Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

Flotillin geeni kutsutaan kasvain promoottori tai vaimennin, riippuen tuumorin tyypistä tai kasvaimen vaiheessa. Meidän tavoitteena oli tutkia kliinistä merkitystä flotillin2 proteiinin ilmentymistä mahasyövässä.

Methods

Tutkimme flotillin2 ja erbB2 tasolla kudosten microarray 282 mahasyövän näytteitä ja analysoitiin yhdistyksen välillä flotillin2 tasojen, ennusteeseen viittaavia tekijöitä ja ennusteeseen. Asetuksen erbB2 mukaan flotillin2 tutkittiin flotillin2 siRNA-transfektoiduissa mahalaukun syöpäsoluja.

Tulokset

Flotillin2 osittain yhteistyössä paikallistaa erbB2 on solukalvon havaittuna konfokaalimikroskopialla, tasot erbB2 vähenivät sen jälkeen, kun flotillin pudotus in SGC-7901 syöpäsoluihin, ja ilmentyminen flotillin2 korreloi positiivisesti että erbB2. Ei-neoplastisia mahalaukun limakalvo, flotillin2 ei ilmaistu epiteelin osastoon. Mahasyövän, positiivinen värjäytyminen flotillin2 osoitettiin 129 (45,7%) ja 282 tapauksessa myös, se oli merkitsevästi liittyy Lauren luokalla histologinen tyyppi, lymphovascular invaasio ja kasvaimen sijainnista. Lisäksi selviytyminen analyysi osoitti, että flotillin2 ilme oli itsenäinen ennustetekijä huono selviytyminen (p 0,001).

Johtopäätökset

Nämä tulokset osoittavat, että positiivinen korrelaatio välillä flotillin2 ja erbB2 ekspressiotasot, flotillin2 ehkä osallistuvat vakauttamiseen erbB2 at solukalvon, flotillin2 merkittävästi korreloi syövän etenemiseen ja huonon ennusteen mahasyövässä.

Citation: Zhu Z, Wang J, Sun Z, Sun X, Wang Z, Xu H (2013) Flotillin2 Expression korreloi HER2 tasot ja huonon ennusteen mahasyövän. PLoS ONE 8 (5): e62365. doi: 10,1371 /journal.pone.0062365

Editor: Joseph Najbauer, Pécsin yliopisto Medical School, Unkari

vastaanotettu: 15 helmikuu 2013; Hyväksytty: 20 maaliskuu 2013; Julkaistu: 02 toukokuu 2013

Copyright: © 2013 Zhu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustuksia National Natural Science Foundation of China (81272718), Young Scholars ”Research Fund tohtorikoulutuskeskukseen of Higher Education of China (20122104120008) ja tieteellisen tutkimuksen rahasto ensimmäisen sairaalan China Medical University (FSFH1208). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Monet solukalvon proteiinien tiedetään osallistuvan solujen proliferaatiota ja tarttuvuus, soluliikkuvuus ja kasvainsolun invaasiota, mikä vastaa yli kaksi kolmasosaa tällä hetkellä tiedossa lääkekohteita. Solukalvon ja siihen liittyvät proteiinit ovat huomattavan kiinnostuneita osalta eri näkökohtia kasvain, mistä karsinogeeninen ja metastaattisen mekanismeja molekyyli diagnoosiin ja terapeuttisten [1]. Flotillins liittyy vesicular kohtiin, solukalvon ja toimivat säätelijöinä signaalitransduktion [2]. Niistä flotillin perheenjäsenet, on olemassa kaksi eri flotillin geenejä (flotillin1 ja 2), flotillin2-proteiinin ilmentyminen on raportoitu joissakin ihmisen syöpäsolulinjoissa ja kasvainnäytteet [3], [4], [5], [6]. Koska flotillin2 suoraan vuorovaikutuksessa molekyylejä kuten reseptorit, kinaasit, adheesiomolekyylien ja G-proteiinit, se toimii kasvain modulaattorin kautta solujen jakautumisen, erilaistumisen, apoptoosin, tarttuvuus ja hyökkäys [4].

