Krooninen sairaus

tiivistelmä

biologiset roolit estrogeenireseptorin 1 (

ERS1

), estrogeenireseptorin 2 (

ERS2

), ja aromataasin (

CYP19A1

) geenien kehitystä ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) on epäselvä, koska on käyttö niiden ilme kuin ennustetekijä. Tutkimuksen tavoitteena oli tutkia ennustetekijöiden arvon estrogeenireseptorin aromataasi mRNA ilmaisun yhdessä aromataasin proteiinipitoisuus, vuonna resekoituun pienisoluista keuhkosyöpää. Kasvain ja ei-kasvain keuhkokudoksesta analysoitiin mRNA: n ilmentymisen

ERS1

,

ERS2

ja

CYP19A1

RT-PCR: llä. Aromataasi-pitoisuus mitattiin ELISA: lla. Kaikkiaan 96 potilasta otettiin mukaan.

ERS1

ekspressio oli merkittävästi suurempi kuin kasvainkudoksessa kuin tuumorinäytteissä. Kaksi geenien ilmentyminen luokat luotiin jokaiselle geenin (ja proteiini): korkea ja matala.

ERS1 korkea

luokka osoitti kasvanut (OS) verrattuna alhainen ilmaisun luokka. Aromataasi-proteiinin pitoisuus oli huomattavasti korkeampi kasvaimen näytteissä. Korkeampi

ERS1

ilmentymistä tuumorikudoksissa liittyi enää kokonaiselinaikaa. Analyysi geenien ilmentymistä yhdistelmien antaa näyttöä pidempään OS kun molemmat

ERS1

ja

ERS2

ovat erittäin ilmaistaan.

ESR1

, yksin tai yhdessä

ERS2

tai

CYP19A

1, on kaikkein määritettäessä ennustetekijä sisällä analysoitiin 3 geenejä. Näyttää siltä, ​​että

ERS1

voi olla rooli NSCLC ennusteeseen, yksin tai yhdessä muiden geenien, kuten

ERS2

tai

Cyp19a1

.

ERS2

yhdistettynä aromataasi keskittyminen voi olla samanlainen toiminto.

Citation: Aresti U, Carrera S, Iruarrizaga E, Fuente N Marrodan I de Lobera AR, et al. (2014) estrogeenireseptorin 1 Gene Expression ja sen yhdistäminen estrogeenireseptorin 2 tai Aromatase Expression ennustaa Survival in Non-pienisoluinen keuhkosyöpä. PLoS ONE 9 (10): e109659. doi: 10,1371 /journal.pone.0109659

Editor: Harriet Wikman, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, Saksa

vastaanotettu: 08 huhtikuu 2014; Hyväksytty: 02 syyskuu 2014; Julkaistu: 13 lokakuu 2014

Copyright: © 2014 Aresti et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että hyväksyttyjä syistä, jotkut pääsy rajoitukset koskevat tietojen taustalla havainnot. Julkinen laskeuma datajoukon rikkoisi eettisiä noudattamista, koska tiedot Setissä tunnistaa ihmisen tiedot. De-Tunnistetun sarja on saatavilla pyynnöstä ja pyynnöt voidaan lähettää López-Vivanco klo [email protected].

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat tukea (proyect BIO07 /CA /012 ) Baskimaan Broadcasting Corporation (EITB; www.eitb.com) Cancer Marathon. Rahoitus maksaa Open Access julkaiseminen maksuja tämän artikkelin tarjosi Instituto de Salud Carlos III Espanjan ministeriön talous ja kilpailukyky (avustus: RD06 /0020/0067, ISCIII). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

kun tilastot Yhdysvalloista esimerkkinä kehityksestä keuhkosyövän kehittyneissä maissa, on selvää, että ennalta ehkäisyssä ja hoidossa tämäntyyppistä syövän parannettava. Ulokkeet 2014 ovat 159260 kuolemista johtuu keuhkosyöpä (27,2% kaikista syöpäkuolemista) vaikka tämä syöpä aiheuttaa enemmän kuolemia kuin summa kolmen seuraavan yleisimmistä syövistä (paksusuoli-, rinta- ja eturauhassyövän) [1]. Edelleen kehitys keuhkosyövän viiden vuoden eloonjäämisluvut, arvioidaan olevan noin 12%, 13% ja 16% vuonna ajanjaksoina 1975-77, 1987-89 ja 2001-2007 vastaavasti [2], on selvästi epätyydyttävä.

