Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Kasvain infiltroituneen T-solut liittyvät selviytymisen epiteelin munasarjasyöpä (EOC), mutta niiden toiminnallinen tila tunnetaan huonosti, erityisesti suhteessa riskiluokat ja histologisia alatyyppejä EOC.

Menetelmät /Principal havainnot

kudossiruina sisältävä korkealaatuinen vakavien, endomet-, mucinous ja selkeä kasvaimet analysoitiin immunohistokemiallisesti läsnäolon lymfosyyttien, dendriittisolujen, neutrofiilit, makrofagit, MHC-luokan I ja II, ja erilaisia ​​markkereita aktivoinnin ja tulehdus. Korkealaatuista serous kasvaimia optimaalisesti rajatusta potilaista, positiivinen yhteys havaittiin välillä intraepiteliaalisten soluihin, jotka ilmentävät CD3, CD4, CD8, CD45RO, CD25, TIA-1, grantsyymi B, FoxP3, CD20, ja CD68 sekä MHC-luokan I ja II kasvainsolujen. Tautikohtaiset eloonjäänti positiivisessa yhteydessä markkereita CD8, CD3, FoxP3, TIA-1, CD20, MHC-luokan I ja II. Muissa histologinen alatyyppi, immuuni infiltraatit olivat harvinaisempia, ja ainoa merkkiaineita, jotka liittyvät selviytymisen olivat MHC-luokan II (positiivinen yhdistys endomet- tapausta) ja myeloperoksidaasin (negatiivinen yhdistyksen kirkas solu tapauksissa).

Johtopäätökset /Merkitys

Host immuunivaste EOC vaihtelevat huomattavasti histologisia alatyyppi ja laajuus jäljellä tauti. TIA-1, FoxP3 ja CD20 nousevat uudet positiiviset ennustettaessa korkealaatuisesta serous EOC alkaen optimaalisesti rajatusta potilaista.

Citation: Milne K, KOBEL M, Kalloger SE, Barnes RO, Gao D, Gilks ​​CB, et ai. (2009) systemaattinen analyysi Immune infiltraattien High-Grade seroosit munasarjasyöpä paljastaa CD20, FoxP3 ja TIA-1 positiivisina ennustavat tekijät. PLoS ONE 4 (7): e6412. doi: 10,1371 /journal.pone.0006412

Editor: Derya Unutmaz, New York University School of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: toukokuu 19, 2009; Hyväksytty: 26 Kesäkuu 2009; Julkaistu: 29 heinäkuu 2009

Copyright: © 2009 Milne et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tutkimus rahoittivat avustusta British Columbia Cancer Foundation, Vancouver General Hospital Foundation, ja US Dept. of Defense (OC000018). Mikään sponsoreita ollut rooli suunnittelussa ja tutkimuksen tekeminen, keräämiseen, analysointiin ja tietojen tulkinta, tai valmisteen, tarkastelun tai hyväksyntä käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, ettei kilpailevia etuja olemassa.

Johdanto

Munasarjasyöpä on tappavin gynecologic syöpä, joka vaikuttaa yli 190000 naista maailmassa vuosittain (International Agency for Research Cancer). Taudinmääritys ja läsnäolo levitetään laajalti taudin selittävät korkeaa kuolleisuutta tautiin liittyvän. Lisäksi, vaikka suuri osa potilaista aluksi vastata hyvin sytoreduktiivisen leikkauksen ja tavanomaisen kemoterapian, tauti yleensä uusiutuu 2-5 vuotta jäljellä tuumorisoluja vastustuskykyiseksi kemoterapiaa [1], [2]. Vaikka ennuste on usein huono, lukuisia suotuisia ennustetekijöitä indikaattorit on kuvattu, mukaan lukien alkuvaiheessa, huono laatu ja optimaalinen kirurgiset debulking [3], [4].

