Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tarkoitus

PIK3CA

koodaava geeni katalyyttinen alayksikkö fosfatidyyli-3-kinaasi (PI3K) on mutatoitunut ja /tai monistaa eri neoplasian, mukaan lukien keuhkosyöpä. Täällä tutkimme

PIK3CA

geenin muutokset, ilmaus ydinosat PI3K koulutusjakson, ja arvioitiin niiden kliinistä merkitystä ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC).

Materiaalit ja menetelmät

onkogeeninen mutaatioita /uudelleenjärjestelyihin

PIK3CA

,

EGFR

,

KRAS

,

HER2

,

BRAF, AKT1

ja

ALK

geenien havaittiin kasvainten 1117 potilasta NSCLC.

PIK3CA

geenikopiomäärä tutkittiin fluoresoivalla

in situ

hybridisaatio- ja ilmaus PI3K p110-alayksikön alfa (PI3K p110α), p-Akt, mTOR, PTEN määritettiin immunohistokemia

PIK3CA

mutantti tapauksia ja 108 potilasta ilman

PIK3CA

mutaatio.

tulokset

PIK3CA

mutaatio havaittiin 3,9% okasolusyöpä ja 2,7% adenokarsinooma. Niistä 34

PIK3CA

mutantti tapauksissa 17 kasvaimet kanna samanaikainen

EGFR

mutaatioita ja 4 oli

KRAS

mutaatioita.

PIK3CA

mutaatio merkitsevästi yhteydessä korkea ilmentymisen PI3K p110α (

p

0,0001), p-Akt (

p

= 0,024) ja mTOR (

p

= 0,001), mutta ei korreloi

PIK3CA

vahvistusta (

p

= 0,463). Potilaat, joilla on yksittäinen

PIK3CA

mutaatio oli lyhyempi kokonaiselossaoloaikaa kuin ne, joilla on

PIK3CA

–

EGFR /KRAS

co-mutaation tai villityypin

PIK3CA

(

p

= 0,004). Merkittävästi elinajan havaittiin myös potilailla, joilla on

PIK3CA

mutaatioita kuin ilman

PIK3CA

mutaatioita

EGFR /KRAS

villityyppisen alaryhmä (

p

= 0,043) B

Johtopäätökset

PIK3CA

mutaatiot usein rinnalla

EGFR /KRAS

mutaatioita. Huono ennuste joilla oli yhden

PIK3CA

mutaatio NSCLC ja ennusteen arvioinnissa on

PIK3CA

mutaatio

EGFR /KRAS

villityyppiseen alaryhmä ehdottaa erillisten mutaatio asema

PIK3CA

geenin tulisi määrittää yksittäisille terapeuttisten strategioiden NSCLC.

Citation: Wang L, Hu H, Pan Y, Wang R, Li Y, Shen L, et al. (2014)

PIK3CA

Mutaatiot Usein rinnalla

EGFR /KRAS

Mutaatiot ei-pienisoluinen keuhkosyöpä ja Ehdota huonon ennusteen

EGFR /KRAS

villityypin alaryhmän. PLoS ONE 9 (2): e88291. doi: 10,1371 /journal.pone.0088291

Editor: Giuseppe Viglietto, UNIVERSITY Magna Graecia, Italia

vastaanotettu: 25 heinäkuu 2013; Hyväksytty: 06 tammikuu 2014; Julkaistu: 12 helmikuu 2014

Copyright: © 2014 Wang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat avustuksia Key rakentaminen ohjelma National ”985” Project (Grant No. 985III-YFX0102), National Natural Science Foundation of China (avustukset nro 81172218 ja 81101761), tiede- ja teknologia-komissio Shanghai kunta (ohjelma Shanghai Aihe johtava tutkija; Grant nro 12XD1402000), säätiö Shanghai Health Administration (Grant nro 20114206), ja Grant Shanghaista Hospital Development Center (Grant nro SHDC12012308). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

on hyvin osoitettu, että fosfatidyyli-3-kinaasi (PI3K) reitti liittyy syövän syntymistä eri ihmisen syövissä [1], [2], [3]. Aktivoinnin PI3K aloittaa tapahtumasarjan, joka johtaa fosforylaatioon Akt, joka vaikuttaa ylimääräinen alavirran signalointia proteiinien osallisena solujen kasvua, aineenvaihduntaa, lisääntymistä, eloonjääntiä, liikkuvuuteen, ja hyökkäys [4], [5], [6]. PI3K-riippuvainen aktiivisuus on usein koholla johtuen mutaatiosta

PIK3CA

, koodaava geeni p110α katalyyttisen alayksikön PI3K (PI3K p110α), ja se, ettei fosfataasin ja tensin homologi (PTEN) proteiini, tuumorisuppressori jolla on tärkeä rooli säätelyssä PI3K antiapoptoottisten ja selviytymisreittiin [7], [8]. Lisäksi lisääntynyt kopiomäärä

PIK3CA

on myös osoitettu liittyvän lisääntyneeseen

PIK3CA

transkriptio, p110α proteiinin ilmentymisen ja PI3-kinaasiaktiivisuutta [9].

