Krooninen sairaus

tiivistelmä

Keuhkosyöpä on johtava syy syöpään liittyvien ihmisten kuoleman. Exploration mekanismien taustalla etäpesäke syövän kantasolujen kaltaisia ​​soluja (CSLCs) avautuu uusia mahdollisuuksia keuhkosyövän diagnosoinnissa ja hoidossa. Tässä me osoitimme, että CSLCs-on peräisin keuhkojen adenokarsinooma (LAC) soluilla erittäin invasiivinen ja muuttavat ominaisuuksia kautta ilmentävät korkeita POU5F1 ja MMP-2. Olemme havainneet, että POU5F1 säädetään suoraan MMP-2-transkription vuorovaikutuksen kautta promoottorin kanssa MMP-2. POU5F1 Knockdown in LACSLCs vähensi MMP-2-proteiinin runsauden, mikä estämällä solun invaasiota, muuttoliike ja kasvaimen kehittymisen potentiaaleja LAC soluja. Kliinisesti poikkeavasti korkea ilmauksia POU5F1 ja MMP-2 oli korreloi käänteisesti selviytymisen LAC potilaiden, ja kaksois-positiivisten POU5F1 ja MMP-2 osoitti pahin ennuste potilaan huono selviytyminen. Nämä tulokset osoittavat, että POU5F1 voi sitoutua MMP-2 promoottori hajoamista ympäröivän soluväliaineen, ja näin ollen edistää invasiivisia ja muuttavat ominaisuuksia LACSLCs. Lisäksi meidän data sekaantumaan että patologinen havaitseminen kaksinkertaisen positiivisia ilmaisuja POU5F1 ja MMP-2 ovat käyttökelpoisia ja ennustavia biologisten merkkiaineiden LAC edistää anti-etäpesäkkeitä hoidon.

Citation: Xin Yh, Bian BSJ, Yang Xj, Cui W, Cui Hj, Cui Yh, et al. (2013) POU5F1 Parantaa invasiivisuus of Cancer Stem-Like Solut keuhkoadenokarsinooma mukaan lisääntymisen merkkejä MMP-2 Expression. PLoS ONE 8 (12): e83373. doi: 10,1371 /journal.pone.0083373

Editor: Persio Dello Sbarba, Università degli Studi di Firenze, Italia

vastaanotettu: 15 heinäkuu 2013; Hyväksytty: 01 marraskuu 2013; Julkaistu: 30 joulukuu 2013

Copyright: © 2013 Xin et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat avustusta National Basic Research Program of China (973 Program, Grant No.2010CB529403), National Natural Science Foundations of China (Grant No.81272598) ja Kiina tutkijatohtori Science Foundation (Grant No.2012T50852). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Keuhkosyöpä on johtavia syitä ihmisen kuolemista maailmanlaajuisesti [1]. Huolimatta suurista edistysaskelista keuhkojen syöpähoitojen, etäpesäke ja hoidon epäonnistuminen johtaa usein toistuminen ja korkea kuolleisuus. Yksi mahdollinen syy taustalla hoidon epäonnistumiseen ja ihmisten kuoleman on läsnäolo jäljellä pahanlaatuisia soluja, jotka lopulta aiheuttavat sekundaarikasvaimia ja etäpesäkkeiden [2].

Ajan tasalla, varaamiseen todisteita on syntymässä, että pieni populaatio soluja hallussaan kasvain-aloittamaan toiminnan keuhkosyövässä ja kutsutaan nimellä ”” syöpää kantasolujen kaltaisia ​​soluja (CSLCs) ’ ”[3], [4]. Läsnäolo pienen ala- populaation CSLCs saattaisi selittää, miksi niin monet keuhkosyövässä uusiutua hoidon jälkeen leikkauksen, kemoterapian ja sädehoidon, vaikka suurin osa pahanlaatuisia soluja näyttävät tapetaan hoidon jälkeen [5], [6]. Näin ollen, on tärkeää löytää biologiset ominaisuudet ja molekyylitason mekanismeja taudin alkamisen ja etenemisen CSLCs varten kehittää uusia hoitoja. Aiemmin olemme onnistuneesti luonut

in vitro

alalla kulttuurin järjestelmä eristää ja rikastaa ”keuhkoadenokarsinooma syövän kantasoluja kaltaisia ​​soluja” (LACSLCs) ja paljasti, että POU homeobox geeniperheen transkriptiotekijä POU5F1 (tunnetaan myös Oct4) toimii avainsäätelijänä säilyttämisestä itseuudistumisen ja aiheuttavan kasvaimia LACSLCs [7].

