Krooninen sairaus

tiivistelmä

interleukiini-23 (IL-23) on tavallinen tulehdusta edistävä sytokiini, joka on rooli kasvaimen eteneminen indusoimalla tulehduksen kasvaimen mikroympäristössä. Kuitenkin rooli IL-23 kilpirauhassyöpä muuttoliikkeen ja invaasion jää epäselväksi. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että käsittely IL-23, aiheuttaman muuttoliikkeen ja invaasion ihmisen kilpirauhasen syöpäsoluja. Lisätiedot osoittavat, että

SOCS4

säätelee negatiivisesti IL-23-välitteisen muuttoliikettä ja invaasiota. Tutkimiseen liittyviä mekanismeja IL-23 välitteisen muuttoliike ja invaasio, havaitsimme, että miR-25 edistää muuttoliikkeen ja invaasion kilpirauhasen syöpäsoluja suoraan sitoutumalla 3′-UTR

SOCS4

joka johtaa esto

SOCS4

. Lisäksi olemme myös osoittaneet, että IL-23 lisää miR-25 ekspressiotasot, ja yli-ilmentynyt miR-25 on mukana IL-23-liittyvän

SOCS4

esto ja solujen vaeltamiseen ja invaasiota. Yhdessä meidän tiedot viittaavat siihen, että IL-23 indusoi muuttoliikettä ja hyökkäyksen kilpirauhasen syöpäsoluja välittämällä MIR-25 /

SOCS4

signalointireitin.

Citation: Mei Z, Chen S, Chen C Xiao B, Li F, Wang Y, et ai. (2015) interleukiini-23 Helpottaa kilpirauhassyöpä Cell Migration ja Invasion estämällä

SOCS4

Expression kautta MicroRNA-25. PLoS ONE 10 (10): e0139456. doi: 10,1371 /journal.pone.0139456

Editor: Zhiqian Zhang, Peking University Cancer Hospital Institute, Kiina

vastaanotettu: 19 kesäkuu 2015; Hyväksytty: 12 syyskuu 2015; Julkaistu: 05 lokakuu 2015

Copyright: © 2015 Mei et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat avustuksia National Natural Science Foundation of China (No.81372880); Independent tutkimushanke Wuhan University (nro 2042014kf0184; NO. 2042014kf0119); tohtoriohjelmasta of Higher Education Research Fund (nro 20130141120093; nro 20110141110062); Natural Science Foundation of Hubein maakunnassa (No.2012FFA045). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

kilpirauhassyöpä on yhteinen tyyppi hormonitoimintaa maligniteetin, joka on kasvanut nopeasti maailmanlaajuisen ilmaantuvuuden aikana viime vuosikymmeninä [1]. Huolimatta parannuksista hoitostrategioita, jotkut potilaat ovat vaikeita hoitaa ja kehittää invaasio ja etäpesäkkeiden [2]. Näin ollen on tärkeää tunnistaa molekyylitasolla mekanismeista kilpirauhassyöpä ja metastaasit. Viimeaikaiset selvitykset osoittivat, että tulehdus on vahva promoottori syövän synnyn ja maligniteetin monissa syövän muotoja [3,4]. Tulehdus näyttää olevan tärkeä välittäjä kehittämiseksi syövän ja tarjoaa syöpäsolujen vieraanvaraiset mikroympäristön [5]. Interleukiini-23 (IL-23), heterodimeerinen tyypin 1 sytokiini, joka koostuu IL-12 /p40-alayksikköä ja erityinen p19-alayksikön, kuuluu interleukiini-6-superperheen [6]. Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että IL-23 liittyy syövän synnyn sekä tulehdusta. Korkea IL-23 löydettiin ihmisen maksasyövän, kolorektaalikarsinooma, levyepiteelikarsinooma syöpä, ja ruokatorven karsinooma [7-10]. Todisteet viittaavat siihen, että IL-23 yliekspressio voi aiheuttaa etäpesäke peräsuolen, keuhko-, ja suusyövästä [7-10].

