Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Viimeaikaiset raportit

Propionibacterium acnes

(

P. acnes

) viittaavat siihen, että tämä bakteeri on vallalla eturauhanen, liittyy akuutti ja krooninen eturauhasen tulehdus, ja saattaa olla rooli eturauhasen syövän syntymistä.

Methods

arvioidaan synnyssä kotimaisten bakteerin, me seulotaan bakteeria eturauhasen yksilöitä käyttämällä entsyymiä immunohistokemia romaani

P. acnes

erityinen monoklonaalinen vasta-aine (PAL vasta-aine), yhdessä anti-tumatekijä-kappa B (NF-KB) vasta-aine. Tutkimme formaliinikiinnitetyt ja parafinoidut kudosleikkeiden of eturauhasen yksilöt 28 potilaalla on eturauhassyöpä ja 18 samanikäisiin ohjaus virtsarakon syöpä, mutta ilman eturauhassyöpä.

Tulokset

Immunohistokemialliset PAL-vasta paljastui pieni pyöreä elinten joitakin ei-syöpä rauhasepiteeliin ja strooman makrofaagien useimmissa eturauhasessa. Eturauhassyöpänäytteissä oli korkeammat taajuudet joko sytoplasman

P. acnes

tai ydinaseiden NF-KB-ilmentymä rauhasepiteeliin ja Useammat strooman makrofaagien

P. acnes

kuin kontrollinäytteitä. Nämä parametrit olivat myös korkeampia reuna-alueella kuin välivyöhykkeen eturauhasen, erityisesti eturauhassyöpänäytteissä. Nuclear NF-KB ilmentyminen oli yleisempää rauhaset kanssa

P. acnes

kuin rauhaset ilman

P. acnes

. Määrä strooman makrofaagien kanssa bakteeri korreloi luokka kroonisen tulehduksen sekä PZ ja TZ alueilla ja arvosanalla akuutin tulehduksen TZ alueella.

Johtopäätökset

immunohistokemiallinen analyysi uusi monoklonaalinen vasta-aine havaitsemiseksi

P. acnes

eturauhasen ehdotti, että intraepiteliaalisten

P. acnes

infektio ei-syöpä eturauhasen rauhaset ja aiheuttamaa tulehdusta bakteeri voi edistää eturauhassyövän.

Citation: Bae Y, Ito T, Iida T, Uchida K, Sekine M, Nakajima Y, et ai. (2014) Solunsisäiset

Propionibacterium acnes

tartuntataudeilla rauhasepiteeliin ja stroomakasvaimet Makrofageilla eturauhasen tai ilman Cancer. PLoS ONE 9 (2): e90324. doi: 10,1371 /journal.pone.0090324

Editor: Robert Hurst, Oklahoma University Health Sciences Center, Yhdysvallat

vastaanotettu: 13 joulukuu 2013; Hyväksytty: 29 tammikuu 2014; Julkaistu: 28 helmikuu 2014

Copyright: © 2014 Bae et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Japan Society for Promotion of Science Grant-in-Aid tieteellisen tutkimuksen 24659402 (YE). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Eturauhassyöpä on toiseksi yleisin syöpä miehillä maailmanlaajuisesti, arviolta 900000 tapauksissa ja 258000 kuolemantapausta vuonna 2008 [1]. Vaikka useat riskitekijät eturauhasen syöpä on tunnistettu, kuten etninen alkuperä, ikä, suvussa, ja ruokavalio [2], tarkka etiologia eturauhasen syöpä on edelleen tuntematon. Useat viimeaikaiset tutkimukset osoittavat, että krooninen tulehdus on tärkeä tekijä eturauhasen syövän synnyn aiheuttamalla DNA-vaurioita, edistävät solujen liikevaihdon ja luodaan kudos mikroympäristön joka parantaa solujen lisääntymisen, muuttoliike, ja angiogeneesi [3], [4].

tulehdusvasteen, transkriptiotekijöitä kuten ydin- factor-kappaB (NF-KB) aktivoidaan sitoutuessaan kuvio tunnustamisesta reseptorit (Toll-like-reseptorien, nukleotidi-sitova oligomerointi domeenin [NOD] kaltainen reseptoreihin, ja muut ), tulehdusta edistävä sytokiini-reseptorit (tuumorinekroositekijä-α tai interleukiini [IL] -1), ja antigeenin reseptorit [5] – [8]. Vaikka NF-KB ei sovi klassisen määritelmän onkogeenin, se on voimakas aktivaattori pahanlaatuisen tilan ja säätelee ilmentymistä kohdegeenien tärkeä solujen lisääntymistä, eloonjääntiä, angiogeneesiä, ja kudosten korjaamiseen [8] – [12].

