Krooninen sairaus

tiivistelmä

Huolimatta laajaa empiirisiä ja tieteellistä näyttöä on vielä paljon ymmärrettävä noin pitkän epäillään yhteys psykologiset tekijät ja alttiutta syöpään. Iho on yleisin sivusto syövän, eli lähes puolet kaikista syövistä Yhdysvalloissa, jossa noin 2-3 miljoonaa tapausta ei melanoomaa syöpien esiintyy vuosittain maailmanlaajuisesti. Oletimme, että korkean ahdistunut, stressi-altis käyttäytymisen fenotyyppi johtaisi korkeampaan krooninen stressi taakka, alempi suojaava-immuniteetin, ja lisäsi etenemistä immunologiseen reagoiva ihosyöpä, okasolusyöpä. SKH1 hiiret fenotyypitettiin kuten korkean tai matalan ahdistunut lähtötilanteessa, ja tämän jälkeen altistettiin ultravioletti-B valo (1 minimaalinen erythemal annos (MED), 3 kertaa /viikko, 10 viikkoa). Merkittävä vahvuuksia syöpä malli on, että se käyttää normaalia, immunokompetenteille, ulkosiittoiset kanta, ilman leikkausta /injektio eksogeenisten kasvainsolujen /solulinjoissa, ja tuottaa vaurioita, jotka muistuttavat ihmisen kasvaimista. Kasvaimet laskettiin viikoittain (Päätulosmuuttuja), ja kudosnäytteiden aikana varhain ja myöhään vaiheissa kasvaimen kehitystä. Kemokiini /sytokiini-geeni-ilmentyminen kvantifioitiin PCR, kasvaimeen infiltroivien auttaja (Th), sytolyyttisen (CTL), ja sääntelyn (Treg) T-solujen immunohistokemiallisesti, imusolmuke T- ja B-solujen virtaussytometrialla, lisämunuaisen ja plasman kortikosteroni ja kudosten verisuonten endoteelin kasvutekijän (VEGF) ELISA: lla. Korkean ahdistunut hiiristä osoittivat korkeampaa tuumorikuorma kaikissa vaiheissa kasvaimen kehitystä. He osoittivat myös: korkeampia kortikosteroiditasojen määrittämiseksi (osoittaa suurempaa krooninen stressi taakka), lisääntynyt CCL22 ilmaisun ja Treg tunkeutuminen (lisääntynyt kasvaimen palvelukseen immunosuppressioon), alempi CTACK /CCL27, IL-12, ja IFN-γ geenien ilmentyminen ja alempi numerot kasvaimen soluttautua Th ja CTL: iä (tukahdutetaan suojaavan immuniteetin), ja suurempi VEGF pitoisuudet (lisääntynyt tuumoriangiogeneesissa /invaasio /etäpesäke). Nämä tulokset viittaavat siihen, että haitallisia vaikutuksia korkean ominaisuuden ahdistusta voitaisiin: pahentaa elämän stressitekijät, korostaa se stressi syövän diagnosointiin /hoitoon, ja välittävät lisääntynyt kasvaimen etenemiseen ja /tai etäpesäkkeitä. Siksi voi olla hyödyllistä tutkia kemoterapian käyttöön yhteensopiva anksiolyyttisessä hoidot heti syövän diagnoosin, ja aikana syövän hoitoon /edunjättäminen.

Citation: Dhabhar FS, Saul AN, Holmes TH, Daugherty C, Neri E , Tillie JM, et al. (2012) High-Ahdistunut Henkilöt Näytä Lisääntynyt Krooninen stressi Burden, Laskua suojaava immuniteetti, ja Lisääntynyt Cancer Progression hiirimallissa okasolusyöpä. PLoS ONE 7 (4): e33069. doi: 10,1371 /journal.pone.0033069

Editor: Pranela Rameshwar, University of Medicine ja hammaslääketieteen New Jersey, Yhdysvallat

vastaanotettu 17. lokakuuta 2011; Hyväksytty: 03 helmikuu 2012; Julkaistu: 25 huhtikuu 2012