suppressorit sytokiinisignaloinnin (SOCS) ovat tärkeitä negatiivista palautetta säätelijöitä sytokiinisignaloinnin [11]. SOCS proteiinit ovat perhe 8 proteiinien (SOCS1-7 ja sytokiinin-indusoituva SH2 sisältävä proteiini tai CIS). Jokainen SOCS proteiini sisältää keskeinen SH2 verkkotunnuksen, joka on vuorovaikutuksessa fosforyloidun tyrosiineilla [12]. SOCS proteiineja on äskettäin tutkittu niiden rooli kehityksen eri syöpien [13-18]. Kuitenkin tiedetään vähän roolista SOCS4 vuonna syöpä, ja niiden mahdollinen vaikutus kasvaimen kasvuun ja maligniteetti.

MikroRNA (miRNA) ovat lajia pieniä Koodaamattomat yksisäikeisen RNA: t, joilla on tärkeä rooli kehityksessä eri syöpien sitomalla 3′-alueen (3′-UTR) kohdistettujen geenien [19]. Poikkeava miRNA ilme on myös usein raportoitu lukuisissa kasvaimissa [20]. Viime vuosina useat todisteet viittaavat rooli miRNA kasvainsolun biologisissa prosesseissa, kuten solujen lisääntymisen, erilaistumisen, muuttoliike, ja hyökkäys [21]. MicroRNA-25 kuuluu miR-106b-25 klusteri, joka sisältää miR-106b, miR-93, ja miR-25. MicroRNA-25 on raportoitu poikkeuksellisesti yli-ilmentynyt useissa kasvaimissa, kuten munasarjasyöpä, keuhkosyöpä, mahasyöpä, paksusuolen ja peräsuolen syöpä [22-26]. Vaikka ilmaus miR-25 eri kasvaimissa on kuvattu, selkeä rooli miR-25 kilpirauhaskarsinoomaa jää epäselväksi.

Tässä tutkimuksessa osoitamme, että IL-23 edistää kilpirauhassyöpä solumigraatioon ja invaasiota . Me osoittavat lisäksi, että IL-23 säätelee muuttoliike ja invaasion kilpirauhasen syöpäsoluja kautta miR-25 /SOCS4 signalointireitin.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Kaikki osallistujat antoivat kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen osallistua tutkimukseen. Tutkimus suoritettiin mukaisesti periaatteiden Helsingin julistuksen ja hyväksynyt Institutional Review Board n Remin sairaalan Wuhan University, mukaisesti suuntaviivat koehenkilöiden suojelemiseen.

Näytteet ja tapaukset

Kilpirauhasen kudokset kerättiin klo Remin sairaalan Wuhan University helmikuusta 2010 helmikuu 2014 kudosnäytteitä leikattiin kahteen osaan, yksi tarkasteli kaksi asiantuntija patologit tarkistaa histologisen diagnoosin, toinen välittömästi pikajäädytettiin nestemäisessä typessä ja säilytettiin nestemäisessä typessä kunnes RNA. Kukaan potilaista ei ollut saanut mitään ennen leikkausta hoitoa. Kasvaimet lavastettu mukaan American sekakomitean Cancer (AJCC) patologisen kasvaimeen solmu-etäpesäke (TNM) classiication. Potilaiden ominaisuudet on kuvattu S1 ja S2 taulukoissa.

Soluviljely

Ihmisen kilpirauhassyöpä solulinjat K1 (papillaarinen) ja WRO (follikulaarinen) viljeltiin Dulbeccon modifioidussa Eaglen elatusaineessa (DMEM) (Gibco BRL, Grand Island, NY) täydennettynä 10% naudan sikiön seerumia (Gibco BRL), 100 yksikköä /ml penisilliiniä, ja 100 ug /ml streptomysiinisulfaattia. Soluja pidettiin 37 ° C: ssa, 5% CO

2-inkubaattorissa. Kaikki nämä solulinjat alkuperäinen ostettiin solusta pankin Kiinan tiedeakatemian Shanghai.

reagenssit

Rekombinantti ihmisen IL-23 (rhIL-23) ostettiin R 0,05 pidettiin tilastollisesti merkittävänä. Tiedot esitetään keskiarvona ± S.D. tai keskiarvo ± SEM

