Krooninen sairaus

tiivistelmä

Polysaccharopeptide (PSP), alkaen

Coriolus versicolor

, on käytetty laajasti apuaineena kemoterapian kanssa osoittivat anti-kasvain ja leveä immunomoduloivia vaikutuksia. Vaikka PSP: n toimintamekanismi on edelleen tuntematon, sen parannettu immunomodulaarisia potentiaali arabikumi on erittäin kiinnostava. Akaasiakumi, joka sisältää myös polysakkaridien ja glykoproteiinien, on osoitettu olevan immuniteettia. Selvittämään onko PSP suoraan aktivoi T-solusta riippuvaisen B-soluvasteita

in vivo

käytimme vakiintunut hapteenikantaja- järjestelmä (nitrofenyyli-kana gammaglobuliinia (NP-CGG)). 6 viikon C57BL /6-uroshiiriä immunisoitiin 50 ug: NP

25-CGG alunalla saostuu intraperitoneaalisesti. Hiiriä letkulla päivittäin 50 mg /kg PSP ajoneuvoon, joka sisältää arabikumia ja tapettiin päivinä 0, 4, 7, 10, 14 ja 21. ELISA käytettiin mittaamaan koko ja suhteellinen hapteeni-spesifisten anti-NP IgA, IgM ja IgG vasta-aineiden pitoisuus verrattuna kontrolleihin. Todettiin, että PSP yhdistettynä arabikumi, lisäsi merkittävästi kokonais-IgG-vasta-aineiden pitoisuus päivänä 4 (P 0,05), väheni IgM vasta-aineiden pitoisuus vuorokausina 4 ja 21 (P 0,05) ilman muutoksia havaittu IgA tai IgE-tiitterin tasot missä tahansa ajankohtina mitattiin. Tuloksemme viittaavat siihen, että vaikka PSP yhdistettynä akaasiakumi näyttää aiheuttavan heikkoja immunologisia vaikutuksia erityisillä T-solusta riippuvaisen B-soluvasteita, ne ovat todennäköisesti laaja ja epäspesifisiä joka tukee kirjallisuudessa PSP. Me raportoimme ensimmäistä kertaa sovellettaessa vakiintunut hapteeni-kantaja, jota voidaan käyttää kuvaamaan ja hahmotella tiettyjä T-solusta riippuvaisen B-soluvasteita mahdollisten immunomoduloivien glykoproteiinin perustuvaa rohdosvalmisteita yhdistelmiä

in vivo

.

Citation: Sekhon BK, Roubin RH, Li Y, Devi PB, Nammi S, Tuuletin K, et al. (2016) arviointi Selected Immunomodulatorisia Glykoproteiineja lisänä syövän immunoterapia. PLoS ONE 11 (1): e0146881. doi: 10,1371 /journal.pone.0146881

Editor: Valerie A. Ferro, Strathclyden yliopisto, Yhdistynyt Kuningaskunta

vastaanotettu: 12 elokuu 2015; Hyväksytty: 24 joulukuu 2015; Julkaistu: 22 tammikuu 2016

Copyright: © 2016 Sekhon et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin.

Rahoitus: Tätä työtä tukivat Cancer Institute NSW: DMS; National Institute of Täydentävä Lääkkeet. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