yli-ilmentymän erbB2 (ihmisen epidermaalisen kasvutekijän reseptori 2), joka tunnetaan myös nimellä HER2, on kalvoon liittyvä tyrosiinikinaasi, joka voi johtaa aktivoitumista solun signaalitransduktion järjestelmiä, jolloin solun transformaatio ja soluproliferaatiota tapahtumia liittyy syövän, kuten rinta- syöpä, munasarjasyöpä ja mahasyövän [7], [8], [9]. Korkea ilmentymistaso erbB2 on korreloi merkitsevästi lisääntynyt kasvaimen invaasio, metastaasi, resistenssi kemoterapiaa, ja huonoon ennusteeseen potilailla, [10]. Viimeaikaiset tutkimukset osoittivat, että flotillin2 proteiinia, muiden toimintojen ohella, oli mukana endosyyttisiin mekanismeja ja solujen kulkeutumista prosesseja, ja sen havaittiin olevan molekyyli- kompleksin erbB2 [11]. Ymmärtää onko vakauttaminen erbB2 at solukalvon välittyy flotillin2 ja niiden kliinistä merkitystä, suoritimme vertailevan kalvo proteomiikka-analyysi ihmisen mahasyöpä.

Tässä tutkimuksessa kuvaamme flotillin2 ja erbB2 ekspressiotasot ovat positiivisesti korreloi solutasolla sekä mahasyövän kudosten ja osoitamme, että erbB2 on sisäistää ja hajottaa mekanismilla kun flotillin2 ehtyminen. Lisäksi ennusteeseen viittaavia merkitys flotillin2 arvioitiin edelleen käyttäen arkistointia kudosnäytteet ja tilastollinen analyysi. Huomasimme, että flotillin2 on itsenäisesti ennustetekijä, myös mahdollinen uusi biomarkkeri imusolmuke etäpesäke. Tuloksemme helpottaa ymmärtämistä mahasyövän syövän synnyn ja kaivosteollisuuden biomarkkereita diagnosointiin ja hoitoon tämän taudin.

Materiaalit ja menetelmät

Tissue Näytteet ja Follow-Up

yhteensä 282 potilasta, joilla oli leikkauksen mahasyövän välillä tammikuussa 2006 ja joulukuuta 2009 ensimmäisen sidoksissa sairaalaan Kiinan Medical University valittiin tähän tutkimukseen. Kaikki potilaat johdettuja näytteet kerättiin ja arkistoidaan protokollien hyväksymien Institutional Review Boards ensimmäisen sidoksissa Hospital China Medical University. Diagnoosi vahvistettiin vähintään kaksi patologien ja lavastus perustui patologiset löydökset mukaan 7th American sekakomitean syövän suuntaviivoja. Mediaani seuranta-aika oli 51 (vaihteluväli 5-78) kuukautta.

282 potilasta, joille tehtiin gastroctomy tehtiin tarkka kliininen seuranta, mukaan lukien rinta ja vatsan TT kuvantaminen, CEA tasolla, ja verikokeet klo 2- 3 kuukauden välein ja vuosittain gastroskopialla. Kokonaiselinaika (OS) hinnat määriteltiin Kokoluokka alkuperäisen leikkauksen kliinisesti tai radiologisesti todistettu uusiutuminen tai etäpesäke ja kuolema, vastaavasti. Lopussa päivämäärä seurantatutkimuksen johtamiseksi analyysi oli 29. kesäkuuta 2012.

Ethics selvitys

Eettinen hyväksyntä Tutkimuksen saatiin Research Ethics komitean Kiinan Medical University, Kiina. Kaikki potilaat tarjoavat kasvain kudosta sekä normaali mahan kudosnäytteitä allekirjoittivat suostumuslomakkeen ennen kirurgista poistoa mahakarsinooman jotta tämä tutkimustoimintaan.

TMA rakentaminen ja immunohistokemia

Hematoksyliini ja eosiinilla (H 0,05) on laitetaan sitten monimuuttujamenetelmin. HR 95%: n luottamusväli (CI) mitattiin arvioida vahinkoriskeistä Yksittäisten tekijöiden. P 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä. Analyysit tehtiin SPSS tilasto-ohjelmalla ohjelmaversio 19,0 (SPSS Inc., Chicago, IL).