POU5F1 tarvitaan pitämään itseuudistumisen alkion kantasolujen (ES-solut), ja edistää stemness, tuumorigeneesin ja etäpesäke CSLCs [8] – [10]. Se on äskettäin raportoitu, että POU5F1 edistää ja metastaasit joidenkin kiinteiden kasvainten lisäämällä hajoamisen ympäröivän soluväliaineen, mikä viittaa siihen, että tämä transkriptiotekijän voivat olla käyttökelpoisia potentiaalinen terapeuttinen kohde syövän ja uuden kasvaimen biologista ja prognostinen markkeri [11], [12]. Kuitenkin mekanismit poikkeavan POU5F1 ilmentymisen keuhkosyövän taustalla invaasiota ja etäpesäkkeiden säilyvät hämäräksi.

Tässä tutkimuksessa osoitimme, että POU5F1 ilmentyminen liittyi hyökkäys ja kulkeutumista LACSLCs ja tutkitaan taustalla molekyylitason mekanismeja. Kliinistä merkitystä POU5F1 ja matriisimetalloproteinaasi 2 (MMP-2) ilmaisuja potilaiden keuhkojen adenokarsinooma (LAC) tutkittiin myös.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

tutkimus tiukasti toteutettiin suositusten mukaisesti oppaasta Care ja käyttö Laboratory Animals hyväksymä Institutional Animal Care ja käyttö komitean kolmannen Military Medical University. Ihmisen ensisijainen LAC näytteet kerättiin potilaan suostumuksella. Kukin osallistuja tässä tutkimuksessa kerrottiin kirjallisen suostumuksen. Ihmisen ensisijainen LAC näytteet kerättiin ja protokollan hyväksyi Medical eettisen komitean Varsinais sairaalan kolmannen Military Medical University. Eläinten koemenettelyn tehtiin mukaisesti National Institutes of Health Sciences ja hyväksynyt Institutional Animal Care ja käyttö komitean kolmannen Military Medical University.

Soluviljely

Ihmisen ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) A549 hankittiin American Type Culture Collection (ATCC) (Rockville, MD) ja viljeltiin DMEM-alustassa, jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia (FBS), 100 U /ml penisilliiniä ja 100 U /ml streptomysiiniä (Gibco, USA) kostutetussa 37 ° C inkubaattorissa 5% CO

2 ilmakehässä. Kasvaimen pallo kasvatus suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [4], [13] – [15].

Lentivirusvektorikonstruktit shRNA, siRNA rakentaminen ja transfektio

Lentivirusvektorikonstruktit konstruktioita ja alukkeita kohdistaminen ihmisen Pou5f1 lyhyt hiusneula sekvenssit suunniteltiin ja valmistettiin Sunbio Medical Biotechnology (Shanghai, Kiina). ShRNA ilmaisu lentivirusvektoreita valmistettiin lyhytaikaisella transfektiolla ja lentiviruksen konstruktit 293T-soluja tuottamaan viruksia. Saatu lentiviruksen POU5F1-shRNA ja valvonta-shRNA käytettiin infektoimaan A549-soluja. Kontrolli-shRNA on suunnitellut mutaatio antisense-nukleotidien POU5F1 shRNA sekvenssin. Plasmidirakennelmissa kuljettaa siRNA sekvenssin kohdistaminen MMP-2 suunniteltiin ja rakennettiin aikaisemmin kuvatulla [16]. Transfektiot suoritettiin Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) valmistajan ohjeiden mukaisesti.