Estrogeenit ovat mukana kehittämässä useiden syöpätyyppien: rinta-, kohdun limakalvon, munasarjojen, kilpirauhasen, ja keuhkojen [3] – [8]. Keuhkoissa, estrogeenit indusoida soluproliferaatiota aktivoitumisen kautta tiettyjen kasvutekijä geenejä, kuten epidermaalinen kasvutekijä ja insuliinin kaltainen kasvutekijä, välittäjäaineet mitogeneesin keuhkokasvaimet [9]. Ne aikaansaavat toiminnon kahden eri erityistä estrogeenin reseptorit, estrogeenireseptori-α (ERa) ja estrogeenireseptorin-β (ER), jäsenet tumareseptorisuperperheen transkriptiotekijöiden [10], ja kahdella eri reittejä, genomista ja ei- genomista, joilla on sama biologinen vaikutus: proliferaatiota, kasvua, apoptoosin, erilaistumista ja angiogeneesiä.

ERS1

ja

ERS2

geenit ilmentyvät useimmissa yleisempiä syövät, keuhko-, rinta-, ruoansulatus ja hormonitoimintaa, mutta niiden rooli voi vaihdella suuresti riippuen kasvaimen tyypistä [10] – [ ,,,0],16].

Tuotanto kaksi runsaimmin ja tärkeä estrogeenien (estradioli ja estroni) katalysoivat P450 19A1 (aromataasin), tuote

CYP19A1

geeni, joka toimii keuhkoissa kudoksiin. Lisäksi, on silmukka, koska estrogeenit aktivoituvat epidermaalinen kasvutekijä, joka johtaa lisääntymiseen aromataasi ilmentyminen ja aktiivisuus [17], joka puolestaan ​​parantaa estrogeenin tuotantoa. On selvää, nämä tosiasiat osoittavat, että aromataasin näyttelee merkittävä rooli syövän kehittymisessä, ja on oletettu, että sen kohonnut ilmentyminen osoittaa huonompi ennuste [18].

Tämä työ yrittää vahvistaa (tai hylkää) jos jokin näiden geenien ilmaisuja on hyödyllinen ennustetyövälineenä ja selkeyttää eri mieltä aiemmin tutkimukset perustuvat pääasiassa immunohistokemiallinen (IHC) menetelmiä [6], [12], [19], ja uudempiin, jotka ovat käyttäneet reaaliaikainen PCR-tekniikalla määrittämään geenin ilmaisun [20], [21]. Tässä mielessä eri ekspressiotasoja ryhmiä perustetaan ja liittyvät selviytymisen.

Materiaalit ja menetelmät

1.-Ethics Statement

Tutkimus hyväksyi eettinen komitea kliininen tutkimus Crucesin yliopistollisen sairaalan (CEIC /Hospital de Cruces) ja suoritettiin Helsingin julistuksen. Kirjallinen suostumus saatiin jokaisen potilaan jälkeen täydellinen selvitys tarkoituksesta ja luonteesta kaikkien menettelyistä.

2.-Potilaat

Niistä 110 otettuja potilaita, vain 96 potilasta täytti valintakriteerit. Olla mukana potilaita tulee diagnosoitu NSCLC ja jalostustoiminto resektio leikkausta; saavilla potilailla neoadjuvanttikemoterapian ja potilaita, joiden ensisijainen kasvain ei sijainnut keuhkoissa jätettiin pois. Heidän kliiniset ominaisuudet on kuvattu taulukossa 1. Kunkin osallistujan, kasvain ja ei-kasvain tuore kudosnäytteet valmistettiin anatomopathologist. Näytteet saatu makro leikkely ja ei-kasvainkudoksessa vastasi viereiseen normaaliin keuhkojen kudoksia.

3.-tekniikat

3,1-REAL TIME RT-PCR.

Kokonais-RNA kasvain ja ei-kasvainkudoksessa uutettiin RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen). Yksi askel reaaliaikaisen RT-PCR: t suoritettiin käyttäen Platinum kvantitatiivinen RT-PCR Thermoscript One-Step System ja 7900HT Fast Real-Time PCR System (molemmat Life Technologies). Estrogeenireseptoreihin ja aromataasin ilmentymisen määrityksissä sekä RPLPO (endogeeninen kontrolli) hankittiin Life Technologies:

ERS1

/Hs00174860_m1,

ERS2

/Hs00230957_m1,

CYP19A1

/Hs00903411_m1 ja RPLPO /NM_053275.3. Kukin määritys vahvistaa useita eri transkriptien. Yksityiskohtaiset tiedot transkriptin pituus liittyvän proteiinin pituus, koetin eksonin eksonin rajan, amplikonin monistuminen ja proteiinin toiminnot sisältyvät File S1.