Tulokset

IL-23 edistää muuttoliikkeen ja invaasion kilpirauhasen syöpäsoluja

Halusimme testata vaikutusta IL-23 solun leviämisen kilpirauhasen syöpäsoluja sen toteamiseksi, jos solujen lisääntymistä häiritsee migraation ja invaasion kapasiteetti soluja. MTT-määritystä osoitti, että leviämisen K1-soluissa ja WRO solut juurikaan vaikuta mitkään annoksella IL-23 (S1 Kuva). Me tutkimme seuraavaksi IL-23 voi vaikuttaa muuttoliikkeen ja hyökkäys kilpirauhasen syöpäsoluja. Parannettu liikkeen ja invaasion K1-soluissa havaittiin, kun läsnä oli 50 ja 100 ng /ml IL-23 (kuvio 1A ja 1 B). Samoin lisääntynyt maahanmuutto ja invaasio havaittiin myös jo 48 tuntia (h) minkä 50 ng /ml IL-23-proteiinin (kuvio 1 C ja 1 D). Olemme myös osoittaneet, että IL-23 lisäsi muuttoa ja invaasion WRO solujen annoksesta ja ajasta riippuvaisella tavalla (S2 Kuva). Lisäksi haavojen määritys osoittavat myös, että IL-23 lisäsi muuttoa K1-soluissa (kuvio 1 E ja 1 F). Yhdessä nämä tulokset vahvistavat annoksesta ja ajasta riippuvia promigratory ja proinvasive vaikutus IL-23.

(A) K1-soluja käsiteltiin rhIL-23 48 h ilmoitettuina pitoisuuksina, minkä jälkeen viljelemällä transwell-järjestelmän 24 tuntia. (B) Cell invaasiomääritys kokeet suoritettiin K1-soluissa, joita oli käsitelty kuten kohdassa (A). (C) K1-soluja käsiteltiin pitoisuudella 50 ng /ml rhlL-23 varten ilmoitettuina ajankohtina, ja sen jälkeen viljelemällä transwell järjestelmän 24 tuntia. (D) Kokeet suoritettiin, kuten (C) solun invaasiomääritys. (E) K1-soluja käsiteltiin rhIL-23 48 h ilmoitettuina pitoisuuksina, minkä jälkeen käyttöön haavan. Solumigraation haavaan tarkkailtiin 24 tuntia. (F) K1-soluja käsiteltiin pitoisuudella 50 ng /ml rhlL-23 varten ilmoitettuina ajankohtina, sen jälkeen ottamalla käyttöön haavan. Solumigraation haavaan tarkkailtiin 24 tuntia. Haavan mitattiin laskemalla pikseli tiheydet haava-alueen ja ilmaistiin prosenttiosuutena haavan sulkeminen kolmena alueilla ± keskihajonnat siirtokuoppaan muuttoliike, invaasio ja haavan paranemista määritys, tiedot ilmaistaan ​​prosentteina valvonnan. Tiedot edustavat keskiarvoa ± SD, n = 3 (** P 0,01; * P 0,05).

IL-23 indusoi migraation ja invaasion kilpirauhasen syöpäsoluja kautta

SOCS4

tunnistamiseksi rooli IL-23 ilmentyminen SOCS4, K1-soluja stimuloitiin IL-23-proteiinin 24 tunnin ajan pitoisuuden 50 ng /ml. Supressorit of sytokiinisignaloinnin (

SOCS4

) mRNA ja proteiini havaittiin reaaliaikaisella PCR ja western blot, vastaavasti. Tulokset osoittivat, että IL-23 vaimentaa

SOCS4

mRNA ja proteiinin ilmentyminen in K1-soluissa (kuvio 2A). Samanlaisia ​​tuloksia saatiin myös, että WRO-solulinjassa (kuvio 2B). Sen ratkaisemiseksi, onko SOCS4 osallistuu IL-23-välitteisen muuttoliike ja invaasion kilpirauhasen syöpäsoluja, rakensimme 4 ihmisen SOCS4-erityinen lyhyt hiusneula-RNA (shRNA). Reaaliaikainen PCR tulokset osoittivat, että # 2 shRNA plasmidit voivat merkittävästi ilmentymisen inhiboimiseksi SOCS4 K1-soluissa, kun taas muut shRNA plasmidit oli vähän vaikutusta ilmentymistä SOCS4 (kuvio 2C). SOCS4 proteiini tasoilla kehittyi samaan tapaan kuin määritettiin Western blot (kuvio 2D). Vuonna solujen vaeltamiseen kokeissa yliekspressio

