Krooninen sairaus

tiivistelmä

Johdanto

ROBO1 on kalvo proteiini, joka edistää kasvaimen etäpesäke ja angiogeneesiä. Raportoimme aikaisemmin, että

90Y-leimattu anti-ROBO1 monoklonaalinen vasta-aine (

90Y-anti-ROBO1 IgG) osoitti antituumorivaikutus vastaan ​​ROBO1-positiivisia kasvaimia. Tässä tutkimuksessa, teimme biojakaantumi- tutkimus ja radioimmunoterapiassa (RIT) vastaan ​​ROBO1-positiivisia pienisoluinen keuhkosyöpä (SCLC) malleissa.

Methods

biologisen jakautumisen tutkimuksessa

olevaan 111In leimattu anti-ROBO1 monoklonaalinen vasta-aine (

111In-anti-ROBO1 IgG) injektoitiin ROBO1-positiivisia SCLC ksenografti hiirille häntälaskimoon. Arvioida antituumorivaikutukset, joka on RIT tutkimus tehtiin, ja SCLC ksenografti hiiriä hoidettiin

90Y-anti-ROBO1 IgG. Kasvaimen tilavuus ja kehon paino oli ajoittain mitattiin koko kokeiluja. Kasvaimet ja elimet hiirten kerättiin sitten, ja patologinen analyysi suoritettiin.

Tulokset

seurauksena biologisen jakautumisen tutkimuksessa havaitsimme kasvaimen oton

111In-anti -ROBO1 IgG. Maksa, munuaiset, perna, ja keuhkojen osoitti vertailukelpoisella kerääntymistä

111In-leimatun anti-ROBO1. Vuonna RIT tutkimuksessa

90Y-anti-ROBO1 IgG vähensi kasvaimen tilavuus verrattuna lähtötilanteeseen. Patologiset analyysit kasvainten paljasti hyytymisen kuolion ja kohtalokas rappeutumista kasvainsolujen, merkittävä väheneminen määrän Ki-67-positiivisia soluja, ja määrä kasvaa apoptoottisten solujen. Ohimenevä väheneminen hematopoieettisten solujen havaittiin pernassa, rintalastan ja reisiluu.

Johtopäätökset

Nämä tulokset viittaavat siihen, että RIT kanssa

90Y-anti-ROBO1 IgG on lupaava hoito ROBO1-positiivisia SCLC.

Citation: Fujiwara K, Koyama K, Suga K, Ikemura M, Saito Y, Hino A, et al. (2015)

90Y-leimattu anti-ROBO1 monoklonaalinen vasta-aine Näytteillä antituumorivaikutuksia pienisoluinen keuhkosyöpä ksenoqraftit. PLoS ONE 10 (5): e0125468. doi: 10,1371 /journal.pone.0125468

Academic Editor: Salvatore V. Pizzo, Duke University Medical Center, Yhdysvallat |

vastaanotettu: 06 lokakuu 2014; Hyväksytty: 24 maaliskuu 2015; Julkaistu: 27 toukokuu 2015

Copyright: © 2015 Fujiwara et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot kuuluvat paperin ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat avustusta Japanin Society for Promotion of Science (JSPS) kautta ”rahoitusohjelma maailman johtava Innovatiivinen R Kuitenkin yleinen ennuste SCLC potilaista on huono. 2 vuoden eloonjäämisaste potilailla, joilla on rajoitettu vaiheessa sairaus on 20-40%, kun taas 2 vuoden pysyvyys potilailla, joilla on edennyt sairaus on vain 5%, koska edennyt sairaus tyypillisesti kemoterapiaa yksinään [2]. Siksi kehitettäessä toimivia SCLC hoitoja sekä rajoitettu vaiheessa tauti ja laaja-vaiheen tauti (ensisijainen vaurioista ja etäpesäke) vaaditaan.

radioimmunoterapiassa (RIT) on eräänlainen sädehoidon käyttäen radioleimattua kasvain-spesifisiä monoklonaalisia vasta-aine [4-6]. Vaikka RIT hoidot Zevalin ja Bexxar on onnistuneesti käytetty hoitoon uusiutunut tai vaikeahoitoinen non-Hodgkinin lymfoomat, menestys RIT hoitona kiinteitä kasvaimia on ollut vähäistä. Tämä johtuu sekä radioresistance kiinteiden kasvainten ja kyvyttömyys toimittaa riittävä annos tilaa vieviä kasvaimia aiheuttamatta luuytimen myrkyllisyys [4, 7]. Äskettäin, Yoshida et al. raportoitu että RIT osoittaa merkittävää terapeuttista tehoa SCLC ksenografteissa [8]. Kliininen tutkimus anti-CEA radioimmunoterapiassa in SCLC on aloitettu [3]. SCLC on korkea radioherkkyyttä, vaikka se tulee todennäköisesti metastaattisen. RIT voivat hyökätä sekä ensimmäisen ja metastaattinen koska RIT ainetta toimitetaan kaikkiin kehon osiin kautta verenkiertoon. Nämä viittaavat siihen, että RIT on potentiaalia tulla tehokas hoito SCLC.