Altistuminen ympäristötekijät, kuten tartunnanaiheuttajien, ravinnon syöpää ja hormonaalinen epätasapaino, uskotaan johtavan vamman eturauhasen ja kehittäminen kroonisen tulehduksen [3]. Viimeaikaiset selvitykset osoittivat, että

Propionibacterium acnes

(

P. Acnes

) on usein havaittu eturauhasen kudosta sairastavien potilaiden eturauhastulehdus ja eturauhasen syöpä, ja että bakteeri liittyy akuutti ja krooninen eturauhasen tulehdus ja saattaa olla merkitystä eturauhasen syövän synnyn [13] – [21].

P. acnes

on gram-positiivisia, ei-itiöitä muodostava, anaerobinen bacillus löydetty pääasiassa talirauhanen-rikas ihoalueille aikuisilla [22]. Alkuperäiskansojen bakteeri eristettiin myös sidekalvon, suun, ja suoli [23]. Historiallisesti

P. acnes

luultiin olevan alhainen virulenssi, mutta hiljattain todettu aiheuttajaa eri sairauksista.

P. acnes

on varsinkin osallisena aknen [24], mutta bakteeri voi liittyä useita tulehdustiloja, kuten endokardiitti, nivel- ja keskushermoston infektiot, ja sarkoidoosi [25] – [28].

aiemmin raportoitu, että monet (71%) serotyypin I potilaista eristetyillä

P. acnes

hyökätä epiteelisolujen [29], ja intraepiteliaalisten

P. acnes

infektio aktivoi NF-KB: sekä NOD1- ja NOD2 riippuvaisella tavalla [30]. Huolimatta kertyvät näyttöä

P. acnes

infektio eturauhasen bakteeriviljelmää tai polymeraasiketjureaktio menetelmiä, on olemassa vain muutamia raportteja, joissa bakteeri sijaitsee eturauhaskudoksiin in situ immunofluoresenssilla menetelmiä polyklonaalisella vasta-aineella

P. acnes

[31] tai monivärinen fluoresenssi in situ menetelmiä kohdistaminen

P. acnes

23S rRNA [14].

Jotta voitaisiin edelleen tutkia etiologic yhdistyksen välillä

P. acnes

ja tulehdusta tai Karsinogeneesin paitsi bakteeri vaan myös histologisen ominaisuuksia eturauhasen kudosta on analysoitava identtisissä histologista osissa. Tavoitteena tässä tutkimuksessa oli paikantaa

P. acnes

eturauhaskudoksessa valomikroskoopilla entsyymi immunohistokemiallisesti. Tätä tarkoitusta varten olemme kehittäneet uuden anti-

P. acnes

monoklonaalinen vasta-aine, joka reagoi bakteerit formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut eturauhasen kudosleikkeiden. Arvioidaan synnyssä kotimaisten bakteerin kehittämiseen eturauhassyövän, tutkimme eturauhasen näytteet saatiin potilailta tai ilman eturauhassyövän immuunihistokemiallisesti uuden vasta-aineen

P. acnes

ja vasta-aineen NF-KB: n, jota käytettiin määrittämään mahdollinen korrelaatio

P. acnes

infektio ja ydin- NF-KB eturauhasessa rauhaset. Lisäksi olemme analysoineet onko

P. acnes

infektiotilanteesta liittyi eturauhassyövän riskiä.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics selvitys

Tutkimus hyväksyi eettinen komitea Tokion Lääketieteen ja hammaslääketieteen University (rekisteröinti nro 1373). Koska tutkimukseen osallistui immunovärjäyksen kliinisesti saatujen ja arkistoidaan formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut kudosnäytteen, eettinen komitea hyväksyi luopumista tietyn tietoisen suostumuksensa mukaisesti eettiset ohjeet kliinisen tutkimuksen (muutettu 31 heinäkuu 2008) terveysministeriön, työ- ja hyvinvointi Japanin. Eläin Koemenettely Tässä tutkimuksessa käytetyt hyväksyi Center for Experimental Animal Tokion Lääketieteen ja hammaslääketieteen University (rekisteröinti nro 0120203A) ja suoritettiin ohjeiden mukaisesti edellä keskustan.