SOCS4

inhiboi IL-23-muuttoliikkeelle K1-soluissa (kuvio 2E). Käänteisesti knockdovvn

SOCS4

ilmaisu parannettu IL-23 aiheuttama muuttoliike K1-soluissa (kuvio 2F). Astetta induktio korreloivat tehokkuudet

SOCS4

Knockdown kunkin shRNA plasmidi (kuvio 2F). Samanlaisia ​​tuloksia saatiin transwell invaasio kokeiden aikana (kuvio 2G ja 2H). Koska SOCS4 säätelee negatiivisesti muuttoliike, seuraavan kerran analysoitiin rooli SOCS4 solun proliferaation kilpirauhasen syöpäsoluja. Tulokset MTT-analyysi osoitti, että leviämisen K1 soluja juurikaan vaikuttanut ilmaus SOCS4. Lisäksi yli-ilmentyminen tai knockdovvn SOCS4 ja hoidon IL-23 ei voi vaikuttaa solujen lisääntymistä kilpirauhassyövän solujen (S3 kuvassa). Nämä tulokset viittaavat siihen, että aktivointi IL-23-säännelty maahanmuutto ja hyökkäys voi vaatia SOCS4.

(A) K1-soluja käsiteltiin 50 ng /ml rhIL-23 48 tuntia.

SOCS4

RNA-tasot määritettiin kvantitatiivisesti qRT-PCR: llä (vasen paneeli), ja proteiinin tasot SOCS4 havaittiin Western blot (oikea paneeli). (B) Kokeet WRO soluja suoritettiin kuten A (C, D) K1-solut transfektoitiin eri

SOCS4

shRNA (shRNA # 1, shRNA # 2, shRNA # 3 ja shRNA # 4) tai shCtrl kuten mock. 48 tunnin kuluttua,

SOCS4

mRNA-tasot mitattiin qRT-PCR: llä (C) ja Western blot (D). (E) K1-solut transfektoitiin osoitetun plasmidi, käsiteltiin sitten rhIL-23 (50 ng /ml) 48 h ja sen annettiin kulkeutua kohti seerumia, 24 tunnin ajan (ylempi paneeli). Proteiini tasot SOCS4 havaittiin Western blot (alempi paneeli). (F) Solut transfektoitiin osoitti shRNA-SOCS4 ja kokeet suoritettiin kuten (E). (G, H) Solu invaasiomääritys kokeet suoritettiin samanlaisissa olosuhteissa kuin on kuvattu (E) ja (F). Kun reaaliaikaisen RT-PCR-kokeita, ohjaus nimettiin 1. Kaikki kokeet toistettiin vähintään 3 kertaa samankaltaisilla tuloksilla. Pylväsdiagrammit edustavat keskiarvoa ± SD, n = 3 (** P 0,01; * P 0,05).

MicroRNA-25 downregulates

SOCS4

ilmentyminen suoraan kohdentamalla sen 3′-UTR

analysoimiseksi miRNA jotka voivat kohdistaa 3′-UTR

SOCS4

, käytimme 3 verkkotietokantoja, TargetScanHuman, miRDB, ja miRWalk2.0, etsimään mahdollisia ehdokkaita. Neljätoista yhteiseen potentiaaliin miRNA löydettiin 3 tietokantoihin. Vaikutuksen määrittämiseksi ennustetun miRNA ekspressioon

SOCS4

,

SOCS4

3′-UTR kloonattiin tulikärpäsen lusiferaasireportteriplasmidi. Lusiferaasiaktiivisuus määritykset osoittivat, että 6 miRNA inhiboi SOCS4 lusiferaasiaktiivisuus alle 50% verrattuna miR-Ctrl (S4A kuvio). Me tutkimme seuraavaksi jotka miRNA aktivoitiin IL-23 aiheuttaman muuttoliikkeen ja hyökkäystä. K1-soluja käsiteltiin IL-23-proteiinia 50 ng /ml 48 tuntia. Tulokset reaaliaikainen PCR osoitti, että joukossa miRNA joka voisi lieventää

SOCS4

lusiferaasiaktiivisuuden, ilmaus miR-25 oli merkittävästi indusoi (S4b kuvio).

