Krooninen sairaus

tiivistelmä

Stathmin on ennusteen merkki monissa syövissä, kuten kohdun limakalvon syöpä. Prekliiniset tutkimukset, pääasiassa rintasyöpä, ovat ehdottaneet, että stathmin voi lisäksi olla ennustavan markkeri reaktiota paklitakselille. Ensin arvioitiin reaktiota paklitakselille endometriumin syövän solulinjoissa ennen ja jälkeen stathmin knock-down. Tämän jälkeen tutkimme kliinistä reaktiota paklitakselille sisältäviä kemoterapia metastaattisessa endometriumsyöpään suhteessa stathmin proteiinin tason kasvaimissa. Stathmin taso määritettiin myös etäpesäkeleesioita, analysoidaan muutokset biomarkkereiden tilan taudin etenemisen. Knock-down of stathmin parantunut herkkyys paklitakselin kohtukarsinooma solulinjoissa sekä luonnollisesti korkeampi, ja alempi herkkyys paklitakseli. Kliinisissä näytteissä, korkea stathmin taso osoitettiin liittyvän huono reaktiota paklitakselille sisältäviä kemoterapiaa ja vähentää tautikohtaisten eloonjäämistä vain hoidetuilla potilailla tällainen yhdistelmä. Stathmin taso nousi merkittävästi perusasteelta etäpesäkeleesioita. Tämä tutkimus viittaa siihen, tukee sekä prekliinisen ja kliinisen tiedon, että stathmin voisi olla ennustavan biomarkkeri vaste paklitakselihoidolla endometriumin syöpää. Re-arviointi stathmin tason etäpesäkeleesioita ennen hoidon aloituksesta voi olla merkitystä. Myös validointi satunnaistetussa kliinisessä tutkimuksessa on tärkeää.

Citation: Werner HMJ, Trovik J, Halle MK, Wik E, Akslen LA, Birkeland E, et al. (2014) Stathmin Protein taso, potentiaalinen Ennakoiva Marker for Taksaania hoitovaste endometriumsyöpään. PLoS ONE 9 (2): e90141. doi: 10,1371 /journal.pone.0090141

Editor: Rui Medeiros, IPO, Inst Port Oncology, Portugali

vastaanotettu: 11 lokakuu 2013; Hyväksytty: 21. 2014; Julkaistu: 25 helmikuu 2014

Copyright: © 2014 Werner et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Helse Vest , Norjan tutkimusneuvosto (803100, 805797) ja The Norja Cancer Society (Harald Andersenin legat) tukenut tätä tutkimusta. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat raportoivat seuraavat konfliktit: The University of Bergen /Haukeland University Hospital /Dana Farber Cancer Institute /Harvard kautta BTO (Bergen Teknologioverføring AS): Eräät näkökohdat liittyvät STMN1 niin prognostinen ja ennakoivan markkeri endometriumsyöpään sovelletaan vireillä immateriaalioikeuksien (US 12/962946). Tämä ei muuta tekijöiden noudattamista PLoS One politiikan tietojen jakamista ja materiaaleja.

Johdanto

Stathmin1 (STMN1 jäljempänä merkintää ”stathmin ’) on 18 kD sytosolin fosfoproteiini, tunnetut tärkeä rooli solusyklin. Stathmin ilmentyy kaikissa kudoksissa. Se on kriittinen säätelijä mikrotubulusdynamiikan kautta mikrotubulus epävakautta ominaisuuksia, mukaan lukien sekä ehkäisy polymeroinnin ja aktiivisen edistämisen mikroputkidepolymeroitumi- nen [1] – [4]. Fosforylaatio stathmin neljä seriinitähteissä alussa Mitoottisen vaiheen vaimentaa sen epävakautta toimintaa, jolloin solujen muodostamiseksi sukkularihmaston; defosforylaatio tapahtuu sitten ennen poistumista mitoosin [1], [4]. Stathmin on mukana myös solunsisäiseen kuljetukseen, solun liikkuvuus, napaisuus, ylläpito solun muodon ja apoptoosin säätelyyn [1].

biomarkkereiden määritellään ”ominaisuus, joka on objektiivisesti mitata ja arvioida indikaattorina normaalista biologinen prosesseja, patogeenisia prosesseja tai farmakologinen vastauksia tietyn terapeuttisen intervention [5]. Biomarkkerit voidaan jakaa eri tyyppejä, kuten ennustetekijöitä; liittyy potilaan ennusteeseen riippumaton hoidon ja ennustavan biomarkkerit; että tunnistaa potilaspopulaatioissa todennäköisimmin (ei) reagoi hoitoon [5]. Siten luotettava ennustava biomarkkerit ovat ensiarvoisen tärkeitä parantamiseksi ja hoito on yksilöllisempää.