Ihmisen homologi

Drosophila

Roundabout geeni,

ROBO1

, on kalvo proteiinin ja reseptori slit2 [9]. Slit2-ROBO1 vuorovaikutukset välittävät vastenmielinen vihjeiden axons ja kasvukartioilla aikana hermoston kehittymistä [9, 10]. On raportoitu, että ROBO1 myötävaikuttaa sekä kasvaimen etäpesäke ja angiogeneesiä [11-13]. Olemme aikaisemmin suoritti RIT tutkimuksen maksasolukarsinoomassa (HCC) kohdistaminen ROBO1 antigeeni [14]. Anto

90Y-leimattu anti-ROBO1 IgG (

90Y-anti-ROBO1 IgG) osoitti merkittäviä antituumorivaikutukset, kuten kasvaimen kasvun tukahduttaminen in ROBO1-positiivisten HCC ksenografteissa. Kuitenkin kasvaimen kutistumista ei havaittu, johtuen ehkä radioresistance HCC. Niinpä määritettiin, että enemmän säteilylle kasvain kuin HCC olisi sopiva terapeuttinen kohde

90Y-anti-ROBO1 IgG. SCLC on korkea radioherkkyyttä verrattuna HCC. Xian et ai. raportoitu ilmaus ROBO1 ihmisen SCLC solulinjassa NCI-H69 [15]. Siksi valitsimme SCLC mallia käyttäen NCI-H69 solulinja tehokkaampi terapeuttinen kohde esillä olevassa tutkimuksessa.

Tässä tutkimuksessa tutkimme farmakokinetiikka

111In-leimatun anti- ROBO1 IgG (

111In-anti-ROBO1 IgG) on biologinen jakautuminen tutkimuksessa käyttämällä SCLC ksenograftin hiiriä. Lisäksi teimme RIT käyttämällä

90Y-anti-ROBO1 IgG ja antituumorivaikutus ja elinvaurioita arvioitiin patologisen analyysin.

Materiaalit ja menetelmät

Soluviljely ja eläinmalleissa

ROBO1-positiivisten SCLC solulinja NCI-H69 (ATCC HTB-119) saatiin American Type Culture Collection [15]. BALB /c-nude-hiiriin (5 viikkoa ikäisiä) ostettiin Clea Japan, Inc. (Tokio, Japani). NCI-H69-soluja viljeltiin RPMI 1640 -elatusaineessa, joka sisälsi 10% (v /v) naudan sikiön seerumia, 37 ° C: ssa kostutetussa ilmakehässä, jossa oli 5% CO

2. Jotta NCI-H69 kasvain eläinmalleissa, NCI-H69-soluja (2 x 10

6), jonka tilavuus oli 200 ui, istutettiin ihonalaisesti oikeaan kylkiin BALB /c-nude-hiirissä. Sitten hiiret analysoitiin 4 viikkoa siirrostuksen jälkeen. Hiiret lopetettiin veren poistamalla isofluraanianestesiassa. Kaikki eläinkokeet oli hyväksynyt Animal Care komitean Tokion yliopisto (hyväksytty numero: P10-017).

Vasta

monoklonaalinen vasta-aine ihmisen ROBO1 luotiin kuten aikaisemmin on kuvattu [16] . Anti-ROBO1 IgG on hiiren IgG2b. Se tunnistaa ihmisen ROBO1 eikä ristireagoi hiiren ROBO1. Immunohistokemiallista (IHC) analyysi, käytimme anti-ROBO1 IgG A7241A (A7241A) [16]. Sillä virtaussytometria, biojakaantumi- tutkimus ja RIT tutkimuksessa anti-ROBO1 IgG B5209B (B5209B) käytettiin [14]. Negatiivinen kontrolli, IgG 3423 (Institute of Immunology, Tokio, Japani), käytettiin virtaussytometrialla. Tämä monoklonaalinen vasta-aine reagoi spesifisesti hepatiitti B: n pinta-antigeeni [17]. Lisäksi se ei reagoi ihmisen membraaniproteiinit.