In vitro

haavan paranemiseen määritys

maljan solut haavoittui käyttäen 200 ui pipetin kärki kuuden kuoppaisille viljelylevyille ja inkuboitiin DMEM: ssä, jossa oli 5% tai 10% naudan sikiön seerumia läsnä ollessa tai poissa ollessa mitomysiini C (10 ug /ml). Haava leveys oli valokuvattu klo 0h, 16h ja 24h jälkeinen alusta alle faasikontrastimikroskoopissa. Siirtyminen etäisyydet mitattiin ja määrällisesti kuten aiemmin on kuvattu [12]. Tietokoneavusteisen kuvankäsittelyohjelmaasi käytettiin määrittämään solujen vaeltamiseen suhteessa ruudukkoviiva rajan.

In vitro

invaasiomääritys

Kenno invasiivisen kapasiteetti määritettiin 24 kuoppaiset muotoon TRANSWELL® lisätään 8 um huokoskoko, päällystetty Matrigelillä® (BD Biosciences, USA) kuten aiemmin on kuvattu [17]. Kasvaimen aloilla trypsinoitiin, suspendoitiin uudelleen seerumittomaan DMEM-alustassa, ja sijoitetaan yläkammiot TRANSWELL® inserttien (5 x 10

4 /kuoppa), ja DMEM-elatusainetta, joka sisälsi 10% FBS: ää lisättiin alakammioissa. Solujen annettiin tunkeutua kalvon läpi 24 h ja sen jälkeen kiinnitettiin 4% paraformaldehydillä PBS: ssä. Ei-invasiiviset solut ylähuoneissa pyyhittiin pois pumpulipuikolla ja invasiivisia solut värjättiin kristalliviolettiliuoksella. Numerot soluja, jotka olivat tunkeutuneet alapintaan inserttien laskettiin valomikroskoopin alla.

tuumorigeenisyyden analyysi

in vivo

hiiret ksenografteja, joka tarttuu A549 yksikerroksinen soluja ja kasvaimen palloja hajotettiin saamiseksi yksisoluisia suspensioita. Sama määrä soluja (5 x 10

5) laimennettiin seerumittomalla DMEM-alustassa ja injektoidaan ihonalaisesti neljän viikon ikäisiä urospuolisia nude-hiirten (

n

= 5 kpl, Center of Experimental Animals , kolmas Military Medical University, Kiina). Hiiriä seurattiin viikoittain ulkonäkö ihonalaisen kasvaimia. Lopussa 7 viikkoa, kaikki hiiret tapettiin ja kasvaimen engrafts poistettiin ja mitattiin. Kasvaimen tilavuus (TV) laskettiin käyttäen seuraavaa kaavaa: TV (mm

3) =

d

2 x

D Twitter /2, jossa d ja D edustavat lyhimmän ja pisin halkaisija, vastaavasti. Lisäksi kasvaimen kudokset kiinnitettiin formaliiniin, ja sen jälkeen suoritetaan kasvainhistologiaa ja immunohistokemiallista analysointia varten.

Kvantitatiivinen reaaliaikainen PCR (qRT-PCR) B

Kokonais-RNA uutettiin syöpäsolujen käyttämällä Trizol-reagenssia (Invitrogen, USA). qRT-PCR suoritettiin käyttäen SYBR PrimeScript RT-PCR-kittiä (TaKaRa, Japani) on Roottorin Gene 6000 reaaliaikaista geneettinen analysaattori (Corbett Life Science, USA). Alukkeet, joita käytetään PCR-monistukseen sisäisiä fragmentteja MMP-2 on lueteltu seuraavasti: 5′-CCACTGCCTTCGATACAC-3 ’(sense); 5’-GAGCCACTCTCTGGAATCTTAAA-3 ’(anti-sense). Glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH) monistettiin sisäisenä kontrollina. Kukin näyte testattiin ainakin kolmena rinnakkaisena.