Meidän data me arveltu, että miR-25 voi olla rooli IL-23 /SOCS4 signalointireitin. Sitten tutkittiin, miR-25 säätelee

SOCS4

ilmentymisen transkription jälkeisen kohdentamista sen 3′-UTR. Selvä mutaatio syntyi 3′-UTR

SOCS4

at ennustettu siemen-matching sivustoja testata vuorovaikutusta miR-25 ja

SOCS4

3′-UTR (kuvio 3A). Ohimenevä transfektio K1-solujen villityypin (WT)

SOCS4

3′-UTR, ja miR-25 matkivat, johtaa vähentynyt merkittävästi reportteriaktiivisuutta verrattiin MIR-ohjaus (kuvio 3B ). Tämä ilmiö katkesi, kun samat solulinjat transfektoitiin

SOCS4

3′-UTR mutantit (kuvio 3B). MIR-25-estäjä (miR-25-Inh) merkittävästi edistänyt lusiferaasin aktiivisuus WT

SOCS4

3′-UTR, ilman mitään vaikutusta Mut

SOCS4

3′-UTR K1 soluja (kuvio 3C). MicroRNA-25 yliekspressio K1-soluissa merkittävästi tukahdutti sekä mRNA ja proteiini tasoilla SOCS4 (kuvio 3D). Toisaalta miR-25-estäjä välittämää knockdown endogeenisen miR-25 nousi

SOCS4

mRNA ja proteiinin ilmentyminen in K1-soluissa (kuvio 3E). Sen määrittämiseksi, oliko miR-25-välitteisen downregulation

SOCS4

ilme on yhteinen piirre kilpirauhasen syöpäsoluja, samanlaiset kokeet suoritettiin WRO soluissa (kuvio 3F ja 3G). Yhdessä nämä tulokset viittaavat siihen, että SOCS4 on tavoite miR-25 K1-soluissa ja WRO soluja.

(A) sekvenssit miR-25 sitoutumiskohtien ihmisen

SOCS4

3 ’ UTR ja kaavamaisen reportterirakenteet. Tässä paneelissa, WT edustaa toimittaja konstrukteja, jotka sisältävät koko 3’UTR sekvenssit

SOCS4

.

SOCS4

-MUT edustaa reportteri konstrukteja, jotka sisältävät mutatoidut nukleotidit. (B, C) K1-solut ko-transfektoitiin joko WT tai MUT

SOCS4

3’UTR toimittaja plasmidit ja joko miR-25 matkivat (B) tai miR-25-estäjä (C). Lusiferaasiaktiivisuudet mitattiin 48 tunnin kuluttua käyttäen dual-lusiferaasianalyysissä kit ja normalisoidaan Renilla lusiferaasi. (D) K1-solut transfektoitiin miR-25 matkivat tai säätimet 48 tuntia.

SOCS4

mRNA (vasen paneeli) ja proteiini (oikea paneeli) havaittiin qRT-PCR ja western blot, vastaavasti. (E) transfektoitiin miR-25 tai kontrollia, ja kokeet suoritettiin kuten D. (F, G) WRO soluja käytettiin, ja kokeet suoritettiin kuten D ja E. Kaikki kokeet toistettiin vähintään 3 kertaa samanlaisia ​​tuloksia. Pylväsdiagrammit edustavat keskiarvoa ± SD, n = 3 (** P 0,01; * P 0,05).