Näytteet

tutkittiin formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut kudosleikkeiden of eturauhasen näytettä 28 potilasta (ikä: 50-78 vuotta), joilla on eturauhasen syöpä, joka leikattiin vuosien 2008 ja 2011 Tokion Lääketieteen ja hammaslääketieteen University Hospital, ja 18 verrokeilla (ikä: 50-80 vuotta) virtsarakon syöpä, mutta ilman eturauhassyöpä, joka leikattiin vuosina 1994 ja 2011. samassa sairaalassa. Potilailla, jotka saivat ennen leikkausta hoitoa suljettiin pois tutkimuksesta. Ennusteeseen viittaavia profiilit tapauksista on esitetty taulukossa 1. parafinoidut kudosblokeista valittiin lohkot on valmistettu tavanomaisesta patologista tarkastelua. Yksi vaakasuoraan leikattu osa eturauhasen lukien verumontanum tunnistettiin kussakin tapauksessa, ja näytteet otettiin tutkimukseen, kun syövän leviämistä rajoittui oikealle tai vasemmalle koru jaksossa. Yksi oikean ja vasemman lohkoa osan vapaa syövästä analysoitiin tutkia jakelua

P. acnes

ja intraepiteliaalisten NF-KB: n ei-syöpäkudoksen, ja toinen lohko analysoitiin havaitsemiseksi

P. acnes

syöpäkudoksessa.

Tuotanto monoklonaalinen vasta

uusi monoklonaalinen vasta-aine on kehitetty paikantaa

P. acnes

in formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut eturauhasen kudosleikkeiden. Vasta-aine on tuotettu protokollan mukaan kuvatun laboratoriossa käsikirja [32] muutoksin. BALB /c-hiiriä (CLEA Japani, Tokio, Japani) immunisoitiin sonikoitiin koko bakteerien lysaattia serotyypin I

P. acnes

eristetty ihmisen eturauhasen aiemmassa tutkimuksessa [29]. Hybridoomasolulinjat tuottavat anti-

P. acnes

vasta-aineet tarkistettiin entsyymi-immunologinen määritys kanssa bakteeriantigeenien käyttää immunogeeneinä. Hybridoomasolulinjoja myönteisiä tuloksia seulottiin immunovärjäämällä formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut kudososaa

P. acnes

: itä rotan maksasta.

P. acnes

pistetään rotan maksasta saatiin suonensisäinen injektio 30 mg lämmöllä tapettuja

P. acnes

osaksi Sprague-Dawley rottia (CLEA Japani) 1 h ennen tappamista rotta. Samalla tavalla valmistettiin maksakudosta osissa rottien pistetään kunkin kannan muiden ohjaus bakteerit tarkasteltiin myös vahvistaa spesifisyydellä

P. acnes

. Hybridoomasolulinjoja vasta-ainetta tuottavasta että syntyy voimakkaan reaktion spesifinen

P. acnes

rotan maksan kohdat valittiin ja edelleen seulotaan immunovärjäämällä formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut eturauhasen kudosleikkeiden näytteen poistettiin eturauhasen, jossa on suuri määrä

P. acnes

viljeltiin edellisessä tutkimuksessa [29]. Hybridooma tuottaa vasta-ainetta, joka tuotti tarkimman reaktiotuote joilla ei ole mitään ristireaktiivisuutta ihmisen eturauhasen kudosten, mukaan lukien lipofuscin pigmentit, valittiin ja kloonattiin kaksi kierrosta rajoittavan laimennuksen. Yksi Hybridoomaklooni sitten istuttaa vatsaonteloon vakavan yhdistetyn immuunipuutos hiiriä (CLEA Japani). 1 tai 2 viikkoa implantoinnin jälkeen, askites kerättiin ja käytettiin laimentamattomana vasta-ainetta ilman lisäpuhdistusta. Vasta-aine oli nimeltään PAL.

spesifisyyden PAL-vasta tutkittiin Western blot mukaan edellä kuvatulla menetelmällä [26] serotyyppin I

P. acnes

tyyppikannoista (ATCC 6919 ja ATCC 11827), serotyypin II

P. acnes

tyyppikannoista (ATCC 11828), 19 potilaista eristetyillä

P. acnes

(10 serotyypin I ja 9 serotyypin II) peräisin prostates [29], muut iho- propionibakteerien (

P. granulosumin

ATCC 25564,

P. avidum

, ATCC 25577, ja

P. lymphophilum

ATCC 27520), ja muut valvonnan bakteerien (

Mycobacterium tuberculosis, Staphylococcus epidermidis, Escherichia coli

,

Bacteroides flagilis

, ja

Enterrococcus faecalis

).