kiertää immuuni tuhoutuminen on katsottu nousevana tunnusmerkki syövän [1]. Erityisesti, ei ole vahva syöpäantigeenejä menetys MHC-luokan I tai stimuloivia ja tai kostimuloivia molekyylejä voi johtaa epäonnistumiseen T-solujen tunnistus, antigeenin esittelyä ja kasvaimen poistamiseen [2,3]. Sivuvaikutuksia solunsalpaajahoidon paikkoja lisärasitusta isännän kykyä nostattaa tehokasta immuunivastetta antigeenejä ja vaarantunut immuunijärjestelmä on siksi altis potentiaalisesti hengenvaarallisia infektioita [4]. Yrityksiä kohdistaminen ja edistää tukahdutetaan isännän immuunivaste tällaista hyökkäysten on herättänyt sekoitettu menestystä toimituksen tehokkaan hoitoja. Vaikka eri immunoterapeuttisia lähestymistapoja kuten dendriittisolujen rokotus hallussaan alhainen myrkyllisyys, valitettavasti ne harvoin ylittävät objektiivisen kliinisen tuumorivasteita 15% [5]. Therapies kuten kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä (TIL) protokollat ​​on hiljattain arvioitu yhdistetyssä analyysissä raportointi 20% täydellinen hoitovaste jossa on 70% kokonaisuudessaan objektiivinen hoitovaste, jos potilaalla on melanooma [6]. Sytokiini hoitoja, erityisesti systeemisesti IL-12 on liittynyt vakavia haittavaikutuksia ja erittäin kapea terapeuttinen indeksi [7]. Harvat näitä kliinisiä tutkimuksia annettaessa IL-12 syöpäpotilailla ovat osoittaneet rohkaisevia tuloksia [7]. Kuitenkin immunoterapia muiden interleukiinit kuten suuren annoksen IL-2 on edelleen olla tehokas hoito viimeisten 20 vuoden metastasoituneen munuaissolukarsinooman, annetaan hyvin dokumentoitu täydellinen kestävä vasteita 10-15% valitse potilaista [8] . Vasta-aineen välittämä hoitojen, kuten kehitystä monoklonaalisia vasta-aineita on käytetty menestyksekkäästi kohdistaa eri reseptoreihin, mukaan lukien VEGF, EGFR, Her-2 kohdistaa erilaisia ​​vaikutuksia eri syöpiä johtaa pitkittyneeseen eloonjäämiseen [9]. Erityisesti kehitystä täysin humanisoidun IgG1 monoklonaalinen vasta-aine ipilimumab kohdistettu sytotoksinen T-lymfosyyttiantigeeniä 4 (CTLA-4) pinnalla auttaja-T-solut estäen siten kehittämiseen immuunijärjestelmän toleranssi. Ipilimumab on hyväksynyt FDA hoitoon melanooman [10]. Viime aikoina löytö MDX-1106 (nivolumab), täysin humanisoitu IgG4 tarkastuspiste-estäjä tavoitteet ohjelmoidun kuoleman 1 (PD-1) kohdistaa immunosuppressiivisia vaikutuksia T-soluihin estää toleranssi. Vaiheet I ja II tutkimuksia on suoritettu erilaisia ​​syöpiä, jotka osoittavat tavoite tuumorivasteita ja parantaa eloonjäämisaste kehittynyt melanooma potilaiden [11]. Tuloksena nivolumab on hyväksynyt FDA hoitoon potilaille, joilla on leikattavissa tai metastaattinen melanooma, jotka eivät enää reagoi muihin lääkkeisiin, ja metastasoituneen levyepiteelikarsinooma ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC), jossa eteneminen tai sen jälkeen Platinapohjaisen kemoterapiaa. Tavoitteena on kehittää ja yhdistellä erilaisia ​​hoitostrategioita yhdessä, jotka tarjoavat laajan kirjon vaikutuksia mahdollisesti vähemmän myrkyllisyys minimoiden vastus, mikä parantaa hoitotuloksia niille, joilla on syöpä. Talidomidi on yksi tällainen lääke käytetään tehokasta hallintaa multippelimyeloomaa jolla monimutkainen mutta monitahoinen vaikutuksia, kuten voimakas sytotoksinen ja immunomodulaarisia toimintaa [12]. Erityisesti, talidomidi on kyky stimuloida ennusteen mukaan merkittäviä sytotoksisia T-solujen vasteita potilailla, joilla on multippeli myelooma [13] ja Waldenström makroglobulinemian [14].

Lukuisat ravitsemukselliset toimia ovat osoittaneet potentiaalia moduloimiseksi dsyregulated immuunivastetta. Erityisesti sieni johdannaiset on hyvin tutkittu ja tiedetään olevan immuuni-stimuloiva vaikutus, mutta selvää näyttöä niiden kyvystä lisätä immunologisia vasteita antigeenejä on hiljalleen kasvaa [15]. Proteiiniin sitoutunut polysakkaridit tai polysaccharopeptides (PSP), ovat luokan yhdisteitä löytyy runsaasti tiettyjä sieniä ja on laajalti käytetty biologisen vasteen muuntajia (BRM) Itä-Aasiassa [16]. PSP johdettu

Coriolus versicolor

on raportoitu parantaa immuunijärjestelmää ja olla voimakas immunomodulaattori syöpiä vastaan ​​ja infektioita [17-19]. Immunostimuloivat vaikutukset PSP ovat korkeus pro-inflammatoristen sytokiinien, kuten interferoni γ (IFN-γ), interleukiinit kuten IL-2; luonnollisten tappajasolujen (NK-solujen) aktiivisuutta, komplementin aktivoituminen (C3), ja T-solujen proliferaatiota [20]. Mikä tärkeintä, olemme aiemmin raportoitu, että PSP ylössäätelee prosenttiosuus monosyyttien mutta ei muuttanut T-solualaryhmiä, NK-solut tai B-solujen [21]. Erityisesti emme löytäneet merkittäviä eroja CD4 /8-suhde jälkeen PSP hoidon [21]. Tämä havainto tukee kliiniset tutkimukset ovat raportoineet mitään merkittäviä muutoksia CD4 /8-suhde jälkeen PSP hoidon [22,23]. Vaikka meidän edellinen tutkimus PSP tehtiin in vitro, se ei ottanut huomioon kysymykset hyötyosuuden tai sen vaikutuksista maksaan aineenvaihduntaan. On todennäköistä, että negatiiviset T-solujen tulokset voivat johtua puuttuessa täysin ehjä immuuni kolmikko DC, T- ja B-soluissa. Vahvistava tutkimus, jossa käytettiin eläinten vuoksi on tärkeää, ja tämän tutkimuksen kohde.