Kokonais-RNA lisättiin saatiin pitoisuus 100 ug /ul: n lopullisessa tilavuudessa 10 ui reaktiossa. Vakio aika /lämpötila profiili käytettiin. Positiivinen kontrolli sisällytettiin jokaiselle levylle: RNA-näytteet uutetaan MCF-7-solut (HTB22), ostettu (marraskuu 2009) ATCC. HTB22 valittiin viittaus (kalibraattori) näyte vertaileva kvantisointi (jota Delta Cq menetelmä). Geenin ilmentyminen on raportoitu RQ-arvot on saatu vertailevasta määrällisesti, jossa RQ = Normalized Suhteellinen määrä = 2

– (ΔΔ Cq).

3,2-ELISA.

Entsyymi-immunologinen määritys sarjat ihmisen aromataasi (ARO) (USCN Life Science Inc.) käytettiin aromataasi proteiinin havaitsemiseen. Proteiini uutettiin kasvain ja ei-kasvainnäytteet, seuraa tätä kitin. Tätä menettelyä, kudokset oli saatavilla 85 potilaista. Proteiinipitoisuus mitattiin Polar Star Microplate Reader (BMG Labtech) käyttäen bikinkoniini- muodostuva proteiini menetelmällä. Tiedot analysoitiin käyttämällä

neljä parametrin logistista Fit

kehittämä MyAssays, Analysis Software Solutions.

4-Tilastollinen analyysi

Tilastoanalyysiin SPSS /V.17, Graphpad -Prism /v.3 ja MedCalc /12.7.5 ohjelmistopaketteja valittiin. Lyhyesti, nämä käytettiin laskettaessa kuvailevia tilastoja, ja suorittamiseksi: Kolmogorov-Smirnov testit normaalisuuden, ei-parametriset testit (Mann-Whitney, Kruskal Wallis) verrattaessa medians, korrelaatio, selviytyminen ja Coxin regressioanalyysi. Kaikki testit olivat kaksipuolisia ja merkitys taso oli 0,05. Hengissä analyysi, Kaplan-Meier konstruoitiin ja merkityksen arvioitiin käyttäen Log Rank (Mantel-Cox) testi. Arvioimaan sellaisten muuttujien eloonjäämiseen, Cox Regressioanalyysi suoritettiin. Ensimmäinen, pareittain vertailut tehtiin ja kaikki muuttujat, joiden merkitys on vähemmän kuin 0,2 jäivät toisesta yleisestä analyysi. Sitten ne poistetaan, yksi kerrallaan, jos merkitys ylittänyt 0,05. Analyysi toistettiin poistamisen jälkeen kunkin muuttujan. Yleinen (OS) laskettiin alkaen leikkaus /resektio sen viimeisimmän seurannan tai kuolema, kuukausiin.

Tulokset

1-

ERS1

ensimmäinen vertailua, välillä ei ollut kasvainta ja kasvainkudoksen

ERS1

tasoilla saanut p 0,0001, pidetään äärimmäisen merkittävä. Tilastot RQ vertailun tulokset on esitetty taulukossa 2. Kuten voidaan nähdä,

ERS1

geenin ilmentyminen oli merkitsevästi pienempi kasvain kuin ei-tuumorikudoksissa.

suhteen analyysi välillä selviytymisen ja

ERS1

geeniekspressiota, näytteet jaettiin kahteen ryhmään sen mukaan, mediaani ekspressiotasoja (Low varten pienempiä arvoja kuin mediaani, korkea suurempia arvoja mediaaniarvot Kaplan-Meierin eloonjäämiskäyrissä laskettiin molemmille paljastaen merkittäviä eroja kasvaimen näytteissä; Log Rank = 0,050, kuva 1 a. kasvain kudosten, mediaani elinaika oli 28,0 kuukautta alemmalla

ERS1

ilmaisun ryhmä, ja 34,0 kuukautta korkeampi

ERS1

ilmentymisen ryhmässä (taulukko 3), Mann-Whitneyn testi osoitti, että tämä on merkittävä ero, p = 0,042, osoittaa suhde suurempi

ERS1

geenin ilmentyminen kasvainkudoksessa ja pidempi potilaan eloonjäämisen .

potilaan näyte jaetaan matala ja korkea (alemman ja ylemmän ilmaisun kuin mediaani). Paneelit: a)

ERS1

ja

ERS2

, b)

CYP19A1

ja ARO, ja c)

ERS1 + ERS2

ja CYP19A1 + ARO.

Jos haluat vahvistaa tai sulkea pois, perusteella selviytymisen tulosten onko geeniekspressio muuttunut kasvain näytteissä, sama analyysi suoritettiin ei-kasvain näytteet samoilta potilaiden ja eivätkä erot selviytyminen havaittiin näiden alaryhmien; Log sijoitus = 0,524; p = 0,815.