immunohistokemia

histologisen kohdissa (3 pm paksu) leikattiin formaliinilla kiinnitetyt ja parafinoidut kudosnäytteistä ja asennettu silaanilla päällystettyä dioja (Muto Pure Chemicals , Tokio, Japani). Sen jälkeen, kun leikkeet de-paraffinized ja rehydratoitiin, ne mikroaalloilla (Microwave Processor H2850; Beam Sciences, East Granby, CT) 40 minuutin ajan 97 ° C: ssa 10 mmol /l sitraattipuskuria (pH 6,0). Sitten leikkeet käsiteltiin 3% vetyperoksidilla metanolissa 10 min. Osat inkuboitiin ensin normaalia hevosen seerumia (Vectastain Universal Elite ABC Kit, Vector Laboratories, Burlingame, CA) ja sitten niitä inkuboitiin yli yön huoneen lämpötilassa joko sopivasti laimennettu PAL-vasta-aine (1:60000) tai anti-NF-KB: n vasta-aineella (1 :2000, EPITOMICS, Burlingame, CA), tai seosta, näiden kahden vasta-cocktail immunovärjäystä, kosteutetussa kammiossa. Sitten leikkeitä inkuboitiin 30 minuuttia biotinyloidun sekundaarisen vasta-aineen, jota seurasi 30 min inkubaatio streptavidiini-peroksidaasi-kompleksia (Vectastain Universal Elite ABC Kit), sekä huoneen lämpötilassa. Ennen ja jälkeen jokaisen vaiheen, leikkeitä pestiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella, joka sisälsi 0,5% Tween-20. Signaali kehitettiin ruskeana reaktiotuotteena käytetään peroksidaasisubstraattia diaminobentsidiiniä (HistofineSimplestain DAB Solution; Nichirei Bioscience Inc., Tokio, Japani). Kaikki näytteet vastavärjättiin Mayerin hematoksyliinillä. Viereisiä alueita tutkittiin hematoksyliinillä ja eosiinilla värjäys tavanomaisten histopatologiset tutkimista.

samanaikaiseen tunnistamiseksi sytoplasman

P. acnes

ja ydin- NF-KB: n ekspression samalla eturauhasen kudoksen osassa, cocktail immunovärjäys seosta PAL-vasta-aineen ja anti-NF-KB: n vasta-ainetta primaarisena vasta-aineena suoritettiin kaikkia näytteitä. Luotettavuuden varmistamiseksi tämän menetelmän, kaksi leikesarjojen identtisiä näytteitä tutkittiin cocktail immunovärjäyksellä ja immunoenzyme kaksinkertainen värjäys, vastaavasti. Sillä immunoenzyme kaksinkertainen värjäys, leikkeet ensin reagoimaan PAL-vasta käyttämällä avidiini-biotiini-kompleksin menetelmä kanssa Vectastain ABC-AP Kit (AK-5000, VECTOR) ja VECTOR Blue Alkaline fosfataasisubstraattikäyttöpakkausta III (SK-5300, VECTOR ), ja sitten inkuboitiin 5 min denaturointia liuokseen (denaturointi liuos kit, BRR001DH, biocare Medical) ja inkuboitiin edelleen 5 min Dako REAL Peroxidase-Blocking Solution (S2023, Dako, Glostrup, Tanska). Näiden toimenpiteiden jälkeen, osat tehtiin sekundaarinen reaktio anti-NF-KB: n vasta-ainetta, minkä jälkeen immunohistokemialla käyttämällä polymeeriä menetelmällä EnVision + System-HRP Labelled Polymer (K4001, Dako) ja HistofineSimplestain DAB Solution.

Sama käytetyt näytteet immunoenzyme kaksinkertainen värjäys analysoitiin myös immunofluoresenssilla double-värjäykseen fenotyypin solujen solunsisäisen

P. acnes

käyttämällä vasta-aineita epiteeli- soluihin ja fagosyyttien; anti-sytokeratiini monoklonaalinen vasta-aine (AE1 /AE3, Dako) ja epiteelisolut, anti-ihmis-CD68 monoklonaalinen vasta-aine (klooni KP1, Dako) ja makrofagien, tai anti-ihmis-fascin monoklonaalinen vasta-aine (klooni 55K-2; Dako) ja dendriittisolut, mukaan aiemmin kuvattujen menetelmien [33].

sen varmistamiseksi, että PAL vasta-aine ei ristireagoi lipofuscin pigmenttejä, jotka esiintyvät usein eturauhasen rauhaset, immunofluoresenssivärjäyksen kanssa tai ilman PAL-vasta verrattiin käyttäen sarja- eturauhasen kudosnäytteiden ja immunoenzyme värjäämällä PAL-vasta seurasi Fontana-Masson värjäys tai fluoresenssi-mikroskooppinen tarkkailu samoja eturauhasen kudosleikkeiden.