Aberrations komponenteissa PI3K signalointireitin on raportoitu monia kiinteitä kasvaimia, mukaan lukien keuhkosyöpä [2], [4], [7], [9]. Useita mutaatioita

PIK3CA

, joita esiintyy säännöllisyyttä ja erittäin konservoituneita alueita geenin johtaa aminohapposubstituutioihin kierteisen sitova domeeni koodaa eksoni 9 ja katalyyttisen alayksikön p110α koodaa eksoni 20, jotka johtavat in upregulating PI3K koulutusjakso signalointi [10]. Vuonna keuhkosyöpä, kopioiden määrä voittoja

PIK3CA

todettiin olevan yksinomaan

PIK3CA

mutaatio, mikä tarkoittaa, että molemmat muutokset voivat olla onkogeenisiä edistää syövän syntymistä keuhkoissa [11]. PTEN proteiini säätelee negatiivisesti PI3K koulutusjakso [12] ja menetyksen PTEN-proteiinin ilmentyminen on yhteydessä heikkoon säilymiseen potilailla, joilla on kielen syöpä, ja kehittyneempää kasvain ruokatorven ja suun levyepiteelisyöpä syövät, vastaavasti [13], [14] . Lisäksi Akt ja mTOR sijaitsevat alavirtaan PI3K ja lisääntynyt mTOR fosforylaatiota havaitaan usein rinnalla aktivoitu Akt NSCLC ja häiriöstä mTOR osallistuu keuhkosyövän etenemiseen [15], [16].

Meidän Edellisessä tutkimuksessa kerroimme, että 90% 52 keuhkoadenokarsinooma näytteitä Aasian tupakoimattomia päässeen kuljettajan mutaatioita vain

EGFR

,

KRAS

,

HER2

ja

ALK

geeneihin [17]. Taajuus

EGFR

,

KRAS

,

HER2

mutaatioiden ja

EML4-ALK

fuusio oli 75,3%, 2%, 5,9% ja 5% , erikseen, viime analyysi 202 keuhkoadenokarsinooma näytteitä kiinalaisten potilaalla koskaan tupakoineet [18]. Kuitenkin enintään 40% tapauksista NSCLC joka sisältää okasolusyöpä, adenokarsinooma ja suuri karsinooma histologia voisi kertyä tällaiset muutokset [18]. Nyt on selvää, että jopa selkeästi tunnistettavana histologinen alatyyppi, erillinen molekyyli muutokset voivat liittyä kirjo kliinisiä piirteitä ja myös korreloivat sairauden lopputulokseen ja hoitovastetta [19]. Tämän seurauksena on tarpeen selkeyttää eri molekyylitason muutos yksilöllistä kohtelua.

Tähän mennessä on olemassa muutamia tutkimuksia, jotka muodostavat kattavan kuvan ilmaisun komponenttien PI3K koulutusjakso,

PIK3CA

geenin muuttaminen, ja niiden vastaavuus NSCLC [20], [21]. Esillä olevassa tutkimuksessa tutkimme

PIK3CA

geenimutaatio,

PIK3CA

vahvistusta sekä ilmaisun PI3K p110α, p-Akt, mTOR ja PTEN jotka sijaitsevat PI3K väylän peräkkäisen kokoelma NSCLC kasvainnäytteestä. Tämä yksityiskohtainen käsitys PI3K koulutusjakson muutokset NSCLC voisi tarjota mahdollisuuden tarkka määrittely ehdokas kohderyhmien, helpottaa kliinisen tutkimuksen suunnittelu ja validointi ennakoivan biomarkkereiden.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat ja näytteet

lokakuusta 2007 joulukuuhun 2012 osalta peräkkäin hankitaan primaarikasvaimen näytettä NSCLC potilasta joille tehtiin keuhkojen resektion laitoksella Torakaaliikirurgia, Fudanin yliopiston Shanghai Cancer Centre. Aiheet oikeutettuja tässä tutkimuksessa oli täytettävä seuraavat: patologisesti vahvistettu keuhkoadenokarsinooma tai keuhkojen okasolusyöpä, kukin näyte sisältää riittävästi kudosta kattavia mutaatioanalyysit ja ilman neoadjuvant hoitoa. Potilaita seurattiin 3 kuukauden välein 2 ensimmäisen vuoden aikana, sitten kaksi kertaa vuodessa sen jälkeen. Kontrasti-parannettu rinnassa tietokonetomografia (CT) skannaus otettiin 3 kuukauden välein 2 ensimmäisen vuoden aikana ja sen jälkeen 6 kuukauden välein sen jälkeen. Jos toistuminen epäiltiin joko äskettäin oireilla tai ajoitettuna ajankohtana, integroitu positroniemissiotomografia /TT (PET /TT) suoritettiin. PET /TT otettiin myös potilailla, joilla ei oireita tai epätavalliset löydökset säännöllisten testien 1 vuoden kuluttua kirurgisen resektion. Lopullinen diagnoosi toistumisen vahvistettiin histopatologinen tutkimus näytteiden saatu leikkausta tai koepala. Jos se oli mahdotonta diagnosoida toistumisen histopatologisesti, toistuva maligniteetin ei enää epäiltiin kliinisen ja radiologisen seuranta-aikana vähintään 12 kuukauden ajan ilman todisteita aktiivinen syöpä. Tämä tutkimus hyväksyi Institutional Review Board of Fudanin yliopiston Shanghai Cancer Center. Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta.