ERS1

ilmaisun Tuumorinäytteissä oli ainoa muuttuja, sisällä kolme geeniä ja proteiinia, joka oli merkittävä, kun kehitetään Coxin regressiomallin: kokonaismäärä merkitsevyystaso oli 0,031 mallin, p = 0,027 varten

ERS1

kasvain mRNA-tasolla, jossa on Exp (B) 0,002. P-arvo ei ollut kasvainta kudosnäytteet ollut 0,529, ei merkitsevä, joten sitä ei sisällytetty malliin. Suhteena kasvain /ei-kasvain, joka läpäisi ensimmäinen kierros, p = 0,105, mutta sitten ei näytä olevan merkittävää. Vain histologia (mukaan lukien pelkästään adenokarsinomia ja squamous-cell karsinoomat) oli myös merkittävä kanssa ap = 0,007 ja Exp (B) 0,462.

2-

ERS2

ERS2

geenin ilmentyminen verrattiin kasvaimen /ei-kasvain kudosten ja tässä tapauksessa ei havaittu merkittäviä eroja (Mann-Whitney testi, p = 0,364). Se voidaan nähdä taulukosta 2, geeni-ilmentymisen tulokset olivat hyvin samanlaisia ​​kahden kudosta. Analysoidaan selviytyminen funktiona ERS2 geenin ilmentymisen tasolle kuin aiemmin (kuva 1a), ei havaittu merkittäviä eroja välillä Matala ja korkea ilmaisun alaryhmiä kasvaimen (p = 0,253) tai ei-kasvain (p = 0,078) näytteitä. Se oli merkittävä suuntaus kohti parempaa eloonjäämistä potilailla, joilla on alhaisempi ERS2 tasoilla niiden ei-kasvain kudosnäytteet, mikä viittaa mahdolliseen alempi ilme /pitempi selviytyminen -alueella.

pitäminen nämä tiedot mielessä, merkitys erojen OS lisäksi arvioitiin kanssa Mann-Whitney testi. Kuten voidaan nähdä taulukosta 3, kuvio Tuumorinäytteissä oli päinvastainen ei-kasvain näytteet: mediaani OS hinnat matalalla /kasvaimen ryhmä olivat huomattavasti alhaisemmat kuin korkean /kasvaimen ryhmä, vaikka nämä erot eivät olleet merkittäviä (p = 0,11). Sen sijaan mediaani oli selvästi enemmän matalan /ei-kasvain ryhmä kuin korkea /ei-kasvain ryhmä, 33,1 vs. 25,9 kuukautta vastaavasti ja tämä ero oli merkitsevä (p = 0,024).

yhdistäminen kasvain ja ei-kasvain ja matalan ja korkean luokat, neljään ryhmään on luotu. Erot OS näiden luokkien olivat merkitseviä (Kruskal Wallis p = 0,017; Log sijoitus = 0,021), jolla on pienin eloonjäämisaste kategoriassa matalan kasvain + korkea kuin kasvain, eli potilaat, joilla

ERS2 Twitter /alhainen ilmentyminen kasvainkudoksessa ja

ERS2 Twitter /voimakasta ilmentymistä ei-kasvainkudoksessa (mediaani = 16,6 kuukautta), ja korkein eloonjääntiprosentin korkean kasvain + alhainen kuin kasvain, eli ne, joilla on

ERS2 Twitter /korkea ilmentyminen kasvainkudoksessa ja

ERS2 Twitter /heikkoa ilmentymistä ei-kasvainkudoksessa (mediaani = 36,9 kuukautta).

Mikään

ERS2

liittyvien muuttujien oli sisältyvät Cox malli, koska niiden alkuperäistä Cox univariate testejä enintään 0,2 kynnys: p = 0,278, p = 0,990 ja p = 0,691 tuumorikudoksia, ei-kasvain kudosten ja suhde kasvain /ei kasvain vastaavasti.

3-

CYP19A1

/aromataasi

Kuten on esitetty taulukossa 2, aromataasin mitattiin sekä mRNA: ta ja proteiinia tasot (ng /ml). Ei ollut merkittäviä eroja kasvaimen ja ei-kasvain näytteissä mitattaessa mRNA, p = 0,32. Sen sijaan, vertaamalla proteiinin tasojen ero havaittiin olevan erittäin merkitsevä, p 0,001. Analysointi suhdetta yksittäisten mRNA ekspressiotasot ja proteiinipitoisuudet korrelaatio Testi suoritettiin, mutta mitään merkittäviä tuloksia saatiin (Spearman, p = 0,133).

eloonjääminen analyysi, jälleen, koko potilaan näyte jaettiin matalan ja korkean (alempi ja korkeampi kuin mediaani) ilmaus /pitoisuuden ryhmiä. Kaplan-Meier testeissä ei havaittu mitään merkittäviä eroja joko geenin ilmentymisen, kasvain näytteet p = 0,154 (kuva 1b), ei ollut kasvainta näytteiden log-rank p = 0,578, tai proteiinipitoisuus, kasvain näytteet p = 0,266 (kuva 1b) ja ei-kasvainnäytteestä log-rank p = 0,532.