T-solusta riippuvaisen B-solujen vasta-ainevasteita, antigeenin tarttunut DC tai makrofagit esitetään naiivien T-auttajasolujen jossa sukulais vuorovaikutusta B-solut voivat esiintyä. B-solujen, joilla on sama spesifisyys kuin erityisesti T-solujen engulfs ja sulattaa antigeenin ja näyttää antigeenifragmentit sidottu sen ainutlaatuinen MHC II molekyylien pinnalla edelleen esitys. Kypsä matching T-solujen vuorovaikutuksessa B-solu- ja erittää sytokiineja, joka johtaa solujen jakautumisen B-solujen ja vasta-aineiden tuotantoa. Tämä prosessi voi johtaa tuotannon muisti B-soluissa (kuvio 1).

Mielenkiintoista, paljon tietoja (mukaan lukien omat) ehdottaa täydentämistä sytokiinimäärien ja immunologisten alaryhmiä myönnettyjä PSP: n non erityinen mutta laaja-alaisia ​​toimia. Olipa PSP kiinnostavuus T-solusta riippuvaisen B-solujen vasta-ainevasteita, tai T-soluista riippumattomia B-solujen vasta-vasteita ei ole selvitetty osittain puutteen vuoksi asianmukaisia ​​määrityksiä kuten eläinmalleissa. Yritys arvioida adjuvanttia vaikutuksia rokotuksen glykoproteiinin-pohjainen rohdosvalmisteita on immuunivastetta potentiaali (erityisesti

Astragalus

ja maksupalveluntarjoajat välillä

Coriolus versicolor

) pariksi KLH ole tehty [24,25] . Vaikka tämä tutkimus pystyi osoittamaan merkittäviä adjuvanttivaikutukset näiden kasviperäisten lääkkeiden, KLH mallien esittää useita rajoituksia. Ensinnäkin B-soluvasteen kompleksi KLH-proteiini on polyklonaalinen vaste suhteessa laajan valikoiman antigeenisiä epitooppeja päätöksen tekoa spesifisten vasteiden, kuten T-solusta riippuvaisen B-soluvasteita mahdotonta. Toiseksi tämä T-solusta riippuvaisen B-soluvasteen KLH malli ulottuu voimassaoloajan jatkamista tekee vaikeaksi erottaa toisistaan ​​suorat ja epäsuorat vaikutukset. Adjuvantti vaikutukset rokoteta kanssa glykoproteiinin-pohjainen rohdosvalmisteita Tässä KLH tutkimuksessa ovat todennäköisesti laaja ja epäspesifinen. Siksi NP-CGG malli käsitellään sekä näiden rajoitusten KLH mallin voida määrittää suora ja erityinen T-solusta riippuvaisen B-solujen adjuvanttivaikutukset immunomodulanttilääkitys kasviperäisten lääkkeiden yhdistettynä immuunivahvistavia aineita. Jotta voidaan maksimoida pernan immuunivasteen, NP-CGG annettiin kautta i.p. reitti. Koska tämä on mekanistinen tutkimus vahvistaa immuniteetin, ei ole mahdollinen kliininen hakemuksen NP-CGG mallin kautta i.p. reitti itse. Mittaamalla erityinen anti-NP vasteet eri ajankohtina, synkronoitu T-solusta riippuvaisen B-solu- vaste voidaan tiivistää huomattavasti.

Tässä raportoidaan ensimmäistä kertaa sovellettaessa vakiintunut hapteenin -carrier järjestelmä NP-CGG kuvata ja rajata spesifisten T-solusta riippuvaisen B-solujen immunologisia vasteita, kun läsnä PSP, yleisesti käytetty adjuvanttia syövän immunoterapiassa. T-solusta riippuvaisen B-solujen vasta-ainevasteita erityisesti on valtava potentiaali suomaan adaptiivisen immuniteetin syöpäantigeenejä (lisääntynyt aviditeetti) [26-28]. Siksi PSP: n kykyä käyttää T-solujen riippuvaisia ​​vasteita

in vivo

vuoksi on erittäin toivottavaa ja on tutkittu tässä tutkimuksessa.

arveltu, että NP-CGG malli, PSP kykenee sen immunologisen vaihtoehtojen vaikutuksia T-solusta riippuvaisen B-solujen vuorovaikutuksia muuttamalla myöhemmin immunoglobuliini (Ig) isotyyppi luokasta sekä määrä Ig eläimillä aluksi riitauttanut NP-CGG ja myöhemmin annetaan PSP.