Copyright: © 2012 Dhabhar et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Rahoitusta näissä tutkimuksissa saatiin National Institutes of Health avustuksen CA107498 (FSD). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että stressi-altis persoonia ja selviytymistä tyylit ja tekijät, kuten piirre ahdistusta, joka osaltaan lisäävät stressiä, liittyy korkeampaan syövän esiintyvyys, eteneminen tai kuolleisuus [1] – [8]. Kuitenkin monet tutkimukset ovat epäonnistuneet löytää yhdistyksen välillä stressiin liittyviä persoonallisuuden piirteet ja syövän ilmaantuvuus ja /tai kuolleisuutta [9] – [13]. Erot ajoitus persoonallisuuden arviointi suhteessa syövän diagnosointiin, vuorovaikutukset persoonallisuuden tyyppi, stressor vakavuudesta, ja siihen liittyvät tekijät [14], [15], menetelmiin heterogeenisuus tutkimuksia [16], ja keskittyminen immunoresistant kasvaimia joissakin tutkimuksissa [17 ], uskotaan selittää kiistanalaista luonnetta koskevat päätelmät persoonallisuustekijät ja alttiutta syöpään. Tärkeää on, syöpäpotilaat monissa eri kulttuureissa alituisesti stressiä kuin merkittävä tekijä heidän sairautensa [18] – [21] ja lukuisat tutkimukset ovat osoittaneet, että pitkäaikainen stressi liittyy kasvainten esiintyvyyden lisääntymistä, eteneminen, ja etäpesäkkeitä [22] – [29] (selontekoa varten katso: [30]). Tässä valossa taustan tutkimme yhdistyksen välistä ahdistusta liittyvien käytöshäiriöiden ja fenotyyppien syöpäalttiutta valvotuissa laboratorio-olosuhteissa ja puitteissa immuunivastetta reagoiva syöpä. Aiemmat tutkimukset käyttäen samaa kasvain malli kuvattu tässä, olivat osoittaneet, että krooninen stressi lisää alttiutta levyepiteelisyöpä (SCC) tukahduttamalla suojaavan immuniteetin ja lisäämällä sääntelyä /estäjä-T-solujen kasvain microenvironment [25]. Ahdistus voidaan määritellä lisääntynyt herkkyys ja /tai reaktiivisuutta todellisia ja fyysisesti olemassa, tai olematon, mutta koettu tai ennakoidun uhkia /stressitekijöitä. Koska on todennäköistä, että korkean ahdistunut käyttäytymiseen fenotyyppi voi aiheuttaa enemmän stressiä-reaktiivisuus ja johtaa lisääntyneeseen krooninen stressi kuorma ajan, testasimme

yleistä oletusta, että ahdistus liittyvien käytöshäiriöiden fenotyypit mitattu lähtötilanteessa (pre-syöpä) liittyisi fysiologisten indeksien lisääntynyt krooninen stressi, vähentynyt suojaava immuniteetti, ja lisääntynyt alttius UV-induced SCC

.

SCC tässä kuvatussa mallissa on useita etuja: se edellyttää normaalia immunofermentiset toimivaltainen , ulkosiittoinen hiiri kanta, joka ei ole geneettisesti manipuloitu, ei liity leikkausta tai injektiona eksogeenisen kasvainsolujen tai solulinjoja, ja mahdollistaa tutkimus naturalistinen ajan kuluessa kaikki vaiheet kasvaimen kehitystä [25] kanssa vaurioita ja vaiheet, jotka muistuttavat läheisesti ihmisen SCC [31] – [33]. Tärkeää on, että kansanterveyden kannalta näistä tutkimuksista on korostettu sitä, että iho on yleisin sivusto syöpää [34], arviolta 2-3 miljoonaa jättämisestä melanoomaihosyöpien esiintyy vuosittain maailmanlaajuisesti [35 ]. SCC on toiseksi yleisin syöpätyyppi Yhdysvalloissa, noin 700000 tapauksia diagnosoidaan ja aiheuttaen noin 2500 kuolemantapausta vuodessa [36]. Lisäksi ultravioletti B (UVB) komponentti auringonvalo (samoilla aallonpituuksilla, 290-320 nm, käytetään aiheuttaa SCC olevassa mallissa) on täydellinen karsinogeeni ja vastaa useimpien ei-melanoomaihosyöpien [37], [38] . Mikä tärkeintä, SCC ovat immunogeenisiä ja voidaan eliminoida endogeenisen soluvälitteinen immuunivaste [39] – [41], mutta UV-säteily tukahduttaa lymfosyyttiliikennettä, ja T- ja NK-solujen toimintaa [42], ja estää anti-SCC immuniteetti [43 ] – [45], jotka kaikki voivat mahdollistaa SCC kasvaimia paeta immuunijärjestelmää puhdistuma [25], [46]. Kun otetaan huomioon, miten tärkeää on ahdistusta syntyy aikana diagnostiikassa ja hoidossa syövän, ja globaali terveys merkitystä ja tieteellinen arvo ihosyöpä malli tutkittavan, tässä tutkimme hormonitoimintaa (fysiologinen indeksit krooninen stressi taakka), immuuni (indeksit suojaava versus tukahduttava immuunitoimintojen kasvaimen mikroympäristössä), ja kasvaimen kasvua edistäviä (VEGF) mekanismit vaikutukset välittyvät korkean versus matalan ahdistunut käyttäytymisen fenotyypit kasvaimen syntyyn ja etenemiseen.