Stathmin ylössäädellään monissa kiinteiden syöpien, kuten kohdun limakalvon syöpä [1], [6] – [14], ja sen säätelyä on liittynyt jossa kliinis muuttujia aggressiivinen sairaus kuten suurentunut imusolmuke etäpesäke [9], [15] ja huono selviytyminen [6], [9], [10], [12], [13], [16], jossa vahvistetaan stathmins rooli ennusteen biomarkkereiden.

Nykyään harvat ennustava markkereita tiedetään ihmisen syövissä ja vielä vähemmän ovat kliinisesti sovelletaan. Endometriumin syöpä ole kliinisesti validoitu ennakoivan markkereita ovat vielä saatavilla [17]. Sekä kohdennettuja hoitoja ja tavanomaisten kemoterapia-aineet ovat tehokkaita vain potilasalaryhmässä [18], [19], on siis kiireellisesti tunnistaa kliinisesti hyödyllinen ennakoivaa markkereita. Esimerkkejä sisällytetty klinikalla kuuluu

KRAS

mutaatiostatuksesta riippumatta osoittaa vastauksena setuksimabin ja panitumumabia kolorektaalisyövässä [18], [20], [21], ALK uudelleen järjestely ei-pienisoluinen keuhkosyöpä ennustamisessa vastaus crizotinib [18], [20], [22] ja HER2 /Neu vahvistus tai yliekspressio rintasyövässä saamisen trastutsumabi hoitoon [18], [20], [23].

Taksaanit ovat ryhmä kemoterapeuttiset aineet käytetään usein hoitoon kohtukarsinooma. Prekliinisissä tutkimuksissa rinta- ja eturauhassyöpää sekä retinoblastoomaa [24] – [28] antaa prekliinisissä viitteitä siitä, että stathmin voi olla ennakoivaa markkeri vastaus taksaanien näissä syövän tyypit. Korkea stathmin vähentynyt herkkyys rintasyövän solulinjat paklitakseli ja vinkristiini [24] ja knock-alas stathmin siRNA lisääntynyt herkkyys paklitakseli sekä rintojen [25] ja eturauhasen solujen [27]. Tämä vaikutus stathmin proteiinin tason hoitovasteen rajattiin mikrotubulusten vastainen aineita. Valitettavasti mikään näistä tutkimuksista ovat ottaneet tämän tiedon seuraavalle tasolle yhdistämällä tuloksia kliiniset tiedot. Endometriumin syöpä tietojemme ole tutkimuksia, prekliinisiä eikä kliinisiä, ovat tutkineet yhdistyksen välillä stathmin tasolla ja reaktiota paklitakselille sisältävä solunsalpaajahoito. Tässä raportissa, osoitamme endometriumin sinoomasolulinjoja, että vähentäminen stathmin tasoja stathmin knock-down johtaa parempiin reaktiota paklitakselille. Samalla osoitetaan ensimmäistä kertaa parhaan tietomme, että stathmin proteiini taso liittyy reaktiota paklitakselille sisältäviä kliinisissä näytteissä Metastasoivassa kohtukarsinooma.

Materiaalit ja menetelmät

solulinjat

Kaksi endometriumsyöpään solulinjat valittiin eron vuoksi niiden herkkyyttä profiili paklitakseli; Ishikawa (Sigma, herkkä) ja Hec1B (American Type Culture Collection, vähentää herkkä). Cancer Cell Line Encyclopedia (CCLE) tiedot vahvistavat ero herkkyydessä [29]. Linjat saatiin 2009 ja aitouden varmistaminen lyhyen tandem-toisto (STR) profilointi tehtiin vuonna 2012 [30], [31]. Solulinjat pidettiin olosuhteissa tajien suosittelemia.

Cell transfektio

Soluja viljeltiin 50-70% konfluenssiin ennen transfektiota lentiviruksen transduktion (Open Biosystems, GIPZ lentiviruksen shRNAmir) . GIPZ lentiviruksen shRNA kohdegeenin asetettu 3 (V3LHS_411977, V2LHS_62940, V3LHS_383505) MOI 2,5 on käytetty. Ei-hiljentäminen GIPZ lentiviruksen shRNAmir ohjaus (BV17110_2.80 x 10 8) käytettiin kontrollina. Solut valittiin puromysiiniä (1 ug /ml) transfektion jälkeen.