Tulokset

ilmaisujen flotillin2 ja erbB2 mahasyövän

Mosaiikki kohdat of kudossiruina (TMA) 282 kudoksen sydämiä luokiteltiin niiden sytoplasmaattinen immunohistokemiallisella värjäyksellä intensiteetti vastaan ​​flotillin2 ja erbB2-proteiinia. 282 luettavissa näytteet ovat 282 mahasyöpä 181 peri-karsinooma ja 101 näytteet normaalista mahalaukun epiteelin kudosta. Kasvainsolujen osalta esiintyi tyypillinen diffuusia kalvon värjäys flotillin2 löytyy mahalaukun karsinooma (kuvio 1 a) kanssa samanlaisia ​​sijainti erbB2 (kuva 1b), ei-neoplastisia mahan limakalvoa, flotillin2 ja erbB2 molemmat ole ilmaistu. Positiivinen värjäytyminen flotillin2 osoitettiin 129 (45,7%) ja 282 näytteistä, erbB2 oli 59 (20,9%). Monistaminen erbB2 geenin määritettiin kaksivärinen kala nude-hiirissä. ErbB2 geenivahvistus klusterin kuvio (punainen) havaittiin MGC-803, BGC-823 ja SGC-7901-soluissa, erbB2 yliekspressio vain ihmisen SGC-7901 mahalaukun syöpäsolun (kuva 2a-c).

edustavan proteiinin ilmentymistä (A) flotillin2 ja (B), erbB2 kudoksessa microarray ydin otettiin mahalaukun syöpä. SGC-7901 mahalaukun syövän solut värjättiin anti-erbB2, anti-flotillin2-vasta-aineen osalta, värjätään vasta-aine visualisoitiin TRITC /FITC-konjugoitua vuohen anti-hiiri-IgG-vasta-ainetta, ja objektilasit tutkittiin sitten konfokaalisella laserkeilauksella mikroskoopilla. TRITC (erbB2) näkyy punaisena (C), FITC (flotillin2) vihreänä (D), ja yhdistäminen vihreän ja punaisen tulee keltainen (E).

monistaminen HER2-geenin määritettiin FISH. HER2 geenivahvistus klusterin kuvio (punainen) havaittiin (A) MGC-803, (B) BGC-823 ja (C) SGC-7901 mahalaukun syöpäsoluja, HER2 yli ilmentyminen ihmisen SGC-7901 solu. (D) Western blot analyysi ja (E) Quantitative real-time PCR käsiksi erbB2 ja flotillin2 in SGC-7901 solulinja jälkeen knockdovvn flotillin-2. Ilmaisu asema flotillin2 on erittäin yhtäpitävä että erbB2, siRNA oli tyhjä vektori, β-Actin käytettiin sisäisenä kontrollina.

välisestä assosiaatiosta ilmentymiä flotillin2 kanssa erbB2

Analysoimme sijainti solun erbB2 ja flotillins in SGC-7901 mahalaukun syöpäsolun. Voisimme osoittaa konfokaalimikroskopialla että flotillin2 osittain kolokalisoituvat kanssa erbB2 on solukalvon (kuvio 1 a-e). Tuloksemme osoittavat, että ilmentyminen flotillin2 do on merkittävä korrelaatio että erbB2 (p 0,001) immunohistokemiallinen kudoksessa erilaisia ​​analyysi (taulukko 1). Lisäksi vuorovaikutus flotillins ja erbB2 voitaisiin osoittaa immunoblottauksella (kuvio 2d) ja laatu RT-PCR kokeissa (kuvio 2e), kaatamalla endogeenisen flotillin2 johti hajottamaan maahan erbB2. Seuraavaksi me analysoi vaikutusta flotillins on sisäistämisen ja myöhemmän hajoamisen erbB2. Kuten alla on kuvattu, erbB2 ja HER2 myös monia suhteita kliinis tekijöitä yhteistä.

Association välillä flotillin2 ja kliinis tekijät

Tässä tutkimuksessa 282 mahasyöpäpotilaista riittävän primaarikasvaimia materiaalit ja seuranta-ajan ollut saatavilla, joiden kudokset kerättiin viime 6 vuotta. Taulukko 2 antoi kuvailevia tilastoja varten mitattiin näille potilaille. Mediaani kesto seuranta-aika oli 54 kuukautta (vaihteluväli 9-78 kuukautta). 5 vuoden yleinen (OS) oli 48,2%.