Virtaussytometria ja IHC

spesifisyys B5209B varten ROBO1 antigeenin arvioitiin käyttämällä virtaussytometria. NCI-H69-soluja inkuboitiin B5209B tai negatiivinen kontrolli-IgG 3423 1 tunnin ajan pitoisuutena 0,3 ug /ml laimennuspuskuriin (1% BSA, 0,1 mM EDTA: a PBS: ssä). Samanaikaisesti, osoittaa spesifisyyden B5209B, estää kokeita lisäämällä liukoista ROBO1 pitoisuutena 100 ug /ml. Sitten solut pestiin kahdesti laimennuspuskurilla, ja saatetaan reagoimaan R-fykoerytriinikonjugoidulla anti-hiiri-IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, USA) laimennettuna 1: 200 laimennus puskurilla. Lopuksi solut pestiin kahdesti laimennuspuskurilla, ja analysoitiin virtaussytometrialla (guava EasyCyteTM Plus System; Millipore, Billerica, MA, USA).

ilmentymisen ROBO1 NCI-H69-ksenografteissa arvioitiin käyttäen IHC. NCI-H69 kasvaimen kudosnäytteet kiinnitettiin 4% paraformaldehydillä yön yli 4 ° C: ssa. Ne upotettiin parafiiniin ja 3-5 pm paksuisia leikkeitä saatiin. Kudosleikkeet parafiini ja nesteytyksestä. Antigeeni haku suoritettiin 10 mM Tris-1 mM EDTA-puskuriin (pH 9,0), joka painekeittimessä 20 minuuttia. Endogeeninen peroksidaasi pysäytettiin käyttämällä 0,3% vetyperoksidia-metanolia 30 minuutin ajan, ja sitten näytteet blokattiin 5% normaalia vuohen seerumia 1 tunnin ajan. Näytteet inkuboitiin A7241A (10 ug /ml) yön yli 4 ° C: ssa ja käsiteltiin sitten sekundaarisen vasta-aineen (Simple tahra MAX-PO; Nichirei, Tokio, Japani) huoneenlämpötilassa 30 minuutin ajan. Visualisoida peroksidaasin, 0,2 mg /ml 3,3′-diaminobentsidiiniä (DAB; Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japani) käytettiin substraattina 0,05 M Tris-HCl-puskuria (pH 7,6), joka sisälsi 0,01% H

2O

2. Tumavärjäystä suoritettiin hematoksyliinillä.

Radiomerkintämenetelmä

ostettu 1, 4, 7, 10-tetra–1, 4, 7, 10-tetraetikkahappo (DOTA) peräisin Macrocyclics (Dallas, TX, USA),

111InCl

3 saatiin Nordion, Inc. (Vancouver, Kanada), ja

90YCl

3 saatiin Eckert ja Ziegler (Braunschweig, Saksa).

B5209B konjugoitiin DOTA ja radioaktiiviseksi

111In ja

90Y kuten aikaisemmin on kuvattu [14]. Me kertoi, että immunoreaktiivinen osa radioleimattujen B5209B ei huononna konjugaatio ehjä B5209B [14].

bioleviäminen tutkimus

NCI-H69 ksenografti (300,7 ± 125 mm

3) hiiret olivat satunnaisesti jaettu 5 ryhmään (n = 3 per ryhmä). Kuhunkin hiireen injektoitiin 40 uCi

111In-B5209B (80 ug) häntälaskimoon. Hiiret lopetettiin 6, 24, 48, 72, ja 144 tuntia injektion jälkeen. Blood, sydän, keuhko, maksa, munuaiset, perna, mahalaukku, suoli, lihas, reisiluusta, rintalastan, ja kasvaimen kerättiin, punnittiin ja mitattiin radioaktiivisuus. Prosenttiosuus injektoidusta annoksesta grammaa kudosta (% ID /g) laskettiin kullekin elimessä.

Kasvain absorboitunut annos

90Y-B5209B arvioitiin biojakaantumi- tiedot

olevaan 111In B5209B. Kasvain kertymistä eri Tome pistettä piirrettiin aikaa vastaan, josta pinta-ala (AUC) laskettiin. Kasvaimen absorboitunut annos arvioitiin perustuu MIRD tyyliä hiiren dosimetriasta malli [18]. Absorboitunut annos elimiin 70 kg viitaten mies arvioitiin meidän biodistrubution dataa MIRDOSE3 tietokoneohjelmaa [19].