Drugs

Paklitakseli ja karboplatiini hankittiin Sigmalta.

solulinjakokeissa

solulinjat käsiteltiin paklitakselia kasvavien pitoisuuksien (1-500 nM) 24 tuntia. Koska kliinisesti taksaaneja yhdistetään usein platinaa johdannaisten kohdun limakalvon syöpä, myös käsitellyt solut yhdistelmällä paklitakselin (kasvavissa konsentraatioissa (1-500 nM) ja karboplatiinin (kiinteä pitoisuus, 200 mmol) 24 tunnin ajan tarkkailla mitään synergististä hoitoa vaikutuksia. Solut myöhemmin joko kiinnitettiin 2% formaldehydi mikroskooppista arviointia apoptoosin, jota käytetään proliferaatiomäärityksessä (MTS) tai tuotettu immunoblottauksella. Kokeet ainakin suoritettiin kolminkertaisina.

arviointia apoptoosin, at vähintään 150 solut laskettiin kolmella eri alueilla 96-kuoppalevyille. Jotta lisääntymismäärityksissä, kokeet suoritettiin kolmena rinnakkaisena 96-kuoppaisilla levyillä. kokeet suoritettiin CellTiter 96® AQ

ueous One Solution Cell Proliferation Assay (Promega) seuraavia valmistajan ohjeita. absorbanssi rekisteröitiin 490 nm käyttäen ELISA (TECAN Magellan Sunrise).

Immunoblotit tehtiin mukaan vakioprotokolla. Lyhyesti, soluja kasvatettiin ja käsiteltiin 6-kuoppaisille levyille ja kerätyistä lyysispuskuriin 24 tunnin jälkeen paklitakselihoidolla. Proteiinit (25 ug) erotettiin SDS /PAGE: lla ja siirrettiin nitroselluloosamembraanille (Biorad, Norja). Stathmin ja /tai (lohkaistaan) PARP todettiin käyttäen lohkaistiin PARP (Asp214) (D64E10) (# 5625Cell Signaling), laimennettiin 1:1000 ja stathmin (# 3352, Cell Signaling), laimennettu 1:1000; β-aktiini toimi latauskontrollina (anti β-aktiini-vasta-aine (AC-15) (ab6276) Abcam), laimennettu 1:10000. Alkalinen fosfataasi konjugoitua sekundaarista vasta-aineita käytettiin (Anti-kani-IgG (Sigma Aldrich A3687): anti-hiiri-IgG: tä (Sigma Aldrich A3562)) ja chemoluminiscence alustan (lumiphos 34150 WB, Thermo tieteellinen) havaitsemista varten.

Potilaan sarjan

Potilaat diagnosoitu ja hoidettu kohdun limakalvon syöpä Haukelandin University Hospital, Bergen, Norja, ovat allekirjoittamisen jälkeen tietoon perustuva suostumus, etu- ja peräkkäin sisällytettiin tietokantaan (väestöpohjainen asetus) vuodesta 2001 lähtien, estää valinta bias ja varmistamalla optimaalinen tiedonkeruu kaikille potilaille, kuten aiemmin raportoitu [14]. Potilaat ovat kuitenkin käsitelty seuraavia rutiini ohjeita ja kliinisistä näytteistä tutkittiin näin ollen koostua takautuvasti kerättyjen arkistointia kudosta. Kliinis Tiedot sisältävät muun muassa FIGO 2009 vaiheessa histologinen alatyyppi, laatu, ensisijainen ja adjuvanttihoitona, ja seurata myös hoidon etäpesäkkeitä. Jotta Tässä tutkimuksessa potilailla, jotka saivat paklitakselia sisältävän kemoterapian (rutiininomaisesti meidän sairaalassa yhdistelmänä paklitakselin ja karboplatiinin) jälkeen kirurginen hoito joko jäljellä olevan sairauden tai etäpesäke ennen huhtikuuta 2011 tutkittiin hoitovasteen mukaan RECIST kriteerien [ ,,,0],32], jossa viimeinen seurannan merkintä heinäkuu 2013. of yhteensä 607 potilasta tietokantaan, josta 121 oli systeemisiä eli toistuva tai jäljellä tautia, 57 oli vastaus tietojen mukaan RECIST kriteerien saatavilla; Joista 33 hoidettiin paklitakselilla sisältävä solunsalpaajahoito. Määrittelimme hyvä vaste täydellinen tai osittainen vaste (RECIST kriteerit), ja huono vaste staattisina sairauden tai taudin etenemisen (RECIST kriteerit). Lisäksi tarkastelimme tautikohtaisten selviytymistä suhteessa stathmin tasolle kaikille potilaille, joiden kohdun limakalvon syöpä ja erityisesti potilaista hoidettiin etäpesäkkeitä. Keskimääräinen seuranta meidän kohortissa oli 34 kuukautta (vaihteluväli 0-105 kuukautta).