Huomasimme, että lisääntyneen ilmentymisen flotillin2 ja erbB2 sen molemmat merkitsevästi yhteydessä histologinen tyyppi (p 0,001, tässä järjestyksessä), Lauren grade (p 0,001, tässä järjestyksessä) ja Lymphovascular invaasio (p = 0,059 ja p 0,001, taulukko 2). Lisäksi, flotillin2 korreloi merkitsevästi kasvaimen kokoa (p = 0,006), T vaiheessa (p = 0,001) ja imusolmukkeiden etäpesäkkeiden (p = 0,033, taulukko 2). Kuitenkaan mitään merkittävää korrelaatiota ei havaittu flotillin2 ilmaisun ja muut muuttujat, kuten ikä, sukupuoli, sijainti, makroskooppinen tyyppi ja maksan etäpesäkkeiden.

ilmentäminen flotillin2 suhteessa ennusteeseen

Käyttämällä Coxin suhteellisten riskien regressio malli, yhden muuttujan väliset suhteet kasvaimen ominaisuudet ja potilaiden tuloksista saatiin (taulukko 3). Niistä 282 potilasta analysoitiin tilastollisesti merkittäviä eroja OS nähtiin, jossa on huono lopputulos potilaalla on suurempi värjäytymisen flotillin2 ja erbB2. Muita ennustavaa tekijät havaittiin korreloivan OS olivat ikä (P = 0,042), koko (P = 0,001), makroskooppiset tyyppi (P = 0,001), pT (P 0,001) ja pN vaihe (P 0,001) (taulukko 3). Käyttämällä log-rank-testi oli merkittäviä eroja OS positiivisten ja negatiivisten potilaiden flotillin2 ja erbB2 (P 0,001, vastaavasti) kaikilla potilailla oli kuvassa 3.

(A) Potilaat, joilla erbB2 -positiivinen kasvain oli huomattavasti lyhyempi elinaikajakson leikkauksen jälkeen kuin ne, joilla erbB2-negatiivinen kasvain (p = 0,014). (B) Potilaita, joilla on flotillin2-positiivinen kasvain osoitti huonoin tulos. Korkea flotillin-2 ja erbB2 ilmaisun merkittävästi korreloi huono potilaiden hoitotuloksiin (p 0,001).

Cox monimuuttuja suhteellisen riskin regressiomalli käytettiin sitten määrittää, mitkä tekijät olivat yhdessä predicative of OS. Muuttujat arveltiin olevan merkittäviä yhden muuttujan analyysiin, otettiin mukaan analyysiin. Merkitys, oikaistu muille yhteistyössä sen vaihtelun, annettiin taulukossa 4. Monimuuttuja-analyysi yhteisen vaikutuksen flotillin2 ja erbB2 muiden ennustetekijöiden osoittivat, että pT (P 0,001) ja pN vaihe (P 0,001) flotillin2 (HR = 1,485, 95% CI: 1,278-1,725, P 0,001) oli parempi itsenäisesti prognostinen markkeri kuin erbB2 (HR = 1,375, 95% CI: 1,133-1,947 P = 0,004) ja OS (taulukko 4).

keskustelu

arviointi biologisten ennustavat tekijät on kliinistä merkitystä, varsinkin sairauden huono tulos kuten mahasyövän. Tämä tutkimus vahvisti ilmentämällä flotillin2 mahasyövän kudosnäytteet ja solulinjat, Huomasimme myös, että flotillin2 oli itsenäinen huono ennustetekijä kokonaiselinaika mahalaukun syöpäpotilailla. Lisäksi esillä oleva tutkimus osoitti, ensimmäistä kertaa, on positiivinen suhde ilmaisuja flotillin2 ja HER2 mahasyövän. Edellisessä tutkimuksessa Pust et al. (2012) havaitsivat, että rintasyövän solulinjat, jotka ovat peräisin etäpesäkkeiden osoitti korkeampaa flotillin mRNA: ta ja proteiinia ilmaisuja kuin johdetut mahasyöpä. Siten ne selitetään rooli flotillin2 kuten kudos- ja vaihe-spesifinen kasvaimen modulaattori, jossa se toimii estäjänä tai edistäjä kasvaimen muodostumisen ja etenemisen riippuen proteiini-vuorovaikutuksen kumppaneiden, kuten kasvutekijän reseptoreita tai solun adheesiomolekyylien [11] . Tuloksemme samaa mieltä kuvauksen koska flotillin2 ilmaisu esillä olevassa tutkimuksessa korreloi positiivisesti HER2 ilme, joka korreloi positiivisesti huonon ennusteen mahasyövässä.