tulokset

luokittelu Hiiret osaksi High versus Low-ahdistunut Fenotyypit lähtötilanteessa

Käytimme kaksi perustettu etologisia testit ahdistuneisuuden liittyvää käyttäytymistä, kohonnut pluslabyrintti (EPM) ja valoa pimeässä arena (LDA), ja määrittää ahdistus liittyvien käytöshäiriöiden fenotyypin kunkin hiiren [47] – [49] lähtötilanteessa, eli ennen kuin syöpäkasvainten. Kaksi eri testeissä käytettiin, koska ahdistus on monimutkainen käyttäytymiseen fenotyyppi ja halusimme tutkia eri ulottuvuuksia ahdistus (jotka todennäköisesti herätti ja määrällisesti eri testaus areenoilla) liittyisi erityisiä näkökohtia syövän etenemisen ja /tai kasvain- asiaan immuunijärjestelmän toimintaa. Lisäksi avoin kenttä areena (OFA) käytettiin määrittämään yleistä tasoa aktiivisuuden /liikkumiskyky kontrollina toimenpiteenä, jotta suhteet käyttämällä havaitut EPM tai LDA ahdistusta toimenpiteet eivät olleet seurausta yksilöiden välisiä eroja yhteisen toiminnan kannalta tasot [48], [50]. Hiiret luokiteltiin kuivassa tai liian ahdistunut perusteella mediaani-split pisteiden jokaisessa testissä. Saatu mediaanit ja ryhmän avulla on esitetty taulukossa 1. Ero hiirillä osoittaa korkean verrattuna alhaisen halukas käyttäytymisen fenotyypin kunkin testi erittäin merkitsevä (p = 0,0001) vain silloin, kun edellä verrattuna alempana mediaani ryhmät olivat verrattuna testin johon mediaani jako perustuu, osoittaa riippumattomuuteen joukossa käyttäytymiseen toimenpiteitä.

korkean ahdistunut Hiiret Näytä Lisääntynyt kasvaimen synty ja eteneminen

Hiiret, jotka osoittivat korkea- ahdistunut fenotyyppi lähtötilanteessa (mitattuna EPM) osoitti suurempaa tuumorikuorma kaikissa vaiheissa kasvaimen kehitystä (Fig. 1): papilloomavirus syntyminen ja regressio (~weeks 11-19), siirtyminen papilloomavirus SCC (~weeks 20- 25), ja SCC etenemiseen (~week 26 alkaen). Kiinnostavaa kyllä, ei tilastollisesti merkittäviä eroja keskimääräisessä kasvaimen laskee havaittiin kun hiiret ryhmiteltiin korkea verrattuna alhaisen ahdistunut fenotyyppien perusteella käyttäytymisensä LDA. Käyttämällä matkojen että OFA kontrollina toimenpide eroja yleisen toiminnan tason yksittäisten hiirten, löysimme ei eroja kasvaimen laskee välillä korkea- vs. matala- liikunnallista aktiivisuutta fenotyypit (p 0,1). Tämä viittasi siihen, että havaittu suhde korkean ahdistunut fenotyypin ja lisääntynyt kasvaintaakkaa ei johdu eroista yleistä liikunnallista aktiivisuutta mutta liittyy ahdistusta. Tilastollisesti merkitseviä eroja havaittiin keskimäärin kasvaimen alueella, tai aikaa 50% kasvaimen esiintymistiheys, kun hiiret ryhmiteltiin korkea- versus matala- ahdistunut fenotyyppejä, tai korkea- versus matala- liikunnallista aktiivisuutta (p 0,1). Tämä viittaa siihen, että vaikka korkean ahdistunut käyttäytymisen fenotyyppi liittyi suurempi määrä kasvaimia, ei yhdistys havaittiin kasvaimen koon tai aikaa 50% kasvaimen esiintymistiheys.

Verrattuna matalan innokas hiiriä (valkoiset pylväät) high-innokas hiiriä (mustat palkit) oli suurempi kasvaimen määrä kaikissa vaiheissa kasvaimen kehitys: papilloomavirus syntyminen ja regressio (~weeks 11-19), siirtyminen SCC (~weeks 20-25), ja SCC etenemiseen (~week 26 alkaen). Data ilmaistaan ​​keskiarvona ± SEM. Tilastollisesti merkittäviä eroja vaiheet on merkitty (**

p

0,05; ***

p

0,01). Analyysimenetelmä yleinen lineaarinen malli Poisson jakauma on logaritminen yhteys funktion avustus overdispersion alueen datan.

kvantitatiivinen arviointi kasvainten edellä kuvatun kehui histopatologinen tutkimus ja tunnistaminen kudosten ominaisuuksista kasvainten viikolla 31. Siitä hiirillä, jotka lopetettiin viikolla 31 esitimme yksi kasvain jokaisesta eläimestä, joka oli kasvain, jonka halkaisija 3 mm histopatologista luokitusta. Kaikkiaan kahdeksantoista kasvainten luokiteltiin. Hiirillä luonnehtia korkean innokas (HiAnx) EPM, yksi ilmeinen kasvain luokiteltiin uudelleen polttoväli epidermaalinen liikakasvu, papilloomaviruksen esiasteleesio. Jäljellä kasvaimet, neljä oli syyliä, kaksi oli microinvasive SCC (miSCC), ja kaksi täysin invasiivisia SCC. Hiirillä luonnehtia matalan innokas (LoAnx) EPM, viisi kasvaimet luokiteltiin papilloomavirus, neljä kuten miSCC, eikä yksikään SCC. Hiiret luonnehtia HiAnx vuonna LDA oli neljä papillomas, neljä miSCC, ja kaksi SCC. Niistä kasvaimia näytteet hiirillä luonnehtia LoAnx on LDA, yksi luokiteltiin uudelleen polttoväli epidermaalinen liikakasvu, viisi oli papillomas kaksi oli miSCC, eikä mikään niistä ollut SCC. Siksi vain hiirillä luonnehtia HiAnx joko EPM tai LDA oli täysin invasiivisia SCC. Lisäksi molemmat ryhmät HiANx hiirillä oli suurempi osuus invasiivisen miSCC tai SCC verrattuna ei-invasiivisia papillomas (≥50% kasvaimia). Laadullisesti, nämä havainnot viittaavat kiihtyi syövän etenemisen korkean ahdistunut henkilöitä.