Terapeuttinen tutkimus

NCI-H69 ksenografti hiiret jaettiin satunnaisesti 2 ryhmät (n = 3 ryhmää kohden). Hiiret injektoitiin häntälaskimon kautta suolaliuosta tai 200 uCi

90Y-B5209B (70 ug). Tuumoritilavuudet torjunta- ja

90Y-B5209B ryhmät olivat 310,5 ± 128,6 mm

3 ja 273,5 ± 153,6 mm

3, tässä järjestyksessä. Kasvaimen tilavuuden ja painon mitattiin kahdesti viikossa 4 viikon kuluttua injektion. Kasvaimen tilavuus laskettiin seuraavalla kaavalla: 0,5 x (lyhin halkaisija)

2 × (pisin halkaisija). Kasvaimen kasvu (%) laskettiin käyttämällä kaavaa: (tuumorin tilavuus kunakin ajankohtana) /(tuumorin tilavuus päivänä 0) x 100. Hiiret lopetettiin, kun kasvaimen koko oli 1500 mm

3 tai kehon painoa laski 20% alkuperäisestä painosta.

Patologiset tutkimus

NCI-H69 ksenografti hiiret jaettiin satunnaisesti 5 ryhmään (n = 3 per ryhmä). Hiiret injektoitiin häntälaskimoon 200 uCi

90Y-B5209B. Hiiret lopetettiin päivinä 0, 7, 14, 21, ja 28 injektion jälkeen, ja sen jälkeen kudosnäytteet NCI-H69 kasvain, maksan, munuaisten, keuhkojen, sydämen, suolen, perna, haima, rintalastan, ja reisiluun saatiin hiiret.

Kaikki näytteet kiinnitettiin 4% paraformaldehydillä yön yli 4 ° C: ssa. Ne upotettiin parafiiniin ja 3-5 pm paksuisia leikkeitä saatiin. Rintalasta ja reisiluun kalkki ennen parafiiniin. Slide kohdat, lukuun ottamatta reisiluu ja rintalastan, poistettiin parafiini, kuivattu, ja värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla. Reisiluun ja rintalastan leikkeet värjättiin Giemsa-liuoksella.

Terminal deoksinukleotidyylitransferaasilla-välitteisen dUTP nick end merkintöjä (TUNEL) ja Ki-67-värjäys suoritettiin NCI-H69 osat tutkimaan tila kasvaimen apoptoosin ja solujen leviämisen, vastaavasti.

Apoptoosi havaittiin käyttäen ApopTag Plus Peroxidase in situ Apoptosis Detection Kit (Chemicon International, Inc., Billerica, MA), kohti valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Ki-67 värjäys suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [14].

apoptoottiset ja lisääntyvät solut kvantitoitiin määrittämällä prosenttiosuus TUNEL- ja Ki-67-positiivisia soluja, vastaavasti, kuten aiemmin on kuvattu [14].

Statistical analyysi

Data ilmaistiin keskiarvona ± keskihajonta. Keinot verrattiin Studentin

t

-testi. P-arvot 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

spesifisyys B5209B jotta ROBO1 antigeenin

NCI-H69-solujen näytteillä keskimääräisen fluoresenssin 35,29 ja 7,80 kanssa B5209B ja negatiivinen kontrolli IgG 3423, vastaavasti (kuvio 1 a ja 1 b). Sitovat B5209B estyi lisäämällä liukoista ROBO1.

(a) virtaussytometrianalyysin kanssa B5209B (täytetty histogrammi) NCI-H69 solulinjassa. Open histogrammit osoittavat blokeerauskokeet jota käytetään liukenevan ROBO1. (B) virtaussytometrianalyysin lgG 3423 (täytetty histogrammi). Open histogrammit osoittavat blokeerauskokeet jota käytetään liukenevan ROBO1. (C) immunohistokemiallinen analyysi ROBO1 kanssa A7241A NCI-H69 ksenograftin. (Asteikko bar = 100 um).

ROBO1 ilmentymistä NCI-H69 ksenografteissa

ilmentyminen ROBO1 vuonna NCI-H69 ksenografteissa vahvistettiin IHC avulla A7241A. Värjäämällä A7241A havaittiin solukalvojen, kuten ROBO1 ilmentyy solun pinnalla (kuvio 1 c).

bioleviäminen tutkimus

biojakaantumi- Tutkimuksessa käyttäen

111In-B5209B toteutettiin käyttäen NCI-H69 ksenograftin hiirillä (kuvio 2). Kasvaimen otto

111In-B5209B oli 3,46 ± 0,3%, 6,42 ± 0,5%, 5,70 ± 2,5%, 9,37 ± 2,0%, ja 10,1 ± 1,3% ID /g 6, 24, 48, 72, ja 144 h injektion jälkeen, vastaavasti. Maksimaalinen kasvaimen otto

111In-B5209B tapahtui 144 tuntia injektion jälkeen. Retention merkkiaineen veressä havaittiin 19,2 ± 2,1% ID /g 6 h, mutta tämä aleni 6,55 ± 0,5% ID /g 144 h.

111In-B5209B osoittivat tehokasta imeytymistä maksaan, munuaisiin ja pernaan kanssa 5,78 ± 0,9%, 4,73 ± 0,4%, ja 5,13 ± 0,4% ID /g 144 h, vastaavasti.

