietojen kliinisestä korrelaatteja ydin- β-kateniinin [23], [24], kasvainsoluproliferaation [25], [26], ja CK20 ilmaisun paksusuolensyöpä [27] , [28]. Jos nämä merkit osoittavat toiminnalliset ja rakenteelliset osastojen näissä kasvaimissa, on mahdollista, että lokero organisaatio on enemmän merkitystä tuumoribiologiassa ja heijastuu kliiniseen tulokseen kuin yksinkertainen osaston koko.

tukeminen Information

Kuva S1.

Lisääntynyt WNT-aktiivisuus juuressa normaalin paksusuolen kryptissa. Vaikka β-kateniinin tarrat epiteelisolujen kalvot osana vyöliitos, suurennoksilla osoittavat lisäksi ydin- β-kateniinin ilmentymistä krypta pohjan (

musta arrowheads

). Puute ydinvoiman lausekkeen ylivoima sininen counterstaining nähdään epiteelisolujen yläpuolelle krypta pohjan (

sininen arrowheads

).

Vasen paneeli

arvo on suurempi suurennos alueen pakattu

oikea paneeli

.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0104284.s001

(TIF) B Kuva S2.

CK20 ilmentyminen ei rajoitu tuumorin keskustassa A-tyypin ja peräsuolen syöpiä. Serial kohdat osoittavat, lisäksi parannettu CK20 värjäytymistä kasvaimen keskelle (

nuolet

), parannettu värjäystä CK20 kasvaimen reunalla, päällekkäin ydin- β-kateniinin (

arrowheads

). Tämä malli todettiin 61% A-tyypin peräsuolen syöpiä.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0104284.s002

(TIF) B

Kiitokset

Olemme kiitollisia A. Sendelhofert, A. Schäfer ja M. Melz kokeellisiin apua, ja kiitos Stiftung Human Tissue ja Cell Research (HTCR) tarjoamiseksi paksusuolisyöpäkudoksessa.