Western blot-analyysi

Solulysaatit A549 yksikerrossoluissa ja kasvainten palloja valmistettiin käyttämällä RIPA puskuria proteaasinestäjien kanssa ja kvantitoitiin käyttäen BCA proteiinia määritystä (Pierce, Rockford, IL). Proteiininäytteet (20 ug) ladattiin 10% SDS-PAGE: lla ja siirrettiin PVDF-kalvoja (Millipore, USA). Immuuni- komplekseja muodostettiin inkuboimalla hiiren monoklonaalista MMP-vasta-aine (1:400; Abcam, USA), kanin polyklonaalinen POU5F1 vasta-ainetta (1:500, BD Biosciences, USA) ja kanin polyklonaalista Actin-vasta-ainetta (1:5000; Abcam, USA) 4 ° C: ssa yön yli, jonka jälkeen inkuboitiin piparjuuriperoksidaasi-konjugoidulla sekundaarisella vasta-aineet hiiren tai kaniinin IgG (1:5000; Invitrogen, USA). Immunoreaktiivinen proteiini visualisoitiin käyttäen SuperSignal West Femto Trial Kit (Pierce, Rockford, IL) vahvistetulla kemiluminesenssidetektiojärjestelmää.

Kromatiini immunosaostuksella (ChIP) B

ChIP määritys suoritettiin ChIP-IT mukainen pakkaus valmistajan protokollaa. Ultraääni leikkausolosuhteiden johti suhteellisen virkapukuinen DNA-fragmentti koon -300 bp. Jäljellä olevat menettelyt saatiin päätökseen, kuten aikaisemmin on kuvattu [7]. Genomi-DNA uutettiin sakat ja monistettiin qRT-PCR: llä. Alukeparit, jota käytetään PCR: ssä monistamaan MMP-2-promoottorin alue, joka sisältää POU5F1 sitova elementti olivat: 5′-CATGACAACAGGCTTTGGATTAG-3 ’(sense) ja 5′-AACAAACTCTTAGGCAACGAACC -3’ (anti-sense).

Immunohistokemia (IHC) B

immunohistokemiallinen värjäys kasvain kudosten ja ksenografteissa suoritettiin näytteistä käyttämällä streptavidiini-biotiini peroksidaasikompleksin (SABC) menetelmällä. Lyhyesti, ksenografti näytteet kiinnitettiin 4% paraformaldehydi 4 ° C: ssa 72 tuntia ja upotettiin parafiiniin. Parafiini leikkeitä inkuboitiin primaarisilla vasta-aineilla 4 ° C: ssa yön yli. Levyjä sitten reagoimaan biotinyloidun vuohen anti-hiiri /kani IgG ja avidiini-biotiini-kompleksin (ABC) (Beyotime, Kiina). Visualisoimiseksi vasta-aine-antigeeni monimutkainen, kromogeeni Reaktio suoritettiin diaminobentsidiinillä (DAB) ja levyt tutkittiin valomikroskoopilla. Kvantifiointiin, IPP ohjelmisto (kuva-pro plus 6,0) käytettiin analysoimaan optinen tiheys kuvien 5 random kentät 400 x suurennus. Keskimääräinen optinen tiheys (AOD), eli IOD /pinta-ala, on laskettu.

transfektio ja lusiferaasin reportterimääritys

rakentaminen ja lyhytaikaista transfektiota tulikärpäsen lusiferaasireportteriplasmidi suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [18] . Sekvenssi pGL3-MMP-2 promoottorikonstruktiin vahvistettiin (Sunbio lääketieteellisen biotekniikan, Kiina). ShRNA-Control ja shRNA-Pou5f1-tartunnan A549 LACSLCs ympättiin 24-kuoppalevyille (1 x 10

5 kuhunkin kuoppaan). 24 tunnin kuluttua solut kotransfektoitiin pGL3-MMP-2-promoottorin ja Renilla vektori (PRL-TK: Promega, USA). Solulysaatit kerättiin 48 h transfektion jälkeen ja suhteellinen lusiferaasireportteri- entsyymiaktiivisuus mitattiin käyttämällä Dual-Luciferase® Reporter Assay System (Promega, USA). Firefly lusiferaasiaktiivisuus normalisoitiin Renilla lusiferaasivaikutusta jokaisesta näytteestä.