Tulokset edustavat lasketut prosenttiosuudet injektoidusta annoksesta grammaa kudosta (% ID /g).

imeytynyt kasvaimia käsiteltiin 200 uCi

90Y-B5209B arvioitiin olevan 10,5 Gy. Annokset imeytyy maksassa, munuaisissa, pernassa ja luuytimessä arvioitiin meidän biodistribuutio tiedot on 2,1 mGy /MBq, 3,8 mGy /MBq, 1,3 mGy /MBq, ja 0,4 mGy /MBq, vastaavasti, 70 kg uros viittaus aihe

90Y-B5209B.

RIT tutkimus

terapeuttinen teho

90Y-B5209B tutkittiin NCI-H69 ksenograftin hiirillä (kuvio 3a). Kasvaimet Suolaliuosryhmän osoitti nopeaa kasvua. Yksi hiiri Suolaliuosryhmän lopetettiin päivänä 20, koska kasvaimen tilavuuden saavutti 1,500 mm

3. Vuonna

90Y-B5209B ryhmä, kasvaimen tilavuus pieneni 19,3 ± 6,1% päivänä 13 verrattuna alkuperäiseen tilavuuteen päivänä 0. Kasvaimen tilavuus osoitti merkittäviä eroja ryhmien päivästä 9 lähtien (p 0,01), vaikka mitään merkittävä ero havaittiin päivänä 0, 2 tai 6. kasvain uusiutumista havaittiin päivänä 20.

(a) kasvaimen kasvukäyrä, (b) keskimääräinen ruumiinpaino NCI-H69 ksenograftin hiiriä (avoin neliö, suolaliuos, musta kolmiot,

90Y-B5209B). ** P 0,01 (opiskelijan t-testi).

Eläinten ruumiinpaino mitattiin injektion jälkeen (kuvio 3b). Vaikka keskimääräinen paino laski 89,5 ± 4,7% alkuperäisestä summa

90Y-B5209B ryhmä, tämä muutos oli ohimenevä. Hiiristä suolaliuosta ryhmä osoitti merkittävää painonlaskua. Päivänä 6, paino vaihteli merkitsevästi Suolaliuosryhmän ja

90Y-B5209B (p 0,01). Päivänä 9, ruumiinpaino ei todettu merkittävää eroa näiden kahden ryhmän välillä.

Patologiset analyysi

Sitten arvioitiin antituumorivaikutuksen patologiset analyysi. Päivänä 0 kasvainsolut osoittivat vakaata kasvua, jotka liittyvät hyalinized kuitu- strooman (kuvio 4a).

(a) NCI-H69 kasvain päivänä 0, alkuperäinen suurennos x 400; (B) NCI-H69 kasvain päivänä 7, alkuperäinen suurennos x 400; (C) NCI-H69 kasvain päivänä 0, alkuperäinen suurennos x 400; (D) NCI-H69 kasvain päivänä 0, alkuperäinen suurennos x 400; (E) NCI-H69 kasvain päivänä 0, alkuperäinen suurennos x 400 Mittakaava = 100 pm.

Päivänä 7, havaitsimme massiivinen hyytymistä kuolion, apoptoottisia soluja, ja solujen rappeutuminen, määritellään solun elin turvotus, solujen tuman turpoaminen, ja chromatin tiivistyminen (kuvio 4b).

päivänä 14, lisäksi hyytymisen kuolion ja degeneraatio, myös havaittu histiocyte aggregaatiota ja fibroosia nekroottinen alueilla (kuvio 4c).

21. päivänä necrotic alueita ei havaittu, kun histiocyte yhdistäminen ja fibroosia havaittiin (kuvio 4d). Vaikka määrä rappeutuu solujen vähenikin päivä 14, meillä on vielä havaittavissa paljon taantumasta soluja.

Päivänä 28 harvat alentavan soluja havaittiin (kuvio 4e). Ominaisuudet solun rungon ja ytimen, kuten muoto ja koko, ei ole muutettu, ja näytti olevan sama kuin on havaittu päivänä 0.

S1 Kuvio esittää Ki-67-värjäystä ja TUNEL värjäys. Prosenttiosuus Ki-67-positiivisia soluja päivänä 7 väheni merkittävästi (27,2 ± 3,4%) verrattuna päivä 0 (55,0 ± 13,9%; p 0,01; Kuva 5). Prosenttiosuus TUNEL-positiivisten solujen 7. päivänä lisääntyi merkittävästi (8,83 ± 1,2%) verrattuna päivä 0 (4,46 ± 1,1%; p 0,01; Kuva 5).