Vaikka on hyvin todettu, että tässä mallissa piikin vasta-aineen spesifisten luokkien tapahtuu tiettyyn aikaan pistettä (IgM = päivä 10, IgG = päivä 14, IgA = päivä 18 [29]), mitä tahansa augmentation by PSP voidaan helposti määrittää. Aiemmin on osoitettu, että ensisijainen vasteita NP, on olemassa alkuviiveen vaihe 3-4 päivää T-solun esikäsittely [30]. Sitten NP-erityinen B-solut rekrytoidaan pernan vasta-ainevasteita, aktivoitu ja kasvaa eksponentiaalisesti. Nämä B-solukloonien sitten joko kehittyä lyhytaikainen plasmablasts in extrafollicular pesäkkeitä, tai kulkeutuvat munarakkuloita jossa ne muodostavat germinaalikeskuksen pitkäikäisen plasman soluja. Eivät ainoastaan ​​elinkaarta plasman solujen näistä kahdesta lähteestä ovat erilaiset, itukeskuksen johdettuja plasma-soluja on havaittu olevan paljon suurempi affiniteetit kohti spesifistä immunogeeniä [30]. Tämä parannettu antigeeni-vasta sokaiseva on tärkeä rooli tehokkaan B-solujen efektoritoimintoja, ja näin kliinisesti merkittävää vaikutusta. Tavoitteena oli selvittää vasta-aineen vasteet eri aikapisteissä ja arvioida luokan immunoglobuliinin ne tuottivat. Tutkimuksemme avulla voimme valaista vaikutusmekanismia kliinisesti käyttökelpoinen kasviperäisten lääkeaineiden lisänä syövän hallintaan. Acacia on yleisesti tunnettu Immunovahvistajaa, jossa tutkimukset ovat osoittaneet, että akaasiakumi voi aktivoida dendriittisolut [31], antaa synnynnäisen ja adaptiivisen immuniteetin (Strobel ja Ferguson, 1982) [32] sekä aiheuttavat Antiparasiittinen vaikutukset

vuonna vivo

[33]. Lisäksi Strobel ym (1986) myöhemmin todetaan, että arabikumi voidaan käyttää indusoimaan oraalisen toleranssin mallista riippuen käytetyn [34]. Tutkimuksessamme arabikumi käytettiin immunovahvistajaa tutkia yhdessä vaikutukset PSP: määrittää, onko T-solusta riippuvaisen B-solujen vasteita parannettu verrattuna akaasiakumi yksin

Materiaalit ja menetelmät

Eläimet ja ruokavalio

5 viikkoa vanhoja C57BL /6 uros hiiret saatiin Animal Resource Centre (Canning Vale, Australia) ja ylläpidetään tietty taudinaiheuttajista vapaa laitos säteilytettyä ruokaa ja vettä mielin määrin.

Kaikki eläin menetelmät suoritettiin tiukasti mukaisesti suosituksia Laboratory animal Services vakiotoimintamenettelyt ja politiikoissa University of Sydney. Protokolla hyväksyttiin eläinten eettisen komitean yliopiston Sydney (Hyväksyntä nro: L24 /2-2007 /1/4484). Katso virtauskaavio kuvassa 2. Kaikki Hiiriä seurattiin säännöllisesti ja varsinkin sen jälkeen gavaging ja vastustuskyvyn haitallisia terveysvaikutuksia kysymyksiä ja hallinnoidaan sen mukaisesti. Asianmukaiset menetelmät eutanasia tehtiin.

5 viikkoa vanha Hiirten annettiin mukautua viikon, immunisoitu NP

25-CGG 6 viikon, ryhmää hiiriä sitten letkulla päivittäin PSP, ACACIA tai MQ enintään 21 päivää ja tapettiin eri ajankohtina (päivinä 0, 4, 7, 10, 14 ja 21).

Rokotukset ja antigeenin

4-hydroksi 3-nitrofenyyliasetyyli (NP) konjugoituna kanan γ globuliinia (CGG) (NP

25-CGG, Biosearch Technologies, Novato, CA) saostettiin aluna [35]. 6 viikkoa vanhat hiiret immunisoitiin 50 ug alunaa sakka (200 ui PBS: ssä) injektoitiin i.p. lähtötilanteessa (päivä 0) ja sen jälkeen jaetaan 4 ryhmään: NPCGG = ei letkulla ohjaus tai käsittelemätön kontrolli, MQ = MQ vesikulkuneuvo ohjaus, ACACIA = arabikumi, PSP = PSP käsitelty

PSP ja seerumin keräys

Polysaccharopeptide (PSP) johdettu Kiinan

Cov-1

-kannan

Coriolus versicolor

(Winsor Health Products Ltd, Hong Kong) saatiin ja kuvattu aiemmin [21]. PSP suspendoitiin 5%: steriloitu akaasiakumin MQ vedessä (Sigma, St. Louis, MO, USA) lopulliseen konsentraatioon 5 mg /ml. 50 mg /kg (200 ui) PSP annettiin päivittäin hiirille hoitoryhmässä oraalisella letkuruokinnalla (PSP) ja lopetettiin 21 päivää. Koska arabikumi oli immunomodulaarisia potentiaali perustason tutkimuksessa PSP annettiin yhdessä akaasiakumi. Mahdolliset immunomodulaarisia vaikutukset PSP odottaisi olevan suurempi kuin akaasiakumi. Loput hiiret olivat valvontaa ja annettiin arabikumia (ACACIA), MQ vesi (MQ), tai ei letkulla (NP-CGG). PSP ei hiirille MQ ryhmässä.