Useat viimeaikaiset tutkimukset ovat analysoineet vaikutus isännän immuniteetin sairauden ennuste. Kasvainta infiltroivia CD3 + T-solut ovat voimakkaasti yhteydessä suotuisa ennusteeseen, erityisesti kun CD3 + solut, sijaitsevat tuumorin epiteelissä [5] – [9]. Nämä havainnot on laajennettu CD8 + T-solujen osajoukko erityisesti [10] – [17], mikä viittaa siihen, että sytotoksiset T-lymfosyytit (CTL) on tärkeä rooli kasvainten vastainen immuunivaste. Näin ollen muut tekijät, jotka liittyvät CTL-vasteita ovat myös positiivisesti liittyy säilymiseen, mukaan lukien interferoni-γ (IFN-γ) [18], [19], IFN-γ-reseptorin [20], interferoni säätelytekijän (IRF) -1 [ ,,,0],21], IL-18 [22], TNF-α [23], MHC-luokan I [24] – [26], ja MHC-luokan I antigeenin prosessointia koneet [17].

toisin CD8 + T solut, useat tutkimukset ovat osoittaneet, että kasvaimen infiltroituneen CD25 + FoxP3 + T-soluja (kutsutaan säätelijä-T-solujen tai Tregs) liittyy vähentynyt selviytymisen [10], [27] – [29]. Tregs on kyky tukahduttaa proliferaatiota, sytokiinin tuottoa ja sytolyyttinen aktiivisuus CD4 + ja CD8 + T-solujen, joissa osallisina solu-solu kosketukseen ja sytokiinien, kuten TGF-β [30], [31]. Tregs voi myös indusoida immuunivastetta fenotyypin muissa solutyypeissä, kuten makrofagien, [32]. Vaikka Tregs on liitetty huonoon ennusteeseen monissa syövissä, useita poikkeuksia on äskettäin raportoitu. Leffers et. al. havaitsivat, että FoxP3 + tunkeutuu sisään pitkälle EOC liittyivät elonjäämisetua [14]. Samanlaisia ​​havaintoja on raportoitu peräsuolen syöpä [33] ja lymfooma [34] – [36]. Lisäksi hiiren malleissa, FoxP3 + solut voivat vaikuttaa myönteisesti antituumoriselta ja anti-virus immuniteetti [37], [38]. Täsmällistä asemaa säätelijä-T-solujen syöpä tuloksiin optio vetänyt koska useat ryhmät yrittävät parantaa kasvainimmuniteetin kuluttamalla FoxP3 + Tregs syöpäpotilaista [39] – [44], mukaan lukien EOC potilaat [45].

lisäksi Tregs muita solutyyppejä kuulemma olla immunosuppressiivinen rooli EOC. Esimerkiksi plasmasolumaisiin dendriittisolujen osaltaan immunosuppression edistämällä tai rekrytointi interleukiini-10-tuottavien CD4 + ja CD8 + säätelijä-T-solujen [46], [47]. Myeloidinen dendriittisolut (MDC) heikentää T-solujen immuniteetin ilmaisemalla B7-H1, ligandi inhiboivan reseptorin PD-1 löytyy T-solujen [48]. Monosyytit ja makrofagit EOC mikroympäristössä voidaan polarisoida kohti ns M2 fenotyyppi, joka on tyypillistä, että IL-10, TGF-b, ja scavenger-reseptoreihin, ja on ajateltu edistää kasvaimen etenemistä [49], [50], [51]. Vaikutuksen alaisena IL-6 ja IL-10, makrofagien EOC voi myös ilmaista B7-H4, joka estää T-solujen proliferaatiota [52]. Makrofagit tuottavat myös CCL22, joka edistää Treg värväyksen kasvain ympäristölle [32]. Lopuksi ilmaus tulehduksellinen välittäjänä COX-2 in kasvain epiteelissä on liittynyt alentunut lymfosyyttien tunkeutumisen ja huonon ennusteen EOC [13], [53].