Tissue mikrosiru (TMA) rakentaminen

TMA: n tuotettiin kuten aikaisemmin on kuvattu ja validoitu useissa tutkimuksissa [33 ]. Alueella korkeimman kasvaimen aggressiivisuus tunnistettiin kaikissa hematoksyliini /eosiinilla dioja varmistaa kasvaimen edustavuuden ja kolme (primäärikasvain) tai yksi (etäpesäke) kudossylintereitä (0,6 mm halkaisijaltaan kukin) on asennettu vastaanottoblokissa käyttäen mittatilaustyönä tarkkuusinstrumentti ( Beecher välineitä, silver spring, MD, USA). Formaliinilla parafiiniin (FFPE) ensisijainen kasvainkudoksen oli saatavilla TMA alkaen 603 potilasta arvioimiseksi stathmin tasolla. 77 potilaalla on metastaaseja, ylimääräisiä metastaattisen kudos oli saatavilla TMA tutkinnan stathmin taso verrattuna vastaavaan primaarikasvaimen. Liian vähän tapauksia oli vielä arvioitavissa etäpesäkeleesioita, saatu ennen paklitakselia sisältävä kemoterapia, sillä stathmin kuntotasoarviona, jossa vaste tietojen mukaan käytettävissä RECIST kriteerit ja samanlainen esikäsittelyä profiilin (n = 3) esittää tarkoituksenmukaisia ​​tilastollisia analyysejä vasteen suhteessa biomarkkereiden tilaansa etäpesäkeleesioita.

immunohistokemia

5 um: n paksuinen TMA kohdat poistettiin vaha ksyleenillä /etanolilla. Antigeeni haku tehtiin mikroaaltouuni TRS pH 6 (S1699 Dako Target Retrieval Solution) 20 minuuttia. Objektilasit blokattiin peroksidaasin (Dako S2023) 8 minuutin ajan ja inkuboitiin 60 minuuttia stathmin (Cell signalointi # 3352), laimennettu 1:50. EnVision + järjestelmä, HRP sekundaarista vasta-ainetta (Dako K4011) käytettiin sen jälkeen DAB + (DAKO K4011), kuten tunnistusjärjestelmä. Objektilasit vastavärjättiin hematoksyliinillä (Dako, S2020).

Värjäys arviointi

Sokkoutetut potilaan ominaisuuksien ja lopputulos, objektilasit tekee kaksi tekijää (HMJW ja JT) tavallisilla valomikroskoopilla kuten aiemmin on kuvattu [34], [35]. Kappa-arvo, mittana toistettavuus oli 0,73 erillisessä joukko 68 dioja teki erikseen HMJW ja JT. Proteiinipitoista taso määriteltiin yläkvartiili, pisteet 9, linjassa aiempien julkaisujen [15]. Mikäli useita etäpesäkkeitä kanssa vaihtelua stathmin tasolla, vaurio on korkein määritelty lopullista pisteet etäpesäkeleesioita.

Tilastot

Tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen PASW18 tilastot (Ennakoiva analyysin ohjelmisto, SPSS inc. Chicago, USA). Kategorisia muuttujia arvioitiin käyttämällä Pearsonin χ2-testi tai Fisherin tarkkaa tarvittaessa. Kaksipuoliset P-arvot 0,05 pidettiin merkittävinä. Univariate analyysit aika mekaanisesti kuolemaan johtuen kohtukarsinooma (tautikohtaisten selviytyminen) suoritettiin käyttäen Kaplan-Meier-menetelmällä. Coxin suhteellisten riskien menetelmää käytettiin Monimuuttuja selviytymisen analyysin (suhteellisuus oletus tarkastaa log miinus käyrästä).

Ethics selvitys

Kaikki potilaat ovat allekirjoittaneet tietoisen suostumuksen ennen sisällyttämistä tutkimukseen. Tutkimus on hyväksynyt Norja tietosuojaviranomainen (961478-2), The Norja Social Science Data Services (15501) ja paikallinen Institutional Review Board (Aluekomiteoiden Lääketieteen ja Health Research Ethics; REKIII nr 052,01).

tulokset

Reagointi paklitakselin kohdun limakalvon syöpä solulinjoissa

reaktiota paklitakselille vaihtelee endometriumsyöpään solulinjoissa [29], [36], [37]. Osoitamme Ishikawa solut ovat herkkiä paklitakselihoidolla prosenttiosuus on korkea apoptoottisten solujen 24 tunnin kuluttua hoidon (mikroskooppisen laskennan ja lisääntymisen määritys) vastakohtana Hec1B solut (Fig. 1 a ja 1 b). Yhdistelmä hoitoon karboplatiinin ja paklitakselin ei aiheuttanut synergististä hoidon teho (ei kuvassa).

V: mikroskooppinen arviointi apoptoosin Ishikawa ja Hec1B villityyppisoluilla jälkeen paklitakselihoidon seuraavissa annokset: 0 nM, 5 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM ja 500 nM. Tulokset edustavat 5 riippumattomassa kokeessa. Keskivirheet keskimääräisestä on merkitty. B: Cell aineenvaihdunta arvioitava proliferaatiomäärityksessä (MTS, Promega) Ishikawa ja Hec1B villityyppisoluilla jälkeen paklitakselihoidon seuraavissa annokset: 0 nM, 1 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM ja 500 nM. Tulokset edustavat 3 (Ishikawa) ja 2 (Hec1B) itsenäisen kokeen.