Vaikka eloonjääminen analyysi ei ollut merkittäviä eroja, taulukko 3 osoittaa, että malli geenien ilmentyminen ja proteiinin pitoisuus oli melko samanlainen: Low ilmaus ryhmiä ollut yleensä pidempi eloonjäämisen, kun taas korkea ilmentyminen ryhmiä yleensä lyhyempi selviytymistä. Jakamalla koko näytettä alkuvaiheen NSCLC (I-II) ja myöhäisessä vaiheessa (III-IV) NSCLC, oli merkittävä ero eloonjäämisasteesta sisällä alkuvaiheen tapaukset välillä alhainen (mediaani = 31,4 kuukautta) ja korkea (mediaani = 25,0 kuukautta) aromataasin geeniekspressiota ryhmään: Log Rank = 0,07; Mann-Whitney p = 0,016. Ei kuitenkaan ole tällainen, kun ei ollut kasvainta kudosnäytteistä verrattiin, tai harkitsee aromataasin proteiinipitoisuus.

Kuten tapahtui

ERS2

yksikään

CYP19A1

tai aromataasin proteiinin liittyvä muuttujia sisällytettiin lopulliseen Coxin regressiomallin, vaikka yksi heistä välitetään alustava analyysi (p 0,200):

CYP19A1

tuumorikudoksista p = 0,966,

CYP19A1

kuin tuumorikudoksista p = 0,810,

CYP19A

1 kasvain /ei kasvaimen suhde p = 0,727, aromataasin tuumorikudokset p = 0.240, aromataasin ei tuumorikudoksista p = 0,692 ja aromataasin kasvain /ei-kasvain suhde p = 0,038.

4-Yhdistetty geeniekspression-eloonjääminen analyysi

Äskettäin on osoitettu [22], että yhdistelmät eri geenin ilmentymisen tulokset voidaan määritellä yksityiskohtaisesti yleisestä tilanteesta NSCLC. Kuten aiemmin tietyn suureen on jaettu matala ja korkea ryhmiä, ja sitten, jos kaksi muuttujaa yhdistetään neljä alaryhmää voidaan määritellä; for

ERS1

ja

ERS2

, alaryhmiin ovat Matala-

ERS1

+ Matala-

ERS2

, matala

ERS1

+ high

ERS2

, korkea-

ERS1

+ Matala-

ERS2

ja korkea

ERS1

+ korkea-

ERS2

. Verrattaessa näytteitä, katso taulukko 4, joilla on korkein ekspression kahden geenin olivat niitä, joilla korkein OS. Ero Matala-

ERS1

+ Matala-

ERS2

ja korkea

ERS1

+ High

ERS2

ryhmät oli merkittävä, Mann-Whitneyn testi p = 0,025, mutta Kaplan-Meier OS testiä ei ollut, p = 0,057 (kuva 1c). Mediaanit alaryhmien Matala-

ERS1

+ High

ERS2

ja High

ERS1

+ Low

ERS2

(26,63 ja 28,80 kuukausi vastaavasti) olivat lähellä niille varten Matala-

ERS1

+ Matala-

ERS2

ryhmä; vaikka vertailuja neljään luokkaan ei havaittu merkittäviä eroja, kuvio saatu näyttää osoittavan, etteivät korkeat ilmentymisen kahta geeniä liittyy parempaan säilymiseen.

sitten

CYP19A1

ilmaisun ja aromataasin proteiinipitoisuus pidettiin. Ei ollut merkittäviä eroja Low

CYP19A1

+ Low-aromataasin proteiinia ja korkea

-CYP19A1

+ korkea aromataasin proteiinia ryhmissä (taulukko 4). Tällöin suurempi ekspressio ja pitoisuudet yleensä liittyä lyhyempi selviytymisen, vaikkakaan ei merkitsevä, p = 0,088 (kuvio 1 c).