ryhmät 6 hiiret uhrattiin peräkkäin lähtötilanteessa (päivä 0); 4, 7, 10, 14 ja 21 päivää immunisaation jälkeen. PSP ja ACACIA käsitellyistä hiiristä tapettiin päivinä 4, 7, 10, 14 ja 21; ottaa huomioon, että MQ ja NP-CGG käsitellyistä hiiristä tapettiin päivinä 10 ja 21. Seerumi kerättiin kaikki nämä ajankohtina.

konjugointi NP sukkinimidiesteriä proteiinikantajiin

Käyttäen menetelmää Lalor [36] sukkinimidi esterin NP (4-hydroksi-5-jodi-3-nitrofenyyli) kaproaatti-O-sukkiini-imidi (NIP-OSu) (Biosearch Technologies, Novato, CA, USA) konjugoitiin naudan seerumin albumiinia (BSA; Sigma), jolloin saatiin noin korvaaminen suhde NP

2-BSA ja NP

18-BSA vastaavasti.

Detection of NP-spesifisen seerumin vasta-aineen ELISA

NP-erityisiä seerumi IgM, IgG, IgA ja IgE kvantitoitiin ELISA eri ajankohtina. Sen määrittämiseksi, onko PSP pystyi tehostavan pääasiassa varhaisen IgM-vasta-vaste NP-CGG, että piikit päivänä 10, mittasimme seerumin hiirille 0, 4, 7, 10, 14 ja 21 päivää immunisaation jälkeen. Samoin muutosten arvioimiseksi IgA vasteita NP-CGG, joka on huipussaan päivän 18, mittasimme seerumin vasta-aineiden pitoisuus hiirien 0, 10, 14 ja 21 päivää immunisaation jälkeen. Sen tutkimiseksi, PSP on potentiaalia lisätä mitään pitkän aikavälin immunologisia vasteita, jotka tapahtuvat postitse 14 päivän immunisaation, mittasimme suurella affiniteetilla ja kokonais-lgG-vasta-vasteita NP-CGG suoralla ELISA käyttämällä NP

2-BSA ja NP

18-BSA vastaavasti kuin päällysteen proteiinia. Seerumi määritettiin 0, 4, 7, 10, 14 ja 21 päivää immunisaation NP

25-CGG. Sulkea pois mahdolliset tulehdus- tai allergisia vasteita, jotka ovat tapahtuneet vastauksena annetaan PSP pitkäksi aikaa, mittasimme IgE-tiitterin rajoissa 7 vuorokautta immunisaation. Lyhyesti 96-kuoppaisia ​​levyjä päällystettiin joko 100 ui 5 ug /ml NP

2-BSA tai NP

18-BSA: ta 0,5 M karbonaattipuskurissa (pH 9,6) 4 ° C: ssa yön yli ja estettiin 1% BSA PBS: ssä. Neljän pesun jälkeen PBS: llä, joka sisälsi 0,05% Tween 20: tä (Santa Cruz Biotechnology, CA, USA), sarjoittain laimennettuja seerumi- näytteitä lisättiin kuhunkin kuoppaan kahtena kappaleena, ja inkuboitiin 1 tunnin ajan 37 ° C: ssa kostutetussa laatikossa. Pesun jälkeen biotiini-konjugoitu vuohen anti-hiiri-IgM, IgG, IgA (Caltag Laboratories) tai IgE (Southern Biotech) laimennoksia, jotka olivat välillä 1: 3000-1: 10000, ja inkuboitiin 1 tunnin ajan 37 ° C: ssa kostutetussa laatikossa . SA-HRP-aktiivisuus visualisoitiin käyttäen O-fenyleenidiamiini (OPD; Sigma). Kehittämisen jälkeen värillinen reaktio pysäytettiin 50 ui 20% H

2SO

4 ja optiset tiheydet määritettiin 492 nm käyttäen Polarstar levynlukijaa (BMG Labtech, Australia). Positiiviset kontrolliseerumit olivat mukana siten, että standardi kalibrointikäyrät määrittämiseksi suhteellisen vasta-ainetitteri voidaan tuottaa.

Tilastollinen

Tilastolliset analyysit tehtiin käyttäen ei-parametriset Kruskall-Wallis tai

post-hoc

Mann-Whitney-testit tarvittaessa. Tilastollinen merkitsevyys saavutettiin, kun p 0,05 verrattuna kontrolliryhmiin.