Effects of High versus Low-ahdistunut Fenotyypit on Kemokiini ja Sytokiini Gene Expression UV paljaan ihon ja UV-induced kasvaimet

Olemme tutkineet vaikutuksia korkean verrattuna matalan haluaa käyttäytymisen fenotyypit keskimääräistä geeni-ilmentymisen kriittisen kemokiinien ja sytokiinien tiedetään olevan tärkeitä suojaavia (kutaaninen T-solujen houkuttelemiseksi kemokiini (CTACK tunnetaan myös nimellä CCL27), interleukiini (IL) – 12, interferoni-gamma (IFN-γ)) verrattuna kasvainta edistävien (CCL22, IL-10, IL-4) vaikutuksia yhteydessä SCC [25], [51]. Koska yleinen biologinen toiminta on viime kädessä vaikuttaa suhteelliset osuudet torjua tekijöistä, tutkimme myös vaikutuksia ahdistuksen fenotyypin suhde suojaavan vastaan ​​haitallisten kemokiinien (CTACK /CCL22) ja sytokiinien ((IL-12 + IFN-γ) /(IL -10 + IL-4)). Arvioida luotettavuutta havaintojen vaikutus koko laskelmat (Cohenin

d

), ja monimuuttuja regressio analyysit tehtiin lisäksi

t

-testaukset. Siksi

t

-testi

p

arvojen vaikutus koko lasketaan Cohenin

d

, ja /tai regressio

p

arvot regressio rinne, ovat alla on kaikkien analyysien osoittaa tilastollista merkitystä (

p

0,05) tai trendi (

p

0,09). Mikä tärkeintä, kaikki vertailut, joissa toinen analyysien,

t

-testi tai regressio rinteen osoitti tilastollinen trendi, loput analyysi osoitti tilastollista merkittävyyttä, ainoat poikkeukset on geeniekspression UV paljaalle iholle viikolla 17 IFN-γ ja viikolla 31 suhteet CTACK /CCL22 ja (IL-12 + IFN-γ) /(IL-4 + IL-10), jonka

t

-testi ei ollut merkittävä ja regressio rinteillä vain osoitti tilastollista trendejä.

Geenien ilmentyminen kvantitoitiin UV-altistunut iho ilman näkyviä vaurioita viikoilla 17 ja 31, jotta voidaan tarkastella valmiiksi pahanlaatuisia muutoksia (Fig. 2): viikolla 17 , HiAnx hiiret osoittivat alempia geenin ilmentymistä varten CTACK (regression kulmakerroin = -0,5,

p

0,05), IL-12 (

t

-testi

p

0,05, vaikutus size = 0,9; regressio kulmakerroin = -0.5,

p

0,09) ja IFN-γ (

t

-testi

p

0,09 , vaikutus size = 0,7) ja suurempi geeniekspressiota IL-4 (

t-

testi

p

0,05, vaikutus size = 0,8; regressio kulmakerroin = 0,5,

p

0,05), kun taas CCL22 ja IL-10-geenin ekspressiotasot eivät havaittavasti eroa näiden kahden ryhmän (Fig. 2). Viikolla 31, UV paljaalle iholle on HiAnx hiirillä oli vähäisempää geenin lauseke CTACK (

t-

testi

p

0,05, vaikutus size = 0,6; regressio kulmakerroin = -0.4,

p

0,01), IL-12 (regressio kulmakerroin = -0,4,

p

0,05) ja IFN-γ (

t-

testi

p

0,05, vaikutus size = 0,7; regressio kulmakerroin = -0.5,

p

0,01). CCL22, IL-4 ja IL-10-geenin ilmentymistä viikolla 31 ei ollut havaittavasti eroa HiAnx ja LoAnx hiirillä, kuitenkin, HiAnx hiiret osoittivat pienempi suhde CTACK /CCL22 (regressio kulmakerroin = -0,2

p

0,09), ja suojaava (IL-12 + IFN-γ) haitallisia (IL-10 + IL-4) sytokiinien (regressio kulmakerroin = -0.5,

p

0,09).