Lisäksi ilmaus estrogeenin reseptorin geenien yhdistettiin aromataasin geenin ilmentyminen ja proteiinin pitoisuudet, ja mediaani hinnat arvioitu (taulukko 5). Jälleen neljään ryhmään otettiin huomioon analyysissä. Vahvin yhdistys löydettiin

ERS1

yhdistettynä

CYP19A1

geeniekspressiota: korkeimmat OS hinnat havaittiin luokkien korkea

-ERS1

+ Low

-CYP19A1

ja korkea

-ERS1

+ korkea

CYP19A1

(molemmat sisältävän

ERS1-

korkea ilmaisun ryhmä), kun taas luokan Matala-

ERS1

-high-

CYP19A1

oli huomattavasti pienempi. Nämä erot olivat merkittäviä (Kaplan-Meier Log sijoitus = 0,0001, Kruskal-Wallisin p = 0,011).

määrällisesti, missä määrin eloonjääminen oli pienempi Low

-ERS1

+ korkea

-CYP19A1

luokka, muut kolme ryhmää yhdistettiin yhdeksi asettaa ja Cox regressio suoritettiin. Tulokset olivat erittäin merkitsevä: p = 0.000007; Exp (B) = 4,041. Tässä Matala-

ER

S1 + High

CYP19A

1 luokka, potilaan eloonjäämisen todennäköisyys oli neljä kertaa pienempi kuin muulle potilaista (yhdistettiin yhdeksi sarja). Toisaalta, ottaen huomioon aromataasin proteiinipitoisuus sijaan geenien ilmentyminen, erot olivat enää merkittävää.

ERS2 Twitter /

CYP19A1

neliluokkaiseen vertailua, ei havaittu merkittäviä eroja (katso taulukko 5). Pienimmät selviytyminen vastasi luokkaan Matala-

ERS2

+ Korkea

-CYP19A1

kaukana jäljellä oleviin luokkiin. Itse asiassa, toistamalla Kaplan-Meierin testi Low

-ERS2

+ Korkea

-CYP19A1

ja muiden luokkien erikseen, kolme pareittain vertailuissa kantoi merkittäviä eroja (Low

-ERS2

+ Low

-CYP19A

vs. Low

-ERS2

+ korkea

-CYP19A1

p = 0,031; korkea

-ERS2

+ Low

-CYP19A1

vs. Low

-ERS2

+ korkea

-CYP19A1

p = 0,045, ja korkea

-ERS2

+ korkea

-CYP19A1

vs. Low

-ERS2

+ korkea

-CYP19A1

p = 0,035). Kuten oli asianlaita

ERS1

vertailu luokkien Low

-ERS2

+ Low

-CYP19A1

, korkea

-ERS2

+ Low

-CYP19A1

ja korkea

-ERS2

+ korkea

-CYP19A1

koottu vain yhdet, jossa luokan Low

-ERS2

+ korkea

-CYP19A1

käyttäen Coxin regressiota määrällisesti selviytymisen eroja, antoi erittäin merkittävä tulos: p = 0,009, Exp (B) = 2,307.

Kun otetaan huomioon proteiinipitoisuus sijasta

CYP19A1

geeniekspression , luokka, jolla on pienin selviytymisen oli jälleen Low

-ERS2

+ High-aromataasi, mutta hinnat olivat huomattavasti korkeammat High

-ERS2

+ Low-aromataasin ja varsinkin pienemmät luokat Low

-ERS2

+ Low-aromataasin ja korkea

-ERS2

+ High-aromataasi. Erot neljään ryhmään eivät olleet merkittäviä kanssa Kaplan-Meierin testillä (p = 0,093), mutta ne olivat Kruskal-Wallisin testiä (p = 0,049).

ERS1

+ Aromataasi ja

ERS2

+ Aromataasi-yhdistelmä jakaa yksi mielenkiintoinen piirre: High

ERS1 /2

+ Low-Aromatase ovat alaluokkien korkeammat eloonjäämisen molemmissa tapauksissa. COX regressio High

ERS1

+ Matalan Aromatase kolmea muuta

ERS1

+ Aromatase yhdistelmiä ei ollut merkitsevä p = 0,114, Exp (B) = 1,89. High

ERS2

+ Matalan Aromatase saadaan sama tulos p = 0,061 Exp (B) = 2,12.

Keskustelu

Vaikka reaaliaikainen RT-PCR on käytetty aiemmin määrittämään estrogeenireseptoreihin ilmentyminen keuhkoissa kasvain näytteissä, nämä tutkimukset ovat rajoittuneet johtuen pienestä näytteen koosta käytetty [23] tai koska he olivat rajoitettu soluviljelmiin [9], [24]. Edelleen, IHC on menetelmä yleisimmin käytetään havaitsemaan ERa ja ER-proteiinien ja muunnelmia niiden pitoisuus. Tutkimus aromataasi on seurannut samaa kaavaa [11], [18], [25].