Tulokset

Acacia ja PSP ei ole vaikutusta kehon ja pernan painot

PSP ja Acacia ovat molemmat tiedetään olevan immunovahvistajat, se on todennäköistä, että mikä tahansa tehostettu immuunivasteita aiheuttamia näiden aineiden NP-CGG malli esiintyy todennäköisesti pernassa ja heijastuvat muutokset pernan painon. Kehon paino arvioitiin myös vastaamaan muutoksia pernan paino ja sulkea pois mitään haittavaikutuksia PSP ja Acacia jotka saattavat päinvastoin nähtävä lasku kehon painoja. Emme löytäneet mitään merkittävää vaihtelua painon hiirten ennen tai sen aikana immunisaation (taulukko 1). Ei ollut myöskään mitään merkittävää vaihtelua painon hiirten ryhmien välillä tai eri ajankohtina paitsi päivänä 21, jossa NPCGG ja MQ (P 0,05) on huomattavasti suurempi verrattuna ACACIA (taulukko 2). On lisääntymässä pernan painon nähtynä päivää 7-14 Acacia ryhmässä, vaikka tämä lisäys ei ollut tilastollisesti merkitsevä. Kaiken kaikkiaan ei ole merkittävää vaihtelua pernan painon kuollessa ryhmien välillä (taulukko 3).

PSP pienenee NP-spesifinen IgM vasta-aineiden pitoisuus vuorokausina 4 ja 21

arvioitiin IgM-vasta-aineiden pitoisuus, koska ne ovat ensimmäinen vasta-aine on tuotettu B-solujen antigeeniä vastaan ​​hiirillä ja ihmisillä samanlaisia ​​ja ovat erityisen tehokkaita aktivoimaan komplementtisysteemiä. IgM vasta-aineiden pitoisuus arvioitiin kunakin ajankohtana (päivinä 4, 7, 10, 14 ja 21), jotta voidaan määrittää, onko PSP yhdistettynä Acacia voisi lisätä tunnetun IgM-tiitterin tasolle kohti NP-CGG malli. Tässä mallissa odotamme, että IgM-tiitterin taso huippuun päivänä 10. Poikkeamat kuten muutos tämä huippu tai aikaisemmin tai myöhemmin muutokset näkyvät tässä maksimi esiintyy eri ajankohtina. Mielenkiintoista löysimme merkittävä lasku seerumin NP IgM vasta-aineiden pitoisuus on hoidetuilla hiirillä PSP vuorokausina 4 ja 21 (kuvio 3B ja 3F) verrattuna käsitelty ACACIA (P 0,05). Sen sijaan, löysimme merkittävä kasvu ACACIA ryhmässä verrattuna NP-CGG kontrolliryhmän (P 0,05), päivänä 21 (kuvio 3F). MQ ryhmä osoitti lievää seerumin NP IgM vasta-aineiden pitoisuus päivänä 10, joka on selvemmin päivänä 21 (kuvio 3D ja 3F), vaikka ne eivät olleet merkitsevästi erilainen kuin muissa ryhmissä. Ei ollut merkittäviä eroja NP IgM vasta-aineiden pitoisuus on 7, 10 tai 14 vuorokautta immunisaation PSP tai ACACIA ryhmiä eikä MQ tai NP-CGG kontrolliryhmää (P 0,05) (kuvio 3C-3E).

C57BL /6-hiiret immunisoitiin NP

25CGG ja seerumi kerättiin päivinä 0, 4, 7, 10, 14 ja 21. NP-spesifisiä IgM-tiitterit mitattiin kaksinkertaisesti laimennettiin sarjassa ( 1 /40-1 /80) seeruminäytteistä ELISA. ACACIA huomattavasti NP-IgM vasteet päivänä 21 verrattuna NP-CGG yksin. Data näytetään mediaani kahdesta toisistaan ​​riippumattomasta kokeesta, jossa 5-6 hiirtä ryhmää kohti. * P 0.05.

PSP lisää NP-IgG vasta-aineiden pitoisuus päivänä 4

arvioitiin IgG tasot, koska ne noudattavat tuotantoa IgM ja IgA vaikka voimakkaampi pitkällä aikavälillä toissijainen immuuni vasteita, IgG vasta-aineiden pitoisuus arvioitiin kunakin ajankohtana (päivinä 4, 7, 10, 14 ja 21), jotta voidaan määrittää, onko PSP yhdistettynä Acacia voisi lisätä tunnetun IgG titteri tasoa kohti NP-CGG malli. Tässä mallissa odotamme, että IgG titteri taso huippuun päivänä 14. Kaikki poikkeamat kuten muutos tämä huippu tai aikaisemmin tai myöhemmin muutokset näkyvät tässä maksimi esiintyy eri ajankohtina. Olemme löytäneet merkittävä kasvu matalan affiniteetin NP-spesifisiä IgG-tiitterin tasolle käsitellyillä hiirillä PSP päivänä 4 verrattuna ACACIA (P 0,05), kuten nähdään kuviossa 4. Tämä kasvu titteri tasolla 4 päivän tapahtuu paljon aikaisemmin odotettua. Suhde ilmentymistä koko korkea affiniteetti alhaisen affiniteetin NP-spesifisen IgG-vasta-ainevaste oli merkittävä ACACIA päivänä 4 (P = 0,008) verrattuna PSP (kuvio 4). MQ ryhmä osoitti lievää kasvua NP tietyn IgG-tiitterin tasot päivänä 10, joka on selvemmin päivänä 21 (kuvio 4D ja 4F) sekä koko korkea affiniteetti ja matala affiniteetti vasteet, vaikka ne eivät olleet merkittävästi erilaiset mistään muut ryhmät.