Ki-67: suhde Ki -67-positiivisten solujen; TUNEL: suhde TUNEL-positiivisten solujen. * P 0,01 (opiskelijan t-testissä).

o ilmenee patologisia muutoksia ei havaittu normaalissa elinten, lukuun ottamatta perna, rintalastan, reisiluun, ja maksassa.

Päivänä 7, perna väheni lukumääräisesti molempien hematopoieettisten solujen punaisen massan ja lymfosyyttien valkoinen massa (kuvio 6a). Päivänä 14, regeneratiivinen saaret, joka koostuu sekoitus erytroblasti ja granulosyyttistä soluja, havaittiin punaisen massan perna. Vuonna valkoisessa ytimessä perna, solutiheys lymfosyyttien oli samaa luokkaa kuin havaittiin päivänä 7. Päivänä 21, hematopoieettiset solut, kuten erytroblasteja, granulosyytit, ja megakaryosyyttien, lisättiin merkittävästi punaisen massan perna . Lisäksi pieni lisäys lymfosyyttien havaittiin valkoinen massa. Päivänä 28, solutiheys hematopoieettisten solujen näytti olevan sama kuin havaittu päivänä 0 punainen massan perna, ja lymfosyytit merkittävästi lisääntynyt valkoinen massa.

(a) Perna, alkuperäinen suurennos x 400, asteikko bar = 100 pm. (B) Rintalasta, alkuperäinen suurennos x 400, asteikko bar = 100 pm. (C) Reiden, alkuperäinen suurennos x 400, asteikko bar = 100 pm. (D) Maksa, alkuperäinen suurennos x 400, asteikko bar = 100 pm.

jälkeen suoritettiin Giemsa värjäys rintalastan ja reisiluun (kuvio 6b ja 6c). Päivänä 7, rintalastan luuytimen oli merkittävä väheneminen määrä hematopoieettisten solujen. Kypsät granulosyytit koostuu valtaosa jäljellä hematopoieettisten solujen. Reisiluun luuytimessä, havaitsimme pienen määrän väheneminen megakaryosyyttien, kun taas ei havaittu selvää laskua määrä punasoluissa ja granulosyyttien. Vauriot reisiluun luuytimen oli lievä verrattuna havaittiin rintalastan luuytimen. Päivänä 14, regeneratiivinen saaret havaittiin rintalastan luuytimen, ja harvat megakaryocytes olivat läsnä. Reisiluun luuytimen näytteille kasvu megakaryosyy-, ja solutiheys hematopoieettisten solujen näytti olevan sama kuin havaittu päivänä 0. Päivänä 21, rintalastan luuytimen osoitti merkittävää lisääntyminen hematopoieettisten solujen. Päivänä 28, solutiheys hematopoieettisten solujen rintalastan luuytimen näytti olevan sama kuin havaittu päivänä 0.

Päivänä 7, ballooning hepatosyyttien lukumäärä havaittiin maksassa (kuvio 6d) vaikka tämä ei havaittu päivänä 14. lisäksi ominaisuudet hepatosyyttien näytti olevan sama kuin on havaittu päivänä 0.

keskustelu

Tämä tutkimus on ensimmäinen, joka osoittaa, että

111In-B5209B sisälle kertyy NCI-H69 ksenografteissa, ja

90Y-B5209B on merkittäviä antituumorivaikutukset vastaan ​​NCI-H69 ksenografteissa.

arvioimiseksi spesifisyyden B5209B varten ROBO1, teimme esto tutkimus virtaussytometriaa käyttämällä. Sitoutuminen B5209B inhiboitui lisäämällä liukoista ROBO1, vaikka samaa hoito ei inhiboi IgG 3423. Näin ollen, B5209B tunnistaa spesifisesti ROBO1 antigeenin.

käyttää

111In-anti-ROBO1 kuten biojakaantumi- korvike ennustaa in vivo käyttäytymisen

90Y-anti-ROBO1; tämä oli, koska se on raportoitu, että

111In ja

90Y-leimattu vasta, proteiinit ja peptidit ovat biologisesti vastaavat, suhteessa niiden otto kasvaimia ja muiden tärkeiden elinten [20].

vahvisti, että B5209B on spesifisyyttä ROBO1 antigeenin. Lisäksi otto

111In-B5209B NCI-H69 kasvoi vähitellen ajan mittaan, ja maksimiotto kasvaimissa oli 10,1 ± 1,3% ID /g 144 h. Ottoa radiomerkkiaineen normaaliksi elimiä, jotka eivät ilmennä ROBO1, kuten maksa, munuaiset ja perna, oli suhteellisen korkeat kertymistä. Kuitenkin ottoa kunkin elimen joko pienentää asteittain ajan tai pysynyt vakiona. Nämä otto käyttäytymistä poikkesivat ottoa havaittu kasvaimia. Siksi tulokset meidän esto ja biologinen jakautuminen tutkimus tuki

111In-B5209B kohdistuu erityisesti ROBO1. On odotettavissa, että

90Y-B5209B kasaantuisivat NCI-H69-ksenografteja, koska samanlaisia ​​sitoutumisaffiniteetti [14].