MicroRNA-25 edistää liikkuvuutta kilpirauhasen syöpäsoluja kohdistamalla

SOCS4

Koska miR-25 voi estää

SOCS4

ilmentymisen sekvenssi- spesifistä sitoutumista sen 3′-UTR, me arveltu, että miR-25 voi vaikuttaa muuttoliike ja hyökkäys kilpirauhassyöpä kautta SOCS4. Sen hypoteesin testaamiseksi, K1-solut kotransfektoitiin

SOCS4

ilmentämisvektoriin (tai tyhjä vektori) ja miR-25 jäljittelee (tai miR-Ctrl). TranswellTM muuttoliike määritykset osoittavat, että miR-25 edistää kulkeutumista K1-soluissa ja migraatiota aiheuttama miR-25 korjaantuu

SOCS4

yliekspressio (kuvio 4A). Lisäksi havaitsimme, että knockdovvn

SOCS4

voi merkittävästi voimistaa miR-25 solumigraation (kuvio 4B). Samanlaisia ​​tuloksia saatiin hyökkäyksen määrityksissä ja haavan paranemista määritys (kuvio 4C-4F). Vaikutus miR-25 /SOCS4 signalointireitin siirtyvien kilpirauhasen syöpäsoluja arvioitiin edelleen käyttäen miR-25-estäjä. Kuten on esitetty kuviossa 4G, miR-25-estäjä estää merkittävästi migraation K1-soluissa. Lisäksi miR-25-estäjän ja

SOCS4

ekspressiovektorin synergistisesti estävät muuttoa K1-soluissa (kuvio 4G). Sitä vastoin korkeita muuttoliike oli läsnä K1-soluissa, kun

SOCS4

pudotettiin by shRNA-SOCS4 # 2 (Kuva 4H). Samanlaisia ​​tuloksia saatiin myös hyökkäyksen määrityksissä ja haavan paranemista määritys (kuvio 4I-4L). Nämä tulokset viittaavat siihen, että inhibitio on

SOCS4

ilmentyminen on vastuussa kyky miR-25 edistää solujen invaasion ja siirtoa.

(A, B) K1-solut kotransfektoitiin osoitettu miR-RNA matkivat ja plasmidi (A) tai shRNA (B) 48 tuntia, ja sen annettiin kulkeutua kohti seerumin 24 tuntia. (C, D) Cell invaasiomääritys kokeet suoritettiin samoissa olosuhteissa kuin A ja B (E, F) Haavan paranemista määritys kokeet suoritettiin samoissa olosuhteissa kuin A ja B (G, H) transfektoitiin jossa miR-25-estäjän tai ohjaus sekä kokeet suoritettiin kuten A ja B (I, J) Cell invaasiomääritys kokeet suoritettiin samoissa olosuhteissa kuin G ja H (K, L) Haavan paranemista määritys kokeet suoritettiin samoin edellytyksin kuin G ja H Pylväsdiagrammeja edustavat keskiarvoa ± SD, n = 3 (** P 0,01; * P 0,05).

IL-23 stimuloi asennuspalveli- 25 ilmentyminen kilpirauhasen syöpäsoluja

tunnistaa roolia IL-23 ilmentyminen miR-25, K1 soluja stimuloitiin ihmisen IL-23-proteiinin pitoisuus vaihtelee 48 tuntia. MicroRNA-25-tasot havaittiin reaaliaikaisella PCR: llä. Tulokset osoittavat, että miR-25 tasoa voimistuvan IL-23-proteiinin annoksesta riippuvalla tavalla (kuvio 5A). Johdonmukaisesti, K1-soluja käsiteltiin IL-23-proteiinin eri ajankohtina, jonka pitoisuus on 50 ng /ml. Tulokset reaaliaikainen PCR-analyysit osoittavat, että miR-25 nousevat, kun aika lisääntyy (kuvio 5B). Rooli IL-23 miR-25 ilmentyminen vahvistettiin toistamalla kokeet käyttäen WRO soluja (kuvio 5C ja 5D). Nämä tulokset viittaavat siihen, että IL-23 aktivoi miR-25 ilmentyminen.

MicroRNA-25 kvantitoitiin reaaliaikaisella PCR: llä, ja kokeet suoritettiin, kuten on kuvattu kuviossa 1. ekspressiotasot normalisoitiin U6 snRNA. Data edustaa keskiarvoa ± SD, n = 3 (** P 0,01; * P 0,05).