Geenien ilmentyminen selän ihon mitattiin kvantitatiivisen PCR viikoilla 17 ja 31 niukassa (valkoiset pylväät) ja korkea (mustat palkit) ahdistusta hiirissä. mRNA-tasojen ja kemokiinien ja sytokiinien tiedetään olevan suojaavia (CTACK, IL-12, ja IFN-γ) tai haitallisten (IL-4 ja IL-10) yhteydessä SCC kvantitoitiin. MRNA: n ilmentymistasoja normalisoida glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH) mRNA on esitetty. Data ilmaistaan ​​keskiarvona ± SEM. Tulokset olivat optimaalisesti Box-Cox muuttaneet ennen analyysiä. Jokaisen lopputulos, avulla verrattiin ryhmien välillä käyttämällä kahden otoksen

t

-testi kanssa Satterthwaite säätö epätasainen vaihtelut. Tilastolliset suuntaukset (*

p

0,09) ja merkittäviä eroja (**

p

0,05) on merkitty, ja vastaava vaikutus koot mainitaan tekstissä. Kaikkien vertailuissa, joissa

t

-testi osoitti tilastollista suuntausta, regressioanalyysi osoitti tilastollista merkittävyyttä, ainoana poikkeuksena viikko 17 IFN-γ-geenin ilmentymistä.

Geenien ilmentyminen kvantifioitiin kasvaimissa viikolla 31 (Fig. 3): kasvaimet alkaen HiAnx hiiret osoittivat korkeampia CCL22 geenin ilmentymisen (

t-

testi

p

0,09, vaikutus size = 0,5; regressio kaltevuus = 0,4,

p

0,05), alempi suhde CTACK /CCL22 (

t-

testi

p

0,05, vaikutus size = 0,6; regressio kulmakerroin = -0,3

p

0,05), ja pienempi suhde suojaava (IL-12 + IFN-γ) haitallisia (IL-10 + IL-4) sytokiinien (

t-

testi

p

0,09, vaikutus size = 0,8; regressio kulmakerroin = -0.5,

p

0,05). Erot geenien ilmentymisen välillä HiAnx ja LoAnx hiiret tässä osassa kuvattuja perustuivat ahdistusta fenotyyppiin määräytyy LDA, lukuunottamatta eroja IL-4-geenin ilmentymisen jotka perustuivat ahdistusta fenotyyppiin määräytyy EPM.

Geenien ilmentyminen kasvaimissa mitattiin kvantitatiivisen PCR viikolla 31 niukassa (valkoiset pylväät) ja korkea (mustat palkit) ahdistusta hiirissä. mRNA-tasojen ja kemokiinien ja sytokiinien tiedetään olevan suojaavia (CTACK, IL-12, ja IFN-γ) tai haitallisten (IL-4 ja IL-10) yhteydessä SCC kvantitoitiin. Koska yleinen biologinen toiminta on viime kädessä vaikuttaa suhteelliset osuudet torjua tekijöistä, tutkimme myös vaikutuksia ahdistuksen fenotyypin suhde suojaavan versus haitallisia tekijöitä: CTACK /CCL22 ja (IL-12 + IFN-γ) /(IL-10 + IL-4). MRNA: n ilmentymistasoja normalisoida glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH) mRNA on esitetty. Data ilmaistaan ​​keskiarvona ± SEM. Tilastolliset suuntaukset (*

p

0,09) ja merkittäviä eroja (**

p

0,05) on osoitettu. Tulokset olivat optimaalisesti Box-Cox muuttaneet ennen analyysiä. Jokaisen lopputulos, avulla verrattiin ryhmien välillä käyttämällä kahden otoksen

t

-testi kanssa Satterthwaite säätö epätasainen vaihtelut.

Kasvaimet Korkea ahdistunut Hiiret Näytä Ala numerot suojaava T-solut ja useammat Regulatory /vaimennin T Cells

Kvantitoimme numerot kriittisten kasvaimen soluttautua lymfosyyttipopulaatioista, joiden tiedetään olevan tärkeitä suojaavia (auttaja ja T -solujen) tai haitallisia (säätelijä-T-solut) vaikutuksia yhteydessä SCC LoAnx ja HiAnx hiiriä (Kuva. 4). Edustavia mikrovalokuvia esitetään myös (Fig. 5). HiAnx hiirten fenotyypitettiin perusteella käyttäytymisestä LDA osoitti pienemmät numerot tuumoreihin tunkeutuvia Th-solujen (

t-

testi

p

0,07, vaikutus size = 0,6; regressio kulmakerroin = – 0,5,

p

0,05) ja CTL: iä (

t-

testi

p

0,05, vaikutus size = 0,8), useammat Tregs (regressio kulmakerroin = 0,37,

p

0,09) ja alemman suhteet Th /Treg (

t-

testi

p

0,05, vaikutus size = 1,0; regressio kulmakerroin = – 0,5,

p

0,05), CTL /Treg (

t-

testi

p

0,05, vaikutus size = 0,7; regressio kulmakerroin = -0,4,

p

0,09), ja (Th + CTL) /Treg (

t-

testi

p

0,05, vaikutus size = 1,1; regressio kulmakerroin = -0.6

p

0,05). Tämä viittaa siihen, että tasapaino immunologiseen suojaava versus immuunisäätelytoimintoja /tukahduttava solut siirrettiin hyväksi aktiivisten Treg välittämää tukahduttaminen kasvaimen vastaisen immuniteetin HiAnx hiirillä.