Stathmin knock-down by virus transfektion

Fluoresenssimikroskopia osoitti transfektio osuus 70-80%: iin alkamista kokeita, joissa pieneni huomattavasti stathmin tasot stathmin knock-down solulinjojen kontrolliin verrattuna knock-down ja villityypin solulinjoilla (Fig. 2a ja 3a).

V: Immunoblotvärjäys jälkeen transfektoimalla solut stathmin lentiviraalinen shRNAmir ( ’stmn kd) tai ei-äänenvaimennusjärjestelmiä ohjaus ( ”non ho”) sekä emosolulinjassa (villityypin; ”WT”). Blotit värjättiin stathmin, ja β-aktiini lastaukseen valvontaa. B: Ishikawa villityypin solulinjan, ei-hiljentäminen ja stathmin knock-down jälkeen paklitakselihoidon 24 tunnin seuraavissa annokset: 0 nM, 5 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM ja 500 nM. Taso sirpaloituminen solujen on osoitettu insertin, kuten proxy etenemisen apoptoottisessa prosessissa. Diamonds; villityypin, kolmiot; ei-hiljentäminen ja risteytyksiä; stathmin knock-down soluissa. C: Immunoblotti Ishikawa villityypin, ohjaus (ei hiljentäminen) ja stathmin knock-down solulinjoissa jälkeen paklitakselihoidon 24 tunnin seuraavissa annokset: 0 nM, 100 nM ja 250 nM. Kalvo värjättiin varten pilkotun PARP ja stathmin, jossa β-aktiini toimii latauskontrollina. D: vasen: Ishikawa villin tyypin (WT) solulinja ja oikea: Ishikawa stathmin knock-down ( ’Stmn kd) solulinjassa. Mikroskooppikuvia Solujen käsittelyn jälkeen 24 tuntia ja 0 nM (ylärivi) tai 500 nM (alin rivi) paklitakselin myös osoittavat hajaantua entisestäänkin korko stathmin knock-down Ishikawa solut (oikea alapaneeli) verrattuna villin tyypin (vasen alempi paneeli).

V: Immunoblotvärjäys jälkeen transfektoimalla solut stathmin lentiviraalinen shRNAmir ( ’stmn kd) tai ei-äänenvaimennusjärjestelmiä ohjaus ( ”non ho”) sekä emosolulinjassa (villi tyyppinen; ”WT”). Blotit värjättiin stathmin, ja β-aktiini lastaukseen valvontaa. B: Hec1B villityypin solulinjan, ei-hiljentäminen ja stathmin knock-down linjat, kun paklitakselihoidon 24 tunnin seuraavissa annokset: 0 nM, 5 nM, 10 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM ja 500 nM. C: Left: Hec1B villin tyypin (WT) solulinja ja oikea: Hec1B stathmin knock-down ( ’Stmn kd) solulinjassa. Näytetään mikroskooppinen kuvat solujen käsittelyn jälkeen 24 tuntia ja 0 nM (ylärivi) tai 500 nM (alin rivi) paklitakselin osoittamalla lisääntynyt solukuolema varten stathmin knock-down Hec1B solut (oikea alapaneeli) verrattuna Hec1B villityypin (vasen alempi paneeli).

molemmissa stathmin knock-down solulinjoissa (Ishikawa ja Hec1B), parantunut vaste Paklitakselihoidon havaittiin (Fig. 2b ja 3b). Hec1B solut osoittavat tilastollisesti merkitsevä lisääntyi apoptoottisen korko jälkeen stathmin knock-down. Johtuen mahdollisesti luontaisista suurempi herkkyys paklitakselin Ishikawa soluissa, knock-down ei johtanut samanlaista suurta kasvua solukuolemaan. Kuitenkin olemme huomanneet selvästi lisääntynyt pirstoutuminen korko käsitellyssä stathmin knock-down Ishikawa solut vastustavat valvonnan soluihin, joita voidaan pitää merkkinä aktivoitumisen apoptoottisen reitin (työnnä Fig. 2b). Käyttämällä immunoblottaus, yritimme entisestään vahvistaa tehostetun apoptoottista reitin aktivaatio osoittamalla PARP pilkkominen alhaisemmalla paklitakseli pitoisuus Ishikawa jälkeen stathmin knock-down kontrolleihin verrattuna (Fig. 2c). Mikroskooppinen kuvia Ishikawa ja Hec1B villin tyypin ja stathmin knock-down-solujen 24 tunnin kuluttua paklitakselihoidolla 0 nM (ohjaus) ja 500 nM esitetään kuvioissa 2d ja 3c. Testasimme vaikutus stathmin knock-alas herkkyys karboplatiinin monoterapian ja paklitakseli-karboplatiini monimuotoiset hoidon noudattamatta lisääntynyt herkkyys tai synergistisiä vaikutuksia (ei kuvassa).