Arviointi immunohistokemiallisen ja histologisten havainnot

arvioimiseksi

P. acnes

infektio ja ydin- NF-KB ilmaisun sama histologista kohdissa, valomikroskoopilla kuvia kohdat immunovärjättiin seoksella PAL vasta-aine ja anti-NF-KB-aineella (cocktail immuunivärjäysmenetelmällä) sisällytettiin virtuaalinen diat Mirax MIDI BF /FL Digitizer 12 Kalvot (Carl Zeiss MicroImaging, Jena, Saksa) ja tutkittava käyttäen Pannoramic Viewer 1,15 Service Pack 2 (3DHISTECH, Budapest, Unkari). Morfometrisiin analyysi kaikista eturauhasen rauhasten sisältyvät jaksoissa suoritettiin korkeassa teho näkymä virtuaalinen dioja. Kukin eturauhasen rauhanen pidettiin

P. acnes

positiivisia kun sytoplasmisen positiivisia signaaleja PAL-vasta havaittiin ainakin yhdessä epiteelisolujen rauhanen. Koska ydinvoiman NF-KB ilme, rauhanen pidettiin positiivisena, kun ydin-positiiviset signaalit havaittiin ainakin yhdessä epiteelisolujen. Sytoplasminen NF-KB: n ekspressiota ei katsottiin positiiviseksi, koska aktivoitu NF-KB translokoituu sytoplasmasta tumaan [34], [35]. Mukaan läsnä tai poissa ollessa sytoplasmisen

P. acnes

ja ydin- NF-KB: n ilmentymisen kunkin gland, kaikki eturauhanen rauhaset (kokonaismäärä rauhaset lohkolle vaihtelevat 933-5519, jolloin keskimääräinen lukumäärä 2358) sijaitsevat alueilla reunavyöhykkeen (PZ) tai siirtymäkauden alue ( TZ) luokiteltiin neljään ryhmään (

P. acnes Twitter /NF-KB: + /+, +/-. – /+ ja – /-), ja rauhaset luokiteltu kullekin ryhmälle leimasi erivärisiä virtuaalisen dioja. Tulosten mukaan on saatu neljän ryhmän luokitus, ilmaisutaajuudelle rauhasten joko soluliman

P. acnes

tai ydinaseiden NF-KB-ilmentyminen laskettiin kulloinkin PZ ja TZ alueilla, vastaavasti. Kaikki eturauhasen strooman solujen soluliman signaaleja PAL-vasta-laskettiin PZ ja TZ alueet, vastaavasti, virtuaalisen dia osia, jotka immunovärjättiin vain PAL-vasta-aineella. Arvioidaan aste akuutin ja kroonisen tulehduksen, vierekkäiset leikkeet tutkittiin hematoksyliinillä ja eosiinilla värjäys ja neljään luokkaan (0, 1+, 2+, ja 3+) mukaan käytetyt perusteet Cohen et al. [13].

Tilastolliset analyysit

taajuus (%) on

p.acnes

-positiivisen rauhasten tai ydinaseiden NF-KB-positiivisten rauhaset laskettiin määrä positiivinen rauhaset jaettuna koko rauhaset jokaiselle potilaalle; ja määrä

P. acnes

positiivisia makrofageja laskettiin kullekin potilaalle. Nämä parametrit olivat tiivistää mediaani [25

th ja 75

th persentiilit] kullekin PZ ja TZ-alue ja verrataan ohjaus ja eturauhassyöpänäytteissä käyttäen U-testi. Parametrit kullekin valvonta ja eturauhassyövän näytettä verrattiin myös välillä PZ ja TZ alueilla käyttäen Wilcoxonin singed-rank-testi. Yhdistys näiden parametrien ja arvosana akuutti tai krooninen tulehdus analysoitiin käyttämällä spearmanin järjestyskorrelaatiokerroin. Grade akuutin tai kroonisen tulehduksen verrattiin myös välillä ohjaus ja eturauhassyöpänäytteissä käyttäen U-testi. Taajuus ydin- NF-KB ilmaisun rauhaset kanssa

P. acnes

ja rauhaset ilman

P. acnes

laskettiin kullekin potilaalle, tiivistää mediaani [25

th ja 75

th persentiilit], ja verrattiin käyttämällä Wilcoxonin singed-rank testi PZ ja TZ alueilla ohjaus ja eturauhassyöpänäytteissä. Spearmanin järjestyskorrelaatiokerroin käytettiin arvioimaan korrelaatiota taajuus

p.acnes

positiivisten rauhaset ja määrä

P. acnes

-positiivinen strooman makrofaagien. Analyysit tehtiin PZ ja TZ alueilla, vastaavasti.

p

-arvot säädettiin monimuuttujille Holmin menetelmällä tarvittaessa.

p

-arvo on vähemmän kuin 0,05 katsottiin olevan tilastollisesti merkitsevä. StatView (versio 5.0; SAS Institute, Cary, NC) käytettiin kaikkiin tilastolaskutoimitukset.