Kasvain soluttautua T-solut määrällisesti matala- (valkoiset pylväät) ja korkea (mustat palkit) ahdistusta hiirillä viikolla 31. numerot tuumoreihin tunkeutuvia soluja, joiden tiedetään olevan suojaavia (Th ja CTL) tai haitallisia (Treg) yhteydessä SCC kvantitoitiin. Koska yleinen biologinen toiminta on viime kädessä vaikuttaa suhteelliset osuudet torjua solujen, myös tutkinut, mitä vaikutuksia ahdistus fenotyypin suhteet suojaavia versus haitallisia tekijöitä: Th /Treg, CTL /Treg, ja (Th + CTL) /Treg. Positiivisten solujen kohti standardoidun kenttä laskettiin sokkoutettujen tarkkailija. Viisi kentät 60x analysoitiin kohti värjättiin kasvain osassa hiirtä kohti. Data ilmaistaan ​​keskiarvona ± SEM. Tilastolliset suuntaukset (*

p

0,09) ja merkittäviä eroja (**

p

0,05) on osoitettu. Tulokset olivat optimaalisesti Box-Cox muuttaneet ennen analyysiä. Jokaisen lopputulos, avulla verrattiin ryhmien välillä käyttämällä kahden otoksen

t

-testi kanssa Satterthwaite säätö epätasainen vaihtelut.

immunohistokemiallinen värjäys CD4 (ylärivi), CD8 ( keskimmäinen rivi), ja CD25 (alin rivi) käytettiin luetella (laskee kuviossa. 4) kasvainta infiltroivia T-soluja matala- (vasen sarake) ja korkea (oikea palsta) ahdistunut hiirillä viikolla 31. Mittakaava merkitsee 100 um.

Sentinel imusolmukkeisiin korkea ahdistunut Hiiret Näytä pienempi osuus CD4 + T-auttajasolujen ja suurempi osa B Cells

suhteellinen osuus Th (CD3 + CD4 + ), CTL (CD3 + CD8 +) ja B (B220 +) solujen vasemman ja oikean hartian imusolmukkeiden (2 imusolmukkeet per hiiri) kerättiin viikolla 31 on esitetty taulukossa 1. brachial imusolmukkeet tutkittiin, koska ne edustavat vartijaimusolmukkeen solmuja, että tyhjentää dorsum, jossa enemmistö kasvaimista havaittiin. Imusolmukkeet korkean ahdistunut hiiriä, fenotyypitettiin perusteella käyttäytymisensä LDA, osoitti alhaisempi Th-solujen (

t-

testi

p

0,05, vaikutus size = 0,7; regressio kulmakerroin = -0.5,

p

0,01) ja suurempi osuus B-solujen (

t-

testi

p

0,01, vaikutus size = 0,8 ; regressio kulmakerroin = 0,6,

p

0,01) verrattuna matalan ahdistunut hiirillä. Ei havaittavissa eroja prosentteina CTL: ien havaittiin.

Korkean ahdistunut Hiiret Express Korkeammalla Yhteensä Lisämunuaisen ja Peak Stressi kortikosteronin

Tutkimme suhde korkean versus matalan ahdistunut fenotyyppi ja stressi -reactivity hypotalamus-aivolisäke-lisämunuaisakselin (HPA), mitattuna plasman kortikosteroni eritystä, kuten mahdollinen mekanismi vaikutukset välittyvät ahdistuneisuus fenotyypin immuunijärjestelmän toimintaa ja syöpäalttiuteen. HiAnx hiiriä, fenotyypitettiin perusteella käyttäytymisensä EPM (mutta ei LDA), osoitti suurempi koko lisämunuaisen kortikosteroiditasojen määrittämiseksi kuin LoAnx hiiret (HiAnx = 98,7 ± 11,5 ug, LoAnx = 73,9 ± 9,4 ng,

t-

testi

p

0,05, vaikutus size = 0,6; regressio kulmakerroin = 0,3,

p

0,09). Lepotilassa plasman kortikosteroiditasojen määrittämiseksi eivät olleet merkittävästi erilaiset välillä HiAnx ja LoAnx hiirillä. Kuitenkin, kun se altistetaan akuutti stressitekijästä (0,5 h turvalaitteen), HiAnx hiiriä, fenotyypitettiin perusteella käyttäytymisensä LDA (mutta ei EPM), osoittivat myös korkeampi huippujännitysten kortikosteroiditasojen määrittämiseksi verrattuna LoAnx hiiriin (high-ahdistunut = 62,3 ± 6,3 ng /dl, matalan ahdistunut = 47,6 ± 8,2 mikrog /dl,

t-

testi

p

0,05, vaikutus size = 0,7). Yhdessä nämä tiedot osoittavat, että HiAnx hiiret voivat kroonisesti alttiina korkeammille kortikosteronin, korkeammat huippujännitysten Rehulautarotilla viittaa siihen, että korkea-ahdistunut hiiret olivat todennäköisesti asentaa suurempi stressi vastaus kohtalainen stressitekijät, kuten häkkiin muutoksia tai sosiaalisen vuorovaikutuksen sekä suurempi koko lisämunuaisen kortikosteroiditasojen määrittämiseksi tarjoavat lisänäyttöä pitkäaikainen tai krooninen lisääntyminen HPA-akselin toimintaan.