Tulokset kahdesta uusien julkaisujen mukaan flotillin on funktionaalinen rooli reseptori tyrosiinikinaasin signaloinnin, erityisesti aktivointi MAP-kinaasin signaloinnin ja säätelyn FGF signaloinnin HeLa-soluissa [16], [17]. Vuonna SKBR3 rintasyövän soluja, joten Akt fosforylaation vähenee kun ehtyminen flotillin-2, mutta ei sen jälkeen flotillin-1 knockdovvn kanssa sovittu tietomme. Näin ollen, reseptorityrosiinikinaaseja tai reseptorityrosiinikinaasin välittämä signalointireittien voidaan säädellä flotillins eri tavoin ja /tai solutyyppispesifistä tavalla, on mahdollista, että eri signalointireittejä laukaisee erbB2 säätelevät joko flotillin2. Kuitenkin alennettu erbB2 tasot laukaisi flotillin2 Knockdown tukea meidän hypoteesia flotillin2 välittämän vakauttaminen erbB2.

ErbB2 tiedetään liittyvän huonoon ennusteeseen mahasyövän, flotillins on kuvattu liittyvän kasvaimen genesis. Olemme osoittaneet, että flotillin2 lokalisoituu erbB2 on solukalvon ja sillä on toiminnallinen rooli säätelyssä erbB2 mahasyövän. Korkea ilmentymistä flotillin2 liittyy huonoon ennusteeseen ja vähentää elinaika, ja ilmenee mahdollisena ennustaja uusiutumisen mahasyövän. On raportoitu, että estrogeenireseptorit olivat mukana mahasyövän ja flotillin2 vuorovaikutuksessa reseptorien kanssa [18], [19], osoittaa merkittävää vaikutusta flotillin2 toiminnon mahalaukun syövän kehittymisen. Toisaalta, perustuu meidän kudos microarray tutkimuksia, flotillin2 yliekspressio oli erittäin liittyy lisääntynyt solujen vaeltamiseen ja pahanlaatuisiksi johtaa imusolmukemetastaaseja ja lisääntynyt invasiivisuus. Tutkimuksessamme kohonnut flotillin2 ja HER2 molemmat osoittivat merkittävää korrelaatiota histologinen tyyppi (P 0,001 molemmat), Lauren grade (P 0,001 molemmat), kun taas flotillin2 myös saada suuri merkitys T vaiheessa (P 0,001) ja imusolmukkeesta etäpesäkkeiden (P = 0,033). Tämä voimakas korrelaatio viittaa siihen, että flotillin2 voidaan käyttää biomarkkerina tunnistaa potilasryhmissä mahalaukun syövän aggressiivisemman fenotyypin. Monimuuttuja-analyysi osoitti flotillin2 toimii paremmin ennustetekijöiden merkki ennustaa etäpesäkkeiden riski ja toistumisen (HR = 1,485, 95% CI: 1,278-1,725) kuin Her2 (HR = 1,375, 95% CI: 1,133-1,947) OS. Ehdotamme, että flotillin2 yli-ilmentyminen voi osaltaan lisätä lisääntymistä ja kehitystä syöpien.

Kaiken kaikkiaan tämä on ensimmäinen osoitus positiivinen korrelaatio flotillin2 ja erbB2 tasolla viljellyissä mahasyövän solujen sekä kudoksissa. Lisäksi flotillin2 ekspressiotaso korreloi huonon ennusteen mahasyövän, mikä osoittaa, että flotillin2 ehkä ennustetyövälineenä biomarkkereiden mahasyövän. On havaittu, että erbB2-yli-ilmentävät kasvaimet ovat todennäköisesti resistentti hoitoon vasta-pohjaiseen (trastutsumabi /Herceptin-hoito), joka on tullut kliininen ensilinjan hoitoon potilailla, joilla on erbB2-yli-ilmentävät metastaattista mahasyövän [20] , [21]. Kuitenkin myös yhdessä muiden kemoterapeuttiset lääkkeet, yli 20%: lla potilaista, joilla erbB2-yli-ilmentymisen osoita mitään hoitovasteesi. Siten kohdistamalla flotillin2 ilmaisua, uusia strategioita syövän hoidossa voidaan kehittää.