Tulokset

erityisyys monoklonaalinen vasta

PAL-vasta reagoida kaikki serotyypin I

P. acnes

ja ei reagoinut millään serotyypin II

P. acnes

, muut iho- propionibakteerien, tai muu ohjaus bakteerit. Vasta-aine tunnisti

P. acnes

erityisiä epitoopin lipoteichoic happo ovat yhteisiä kaikille serotyypin I

P. finni

.

lokalisaatio

P. acnes

eturauhasen

ei-syöpä eturauhasen rauhaset, PAL-vasta reagoi pieni pyöreä elinten epiteelisoluissa (kuvio 1). Pieni pyöreä elinten havaittiin hyperplastic, normaali, ja atrofinen epiteelisolujen mutta useammin hyperplastic epiteelisoluissa (kuvio 2A-B) kuin normaaleissa tai atrofinen soluissa (kuvio 2C-D). Vuonna eturauhasen strooman PAL-positiivinen pieni pyöreä elinten havaittiin myös makrofagin kaltaisten solujen, joita jaettiin harvaan klustereiden strooman. Nämä solut esiintyi suhteellisen korkean tiheyden lähellä atrofinen rauhaset, mukana mononukleaariset tulehdussolujen (kuvio 2E-F). Joissakin pesäkkeitä Vaikean periglandular tulehdus, makrofaginkaltai- PAL-positiivisten solujen soluttautuneet rauhaset ja toisinaan havaittu luminaalisessa tiloissa.

Vasta reagoida pieni pyöreä elinten (nuolet) joissakin ei-syöpä glandular epiteelin soluja.

Positiivinen signaalit vasta esiintyi useammin rauhaset epiteelin liikakasvu (A, B) kuin normaalissa tai atrofinen rauhaset (C, D). Eturauhasen strooman, positiiviset signaalit havaittiin makrofagin kaltaisten solujen mukana mononukleaaristen tulehdussolujen (E, F). Muutamia myönteisiä signaaleja harvoin todettu joitakin syöpäsoluja (G, H). Suuremmalla suurennoksella alueen nuolella on esitetty upotettu kunkin kuvion.

Immunofluoresenssi double-värjäys vahvisti, että kaikki rauhasten havaitsemat signaalit PAL-vasta-aine oli sytoplasmassa epiteelisolujen värjättiin anti-sytokeratiini-vasta-aine (AE1 /AE3) ja kaikki strooman havaitsemat signaalit PAL-vasta-aineen makrofageissa värjättiin anti-CD68-vasta-aine, mutta ei anti-fascin-vasta-ainetta (kuvio 3A-C). Lipofuscin pigmentit havaittiin joissakin eturauhasen rauhaset solunsisäisten

P. acnes

. Nämä lipofuscin pigmentit värjättiin tummanruskea Fontana-Masson ja tuotettu vahva auto-fluoresenssi, ja PAL-vasta eivät ristireagoi näillä lipofuscin pigmentit (kuva 3D-J).

Immunofluoresenssikoe kaksinkertainen värjäys

P. acnes

positiivisia soluja eturauhaskudoksiin (A-C). Vihreä signaali (FITC): PAL vasta-aine; punainen signaalit (TRITC): anti-sytokeratiini-vasta-aine (A), anti-CD68-vasta-aine (B) ja anti-fascin vasta-ainetta (C). Tulokset kaksinkertainen värjäys on sulautettu kaikki kuvat. Eturauhasen rauhaset, kaikki

P. acnes

positiivisia signaaleja päällekkäin (keltainen) kanssa sytokeratiinia-positiivisten glandular epiteelisolujen (A). Eturauhasen strooman, kaikki

P. acnes

positiivisia signaaleja päällekkäin (keltainen), jossa CD68-positiivisten makrofagien (B) ja täydensi ollenkaan (vihreä) kanssa fascin-positiivisten dendriittisolut (C). Immunovärjäämällä PAL-vasta sen jälkeen Fontana-Masson värjäys (D). Suurin osa punaisen positiivisia signaaleja PAL-aineella (nuolet) eturauhasen rauhaset eivät päällekkäisiä lipofuscin pigmentit (nuolenpäät), jotka ovat tummanruskea Fontana-Masson värjäystä. Immunoenzyme värjäys eturauhasessa tai ilman PAL-vasta-ainetta käyttämällä sarja- eturauhasen kudosleikkeiden (E, F). Monet solunsisäiset tummanruskea signaalit (nuolet) havaittiin osio PAL-vasta-aineen (E), mutta ei ole tällaisia ​​signaaleja havaittiin kohdassa ilman vasta-ainetta (F). Identtiset osa eturauhasen rauhanen tai ilman immunoreaktiivista signaaleja entsyymi menetelmällä havaittiin sekä valon ja fluoresenssimikroskopiaan (G-J). Kun osa eturauhasen rauhanen monia positiivisia vasta-signaaleja (nuolet) (G), pieni lipofuscin automaattinen fluoresenssi (nuolenkärki) havaittiin identtinen alueella (H). Sen sijaan, että osa eturauhasen rauhanen ilman positiivisia vasta-signaalit (I), suuremman tason lipofuscin auto-fluoresenssi (nuolenpäät) havaittiin identtinen alue (J).