korkean ahdistunut Hiiret Express korkeampi verisuonten endoteelin kasvutekijä (VEGF) B

Tissue VEGF on käytetty ennustetyövälineenä indikaattorina SCC [52], [53]. Olemme tutkineet suhde korkean versus matalan ahdistunut fenotyyppi ja VEGF pitoisuudet kudoksessa mikroympäristöä HiAnx versus LoAnx hiirillä. HiAnx hiiriä, fenotyypitettiin perusteella käyttäytymisensä LDA (mutta ei EPM), osoitti korkeampia VEGF pitoisuudet ihovaurioita (halkaisija 2 mm), jotka edustavat siirtyminen polttovälin epidermaalinen liikakasvu tosi papilloomavirus ja ovat osa kirjo vauriot johtavat lopulta SCC [54], [55] (HiAnx = 76,0 ± 16,7 pg /ml, LoAnx = 45,1 ± 10,1 pg /ml,

t-

testi

p

0,09, vaikutus size = 0,6). HiAnx hiiret osoittivat myös korkeampia VEGF pitoisuudet UV-altistunut iho jossa ei ollut näkyviä vaurioita (HiAnx = 29,9 ± 5,5 pg /ml, LoAnx = 20,0 ± 2,7 pg /ml,

t-

testi

p

0,09, vaikutus size = 0,6; regressio kulmakerroin = 0,5,

p

0,05).

keskustelu

Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että stressi-altis persoonallisuus ja selviytymistä tyylit ja tekijät, kuten piirre ahdistus liittyy korkeampaan syövän ilmaantuvuus ja /tai lisääntynyt kuolleisuus [1] – [8], mutta muut tutkimukset ovat epäonnistuneet löytää assosiaatioita persoonallisuuden piirteet ja syövän ilmaantuvuus ja /tai kuolleisuutta [9] – [13]. Oivaltava arvioita viittaavat siihen, että kiistanalaista luonnetta koskevat päätelmät persoonallisuustekijät ja syöpäalttiuteen johtuvat ajoitus persoonallisuuden arviointeja suhteessa syövän diagnoosit; vuorovaikutus persoonallisuuden tyyppi, stressor vakavuudesta, ja siihen liittyvät tekijät [14], [15]; menetelmiin heterogeenisuus tutkimukset [16]; ja keskittyminen immunologiseen resistenttejä kasvaimia joissakin tutkimuksissa [17]. Tutkimuksessa kuvattu tässä tutkittiin yhdistyksen välillä perustason (pre-syöpä) ahdistus fenotyyppi ja syöpäalttiutta valvotuissa laboratorio-olosuhteissa ja puitteissa immuunivastetta reagoiva kasvain.

Ahdistus Fenotyyppikuvaus ja kasvaintaakkaa

Testasimme hypoteesia, että hiirien korkean ahdistunut käyttäytymisen fenotyyppi lähtötilanteessa olisi alttiimpia UV-induced SCC verrattuna hiiriin, joilla on pieni-ahdistunut fenotyyppi. Tätä hypoteesia tukevat, huomasimme, että HiAnx hiiret osoittivat suuremman tuumorikuorma kaikissa vaiheissa kasvaimen kehitystä (Fig. 1): papilloomavirus syntyminen ja regressio (~weeks 11-19), siirtyminen papilloomavirus SCC (~weeks 20-25) , ja SCC etenemiseen (~week 26 alkaen). Löysimme enää yhdistyksen välillä ahdistusta fenotyyppi ja aika kasvaimen puhkeamista. Tämä osoittaa, että korkean ahdistunut fenotyyppiä ei jouduttaa kasvaimen esiintymistiheys vaan liittyy lisääntynyt kasvaimen määrä ja etenemisen kerran kasvaimia alkaa syntyä. Nämä havainnot viittaavat siihen, että se voi olla hyödyllistä, erityisesti korkean ahdistunut potilaat, vastaanottaa käyttäytymiseen ja /tai kemoterapia-yhteensopiva farmakologinen ahdistusta lievittävä hoito pian syövän diagnoosin ja aikana ja sen jälkeen syövän hoidossa. Nämä havainnot ovat yhtä mieltä tyylikäs rotilla osoittavat, että korkean ahdistunut, neophillic fenotyyppi [56], tai anxiogenic ja stressi aiheuttavia vaikutuksia sosiaaliseen eristyneisyyteen [57], voivat osaltaan lisätä alttiutta maitorauhaskasvaimet.