Mutaatioanalyysit

Jäädytetyt kudosta kasvaimen näytteiden selvästi jakaa osiin TRIZOL (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA), minkä jälkeen kokonais-RNA uuttamalla käyttäen vakioyhteyskäytäntöä. Kokonais-RNA-näytteet käänteistranskriptio cDNA: ksi.

PIK3CA

eksoni 9 sisältää kodoneja 542 ja 545 ja

PIK3CA

eksoni 20 sisältää kodonin 1047, jossa suurin osa syntyy mutaatioita [22]. Niinpä haimme mutaatioiden

PIK3CA

eksonit 9 ja 20.

EGFR

(eksonit 18-21),

HER2

(eksonit 18-21),

KRAS

(eksonit 2-3),

BRAF

(eksonit 11-15) ja

AKT1

(eksonit 2-3) on myös monistettiin PCR: llä käyttäen cDNA. Monistetut tuotteet analysoitiin suoralla dideoksinukleotidisekvensoinnilla. Tunnistaa

EML4

–

ALK

fuusioita, useita 50 alukkeita käytettiin yhdessä kiinteällä 30 pohjamaali paikallistamiseksi osoitteeseen

ALK

eksoni 20 osoittamaan kaikki

EML4

fuusio variantit, kuten aiemmin on kuvattu [17]. Alukkeita käytettiin tunnistamaan välisiä fuusioita

ALK

ja

KIF5b

tai

TFG

olivat aiemmin raportoitu [23], [24].

ALK

FISH käytettiin myös vahvistaa tarkkuutta PCR. Kaikki mutatoidut tapausta vahvistettiin kahdesti riippumattoman PCR-reaktioissa. Uusia tietoja ei tuotettiin tutkimuksessamme.

ilmentäminen tärkeimmistä osista PI3K koulutusjakson

kasvainkudoksen valinta ja immunohistochemial arviointi suoritettiin kahdella patologit (Yuan L ja Lei S). Kirurginen Näytteet kiinnitettiin 10% formaliinilla ja upotettiin parafiiniin; 4 um osastoja keuhkokasvaimet valmistettiin ja parafiini, ja antigeeni haku tehtiin mikrossa. Endogeeninen peroksidaasiaktiivisuus estettiin 0,3% H

2O

2. Jälkeen estää normaalin seerumin leikkeitä inkuboitiin 120 minuuttia monoklonaalisia vasta-aineita PI3K p110α (1:400 laimennos, klooni: C73F8; Cell Signaling Technology), PTEN (laimennos 1:50, klooni: 138G6; Cell Signaling Technology), s -Akt (1:50 laimennos, klooni: Ser473; Cell Signaling Technology) ja mTOR (1:50, klooni: 7C10; Cell Signaling Technology). Objektilasit pestiin PBS: ssä ja havaitaan piparjuuriperoksidaasiin konjugoitua anti-kani /hiiri Real Envision Detection Kit (Gene Tech), jota seurasi counterstaining hematoksyliinillä.

mukaan pisteytysjärjestelmää, joka on aikaisemmin raportoitu kirjallisuudessa [ ,,,0],25], [26], Our PI3K p110α värjäys pisteytys tehtiin seuraavasti: Tilanne on 0, jos mitään positiivisia kasvainsoluja löydettiin; 1 jos positiiviset kasvainsolut olivat 10%; ja 2, jos positiiviset kasvainsolut olivat 10%. Kudokset pistein 0 tai 1 pidettiin heikkoa ilmentymistä; joilla tulokset 2 pidettiin korkealla ilme. Immunoreaktiivisuus p-Akt, mTOR ja PTEN arvioitiin semikvantitatiivisesti perustuu värjäytymisen intensiteettiä ja osuus, kuten aiemmin on kuvattu [27]. Värjäytymisvoimakkuus pisteytettiin: poissa (0); heikko (1); kohtalainen (2), tai vahvaa värjäytymistä (3). Värjäystä suhteessa pisteytettiin: none (0); vähemmän kuin 1/3 (1); 1/3 2/3 (2), tai suurempi kuin 2/3 tuumorisolujen (3). Kokonaisarvosana laskettiin summana intensiteetti pisteet ja osuus pisteet tuottaen pisteet välillä 0 ja 6. yleisarvosanaksi 0-2 pidettiin heikkoa ilmentymistä, kun taas toinen pistemäärät pidetä erityisen ilme tilastollinen analyysi. Immunohistokemiallinen värjäys arvioitu riippumattomasti kahdella patologit (Yuan L ja Lei S). Tapauksissa Eri yleistä tulokset otettu samasta kasvain, keskimääräinen pisteet pidettiin lopullisessa yleisarvosanaksi.