Korkean stathmin tason ennustaa huono reaktiota paklitakselille kliinisistä näytteistä

sitten tutkittiin potilaiden kasvain näytteet onko samanlaista yhdistyksen välillä stathmin tasolla ja hoitovasteen voitiin havaita. Stathmin värjäytyminen oli pääasiassa sytoplasmista, kuten on raportoitu kirjallisuudessa [15], [38]. Edustavia kuvia immunohistokemia heikoilla (normaali) ja vahva (korkea) stathmin värjäys on esitetty kuvassa 4a. Ilman metastaattinen saavien potilaiden anti-hormonihoito vain, metastasoivaa tautia sairastavaa potilasta sai paklitakselia sisältävä solunsalpaajahoito oli samanlainen kliinis ominaisuudet kuin potilaita kohdellaan eri. Sisältää saaneilla potilailla anti-hormonaalisia lääkkeitä vain, pääasiassa hauras vanhuksilla, kliinis ominaisuudet pysyivät edelleen samanlainen, paitsi että tämä alaryhmä oli huomattavasti vanhempi (taulukko 1). Potilaat, joilla on normaali stathmin taso vastasi selvästi parempi (RECIST kriteerit) hoitoon kuin potilailla, joilla on korkea stathmin tason (Fig. 4b). Stathmin taso ei ennustanut vastauksena muihin kemoterapiahoitojen tai hoitotapoja.

V: Kuvia edustaja heikko immunohistokemiallisella stathmin värjäytymistä (ylhäällä) ja vahva (korkea tai patologisen) stathmin värjäys (alhaalla) in kohtukarsinooma. Bars (oikea alakulma) toimenpide 40 pm. B: Clinical reaktiota paklitakselille kaikille kohtukarsinooma potilaita, joilla arvioitavissa taudista RECIST kriteerien ja erottaa normaali verrattuna korkean stathmin tasolla. Huono vaste (RECIST: staattinen sairaus tai sairauden etenemisen) merkitty sinisellä, hyvä vaste (RECIST: täydellinen tai osittainen vaste) merkitty punaisella. C: vertailu korkea (sairauden) stathmin proteiinin tason ala- ja etäpesäkeleesioita.

lähestyy eri näkökulmasta, yleensä potilailla, joilla on korkea stathmin taso oli alennettu sairausspesifistä selviytymistä, sopusoinnussa stathmins rooli ennustetyövälineenä biomarkkereiden (Fig. 5a). Kuitenkin alaryhmässä metastasoivaa tautia sairastavaa potilasta hoidettiin paklitakselilla sisältäviä kemoterapia, tautikohtaisten eloonjääminen oli merkitsevästi huonompi niillä potilailla, joilla on korkea verrattuna normaaliin stathmin (p = 0,03, Fig. 5b). Potilailla, jotka saivat muita hoitoja etäpesäkkeitä, ennuste oli liity stathmin tasolle (p = 0,76, Fig. 5c. Sulkemiseksi pois sekoittavia tunnetuilla tärkeä kliinis ennustetekijöiden muuttujia, suoritimme Monimuuttuja selviytymisen analyysin molempien alaryhmien tutkia vaikutusta of stathmin tason eloonjäämiseen hoidon jälkeen metastaattista sairautta, korjattuna FIGO vaiheessa ja histologiset alatyypin. stathmin proteiinin taso säilyi itsenäisenä ennustaja tautikohtaisten eloonjäämisen potilaiden alaryhmässä, jotka saivat paklitakselia sisältävän kemoterapian (n = 38, HR 2,3, CI 1.1 -5,2), oikaistuna FIGO vaiheessa ja histologinen alatyyppi, mutta ei alaryhmässä saavat muita hoitoja (n = 43, HR 1,1, CI +0,4-+2,7).

V: Kaikki potilaat täydelliset tiedot (n = 476). lukumäärä taudin tapahtumia suluissa. B: Kaikki potilaat etäpesäkkeitä, jotka saivat paklitakselihoidolla (n = 38). lukumäärä taudin tapahtumia suluissa. C: Kaikki potilaat etäpesäkkeitä, jotka saivat erilaisia ​​hoitoja (n = 43). Määrä tauti tapahtumia suluissa.

ristiriitainen biomarkkereiden aseman perus- ja etäpesäkeleesioita

Niiden potilaiden prosenttiosuus, joilla on korkea stathmin taso oli huomattavasti korkeampi etäpesäkkeitä verrattuna ensisijaisen vaurioita pathologic (korkea) tasot todettiin 18% jälkimmäisen (n = 84 477 ensisijainen leesioiden stathmin värjäys käytettävissä) verrattuna 37% metastaattisessa näytteistä (n = 29 79) (Fig. 4c).

vuonna pariksi ensisijainen-etäpesäke näytteitä, 35% etäpesäkeleesioita osoitti korkean stathmin tasolla. Eripuraisuus 26% välillä etäpesäkeleesioita ja heidän esivaaleissa havaittiin. 16% oli muutos korkean tason etäpesäkkeitä ja 10% normaalia.