Kemokiini ja Sytokiini sovittelijoiden

jotta voitaisiin tunnistaa immunologisia mekanismeja, jotka voivat välittää eroja kasvaimen herkkyys välillä HiAnx ja LoAnx hiiriä, tutkimme geenien ilmentyminen kriittisten kemokiinien ja sytokiinien tiedetään aiheuttavan suojaavia vs. haitallisia vaikutuksia yhteydessä SCC. Tekijöitä, jotka voivat lisätä suojaavan immuniteetin SCC olivat CTACK (tunnetaan myös nimellä CCL27), kemokiini, joka on ratkaiseva rekrytoida skin-homing T-solujen sivustoille ihon immuuniaktivaatiota [58] – [60], ja IL-12 ja IFN γ, sytokiineja, jotka ovat kriittisiä aloitus ja ylläpito soluvälitteinen [61], [62] ja kasvaimen immuniteetti [63] – [67]. Tekijöitä, jotka ovat tunnetusti SCC etenemiseen ja on liitetty huonoon ennusteeseen sisältyy CCL22, kemokiini, joka houkuttelee säätelijä-T-solujen (Tregs), joka sammuttaa kasvaimen vastainen immuunivaste [68] – [71], IL-10, joka on immuunisäätelytoimintoja /tukahduttava sytokiinien [72] – [75], ja IL-4, joka on prototyyppiä Th2 sytokiinien [76] – [79]. Geenien ilmentyminen kvantifioitiin iholla, joka oli vailla havaittavissa vaurioita tutkiakseen varhain muutoksia ihon immuniteetin puuttuessa kasvaimet (kuva 2), sekä kasvaimia (kuva 3). Tulokset osoittivat, että UV-altistuneet ihon sekä kasvainten HiAnx hiirten ilmaistuna alhaisempi suojaavan kemokiinien ja sytokiinien kuin LoAnx hiirillä. Koska biologisten vaikutusten kemokiinien ja sytokiinien liittyy usein muutoksia tasapaino torjumaan tekijöiden, myös tutkinut, mitä vaikutuksia korkean versus matalan ahdistunut fenotyypin suhde suojaavia haitallisia tekijöitä. Kasvainten HiAnx hiiret osoittivat pienempi suhde CTACK /CCL22 ja (IL-12 + IFN-γ) /(IL-10 + IL-4).

Yhdessä nämä tiedot viittaavat siihen, että kemokiinin tasapaino kasvaimissa HiAnx hiirillä on siirtynyt CCL22, joka houkuttelee sääntely /estäjä-T-soluja, jotka tukahduttaa kasvaimen vastaisen immuniteetin, ja kaukana CTACK, mikä saattaa houkutella suojaava anti-kasvain T soluja

.

Vastaavasti sytokiinien tasapainoa HiAnx hiirillä on siirtynyt immuunisäätelytoimintoja /tukahduttava (IL-10) ja tyypin 2 (IL-4) sytokiinien ja pois Type-1 sytokiinien kuten IL-12 ja IFN

γ

, joiden tiedetään suojaamaan SCC

.

immuunisolujen Sovittelijat

Koska erot kemokiinin ja sytokiinien geeniekspression kuvattu edellisessä osiossa määrällisesti vaikutukset korkea- versus matalan ahdistunut fenotyypin koot kriittisten kasvaimen soluttautua lymfosyyttipopulaatioista, joiden tiedetään olevan tärkeitä suojaavia tai haitallisen yhteydessä SCC (Fig. 4). Edustavia mikrovalokuvia esitetään myös (Fig. 5). Solutyyppejä tunnettua asentaa kasvaimen vastaisen immuunivasteen vastaan ​​SCC sisältyy CD4 + T-auttajasolujen (Th) ja CD8 + T -solujen (CTL) [40], [80] – [85]. Solutyypin tiedetään suosivan kasvaimen etenemistä estämällä kasvaimen vastaisen immuniteetin, oli CD25 + regulatory /heikentäjä-T-solu (Treg) [68] – [71], [86], [87]. Koska biologisten vaikutusten näistä immuunijärjestelmän solualapopulaatioiden liittyy usein muutoksia tasapainon kilpailevien solutyyppien, tutkimme myös vaikutuksia korkean versus matalan ahdistunut fenotyypin suhteet suojaavan haitallisille soluihin: Tulokset osoittivat matalampia tunkeutuvien Th-solujen , useammat Tregs, ja alempi suhteet CD4 /CD25, CD8 /CD25 ja (CD4 + CD8) /CD25 tuumoreissa HiAnx hiirillä.

Tämä viittaa siihen, että tasapaino immunologiseen suojaava versus immuunisäätelytoimintoja /tukahduttava solut siirretään hyväksi aktiivisen tukahduttaminen suojaava anti-kasvain immuniteetin Tregs sisään HiAnx hiirillä.

Lisäksi tutkittiin