lisäksi vahvistettiin, että havaitseminen tulokset sytoplasman

P. acnes

ja ydin- NF-KB: n ilmentymistä eturauhasen rauhasten epiteelisolujen olivat lähes samat välillä immunoenzyme kaksinkertainen värjäys ja cocktail immunovärjäys, joita käytettiin analysointiin virtuaalisen kalvot (kuvio 4). Samanaikainen arviointi

P. acnes

ja NF-KB asema identtinen jaksoihin cocktail immunovärjäyksellä paljasti panoraama jakautuminen rauhaset luokiteltu neljään ryhmään virtuaalisen diat (kuva 5).

kaksois-värjäyksen (vasen sarake), positiiviset signaalit havaitaan PAL-vasta-ainetta (nuolet) ja positiivinen ydin- signaalit anti-NF-KB: n vasta-ainetta (nuolenpäät) visualisoitiin sininen ja ruskea väri, vastaavasti. Cocktail värjäyksen (oikea palsta), molemmat positiiviset signaalit visualisoitiin ruskea väri. Edustavia rauhaset jotka luokiteltiin jokaisessa mukaan neljään ryhmään tilan intraepiteliaalisten

P. acnes

infektio ja ydin- NF-KB: n ilmentyminen on esitetty kussakin rivissä. Tulokset näistä parametrit olivat lähes samat välillä immunoenzyme kaksinkertainen värjäys ja cocktail immunovärjäys. NNF-KB: ydinaseiden NF-KB.

Vasen, eturauhassyöpä näyte (A); oikea, kontrollinäyte (B). Punaiset ympyrät, rauhaset sekä

P. acnes

ja ydin- NF-KB ilmaisu; keltainen ympyrä, rauhaset jossa

P. acnes

mutta ydin- NF-KB ilmaisu; sininen ympyrä, rauhaset ydinalan NF-KB ilmaisun mutta ei

P. acnes

; ja valkoiset ympyrät, rauhaset jossa kumpikaan

P. acnes

eikä ydin- NF-KB ilme. Mustat viivat osoittavat välistä rajaa reuna-alue (PZ) ja siirtymäkauden alue (TZ). Kokonaismäärä rauhaset tutkittiin virtuaalisen luistin analysaattorin on 1894 näytteen (A) Eturauhassyöpätutkimuksessa potilaan ja 1465 otoksessa (B) peräisin virtsarakkosyöpäpotilaasta mutta ei eturauhassyöpä. Huomaa, että enemmän punaisia ​​ja keltaisia ​​ympyrät havaittiin PZ alueella eturauhassyöpä näytteen verrattuna sekä PZ ja TZ alueilla vertailunäytteen sekä TZ alueen eturauhassyövän näyte.

Eturauhassyöpä solujen useimmiten olivat negatiivisia PAL-vasta, jossa on kolme poikkeustapauksissa (kuvio 2G-H). Paikassa oleva alue syöpä rauhasten kanssa

P. acnes

infektio koko alueen syövän vaurio osassa oli 5% yhdessä tapauksessa ja alle 1% kahdessa muussa tapauksessa. PAL-positiiviset strooman makrofaagien havaittiin 13 (46%) 28 syöpä kudoksiin.

Detection taajuus

P. acnes

eturauhasen

epiteelinsisäisen

P. acnes

on ei-syöpä eturauhasen rauhaset havaittiin kaikissa näytteissä, ja strooman makrofaagien bakteeria havaittiin 27 28 syöpänäytteissä ja 14 18 kontrollinäytteistä.

Mediaani [25

th ja 75

th persentiilit] taajuus (%) eturauhasen rauhaset kanssa intraepiteliaalisten

P. acnes

oli 14,4 [8,8, 28.0] in PZ alueella ja 4,9 [2,4, 9,1] in TZ alueella syövän näytteistä (kuvio 6A). Kontrollinäytteissä, taajuus oli 4,3 [1,3, 8,1] in PZ-alueella ja 1,6 [1,1, 3,2] ja TZ-alueella. Taajuus oli huomattavasti korkeampi syöpänäytteissä kuin kontrollinäytteistä sekä PZ ja TZ alueilla. Sekä syövän ja vertailunäytteet, taajuus oli merkitsevästi suurempi PZ alueella kuin TZ-alueella.