Vaikka

111In-B5209B oli suhteellisen korkea kertymistä maksaan, munuaisiin, ja perna, sitoutumisspesifisyyttä

111In-B5209B voi selittää tätä kertyy runsaasti, koska nämä elimet eivät ilmaise ROBO1 [16]. Tämä ilmiö voidaan selittää läsnä jäljellä

111In-B5209B veressä ja Fcy tai FcRn-reseptori-välitteisen imeytyminen endoteelisolujen näissä elimissä [21, 22].

injektoitiin 200 uCi on

90Y-B5209B osaksi NCI-H69 vierassiirrettä hiiriä, ja kasvaimen tilavuus NCI-H69 ksenografteissa vähentynyt merkittävästi hoidon jälkeen

90Y-B5209B. Sen jälkeen kun

90Y-B5209B hallinto, havaitsimme patologisia muutoksia kasvain, kuten solujen rappeutuminen, hyytyminen kuolion, kasvu apoptoottisia soluja, ja vähennys Ki-67-positiivisia soluja. Nämä muutokset ovat yleisiä patologisia muutoksia kasvaimen kudoksissa. Täten nämä tulokset viittaavat siihen, että

90Y-B5209B on merkittäviä antituumorivaikutukset käytettynä RIT.

Valitettavasti havaitsimme kasvaimen uusiutumista päivänä 20.

90Y-B5209B ryhmä. Vuonna patologinen tutkimus, vähentynyt solujen rappeutuminen havaittiin päivästä 21 päivään 28. Ei ollut nekroottinen alue päivänä 21, vaikkakin histiocyte yhdistäminen ja fibroosia havaittiin tuolloin, ja nämä ovat immuunivaste nekroottista soluihin. Histiocytes nielemään nekroottisten solujen ja fibroblastien korjaa alueella. Lisäksi, morfologiset ominaisuudet solun elinten ja tumat päivänä 28 näytti olevan sama kuin on havaittu päivänä 0. Nämä tulokset viittaavat siihen, että antituumorivaikutukset RIT vähentynyt päivänä 21. täydellisen remission tai pitkäaikainen eloonjääminen käyttämällä

90Y-B5209B, lisälaitteen tai laajentaa näitä antituumorivaikutukset on tarpeen. Yhdistelmähoitoa RIT, kemoterapiaa ja poly ADP riboosi polymeraasin estäjä tuloksia pidentynyt eloonjääminen verrattuna kunkin hoito yksinään [23, 24]; Näin ollen, yhdistelmähoito on mahdollista antaa tehokkaampaa antituumorivaikutus. Käyttö pitkän puoliintumisajan nuklidin voi saavuttaa parantamiseen terapeuttisia vaikutuksia.

90Y on hyödyllinen terapeuttinen β

– päästöiltään että on korkea maksimi energia (2,3 MeV) ja pitkän kantaman (maksimi kudospenetraatio 11 mm) [25]. Kuitenkin sen puoliintumisaika on suhteellisen lyhyt (2,7 päivää). Verrattuna

90Y,

177Lu on pienempi maksimi energia (0,5 MeV) ja lyhyempi kantama (maksimi kudospenetraatio 1.6mm), mutta sillä on pidempi puoliintumisaika (6,7 päivää) [26]. Siten käyttö

177Lu voi pidentää antituumorivaikutuksia ja rajoittaa elinvaurioita, koska sen lyhyen kantaman. Lisäksi on raportoitu, että

177Lu RIT on tehokkaampaa kuin

90Y RIT hoidossa pieniä vaurioita ( 1,000 mm

3) [27, 28].

177Lu RIT voi olla tehokas suhteellisen pieniä kasvaimia jota käytettiin tässä tutkimuksessa.