Tissue mikrosiru (TMA) analyysi

Yhteensä 55 primaarisessa LAC saaneilla kirurginen resektio oli mukana. Kasvaimen laadut määriteltiin kriteerien mukaan Maailman terveysjärjestön. Kasvain-Node-Metastasis (pTNM) tilan kaikki LAC arvioitiin kriteerien mukaan kuudennen painoksen TNM luokittelu International Union syöpää vastaan ​​[19]. Kliinis-patologisia ominaisuuksia potilasta yhteenvetona taulukossa 1. TMA rakennettiin aikaisemmin kuvatulla tavalla [20].

Tilastollinen analyysi

Kaikki kokeet suoritettiin vähintään kolme kertaa kolmena kappaleena. Tulokset esitettiin keskiarvo ± SEM. Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttäen SPSS13.0 ohjelmistoa. Tilastollisesti merkittävä ero määritettiin yksisuuntaisella varianssianalyysillä (ANOVA), jota seurasi useita keskimääräinen vertailuja Student-Newman-Keul testi. Tilastollinen ero pidettiin merkittävinä, jos

P

-arvo oli alle 0,05.

Tulokset

LACSLCs näyttää laajasti vaeltavia ja invasiivisia kyvyt

Tutkimuksessamme loimme vakaa pallo viljelyjärjestelmästä eristämiseksi ja rikastamiseksi LACSLCs valottaa niiden biologista käyttäytymistä. Kuten kuviossa 1 on esitetty, A549-soluja, jotka viljeltiin SFM EGF ja bFGF syntyy tarttumaton, monisoluisten alalla LACSLCs (kuvio 1A), ja näiden alalla LACSLCs näkyy erittäin invasiivinen ja muuttavat ominaisuudet

in vitro

(kuvio 1 B ja C) ja

in vivo

(kuvio 1 D). Tulokset

in vitro

arpeutumisprosessit määrityksessä osoitti, että pallo LACSLCs muuttivat naarmuuntuu alueella nopeammin kuin A549 yksikerrossoluissa. Lisäksi syynä on

in vitro

Matrigel invaasiomääritys osoitti, että A549 LACSLCs näkyy suurempi invasiivisen kapasiteettia kuin A549 yksikerrossoluissa (137,5 ± 17,7 versus 49,7 ± 9,2 tunkeutuvat solua /kenttä). Lisäksi A549 LACSLCs oli korkeampi tuumorigeenisyystesti

in vivo

joka johti suurempiin tuumoriksenografteja tiiviimmän invaasio aktiivisuutta (kuvio 1 D). Kaiken kaikkiaan nämä tulokset osoittavat, että LACSLCs ovat laajasti vaeltavia ja invasiivisia

in vitro

ja

in vivo

.

(A) morfologia pallo-LACSLCs johdettu keuhkosyövän A549 linja. Edustavia kuvia valomikroskoopilla (yksikerrossoluissa 10 ×, LACSLCs 20 x) on esitetty. (B) Haavan paranemista määritys solujen migraation A549 LACSLCs ja A549 yksikerrossoluissa. Edustavat kuvat solun kulkeutumisen haavoittunut alue 0 ja 16 tuntia vamman jälkeen (

vasen paneeli

) esitetään. Kvantitatiivinen analyysi osoittaa haavan kyky vaeltavien solujen 16 tunnin vamman jälkeen (

oikea paneeli

). (C) Vertailu invasiivisen valmiudet A549 LACSLCs ja yksikerrossoluissa havaita Transvvell- määrityksessä. Edustavia kuvia hyökkäävän solujen visualisoitiin kristalliviolettia värjäytymistä (20 x) (

vasen paneeli

). Kvantitatiivinen analyysi solun valtaavat kapasiteetti 24 tunnin kuluttua kylvö (

oikea paneeli

). (D) Histologinen kuvat H 0,001). Gp0: POU5F1 (matala lauseke) ja MMP-2 (matala lauseke); GP1: POU5F1 (korkea ilmaus) tai MMP-2 (korkea lauseke); GP2: POU5F1 (korkea lauseke) ja MMP-2 (korkea lauseke).

univariate analyysi, korkea ilmauksia POU5F1 ja MMP-2 korreloivat huono tautikohtaisten selviytyminen (DSS) potilaista (

P

= 0,001,

P

= 0,073), tässä järjestyksessä. Lisäksi me ositettu potilaat kolmeen alaryhmään mukaan kaksi edellä mainittua epäsuotuisat tekijät

so.