Arvio

PIK3CA

geenimonistuman

Fluoresoiva in situ -hybridisaatio ( FISH) määritys

PIK3CA

suoritettiin käyttäen

PIK3CA

koetin, joka hybridisoituu bändi 3q26.32 Texas Red (punainen) ja centromere3 (CEN3) FITC (vihreä) (Abbott Molecular Abbott Park, IL) noudattaen rutiininomaisia ​​menetelmiä. FISH analyysit tulkitsi kaksi kokenutta arvioijien (Lei W ja Yunjian P) sokaissut kliiniset tiedot. Vähintään 100 ytimiä potilasta kohden arvioitiin. Tissue näytteitä

PIK3CA Twitter /CEN3 suhde 1,0 luokiteltiin normaali ja ne, joilla on

PIK3CA Twitter /CEN3 suhde 1,0 ja 2,0 luokiteltiin ottaa

PIK3CA

voitot .

PIK3CA Twitter /CEN3 suhde on yli 2,0 katsottiin monistettiin. Vähintään 50-solujen kanssa sekä sentromeerisen ja

PIK3CA

geeni signaaleja pisteytettiin antaa ratkaisevat tiedot.

Tilastollinen

Ero osuuksina analysoitiin

X

2

tai Fisherin testiä. Toistuminen-elinaika (RFS) kesto määriteltiin leikkauksen aikana uusiutumiseen tai viime yhteystietoja. Kokonaiselinaika (OS) määriteltiin aika leikkauksen kuolemaan tai viime yhteystietoja. Tapahtuma todettiin niin uusiutumisen tai kuoleman jälkeen leikkauksen. Potilaat elossa ja näkyvissä mitään toistuminen viimeisessä seurannassa sensuroitiin. RFS ja OS jakaumat arvioitiin käyttämällä Kaplan-Meier-menetelmällä. Log-rank-testi määrittämiseen käytettiin selviytymisen eroja ryhmien välillä. Regressioanalyysisarjoissa Eloonjääntitulokset, joka perustuu Coxin suhteellisten riskien mallia, käytiin RFS ja käyttöjärjestelmän. Eteenpäin vaiheittainen valintamenettely toteutettiin

P

-arvo kynnys 0,05 sisällytettäväksi monimuuttujamenetelmin. Tilastollinen merkitsevyys hyväksyttiin, kun

P

-arvo was 0,05. Kaikki tulokset analysoitiin käyttämällä Statistical Package for Social Sciences Version 16.0 Software (SPSS Inc., Chicago, IL).

Tulokset

PIK3CA

geenimutaatio tilaansa NSCLC

yhteensä 1117 NSCLC-potilailla 646 miestä ja 471 naista olivat hyväksyttäviä mutaation analyysi tässä tutkimuksessa. Kuten esitetään taulukossa 1, kuviossa 1 ja kuviossa S1 File S1. 3,0% (34/1117) potilaat tunsivat mutaatiot

PIK3CA

osuus 2,7% (22/807) keuhkojen adenokarsinoomien, ja 3,9% (12/310) ja okasolusyöpää. Mitään merkittävää korrelaatiota ei havaittu

PIK3CA

mutaatioiden ja kliinis tekijät, kuten sukupuoli, ikä, patologinen tyypit, tupakointi historia, kasvaimen erilaistumiseen tai vaiheessa (taulukko 1).

Laatikot edustavat funktionaalisia domeeneja (jäljempänä P85 sitova alue, Ras sitova alue, C2 domain, kierteiset domain, ja kinaasidomeenia). Taajuus ja erilaisia ​​mutaatioita havaittiin kullakin alueella on merkitty ala- ja yläpuolella ruutuun.

Mutaatiot eksonissa 9 koodauksen kierteisen domain (E545K, E545Q, E545G, E545A, Q546R, E542K, T536I) havaittiin 21 potilaalla. Eksoni 20 mutaatiot koodaavan kinaasidomeenissa (H1047R, H1047L, M1043L, G1007R, Y1021C) havaittiin 13 potilaalla. Yleisimmät mutaatiot olivat E545K ja H1047R esiintyy 16 (47,1%, 16/34), ja 34 potilasta, joilla

PIK3CA

mutaatioita (kuvio 1, taulukko 2). Mukaan ennusteeseen viittaavia tietoja tunnistettu, analyysi taajuus mutaatioita kierteisen vs. kinaasidomeeni suoritettiin. Oli suuntaus, että enemmän kierteisen domain

PIK3CA

mutaatioita havaittiin potilailla, joilla imusolmuke etäpesäke järjestetään II~III, mutta ero ei ollut tilastollisesti merkitsevä (taulukko S1 File S1).