MicroRNA-25 on tärkeä rooli IL-23-välitteinen

SOCS4

esto ja solujen vaeltaminen ja invaasiota

määrittää roolin miR-25, downregulation IL-23-välitteisen

SOCS4

ilme, K1-solut transfektoitiin joko miR-25 jäljittelee tai miR-Ctrl ja käsitelty tai ilman IL-23-proteiinin 48 tuntia. Tulokset reaaliaikaista PCR: ää ja western blot-analyysit osoittavat, että transfektio miR-25 jäljittelee lisää IL-23-välitteinen inhibitio

SOCS4

mRNA ja proteiinin ilmentyminen (kuvio 6A). Sitä vastoin korkea

SOCS4

mRNA: ta ja proteiinia, on läsnä K1-soluissa, kun ilmentyminen miR-25 inhiboi miR-25-estäjä (kuvio 6B). Myös tutki miR-25 on mukana IL-23-välitteisen kilpirauhasen tasyöpäsolulinja liikkuvuuteen. Käyttämällä siirtokuoppaan muuttoliike ja invaasio määritykset, osoitimme että miR-25 yli-ilmentymisen stimuloi IL-23-aktivaatio muuttoliikkeen ja invaasion (kuvio 6C ja 6D), ja knockdovvn miR-25 ilmentyminen inhiboi IL-23-aktivaatio muuttoliikkeen ja invaasion (kuvio 6E ja 6F). Samanlaisia ​​tuloksia saatiin myös haavan paranemista määrityksessä (kuvio 6G ja 6H) .Taken yhdessä, nämä tiedot viittaavat siihen, että miR-25 on keskeinen osa mukana IL-23-välitteisen kilpirauhassyöpä solumigraatioon ja invaasion kautta estämällä

SOCS4

ilmaisu.

(A) K1-solut transfektoitiin osoitetun plasmidi, käsiteltiin sitten rhIL-23 (50 ng /ml) 48 tuntia. SOCS4 mRNA (vasen paneeli) ja proteiini (oikea paneeli) havaittiin qRT-PCR ja western blot, vastaavasti. (B) Soluja transfektoitiin miR-25 tai kontrollia, ja kokeet suoritettiin kuten A (C, D) K1-solut transfektoitiin miR-25 matkivat (C) tai inhibiittori (D) ja valvonta, sitten käsiteltiin jossa rhIL-23 (50 ng /ml) 48 h ja sen annettiin kulkeutua kohti seerumin 24 tuntia. (E, F) Cell invaasiomääritys kokeet suoritettiin samoissa olosuhteissa kuin C ja D. (G, H) Haavan paranemista määritys kokeet suoritettiin samoissa olosuhteissa kuin C ja D. Kaikki kokeet toistettiin vähintään 3 kertaa samankaltaisilla tuloksilla. Pylväsdiagrammit edustavat keskiarvoa ± SD, n = 3 (** P 0,01; * P 0,05).

ilmentyminen IL-23, miR-25 ja

SOCS4

kilpirauhassyövän hoitoon kudoksissa

vahvistaa roolia IL-23, miR-25 ja

SOCS4

kilpirauhassyövän hoitoon, ilmaus IL-23, miR-25 ja SOCS4 analysoitiin 35 paria kliinisen PTC, 26 paria kliinisen FTC, ja 22 normaali kilpirauhasen näytteitä. Kuten on esitetty S5a-S5c kuvio, ilmaus

SOCS4

oli pienempi ja ilmentymistason IL-23 ja miR-25 oli korkeampi PTC ja FTC yksilöitä kuin normaali kilpirauhanen näytteitä. Lisäksi korkeat IL-23 korreloivat korkea miR-25 (S5d kuvio). Mielenkiintoista, alhainen

SOCS4

ilmaisu korreloivat korkeat IL-23 ja miR-25 ilmentyminen PTC ja FTC yksilöt (S5E ja S5F kuvassa). Nämä havainnot viittaavat vahvasti siihen, että korjauksilla IL-23, miR-25 ja SOCS4 ilmaisun voisi olla mukana kilpirauhassyöpä etenemiseen.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa, määrittelimme uusi signalointireitin sekaantunut valvontaan kilpirauhassyövän solumigraation ja invaasiota. Ensin osoitimme, että IL-23 voimistunut miR-25 ilmentyminen sekä vaimentua

SOCS4

ilmentymistä kilpirauhassyöpä solujen vaeltamiseen ja invaasiota. Lisäksi olemme myös osoitti, että miR-25 edistää kilpirauhassyöpä solumigraation ja invaasiota kohdistamalla SOCS4. Lopuksi, meidän tiedot viittaavat siihen miR-25 on mukana IL-23-liittyvän

SOCS4

ilmaisun ja solujen vaeltamiseen ja invaasiota.