Toistaiseksi on ollut huomattavia eroja IHC raportoidut tulokset (jopa käyttämällä samaa vasta-ainetta, tekniikka ja kudostyypin) : havaitseminen hinnat vaihtelevat 0-80% varten ERa, 30 100%: iin ER ja 60 100%: iin aromataasi. Gomez-Fernandez et al. [26], Raso et ai. [27] ja Miki et al. [28] keskusteltiin ongelmasta, perustamisesta Erojen: erilaiset vasta-aineet, jotka sitoutuvat eri epitooppeja. Brueckl et ai. [21] ja atmaca et ai. [20], julkaisivat

ERS1

ekspressiotulokset perustuvat RT-PCR-menetelmällä ja ihmisen näytettä (sisältäen suuremman kokoelma potilasta), lisäämällä uusi ristiriita lähde, moninaisuus silmukoinnin varianttien ESR1 mRNA: iden.

ERS1

geeni ilmaistu 100% kasvaimen ja ei-kasvain näytteitä. Sisällä kasvain näytteissä oli merkittävä malli selviytymisen: ne, joilla on korkeampi

ERS1

geenin ilmentyminen oli pidempi eloonjäämisen ja tämä on ristiriidassa aiempien tutkimusten. Esimerkiksi Fasco et ai. [23] ei havaittu yhteyttä, ehkä johtuen pieniä kohortin potilaista, kun taas Olivo-Marston et al. [29] ilmoitetaan käänteinen korrelaatio ER-α positiivinen ilme ja selviytymistä seeruminäytteistä ja toinen kudos ikäluokat tutkittu. Erilaiset tulokset voidaan selittää osittain jonka lähestymistapa analyysi: he ottivat ensimmäistä tertile negatiivisena ilmaisun ja kaksi muuta kuin positiivista. Aiemmat tutkimukset ovat pyrkineet käyttämään IHC menetelmiä ja tulokset ovat olleet hyvin ristiriitaisia, aina ei ole proteiineista havaittu läsnäolo ER-α yhteydessä heikompaan selviytymisen, yksin tai yhdessä epidermaalisen kasvutekijän reseptoria [6], [12] , [19], [22], [30], [31]. Muita näiden erojen syyt, paitsi edellä mainittu vasta-ongelma ja vaihtoehtoisen silmukoinnin, ovat vaikutukset translaation jälkeisen asetus havaitsemiseen [9], [26], [28], [32].

ERS1

ekspressiotulokset liittyy selviytymisen ovat yhtä mieltä Brueckl et al. [21] ja atmaca et ai. [20]. Oikeastaan ​​ne vertaili lähestymistapa samanlainen kuin mitä sitä on käytetty tässä, Delta Cq menetelmää käyttäen mediaani jakaa potilaille matalan ja korkean ilmaisun alaryhmiä.

Mitä

ERS2

geeniekspression potilaat, joilla on korkea ja matala

ERS

2 ilmentymistä kasvainsoluissa ja ei-kasvainkudoksessa vastaavasti yleensä korkeampia selviytymismahdollisuuksia; ja ne vastakkaisen ilmaisun profiilin (Low

ERS2

kasvaimen /korkea

ERS2

ei-kasvainkudoksessa) on köyhimpien ennustetta. Jotkut kirjoittajat ei löytänyt mitään suhdetta ER-β-proteiinin ilmentymisen ja selviytymisen [22], [23], [33] kun taas toiset, kanssa tuloksemme, havaittiin, että läsnäolo ER-β-proteiini liittyy parempaan ennusteeseen. Kun myös Coxin regressio monimuuttujatestausta malli

ERS2

ilmaisun kasvain, ei ollut kasvainta ja sen suhde ei tuottanut merkittäviä tuloksia. Koskee

CYP19A1

ilme, alkuvaiheessa potilaat ilmaisu ryhmät (Matala /Korkea) selviytyminen tulokset ovat yhdenmukaiset niiden kanssa Mah et al. [18], vaikka niiden tulokset perustuivat IHC menetelmiä proteiinin havaitsemiseksi Kuten

ERS2

yksikään

CYP19A1

tai aromataasin muuttujia sisältyivät Cox monimuuttujatestausta mocel.

pitäen mielessä geenin /proteiinin ilmentymisen yhdistelmä, High

ERS1 Twitter /High

ERS2

selvästi ennustaa nopeampi käyttöjärjestelmä ja voitaisiin käyttää ennustetekijä. Aiemmat raportit että käytetään tätä lähestymistapaa perustuivat IHC menetelmiin ja ne on saatu merkittäviä vertailuja yhdistämällä kuvaavat muuttujat läsnä ER-β ja aromataasi proteiinit [22], [34], [35].