PIK3CA

mutaatiot usein rinnalla

EGFR /KRAS

mutaatioita NSCLC

Tutkiakseen rinnakkaiselo

PIK3CA

ja muut onkogeenimutaatiot vuonna ei-pienisoluinen keuhkosyöpä, testaus

EGFR

,

KRAS

,

HER2

,

BRAF

,

AKT1

geenimutaatioita ja

ALK

uudelleenjärjestely on järjestänyt.

EGFR

ja

KRAS

geenimutaatioita löydettiin 536 (48,0%, 536/1117) ja 67 (6,0%, 67/1117) 1117 potilasta. Esiintyminen hinnat

HER2

,

BRAF

,

AKT1

mutaatioita ja

ALK

uudelleenjärjestely oli 20 (1,8%, 20/1117), 11 ( 1%, 11/1117), 2 (0,2%, 2/1117) ja 33 (3,0%, 33/1117), vastaavasti. Kaikki tunnistetut

ALK

fuusio variantteja

EML4-ALK

. Muita fuusio variantit, kuten

KIF5B-ALK

ja

TFG-ALK

ei havaittu tutkimuksessamme. Täydellinen tietoja

ALK

uudelleenjärjestely on esitetty taulukossa S2 File S1. Ei korrelaatio löytyi

PIK3CA

mutaatioiden ja muiden geenin muutokset eivät keuhkojen okasolusyöpä eikä adenokarsinooma ryhmissä (taulukko S3-S4 File S1).

Niistä 34

PIK3CA

mutantti tapauksessa kaksikymmentäyksi (61,8%, 21/34) kanna samanaikainen onkogeeniset mutaatiot – 17 (81,0%, 17/21)

EGFR

mutaatioita ja 4 (19,0%, 4/21)

KRAS

mutaatiot (kuva 2), jonka osuus 3,2% (17/536) ja

EGFR

-mutant tapauksissa ja 6,0% (4/67) ja

KRAS

-mutant tapauksissa. Rinnakkaiselo

PIK3CA

kanssa

BFAF

,

HER2

,

AKT1

geenimutaatioita tai

ALK

uudelleenjärjestely ei löytynyt. Tämä

PIK3CA

–

EGFR /KRAS

co-mutaatio oli yleisempää tupakoimattomia kuin nykyisiä tai entisiä tupakoitsijoita (

p

= 0.039) ja adenokarsinooma kuin okasolusyöpä (

p

0,0001). Siellä oli myös taipumusta korkeamman co-mutaation suhteen naisilla (

p

= 0,067) ja vanhemmilla potilailla enintään 60 (

p

= 0,168) (taulukko S5 File S1 ).

erityisiä histopatologisia alatyyppi analysoitiin myös 807 keuhkoadenokarsinooma ja mitään merkittävää eroa alatyyppi todettiin potilaiden välillä ja ilman

PIK3CA

mutaatio (

p

= 0,082, taulukko S6 File S1). 34

PIK3CA

mutantti tapauksissa ei ollut merkitsevää korrelaatiota histopatologisia alatyypin sairastavien potilaiden välillä

PIK3CA

–

EGFR /KRAS

mutaatiot ja niitä vain

PIK3CA

mutaatioita joko. (

p

= 0,121, taulukko S7 File S1).

immunohistokemiallinen ilmentymä PI3K p110α, p-AKT, mTOR, PTEN ja niiden korrelaatioita

aktiivisuuden arvioimiseksi PI3K /AKT-reitin sekä

PIK3CA

mutantti ja

PIK3CA

villityyppiseen ryhmiä, me peräkkäin valittu pienemmän joukon

PIK3CA

villityyppisen primaarisessa NSCLC, kirurgisesti resekoitu heinä 2008 ja kesäkuussa 2009 samankaltaisia ​​kliiniset ja patologiset ominaisuudet kuin 1117 potilasta tarkasteltiin edellä. 108

PIK3CA

villityyppisen potilaita kerättiin. Määritimme PI3K p110α, p-Akt, mTOR ja PTEN-proteiinin tasot 34

PIK3CA

mutantti tapauksia ja 108

PIK3CA

villityyppisen tapauksissa immunohistokemiallinen (IHC). Edustavia immuunivärjäykseen kutakin proteiinia kuvassa S2 File S1. Sillä

PIK3CA

mutantti ryhmä, korkea sytoplasmista ekspressiota PI3K p110α havaittiin 27 (79,4%, 27/34) kasvaimet, kun taas korkea ilmentyminen p-Akt (lähinnä sytoplasman) ja mTOR (sytoplasman) oli havaittu 18 (52,9%, 18/34) ja 25 (73,5%, 25/34) kasvaimia, vastaavasti. Alhainen ilmentyminen PTEN (PTEN menetys) sytoplasmassa ja tumassa nähtiin 8 (23,5%, 8/34) kasvaimia. Sillä