With kasvainkudoksen microarray (TMA) -tekniikka , suuri määrä retrospektiivinen on tutkittu suhdetta kasvainta infiltroituneen immuunisolujen ja ennusteen EOC ja muita syöpiä. Kuitenkin useimmat tutkimukset keskittyvät yhteen tai muutamaan markkereita, niin että yhdistykset eri immunologisten tekijöiden voidaan hukata. Lisäksi useimmat tutkimukset eivät käsitellä eri histologisia alatyyppejä EOC, jotka nyt tunnustettu käyttäytyä erillisinä sairaudet [54]. Tämän seurauksena on olemassa epäjohdonmukaisuuksia ja ratkaisemattomia kysymyksiä kirjallisuudessa koskee ennustetekijöiden merkityksestä eri immuunijärjestelmän soluinfiltraat-. Tilanteen korjaamiseksi, analysoimme useita suuria sarja EOC kasvaimia, mukaan lukien korkea-asteen vakavien, endomet-, kirkas solu ja mucinous alatyyppiä, läsnäolo eri immuunisolujen suodattuu ja tulehdusmarkkereiden. Tuloksemme osoittavat, että korkea-asteen serous kasvaimet ovat selvä immunologinen profiili on vahvasti sidoksissa potilaan selviytymistä.

Tulokset

epiteelinsisäisen T-solut ja niihin liittyvät toiminnalliset merkkiaineiden korkealaatuisesta serous EOC

aluksi tutkittiin suhdetta immuuni suodattuu ja eloonjäämisen kohortin 199 korkealaatuisesta vakavasta EOC potilaille. Päätimme ensin keskittyä korkean asteen vakavien tapausten, kuten muut histologinen alatyyppi näytteille erillisiä biologisia ja kliiniset ominaisuudet, jotka mahdollisesti sekoittavat [54], [55]. Tämä ensimmäinen kohortti rajoitettiin potilaisiin, joille oli tehty optimaalisen cytoreduction (eli ilman todisteita makroskooppisten jäljellä tauti). Potilaan ominaisuudet on esitetty taulukossa 1.

kasvaimia tässä ensimmäisessä kohortissa oli aiemmin arvioitiin immunohistokemiallisesti (IHC) erilaisia ​​lymfosyyttien markkereita, mukaan lukien CD3, CD4, CD8, CD20 ja grantsyymi B [12]. Epiteelinsisäisen lymfosyyttien (eli lymfosyytit sisällä epiteelin osa kasvain) pisteytettiin joko läsnä (eli yksi tai useampi intraepiteliaalisia lymfosyyttejä on läsnä vähintään kahdella 0,6 mm: n ytimiä) tai poissa. Me uudelleen analysoitu näitä tietoja keskittyy yksinomaan korkealaatuista vakavasta tapauksissa. Huomasimme, että 83,2% (163/196) arviointikelpoisista korkealaatuisesta serous kasvaimet olivat positiivisia intraepiteliaalisten CD3 + T-solujen, kun taas CD4 + ja CD8 + intraepiteliaalisten soluja todettiin 53,4% (103/193) ja 84,0% (163/194) ja arvioitavissa kasvaimia, vastaavasti (Fig. 1A B ja tietoja ei ole esitetty). CD4 + ja CD8 + solujen infiltraatit osoitti vahva positiivinen yhdistys (p 0,0001). Taulukossa 2 on esitetty tilastollisen yhdistysten Näiden ja kaikkien muiden merkkiaineiden tutkittu tämän ensimmäisen kohortissa.

(A) CD4, (B) CD8, (C) CD45RO, (D) OX40, (E) CD25, (F ) TIA-1, (G) Granzyme B, ja (H) FoxP3. 40X tavoite.