Kasvainsolulinja muuttoliikettä ja invaasio on hyvin monimutkainen prosessi, jossa syöpä solut leviävät primaarikasvaimen, hengissä verenkierrossa, ja kasvaa kaukaisissa paikoissa kehossa [28]. Jokainen prosessi määräytyy muuttoliike ja hyökkäys kyky kasvainsolujen ja paikallinen kasvain microenvironment jotka tarjoavat suotuisat olosuhteet syöpäsolujen hengissä ja etäispesäkkeitä [29]. Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että korkea ekspressio tasoja IL-23, joka voidaan havaita mikroympäristössä, voisi auttaa helpottamaan kasvainmetastaasin. Esimerkiksi, IL-23 edistää maksasyövän etäpesäke NF-KB-säädelty MMP-9 ilmaisun [9]. IL-23 ilmentyy voimakkaasti etäpesäkkeitä liittyvien astrosyytit, ja IL-23 indusoi etenemistä melanooman aivometastaasi [8]. IL-23: lla on keskeinen rooli kehitettäessä ruokatorven syöpään kautta epiteelin-mesenkymaalitransitioon [7]. IL-23 voi parantaa leviämisen ja invaasion kolorektaalikarsinooman solujen [10]. Kuitenkin rooli IL-23 kilpirauhassyöpä solumigraatioon ja invaasio on vielä tuntematon. Tietääksemme tämä on ensimmäinen tutkimus osoittaa suoria vaikutuksia IL-23 maahanmuutto- ja invaasion kilpirauhasen syöpäsoluja. Mielenkiintoista, tuore tutkimus osoitti, että IL-23 säätelee leviämisen keuhkosyövän soluihin [30]. Kuitenkin, toisin kuin keuhko- syöpäsoluja, emme löytäneet todisteita, joiden mukaan IL-23 indusoi leviämisen kilpirauhasen syöpäsoluja (S1 kuvio). Spekuloida, että voi olla joitakin luontaisia ​​eroja kilpirauhassyöpä ja keuhkosyöpä. Toisaalta, IL-23 edistää muuttoliikkeen ja invaasion kilpirauhasen syöpäsoluja.

Tällä hetkellä kaksi raporttia ovat hiljaista mahdollista roolia SOCS4 syövän. Yhdessä tutkimuksessa käytettiin kahden yhdistelmä erilaisia ​​analyysi osoittaa, että SOCS4 on uusi mahasyövän estävä geeni [31]. Toisessa tutkimuksessa verrattiin ilmentymisen eroja

SOCS1-7

rintasyövän kudosta ja tausta rintojen kudosten [32]. Korkea ilmaus

SOCS4

liittyy merkittävästi aiemman kasvaimen vaiheessa ja parempaan kliinistä tulosta ihmisen rintasyövän [32]. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että tasot SOCS4 vähenevät IL-23 aiheuttama muuttoliike ja invaasion kilpirauhassyöpä soluissa (kuvio 2). Käsittely IL-23 johti pienentyneeseen ekspressiotasot

SOCS4

kilpirauhassyövän hoitoon soluissa (kuvio 2). Kautta yli-ilmentymisen ja knockdown kokeita, osoitamme, että

SOCS4

säätelee negatiivisesti IL-23 aiheuttaman muuttoliikkeen ja invaasiota (kuvio 2). Viime aikoina useat tutkimukset ovat osoittaneet todisteita siitä, että SOCS perhe on vahva kasvaimen tukahduttaa rooli useita erilaisia ​​kiinteitä ja hematologiset kasvaimet [32,33].