Frequency (%) on

P. acnes

positiivisia rauhaset (A) tai ydinaseiden NF-KB-positiivisten rauhaset (B), ja kokonaismäärä

P. acnes

positiivisia strooman makrofageja (C) reuna ja siirtymäkauden alueilla eturauhassyövän (PCA) ja kontrollinäytteitä.

P

-arvot säädettiin monimuuttujille (4 vertailut kussakin paneelissa) Holmin menetelmällä. NS: ei merkittävää.

Mediaani määrä strooman makrofaagien

P. acnes

oli 30 [10, 82] in PZ alueella ja 12 [3,35] in TZ alueella syöpänäytteissä, kun taas mediaani määrä oli 2 [0, 32] ja 5 [0, 7] hallinnassa näytteet, vastaavasti (kuvio 6C). Määrä strooman makrofagien oli huomattavasti korkeampi syövän näytteistä kuin kontrollinäytteissä sekä PZ ja TZ-alueilla. Syövän näytteiden määrä oli merkitsevästi suurempi PZ alueella kuin TZ-alueella. Lukumäärät

P. acnes

positiivisia strooman makrofaagien korreloi taajuudet

P. acnes

positiivisia rauhaset PZ alalla syöpänäytteissä (spearmanin järjestyskorrelaatiokerroin = 0,47,

p

= 0,015).

Detection taajuus ydin- NF-KB ilme

Nuclear NF-KB: n ilmentyminen rauhasten epiteelisolujen havaittiin kaikissa näytteissä. Vuonna syöpä näytteiden mediaani taajuus (%) NF-KB-positiivisten rauhaset oli 17,1 [10,3, 31,4] in PZ alueella ja 7,1 [2,8, 14,8] in TZ alueella (kuvio 6B). Kontrollinäytteissä, taajuus oli 7,3 [4,4, 11,1] in PZ-alueella ja 4,4 [2,1, 11,3] ja TZ-alueella. Vuonna PZ alueella, taajuus oli merkittävästi suurempi syöpänäytteissä kuin kontrollinäytteestä. Syöpänäytteissä, taajuus oli merkitsevästi suurempi PZ alueella kuin TZ-alueella.

korrelaatio

P. acnes

infektio ja ydin- NF-KB ilmaisu

syöpänäytteissä, mediaani taajuus (%) ydinvoiman NF-KB ilmentymä rauhaset kanssa

P. acnes

oli 27,6 [18,3, 47,5] in PZ alueella ja 14,0 [5,8, 25,6] in TZ alueella, kun taas mediaani taajuus rauhaset Ydinvoimalla NF-KB ilmentymisen mutta ilman

P. acnes

oli 15,9 [9,0, 27,2] in PZ alueella ja 6,7 ​​[2,7, 13,7] in TZ alueella (kuvio 7A). Kontrollinäytteissä, taajuus

P. acnes

positiivisia rauhaset oli 17,8 [8,9, 24,8] in PZ alueella ja 13,0 [1,3, 36,1] in TZ alueella, kun taas taajuus

P. acnes

-negatiivinen rauhaset oli 7,2 [4,1, 10,9] PZ alueella ja 4,1 [2,0, 10,7] in TZ alueella (kuvio 7B). Taajuudet ydin- NF-KB ilmentyminen oli merkitsevästi korkeampi

P. acnes

positiivisia rauhaset kuin

P. acnes

-negatiivinen rauhaset PZ ja TZ alueilla sekä syövän ja kontrollinäytteitä.

Frequency (%) ydinvoiman NF-KB ilmaisun rauhaset tai ilman soluliman

P. acnes

syrjäisillä tai siirtymäkauden vyöhykkeitä eturauhassyövän (A) ja ohjaamaan eturauhasen (B) näytteet.

P

-arvot säädettiin monimuuttujille (2 vertailut kussakin paneelissa) Holmin menetelmällä.

korrelaatio tulehdusta ja

P. acnes

infektion tilaa tai NF-KB: n aktivaation

Grade akuutin tai kroonisen tulehduksen PZ tai TZ alueet syövän ja vertailunäytteiden on esitetty kuviossa 8. Sekä PZ ja TZ alueilla, luokka tulehduksen eivät eronneet merkittävästi toisistaan ​​syöpä ja kontrollinäytteitä. Arvosana akuutti tai krooninen tulehdus ei korreloinut joko taajuudella rauhaset kanssa sytoplasmisen

P. acnes

tai taajuus rauhaset Ydinvoimalla NF-KB ilme.