Expression koko suuren affiniteetin ja matalan affiniteetin NP-IgG-tiitterit mitattiin kaksi kertaa laimennossarja seeruminäytteitä (1 /40-1 /80 vrk 4-1 /8000- 1/10000 päivä 10 eteenpäin) käyttäen NP

2-per BSA (NP

2) ja NP

18-per BSA (NP

18) vastaavasti ELISA. Alhaisen affiniteetin NP-spesifisiä IgG-vasta-ainevasteet ACACIA oli merkittävää päivänä 4, mutta ei muita ajankohtana (päivä 7, 10, 14 tai 21) verrattuna PSP. Suhde ilmentymistä koko on korkea affiniteetti ja matala affiniteetti NP-spesifisiä IgG-vasteet olivat merkitseviä ACACIA päivänä 4 verrattuna PSP. NP

2 lähtötilanteessa hyvin pieni (tuloksia ei ole esitetty). Data näytetään mediaani kahdesta toisistaan ​​riippumattomasta kokeesta, jossa 5-6 hiirtä ryhmää kohti. * P 0.05.

Kaiken emme löytäneet merkittäviä eroja ilmaisua koko suuren affiniteetin tai matalan affiniteetin NP-IgG seerumissa NP-CGG jollekin muulle ajankohtina tai ryhmiä (P 0,05).

PSP ei muuta NP-IgA vasta-aineiden pitoisuus

arvioitiin IgA vasta-aineiden pitoisuus, koska ne ovat ensimmäinen taso puolustus toimii neutraloiva vasta-aine antigeenejä hyökkääviä limakalvon läpi. IgA vasta-aineiden pitoisuus arvioitiin kunakin ajankohtana (päivinä 4, 7, 10, 14 ja 21), jotta voidaan määrittää, onko PSP yhdistettynä Acacia voisi lisätä tunnetun IgA tiitteri tasoa kohti NP-CGG malli. Tässä mallissa odotamme, että IgA tiitteri taso huippuun päivänä 18. Poikkeamat kuten muutos tämä huippu tai aikaisemmin tai myöhemmin muutokset näkyvät tässä maksimi esiintyy eri ajankohtina. Sellaisenaan, emme löytäneet mitään merkittäviä eroja NP-spesifisen IgA seerumin missä tahansa aikapisteessä tutkittu eikä jonkin ryhmistä (P 0,05) (kuvio 5).

Kun NP CGG immunisointi ei muutoksia IgA-vasta-ainevasteita havaittiin tahansa vaiheessa (päivä 0, 10, 14 tai 21) PSP tai ACACIA. NP IgA-tiitterit mitattiin kaksi kertaa laimennossarja (1 /50-1 /100) seeruminäytteistä ELISA. Data näytetään mediaani kahdesta toisistaan ​​riippumattomasta kokeesta 5-6 hiirtä ryhmää kohti.

PSP ei muuta NP-IgE-aineiden pitoisuus

arvioitiin IgE vasta-aineiden pitoisuus hallitsemaan onko PSP pystyy aiheuttamaan allergiaa vaikutuksia tässä mallissa, koska antigeenin sitoutuminen voi laukaista mastsolun vapauttamaan kemiallisia välittäjäaineita, kuten histamiinia, jotka aiheuttavat anti-loinen immuniteetin ja allergian. Emme löytäneet mitään merkittäviä muutoksia IgE päivinä 10, 14 tai 21 PSP hoidetussa ryhmässä verrattuna lähtötilanteeseen (NP-CGG ryhmä päivänä 0 immunisaation jälkeen) (P 0,05) kuten kuviossa 6. On epätodennäköistä, että PSP kiinnostavuus allergisia vasteita tässä mallissa.

jälkeen NP-CGG immunisaation ei muutoksia IgE-vasta-vasteet havaittiin tahansa vaiheessa (päivä 4, 7, 10, 14 tai 21) PSP NP erityisiä IgE-tiitterit mitattiin kaksi kertaa laimennossarja (1 /5-1 /20) seeruminäytteistä ELISA. Data näytetään mediaani kahdesta toisistaan ​​riippumattomasta kokeesta 5-6 hiirtä ryhmää kohti.

Keskustelu

Syöpä immuunitutkimusohjelmasta tapahtuu, kun immuunijärjestelmän tarkkailun prosessit ovat heikentynyt, johtaen täten kyvyttömyys tunnistaa oikein, kohdistamaan ja tuhota syöpäsolut, joka voi johtaa kasvaimen kasvun ja etäpesäkkeiden. Viime aikoina ”syöpä immunoediting” on käytetty kuvaamaan tätä dynaamista eliminointiprosessin, tasapainon ja paeta [37]. Vaikka immunoterapia on ääni kohdennettu lähestymistapa käsitellä ja lisätä kukin näistä prosesseista, käyttö rohdosvalmisteita tarjoaa suuren lupauksen. Polysaccharopeptides kuten PSK ja PSP johdettu sieni

Coriolus versicolor

on hyvin tutkittu ja väitettiin parantaa immuunijärjestelmää mittavasta syöpälääkkeen toimintaa, annetaan selviytymisen etu syöpäpotilailla [38]. PSK (joka tunnetaan myös krestiini) on käytetty Japanissa adjuvanttina tavanomaisen anti-syöpähoitoihin vuodesta 1977 [39].