Gp0, GP1 ja GP2. Kuten kuviossa 5C, mediaanielossaolosta oli pisin Gp0 versus lyhin yksi GP2 (eli 80,09 kuukautta varten Gp0 66,8 kuukautta GP1, 38,1 kuukautta GP2 vastaavasti (

P

0,001) (kuvio 5C). Kaplan-Meier-analyysi osoitti merkittäviä vaikutuksia prognoosi- parametrin kasvain vaiheessa (

P

= 0,013) on DSS.

keskustelu

CSLCs on aiemmin raportoitu erilaisia ​​syöpiä ja osoittautui kriittisiä rooleja syövän aloittamista, kehittämistä ja toistuminen sekä syövän terapeuttista epäonnistumiset [21] – [24]. Toistaiseksi tiedetään vähän koskien invasiivisia ja muuttavien fenotyyppien ja niiden sääntelyyn mekanismi CSLCs. tässä tutkimuksessa havaitsimme, että transkriptiotekijä POU5F1 vaadittiin LACSLCs invaasio ja muuttoliike sekä se voisi lisätä MMP-2: n ilmentymisen suoraan kohdentamalla MMP-2 promoottorin transkription aloittamiseksi. Lisäksi poikkeavasti korkea ilmauksia sekä POU5F1 ja MMP-2 korreloivat selviytymisen sairastavien potilaiden LAC.

on tunnettua, että POU domain transkriptiotekijä POU5F1 on keskeinen rooli sääntelyn pluripotenttisuuden ominaisuuksista sekä somaattisia kantasoluja ja CSLCs [8] , [25]. Viime aikoina on raportoitu, että POU5F1 indusoi CSLCs ominaisuuksia ja myötävaikuttaa kasvaimien syntyyn ja etäpesäkkeiden LAC [9]. Kuitenkin mekanismit invasiivisen ja muuttavien potentiaalit CSLCs jäävät selvittämättä. Täällä vahvisti, että LACSLCs peräisin A549-solut omaavat erittäin invasiivisia ja vaeltavia kykyjä, ja nämä solut ilmensivät runsaita tasoja POU5F1 ja MMP-2. MMP-2 ja muut jäsenet matriisin metalloproteinaasien perhe tiedetään välittävän hyökkäystä kehityksen aikana ja etäpesäkkeiden, ja pidetään myös otaksuttu kasvainmerkkiaineet kliinisiin sovelluksiin. [26] – [28]. MMP-2 hajoaa soluväliaineen ja vapauttaa tallennetaan pro-muuttavien tekijöiden liikkeen sallimiseksi solujen kudoksissa [29]. Kuitenkin MMP-inhibiittorit ovat osoittautuneet epätyydyttäviksi kliinisissä tutkimuksissa johtuen joko selektiivisyyden puutteesta MMP tai ulkonäkö merkittäviä haittavaikutuksia [16], [30]. Kohdespesifisen geenien MMP-2: n ilmentymisen tutkimus osoittaa tehoa siRNA-MMP-2 estossa LACSLCs hyökkäyksen ja muuttoliike, mikä viittaa siihen, että MMP-2 voi toimia tehokkaana adjuvanttina geenien täsmähoitoihin in LAC.