PIK3CA

villityypin ryhmä, korkea ilmentymä PI3K p110α, p-Akt, mTOR löydettiin 42 (38,9%, 42/108), 34 (31,5%, 34/108) ja 44 (40,7% , 44/108) kasvaimen vastaavasti. Alhainen ilmentyminen PTEN nähtiin 30 (27,8%, 30/108) kasvaimia. Kuten taulukosta S8-S9 File S1, kummassakin kahdessa ryhmässä, yhdistyksen välillä kunkin parin PI3K p110α, p-Akt, mTOR proteiinit olivat tilastollisesti merkitseviä. Ei kuitenkaan ole merkittäviä korrelaatioita havaittu välillä PTEN ja muita proteiineja. Vuonna

PIK3CA

mutantti ryhmä, korkea PI3K p110α ilmentyminen liittyi vaiheen II-IV sairaus. (

p

= 0,043) (taulukko S8 File S1) ja

PIK3CA

villityypin ryhmä enemmän korkean p-Akt ilmentyminen havaittiin vanhemmilla potilailla (

p

= 0,037) (taulukko S9 Tiedosto S1). Mikään muu ennusteeseen viittaavia ominaisuuksia osoittivat merkittävää suhdetta ilmentymisen PI3K p110α, p-Akt, mTOR tai PTEN.

Analyysi

PIK3CA

geenin monistamisen

tutkia kopioluku korjauksilla

PIK3CA

, sama paneeli 142 jäädytettyjen NSCLC kasvainnäytteestä analysoitiin fluoresenssi sivuston hybridisaatio lukien 34 kasvaimia mutaatio

PIK3CA

ja 108 tapauksessa ilman,

PIK3CA

mutaatio.

PIK3CA

vahvistus havaittiin 5

PIK3CA

mutantti näytettä (14,7%, 5/34), joka oli yleisempää keuhkojen okasolusyöpä (4/12 keuhkojen okasolusyöpä vs. 1 /12 keuhkojen adenokarsinooman,

p

= 0,042). Kuitenkin

PIK3CA

villityypin ryhmä,

PIK3CA

vahvistus havaittiin 22 (20,4%, 20/108) kasvaimia ja oli merkitsevästi yhteydessä miessukupuoli (22/90 vs. 0 /18,

p

= 0,021), nykyinen /entinen tupakoitsija (22/78 vs. 0/30,

p

= 0,001) ja okasolusyöpä patologinen tyyppi (19/52 vs. 3 /56,

p

0,0001). (Taulukko S10 ja kuvio S2 File S1) B

Association keskuudessa

PIK3CA

mutaatio,

PIK3CA

vahvistusta ja ilmaisun PI3K p110α, p-AKT, mTOR, PTEN

edelleen selvitettävä,

PIK3CA

muutoksia liittyivät toimintaan PI3K koulutusjakso. Havaitsimme, että

PIK3CA

mutaatio merkitsevästi yhteydessä korkea ilmentymisen PI3K p110α (

p

0,0001), p-Akt (

p

= 0,024) ja mTOR (

p

= 0,001) (taulukko 3). Ei kuitenkaan korrelaatioita välillä ei havaittu

PIK3CA

mutaatio ja PTEN-ilmaisun (

p

= 0,626) (taulukko 3). Lisäksi,

PIK3CA

monistus ei korreloi ilmentymisen PI3K p110α, p-AKT, mTOR, PTEN ole in

PIK3CA

mutantti eikä villityypin ryhmä (taulukko S10 File S1). Vertasimme myös

PIK3CA

monistuksella

PIK3CA

mutaatiostatus ja totesi, että on suoritettu viisi kätkeminen

PIK3CA

vahvistus yhdistettynä

PIK3CA

mutaatioita. Ei ilmeistä suhde välillä havaittiin

PIK3CA

mutaatio ja vahvistus (

p

= 0,463) (taulukko 3)

Survival tulosten mukaan

PIK3CA

geenimutaatio ja monistamisen tila

edelleen havaita ennustetekijöiden arvo

PIK3CA

geenimutaatio ja vahvistus samassa paneelissa 142 tapausta. Selvittääkseen hoitojen vaikutti yli (OS) ja toistuminen-elinaika (RFS), vertasimme OS ja RFS potilaiden välillä ja ilman adjuvanttihoitoa löytäminen ei ole merkittävää eroa kahden ryhmän ei OS eikä RFS (Kuva S3A- S3B File S1). Sen selvittämiseksi, onko potilaalla on