Vastaavasti PSP on käytetty immuuni tehostajana Kiinassa ja on sovellettu 30 vuoden tutkimuksen; kuitenkin huolimatta laaja

in vitro

,

in vivo

kliinisistä tutkimuksista erityinen immunologinen toimintamekanismia ei ole vielä selvästi yksilöity. Olemme raportoi ensimmäisenä soveltaminen vakiintunut

in vivo

malli NP-CGG ja kasviperäisten lääkkeiden kanssa immuuniterapeuttista potentiaalia. Me raportoimme että PSP ei aiheuta erityisiä immunologisia vaikutuksia kautta T-solusta riippuvaisen B-soluvasteita. Tämä voidaan nähdä ilman merkittäviä muutoksia eri anti NP-immunoglobuliinit testattu lukien IgM, IgG, IgA tai IgE (kuviot 3-6). Vaikka havaitsimme tilastollisesti merkittävän laskun seerumissa IgM titteri tasolla hoidettujen hiirien PSP päivinä 4 ja 21 (kuvio 3B ja 3F) verrattuna hoidettiin ACACIA (P 0,05), nämä tulokset vaikka pieni ovat osoitus trendi. Lisäksi havaitsimme merkittävän kasvun kokonais-lgG-tiitterin tasolla hoidettujen hiirien PSP päivänä 4 verrattuna ACACIA (P 0,05) kuten kuviossa 4. Mitä tunnetun mekaniikka NP-CGG malli, IgG vasteita esiintyy todennäköisesti 14. päivänä alkaen [30], nämä varhaiset havaitut muutokset ovat pieniä, mutta odotettua alhaisempi. Vaikka PSP ei merkittävästi muuttanut IgE vasta-aineiden pitoisuus käsitellyissä hiirissä PSP (kuvio 6), on epätodennäköistä, että PSP tukee allergisia reaktioita. Tässä tutkimuksessa olemme osoittaneet johdonmukaisesti nousussa kaikissa Ig luokissa paitsi IgE, NP-CGG by PSP. Tämä on sopusoinnussa isotyypin vaihto IgM IgG. IgA vasteita pudota pois ajan mittaan odotetusti johtuen toleranssin aiheuttamasta johdonmukainen limakalvon stimulaation gavaging. PSP siis tuottaa pieniä vaikutuksia T-solusta riippuvaisen B-soluvasteita

in vivo

. On lisääntymässä pernan painon nähtynä päivää 7-14 Acacia ryhmässä paino vastaavaan painonlaskua, vaikka tämä lisäys ei ollut tilastollisesti merkitsevä. Lisäksi meillä ei havainnut merkittäviä muutoksia kehon tai pernan painon missään ryhmässä mitatun koska niihin on lisätty PSP (taulukot 2 ja 3) tai liittyviä haittavaikutuksia immunisaatio. Lisääntynyt kehon painot ryhmät olivat odotetusti.

Mielenkiintoista, vaikutukset akaasiakumi T-solujen riippuvaiset vasteet on merkitystä. Toisin kuin PSP, löysimme merkittävä kasvu IgM-tiitterin tasolle ACACIA ryhmässä verrattuna NP-CGG ryhmä (P 0,05), päivänä 21 (kuvio 3F), joka on myöhemmin kuin odotettavissa IgM huiput päivänä 10. Mielenkiintoista on, että suhde ekspression koko suuren affiniteetin ja matalan affiniteetin -NP-spesifisen IgG-vasta-ainevaste oli merkittävä ACACIA päivänä 4 (P = 0,008) verrattuna PSP (kuvio 4), tapahtuu myös aiemmin. Oli pieni mutta ei-merkitsevä nousu seerumin NP IgM ja IgG titteri tasot MQ, erityisesti 21. päivänä, joka voi johtua suurempi vaihtelu yksittäisten vastausten havaita, että tietty ryhmä (P 0,05). Lisäksi emme löytäneet merkittäviä eroja ilmaisua koko suuren affiniteetin tai pienen affiniteetin IgG seerumissa NP-CGG jollekin muulle ajankohtina tai ryhmissä (P 0,05). Vaikka nämä tulokset viittaavat siihen, että ACACIA saattaisi vaikuttaa T-solusta riippuvaisen B-soluvasteita, taitos erot ovat pieniä ja ne tulee varmistaa. Tutkimukset ovat osoittaneet, että akaasiakumi voi aktivoida dendriittisolut [31], antaa synnynnäisen ja adaptiivisen immuniteetin sekä aiheuttavat Antiparasiittinen vaikutukset

in vivo

.