korkeat ekspressiotasot MMP: on havaittu, että virtsarakon syövän solujen yli-ilmentävät POU5F1, mikä viittaa siihen, että yli-ilmentyminen POU5F1 ylössäätelee geenien MMP [11]. Tuloksemme osoittavat, että sekä POU5F1 ja MMP-2 voi myötävaikuttaa kasvaimen aloittamista ja invaasio-etäpesäkkeiden fenotyypin keuhkosyöpään. Olemme paljasti, että proteiini MMP-2 oli merkittävästi vähentynyt LACSLCs jälkeen POU5F1 pudotus, jonka shRNA strategiaa. Lisäksi ChIP ja Lusiferaasimäärityksiä osoittivat ensimmäistä kertaa, että ehtyminen POU5F1 kanssa shRNA aiheuttaman transkription downregulation endogeenisen MMP-2-geenin ja MMP-2-promoottori-reportteri, viittaa siihen, että MMP-2 on suora transkription kohteena POU5F1 in LACSLCs . Meidän havainnot tukevat käsitystä, että tarpeelliset ja riittävät toiminnan POU5F1 suoraan aktivoivat spesifisten kohdegeenien edistämiseksi LACSLCs hyökkäyksen ja muuttoliike. On myös mahdollista, että POU5F1 voidaan torjua tiettyjen geenien, erityisesti silloin kun se voi sitoa yhteistoiminnassa muiden transkriptiotekijöiden kanssa repressioaktiivisuuteen parantaa solujen invaasiota ja muuttoliike, ja tämä saattaa selittää sen yhdessä corepressor komplekseja.

Koska patogeneesin ja biologinen käyttäytyminen eri alatyyppejä keuhkosyöpään ovat täysin erillisiä, on kiireellisesti tutkia kehittyneitä diagnostisia menetelmiä ja uusia prognoosimarkkereina eri alatyypit keuhkosyöpään parantaa tehokkuutta syövän hoidossa. Havaintomme että POU5F1 voi positiivisesti säädellä MMP-2: n ilmentymisen edistämiseksi kasvainsolun invaasiota ja migraatio LACSLCs ovat tärkeitä kliinisiä seurauksia. Vaikka emme noudata positiivinen ilme kytkös POU5F1 ja MMP-2, korkeampi ilmentyminen Jokaisen molekyylin merkitsevästi liittyy huono ennuste, joka on yhdenmukainen aiempien tutkimusten kanssa, jotka POU5F1 ja MMP-2 ilmoitettiin itsenäistyä riskitekijöitä huonon ennusteen keuhkosyövän [14], [31] – [33]. Vielä tärkeämpää on, me täällä määritellään ensimmäistä kertaa, että yhdistetyt yliekspressio näiden kahden molekyylin esitteli pahin huonon ennusteen LAC potilaista, mikä viittaa siihen, että ilmaus POU5F1 ja MMP-2 on etua syöpäsolujen ylläpitää hyökkäyksen ja muuttoliike omaisuuden LAC . Siten yhdistetty patologinen tutkimus POU5F1 ja MMP-2 IHC voidaan käyttää lisävälineenä tunnistamaan ne LAC korkean tason CSLCs tarjota ennustaa vahvasti biomarkkereiden kliinisissä hallintaan LAC potilaista.

Lopuksi todettakoon, että tutkimus osoittaa, että POU5F1 ja MMP-2 edistää kasvaimen invaasion ja muuttoliike fenotyypin LACSLCs, ja poikkeavasti korkea ilmentyminen POU5F1 voi parantaa MMP-2: n ilmentymisen suoraan kohdentamalla promoottori MMP-2. Lisäksi olemme paljastavat, että yhdistetyn yliekspressio POU5F1 ja MMP-2 korreloi huono eloonjäämistä potilailla, joilla on LAC. Tuloksemme osoittavat, että POU5F1 tarvitaan ohjaukseen soluinvaasiota ja muuttoliike suoralla MMP-2 keuhkosyövän, ja tukevat ajatusta, että POU5F1 ja MMP-2 on hyödyllinen mahdollisiksi biomarkkerit ennustetta ja uusia tavoitteita keuhkojen Caner hoitoa.

Kiitokset

Kiitämme Miss Wen-juan Fu ja Miss Qing Liu (Institute of Pathology ja Southwest Cancer Center, Southwest Hospital, kolmas Military Medical University, Chongqing, Kiina) niiden teknistä apua.