Yoshida et ai. kertoi vaikutus radioimmunoterapiassa käyttämällä

90Y-anti-c-kit-vasta-aineen SCLC [8]. Tunniste

90Y-anti-c-kit-vasta saavutti täydellisen terapeuttisen vasteen SCLC ksenograftit. Kahdessa tutkimuksessa, erosivat monella tavalla, kuten kohdennetut proteiinia, vasta-ainetta käytetään, ja kasvaimen tilavuus. Kasvaimen tilavuus käytettiin tutkimuksessamme (273,5 ± 153,6 mm

3) oli yli 50 kertaa suurempi kuin kasvaimen käytetty in2 tutkimuksessaan (4,4 ± 3,2 mm

3). Ero kasvaimen tilavuuden voi selittää erot terapeuttinen vaikutus havaitaan välillä kahdessa tutkimuksessa, koska kasvaimen tilavuus on tärkein tekijä hoitotuloksia sädehoidossa [29]. Lisäksi saatavuus RIT hoito riippuu läsnäolo tai puuttuminen kohde- proteiinin ilmentymisen. Siksi monipuolisempia kohde- proteiinien RIT on parempi.

90Y-B5209B on arvoa terapeuttisena ehdokas hoitoon ROBO1-positiivisten SCLC koska c-kit ei aina ilmaistu SCLC.

Havaitsimme myös kehon painon, pieneni hematopoieettisten solujen ja ballooning of maksasoluissa. Nämä olosuhteet olivat ohimeneviä, mikä osoittaa, että 200 uCi

90Y-B5209B oli alle suurin siedetty annos NCI-H69 ksenograftin hiirillä. On välttämätöntä suorittaa annoksensuurentamistutkimuksessa määrittämiseksi kuolettavan annoksen ja optimaalisen terapeuttisen annoksen. Huomioon imeytyneestä annoksesta normaaliin elimiin on tärkeä määritettäessä terapeuttinen säteilyannos potilailla. Tässä tutkimuksessa arvioimme absorboitunutta annosta elimiin 70 kg viittaus mies meidän biologinen jakautuminen tietoja. Annokset imeytyy maksassa, munuaisissa, pernassa ja luuytimessä olivat 2,1 mGy /MBq, 3,8 mGy /MBq, 1,3 mGy /MBq, ja 0,4 mGy /MBq, vastaavasti. Kliinisessä tutkimuksessa

90Y-Zevalin hyväksyttävän absorboituneet annokset normaaliksi elimiin ja punainen luuydin oli alle 20 Gy ja 3 Gy vastaavasti [30]. Suurin siedetty annoksilla, lasketaan annoksia imeytyy maksa, munuaiset, perna, ja luuytimessä, oli 9,5 GBq, 5,3 GBq, 15,4 GBq, ja 7,5 GBq, vastaavasti. Näin ollen arvioitu enimmäismäärä terapeuttinen annos

90Y-B5209B on 5,3 GBq. On kuitenkin todettu, että biologisen jakautumisen tämän radioleimatun vasta-osoittaa ristiriita eläinmalleissa ja potilaat [31]. Lisäksi B5209B reagoi ihmisen ROBO1, mutta ei hiiren ROBO1. On tarpeen tehdä biologista jakautumista tutkimus

111In-B5209B potilailla arvioida tarkasti dosimetriasta.

Ero aste vahingon välillä rintalastan ja reisiluun havaittiin. Kuitenkin kertyminen

111In-B5209B ei ole eroa näiden kahden meidän biologisen jakautumisen tutkimuksessa. Nämä viittaavat siihen, että kertyminen

90Y-B5209B näihin elimiin ei ole tärkein tekijä eron aste vahingon välillä. Olemme aiemmin selitti, että tämä ero voi johtua siitä, että aikaväli erot verestä allas ja korkea kerääntymisalueilla kuten kasvain, maksan ja pernan [14]. Tämä viittaa siihen, että aste sivuvaikutus RIT on mahdollista muuttaa riippuen metastaattinen asentoon. Siksi on tarpeen yksilöidä polttoväli kantoja ennen injektiota

90Y-leimattu RIT agentti arviointiin sivuvaikutus.

perna, havaitsimme regeneratiivinen saaret koostuvat erytroblasti ja granulosyyttistä soluja päivinä 14 ja 21, sekä merkittävä määrä kasvaa hematopoieettisten solujen, mukaan lukien megakaryocytes. Nämä tulokset viittaavat siihen, että uusiutuminen hematopoieettisten kudosten alkoi päivä 14-20, ja vahingoittaa verta muodostavan kudoksiin oli ohimenevää tähän hoitoon. Kasvu megakaryosyyttien havaittiin korotuksen jälkeen erytroblasteja ja granulosyyttejä. Lisäksi havaitsimme lasku megakaryocytes ilman erytroblasteja ja granulosyytit, reisiluu. Kashiwakura et ai. raportoitu, että pesäkkeitä muodostava yksikkö megakaryosyyttien ovat säteilylle kuin muut myelooinen esisolut [32]. Näin ollen, korkea radioherkkyyttä pesäkkeitä muodostava yksikkö megakaryosyyttien voi selittää näitä ilmiöitä.

Päivänä 7, havaitsimme ballooning hepatosyyttien maksassa.