Keskustelu

Stathmin-proteiinin taso on osoitettu olevan prognostinen markkeri aggressiivinen tauti monissa syövissä , kuten kohdun limakalvon syöpä, jossa korkea stathmin tasolla primaarikasvaimen tunnistaa potilaat suuri riski uusiutuva sairaus ja imusolmukemetastaaseja [6], [9], [10], [12], [13], [15], [16 ]. Tunnistaminen ja kehittäminen ennakoivan biomarkkerit ovat ensiarvoisen tärkeitä lisätä hoidon tehoa ja vähentää tarpeettomia sivuvaikutuksia, paitsi kohdistettuja hoitomuotoja vaan myös kemoterapeuttisten järjestelmissä, kuten molempien osalta, että vain alapopulaatio vastaa hyvin, varsinkin Metastasoituneessa mutta tällä hetkellä hyvin rajalliset välineitä ennustaa näille potilaille [39], [40]. Mikään tärkeä kliinis tekijät, kuten FIGO vaiheessa tai histologinen alatyyppi, ovat nykyään tunnetusti auttaa erottamaan mahdollisia vasteen ei-vaste paklitakselia sisältäviä kemoterapia Metastasoituneessa. Opiskelu suuri väestö pohjainen sarja laadukkaita kliinisen annotation kuten meidän sarja, yhdistettynä prekliinisten kokeet ovat hyödyllinen ja aikaa tehokas työkalu tutkimaan mahdollisia ennustavan biomarkkereita, joita voidaan myöhemmin testata kliinisissä kokeissa.

aiempien

in vitro

johtaa rintasyöpä, näytämme endometriumsyöpään solulinjoissa että riippumatta alkuperäisen stathmin tasolla, herkkyys paklitakseli lisääntynyt ja siten apoptoosia nopeutettua jälkeen onnistuneen stathmin knock-down. Tämä käy ilmi suoraan mikroskooppisia laskenta ja Ishikawa soluissa myös toteen immunoblottauksella keskittymällä PARP pilkkominen. PARP lohkaisu on perustettu indikaattori apoptoosin, mikä erottaa sen muista solukuoleman mekanismia, kuten nekroosia. Lisääntynyt apoptoottinen elin muodostumista huomattava mikroskopialla on stathmin knock-down solulinjoissa sopii voimistunutta apoptoosia [41], [42].

Meidän takautuvasti kerättyjen, takautuvasti analysoidaan potilaan sarja, me myös osoittaneet silmiinpistävä ero vastauksena paklitakselia sisältäviä kemoterapia verrattiin potilailla, joilla on normaali niille korkean stathmin tasolla, myös korjattaessa tärkeimpien kliinis prognostisia muuttujia. Jopa silloin, kun tutkitaan niin suuri kliininen sarjaan endometriumsyöpään potilaiden kuin meillä, keräsi yli yli 10 vuotta, ja asianmukaisen seurannan ja RECIST [32] mukainen dokumentointi vastaus, lopulta vain pienempi määrä potilaita oli hoidettu hoidon kiinnostavat, korostetaan vaikeus kerätä sarjaan riittävä potilaan numerot markkeri tutkimuksia; mutta samalla, että on tärkeää hyödyntää näitä suuria takautuvasti kerättyjen väestö pohjainen sarja ennustavaa biomarkkereita ehdotettu prekliinisissä tutkimuksissa, ja tutkia mahdolliset kliiniset voimassaolo ennen kliinisen tutkimuksen vaiheessa. Tilastollisesti merkitsevä korrelaatio korkean stathmin tason ja huono paklitakselin vastaus mukaan RECIST kriteerien kliinisissä näytteissä ja se, että stathmin taso on itsenäinen ennusteen arvioinnissa potilailla, jotka saivat paklitakselia metastaattista sairautta, ei esitellä potilaille, jotka eivät selviytymistilassa analyysit, tukee todennäköisyyden taso stathmin taso voi toimia paitsi ennustetyövälineenä markkeri vaan myös ennustavan merkkiaineena vaste paklitakselihoidolla endometriumin karsinoomia.