PIK3CA /EGFR

co-mutaatiot voisivat hyötyä

EGFR

tyrosiinikinaasiestäjä, myös tutkineet adjuvanttihoito 34

PIK3CA

mutantti tapauksissa. Näiden, 2 potilasta, joilla L858R ja 746-poistetaan erikseen, käsiteltiin gefitinibin jälkeen. Osittainen vaste saatiin molemmat kahden potilaan

yli (OS) kokonaisille kohortin 12,0 kuukauden mediaani seuranta-aika 12,2 kuukautta. Ei ollut mitään merkittävää eroa mediaani välillä

PIK3CA

mutantti ryhmä ja

PIK3CA

villityypin ryhmä (

p

= 0,442; Kuva 3A). Kuitenkin, kun

PIK3CA

mutantti potilasta alaluok- single

PIK3CA

mutaation tai

PIK3CA

–

EGFR /KRAS

co-mutaatio, selviytymisen joilla oli yhden

PIK3CA

mutaatio oli lyhyempi kuin potilailla, joiden

PIK3CA

–

EGFR /KRAS

co-mutaation tai

PIK3CA

villityypin ryhmä (

p

= 0,004; Kuva 3B).

Kokonaiselossaoloaika käyrät potilaille: tai ilman

PIK3CA

mutaatio (A); yhdellä

PIK3CA

mutaatio, rinnakkaiselo

PIK3CA

ja muut geenimutaatio, ja ne,

PIK3CA

villin tyypin ryhmä (B); tai ilman

PIK3CA

mutaatio

EGFR /KRAS

villin tyypin ryhmä (C); jossa

PIK3CA

eksonissa 9 tai eksonissa 20 (D).

On hyvin tunnettu, että

EGFR

mutaatio liittyy yleensä suhteellisen hyvä ennuste kun taas

KRAS

mutaation osoitettiin liittyvän huono tulos, jättäen määräämättömäksi ennustetekijöitä alaryhmä varten

EGFR /KRAS

villityypin potilaille. Siksi olemme edelleen tutkineet ennustetekijöiden rooli

PIK3CA

mutaatioita

EGFR /KRAS

villityyppiin pienisoluista keuhkosyöpää. Löysimme huomattavasti elinajan potilailla, joilla

PIK3CA

mutaatioita (

p

= 0,043; Kuva 3C). Sitä paitsi, kun

PIK3CA

mutantti potilasta jaettiin E9 (

PIK3CA

eksonissa 9) ja E20 (

PIK3CA

eksonissa 20) ryhmä, suuntaus havaittiin että potilas E20 ryhmässä elivät pidempään kuin E9 ryhmässä (

p

= 0,080; Kuva 3D).

mediaani toistuminen-elinaika (RFS) oli 15,5 kuukautta potilailla, joilla

PIK3CA

mutaatio ja 23,3 kuukautta potilailla, joilla ei

PIK3CA

mutaatioita (

p

= 0,138, kuvio 4A). Kuten mediaani, joilla oli yhden

PIK3CA

mutaatio oli lyhyempi RFS kuin potilailla, joiden

PIK3CA

–

EGFR /KRAS

co-mutaatio (

p

= 0,014, kuvio 4B). Merkittävä ero RFS löydettiin myös tapausten välillä ja ilman

PIK3CA

mutaatio

EGFR /KRAS

villityyppisen alaryhmä (

p

= 0,046; kuvio 4C). Potilaat E20 ryhmässä oli pitempi RFS kuin E9 ryhmässä (

p

= 0,003; Kuva 4D).

PIK3CA

vahvistusta ei liittynyt kokonaiselinaikaa (

p

= 0,491; Kuva S4A File S1) tai toistumisen-elinaika (

p

= 0,884; Kuva S4b vuonna File S1). Olemme edelleen suorittaa Monimuuttuja-analyysissä (Coxin suhteellisen vaarat) kanssa

PIK3CA

mutaatiostatus, histologinen alatyyppi, ikä, sukupuoli, kasvaimen vaiheessa kasvaimen muuttuvina, eikä löytänyt itsenäisesti ennustetekijöiden arvo

PIK3CA

mutaatio näihin tekijöihin.

uusiutuminen elinaika käyrät potilaille: tai ilman

PIK3CA

mutaatio (A); yhdellä

PIK3CA

mutaatio, rinnakkaiselo

PIK3CA

ja muut geenimutaatio, ja ne,

PIK3CA

villin tyypin ryhmä (B). tai ilman

PIK3CA

mutaatio

EGFR /KRAS

villin tyypin ryhmä (C); jossa

PIK3CA

eksonissa 9 tai eksonissa 20 (D).