Tehokkain geeni yhdistelmä havaittiin olevan matala

ERS1

+ High

CYP19A1

ilmaisuja ja tämä liittyi lyhyempi selviytymistä. Tutkittuaan neljä osajoukot, joissa

ERS1 /CYP19A1

, näyttää siltä, ​​että matala

ERS1

on ratkaiseva selviytymisen kuin High

CYP19A1

geeniekspressiota, koska selviytyminen haitta ei löydy, kun korkea

CYP19A1

geenin ilmentyminen yhdistyy korkea

ERS1

ilme, mutta OS korko matala-

ERS1

+ /low

CYP19A1

ilmaus viittaa siihen, että se on tarkka yhdistelmä, joka johtaa lyhyempi OS. Ero kuvion välillä ilmaus

CYP19A1

ja läsnäolo vastaavan proteiinin (taulukko 5) voidaan päätellä, että jotain kompensoi kasvu OS kategoriassa Matala-

ERS1

+ korkea

-CYP19A1

, ja lasku high

ERS1 Twitter /high

CYP19A1 Twitter /korkea. Tämä voi olla liitos, translaation jälkeinen muutos tai toisella vielä tuntemattoman biologinen mekanismi, vaikka se voisi myös johtua suhteellisen pieni otoskoko.

saadakseen vastaavan ennustaja OS perustuu

ERS2

yhdistelmä Matala-

ERS2

+ High

CYP19A1

täytyi asettaa vastaan ​​kolmea muuta mahdollista yhdistelmää (taulukko 5) koota yhteen joukon. Riskisuhde peräisin Coxin regressio potilaille, joilla Matala-

ERS2

+ High

CYP19A1

ilmaisu verrattuna muihin kolmeen ryhmään on 2,307, kun taas sama testi Matala-

ERS1

+ High

CYP19A1

ilmaisu tuotti riskisuhde 4,041, korostaa suhteellinen voimakkuus

ERS1

tasoilla ennustajana. Toisaalta, jos kyseessä on

ERS2 Twitter /Aromataasi proteiinia, merkittävät erot selviytyminen oli huomionarvoista, kuvio, joka ei nähty

ERS1

. Kuten

ERS1 Twitter /CYP19A1 yhdistelmiä, voidaan päätellä, että low

ERS2

on tärkeämpää kuin High

CYP19A1

geeniekspression harkittaessa ero selviytymisen välillä neljä osajoukot. Lisäksi mahdollinen olemassaolo jonkinlainen sääntelyä on pidettävä johtuen vaihteluista hinnat luokkien Matala-

ERS2

+ Matala-

CYP19A1

, High

ERS2

+ Matala-

CYP19A1

ja High

ERS2

+ High

CYP19A1

ja erot käyttäytymistä

ERS1

ja

ERS2

profiilit yhdistettynä ilme tai tuote

CYP19A1

geeni.

Yhteenvetona

ERS1

, yksin tai yhdessä

ERS2

tai

CYP19A1

, on kaikkein määritettäessä ennustetekijä sisällä analysoitiin 3 geenit ottaen huomioon sen sääntelyn kasvainkudoksissa, sen suhdetta selviytymisen, ja että riskisuhde kun se yhdistetään muihin muuttujiin on korkeampi kuin

ERS2

. Alkuperä vapauttamisen, joka näyttää aiheuttaa ali

ERS1

RNA on vielä selvittämättä. Kun kyseessä on

ERS2

on aivan erilainen, koska rakenteessa elossaololuku muuttuu huomattavasti, kun otetaan huomioon ilmaisun ei ollut kasvainta tai kasvain kudosta. Jälleen uskomme, että on jonkin verran vielä tuntematon tekijä häiritsevän prosessia. Lisätutkimuksia tarvitaan tunnistamaan nämä tekijät ja taso, jolla ne toimivat.

tukeminen Information

Tiedosto S1.

Yksityiskohtaiset tiedot ERS1,

ERS2

ja CYP19A1 geenien transkriptio pituus, liittyvän proteiinin pituus, koetin eksoni-eksonin rajan, amplikonin vahvistusta ja proteiinin toiminnallisuus. Taulukko S1a.

CYP19A1

geenitranskriptien ja proteiinia tietoja, muokattu Life Technologies verkkosivuilla, määritystä ID Hs00903411_m1. Taulukko S1B.

CYP19A1

geenitranskriptien ja proteiinia tietoja, muokattu ENSEMB, määritystä ID Hs00903411_m1. Taulukko S2a.

ERS1

geenitranskriptien ja proteiinia tietoja, muokattu Life Technologies verkkosivuilla, määritystä ID Hs00174860_m1. Taulukko S2b.

ERS1

geenitranskriptien ja proteiinia tietoja, muokattu ENSEMB, määritystä ID Hs00174860_m1. Taulukko S3a.

ERS2

geenitranskriptien ja proteiinia tietoja, muokattu Life Technologies verkkosivuilla, määritystä ID Hs00230957_m1. Taulukko S3b.

ERS2

geenitranskriptien ja proteiinia tietoja, muokattu ENSEMB, määritystä ID Hs00230957_m1.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0109659.s001

(DOC) B