Toisin kuin aikaisemmat tutkimukset tarkastellaan stathmin mahdollisena ennakoivaa markkeri, etupäässä

in vitro

rintasyöpätutkimuksissa, tässä tutkimuksessa pystyimme testaamaan ja vahvistaa yhdistyksen kliinisissä näytteissä saaneilta potilailta huumeiden kohteisiin; saatujen tietojen käyttämisen hyvin selityksin takautuvasti kerätään potilaan sarjassa. Sekä prekliinisissä ja kliinistä testausta tuki stathmin taso vaikuttaa herkkyys paklitakseliin. Olemme tutkineet ja sulkea pois, että tämä vaikutus voidaan yleistää muiden kemoterapia-aineiden, kuten karboplatiini, myös usein käytetty kohdun limakalvon syöpä.

Raportointi suosituksia tuumorimarkkeri ennusteita, (REMARK) suuntaviivoja on kehitetty, jonka tavoitteena on parantaa tutkimusten laadun ja raportoinnin avoimuutta tällaisissa tutkimuksissa [43]. Nykyinen tutkimus on suoritettu mukaisesti näiden ohjeiden laadun parantamiseksi ja yleispätevyyttä sen tuloksia.

taksaanit, joka eristettiin alun perin kuori marjakuusi puu, kuuluvat perheeseen vastaisten mikrotubulusten kemoterapia-aineiden , paklitakselin niiden prototyyppi. Yksinkertaisesti sanottuna, taksaanit sitoutuvat p tubuliinia aiheuttaen mikrotubulusten vastustaa depolymerisaatiota, estämällä solusyklin etenemisen ja edistää mitoosi pidättäminen ja solukuolemaa [44]. Karboplatiini, sitä vastoin, on yksi platinaa aineita, vuorovaikutuksessa DNA: n ja häiritsee DNA: n korjaukseen. Koska stathmin on kriittinen säätelijä mikrotubulusdynamiikan, otetaan huomioon toimintatapa lääkkeiden, positiivinen vaikutus stathmin knock-alas paklitakselia vasteen ja ilman sitä karboplatiinin herkkyys, on myös biologisesti uskottava.

Näytämme suurempi osuus korkean stathmin tason metastaattisessa (37%) verrattuna ensisijaisen leesioita (18%). Ristiriita stathmin aseman havaittiin neljäsosa pariksi näytteistä, rinnalle löydökset esim rintasyöpä jossa eroavaisuuksia ensisijaisen ja etäpesäkeleesioita esitetään 14-55% ja 0-40% hormonireseptoreita varten ja HER2 vastaavasti [45] – [47]. Endometriumin syöpä, harvat tutkimukset keskustella eroja merkki aseman välillä ensisijainen ja etäpesäkeleesioita [38], [48], [49]. Kasvaimensisäistä heterogeenisuus on hyvin kuvattu syövän ja mahdollinen sekoittava tekijä monissa tutkimuksissa riippumatta käyttäen koko kudosta dioja tai TMA. Inter-tarkkailija vaihtelu ei todennäköisesti ole ainoa selitys näille kuvattu eroja. Myös tuoreessa tutkimuksessa arvioidaan mutaatiostatus menetelmä pidettiin vähemmän subjektiivinen kuin immunohistokemiallinen pisteytys, useita etäpesäkeleesioita yhdeltä potilaalta kanssa munuaissyövän, tuki havaitut biomarkkereiden muutoksia perusopetuksesta etäpesäkeleesioita ovat todellisia ja voivat liittyä ja merkityksellisiä syövän etenemistä [39]. Muutokset biomarkkereiden aseman perusopetuksesta etäpesäkeleesioita tukemaan tarvetta toistuvaan koepaloja vuonna etäpesäkeleesioita, jotta paremmin kattaa hoidon ratkaisut mahdolliseen ennustavan biomarkkerit mutta myös vain tarjota hoitojen todennäköisesti positiivinen vaikutus, kun ennustava biomarkkerit ovat saatavilla [47], [50 ], [51]. Rintasyövän, American Society of Clinical Oncology (ASCO) neuvoi vuonna 2007 jo, että hormonin reseptoristatus, testaus olisi katsottava toistua etäpesäkkeitä jos tulokset olivat vaikuttaa potilaan hoitoon [52].

Johtopäätös

Nämä tulokset, mukaan lukien prekliiniset tiedot ja ensimmäistä kertaa tieto kliinisistä näytteistä, tukevat tätä stathmin voi olla ennakoivaa biomarkkeri vaste paklitakselihoidolla endometriumin syövän. Kuitenkin vahvistava tutkimuksia, mieluiten satunnaistettuja kliinisiä kokeita tarvitaan. Biomarkkerin eripuraisuus kasvaimen etenemistä on linjassa muiden tutkimusten kasvain biomarkkereiden heterogeenisyys ja tukee tarvetta toistuvaan biopsia etäpesäkkeitä.

Kiitokset

Britt Edvardsen, Ellen Valen, Gerd Lillian Hallseth,