Keskustelu

Tutkimuksessamme selvitimme ilmaus proteiinien PI3K koulutusjakso, molekyyli- muutos

PIK3CA

ja sen vaikutusta eloonjäämiseen potilailla, joilla on NSCLC. Parhaan tietomme mukaan tämä on suurin kohortti useiden analyysi

PIK3CA

geenin muutos ja aktiivisuutta PI3K koulutusjakson ja löysimme negatiivinen ennustetekijöiden vaikutus single

PIK3CA

mutaatio NSCLC. Tutkimuksemme osoitti usein päällekkäisiä

PIK3CA

ja

EGFR /KRAS

mutaatioita ja osoittivat huono ennusteen arvioinnissa on

PIK3CA

mutaatio

EGFR /KRAS

villityyppisen potilailla.

taajuus

PIK3CA

mutaatio, joka määritetään suoralla sekvensoinnilla oli 3,9% keuhkojen okasolusyöpä ja 2,7% adenokarsinooma, joka on verrattavissa arvoon 2,9% ja 2,5 % aiemmassa raportissa, jossa tutkittiin pieni määrä japani potilaita [21]. Mielenkiintoista on, että toisin kuin

PIK3CA

–

KRAS

co-mutaatio, joka on yleisempää länsimaissa [28], puolet

PIK3CA

mutantti potilasta tutkimuksessamme oli samanaikainen

EGFR

mutaatioita. Tämä voi johtua suurempi esiintyvyys

EGFR

mutaatioita keuhkosyöpäpotilaita idästä kuin

KRAS

mutaatioita [17], [29]. Vaikka PI3K voisi aktivoida reseptorikinaasit ja Ras, joka puolestaan ​​aktivoituu p-Akt, PI3K /Akt-reitin ja

EGFR

signalointireittien vuorovaikutuksessa tiiviisti, PI3K signalointi saattaa olla muita aktivaattoreita ja loppupään tavoitteet [11 ], [30]. Meidän havainnot rinnakkaiselo

PIK3CA

ja muita geenimutaatioita sisällä

EGFR

signalointipolkujen ovat yhdenmukaisia ​​näiden havaintojen.

yhdenmukaisia ​​aiempien tutkimusten korkea ilmentymä PI3K p110α, p -Akt, mTOR ja menetys PTEN havaittiin 79,4%, 52,9%, 73,5%, 23,5% ja

PIK3CA

mutantti ryhmässä ja 38,9%, 31,5%, 41,7%, 27,8% ja

PIK3CA

villityypin ryhmä [20], [26], [27], [31], [32]. Havaitsimme, että läsnä

PIK3CA

mutaatio liittyy korkea ekspressio PI3K p110α, p-Akt, mTOR NSCLC, samanlaisia ​​tuloksia munasarjojen selvää cell carcinoma [31]. Kuitenkin, yksi viimeaikainen tutkimus on paksusuolen ja peräsuolen syövän raportoitiin

PIK3CA

mutaatio ei mukaisesti ilmentymisen PI3K p110α proteiinia, joka osoittaa, että

PIK3CA

mutaatioita ei ehkä ainutlaatuinen syy johtaa suureen ilmentymisen PI3K p110α ja voisi olla erilaisia ​​rooleja aktiivisuuteen PI3K väylän eri tyyppiä karsinoomien [26]. Olemme myös osoittaneet, että PI3K p110α ilmentyminen korreloi positiivisesti ilmentymisen p-Akt ja mTOR, kun taas p-Akt ilmentyvän myös korreloi positiivisesti mTOR ilme sekä

PIK3CA

mutantti ryhmä ja

PIK3CA

villityypin ryhmä. Nämä tulokset on helppo ymmärtää, koska se

PIK3CA

aktivoi p-Akt, ja säätelee positiivisesti mTOR [27], [31]. Tekemässä tutkimuksessa Marsit et al. ehdotti, että sääntely PTEN ei aina geneettisellä tasolla vaan myös saattaa esiintyä transkription tai translaation tasolla, mikä saattaa myös selittää rajoitetun korrelaatio PTEN menetys ja

PIK3CA

mutaatio havaittiin [12]. Myöhemmät yhdistys analyysi osoitti, että

PIK3CA

mutantti kasvainten korkea ilmentymä PI3K p110α olivat todennäköisemmin vaiheen II-IV sairaus verrattuna tuumoreihin korkea PI3K p110α ilme. Ilmentyminen PI3K p110α havaittiin myös korreloivan primaarinen ja metastaattinen vaurioita, mikä viittaa siihen, että PI3K p110α saattaa olla mukana kasvaimen etenemisen ja etäpesäkkeiden [25], [26]. Tarkkaa molekyylitason mekanismia vielä ansaitsee lisätutkimuksia.

laajentaa ymmärrystämme mekanismin alla aktivointi PI3K koulutusjakso, tutkimme korrelaatio

PIK3CA

vahvistusta ja kliinis muuttujia sama järjestysnumero on NSCLC potilaat. Samanlainen aiemmissa tutkimuksissa, huomasimme, että

PIK3CA

monistus merkitsevästi yhteydessä tupakoinnin historiaa ja histologinen tyyppi, joka oli yleisempää tupakoitsijoilla verrattuna tupakoimattomia ja levyepiteelikarsinoomien verrattuna adenokarsinooman