Vaikka edellä markkereita mitkä lymfosyyttien alaryhmiä ovat läsnä kasvaimia, ne eivät paljasta heidän aktivaatiotilaa. Tämän kysymyksen, analysoimme kasvaimet ilmentämiseen CD45RO, OX40 ja CD25, jotka ilmaistaan ​​aktivoidut T-solut [56], [57]. Käyttämällä samaa pisteytys kriteerit kuin edellä, 70,6% (132/187), kasvaimia oli positiivinen intraepiteliaalisten CD45RO + soluja, ja 49,7% (96/193) oli positiivisia intraepiteliaalisten CD25 + -solujen (Fig. 1 C 0,0001). Lisäksi pareittain vertailuissa, TIA-1 + ja Granzyme B + solut kussakin liittyvä aktivaatiomarkkereita CD45RO, CD25 ja OX40. Lopuksi, TIA-1 + ja grantsyymi B + solut liittyvät kukin läsnä CD3 +, CD4 + ja CD8 + solut (taulukko 2). Sen tutkimiseksi, onko TIA-1 ja grantsyymi B ilmentyminen voi johtua läsnäolon NK tai NKT-soluja, tutkimme kasvaimia NK-solujen markkereita CD56 ja CD57. Sekä merkit, oli joko vähän tai ei lainkaan infiltraatit lainkaan tuumorin sisällä epiteelin (tuloksia ei ole esitetty), mikä osoittaa, että TIA-1 + ja grantsyymi B + infiltraatteja oli todennäköisesti T-soluja.

Lopuksi, kasvaimet olivat analysoitiin läsnäolo intraepiteliaalisten soluja, jotka ilmentävät FoxP3, joka ihmisillä on markkeri säätelijä-T-solujen ja aktivoitujen T-solujen [61], [62]. Noin puolet kasvaimia (52,9%, 100/189) oli positiivisia intraepiteliaalisten FoxP3 + soluissa (kuvio. 1H). Oli vahvan yhteyden FoxP3 + ja CD25 + soluja (p 0,0001), ja FoxP3 + ja CD25 + solut kukin liittyy voimakkaasti CD4 + solujen (p 0,0001 molemmille markkereita). Siten yhdenmukaisia ​​aiempien raporttien [10], [14], [27], [28], joka on merkittävä osa kasvaimien sisälsi intraepiteliaalisten infiltraatit kanssa markkereita ominaista Tregs (CD4 +, CD25 +, ja FoxP3 +).

MHC-luokan I ja II korkea-asteen serous EOC

Analysoimme kasvainsolut MHC-luokan I ja II käyttäen neljän pisteen asteikolla (negatiivinen, polttoväli [ 10%], hajanaista [10- 50%] tai diffuusi [ 50%]). Kaikki arvioitavissa kasvaimet (185/185) ilmaistuna MHC-luokan I jossain määrin (so polttoväli, hajanaisia ​​tai hajanainen), joka ilmaisee ne voisivat teoriassa esillä olevan antigeenin CD8 + T-soluja. Tilastoanalyyseihin, vain korkeimman luokan (diffuusi, 50%) katsottiin positiiviseksi (Fig. 2A B). Käyttämällä tätä kynnystä, 85,4% (158/185) kasvaimista oli positiivinen MHC-luokan I MHC-luokan I positiivisesti liittyvät kaikkiin kolmeen T solualaryhmiä (CD3, CD4, ja CD8), aktivointi markkereita CD45RO ja CD25, ja differentiaatiomarkkerien TIA-1, grantsyymi B ja FoxP3 (taulukko 2).

40X tavoite.

suurin osa kasvaimista (86,5%, 166/192) ilmaistu MHC-luokan II jonkin verran (eli polttoväli, hajanaisia ​​tai diffuusi), joka ilmaisee ne voisivat teoriassa esillä olevan antigeenin CD4 + T-soluja. Kuten MHC-luokan I, vain korkeimman luokan (diffuusi, 50%) pidettiin positiivisena tilastollisia analyysejä (Fig. 2 C 0,0001). Näin ollen, luokan II MHC-positiivisesti liittyy kaikkien kolmen T-solun osajoukot (CD3, CD4, CD8), aktivointi markkereita CD45RO ja CD25, ja erilaistumisen markkereita TIA-1, grantsyymi B ja FoxP3 (taulukko 2). Samanlaisia ​​tuloksia MHC-luokan I, MHC-luokan II kasvaimeen epiteelin positiivisesti liittyy erilaisia ​​T-solujen markkereita, mukaan lukien CD3, CD4, CD8, CD45RO, TIA-1, grantsyymi B, CD25 ja FoxP3 (taulukko 2) .

epiteelinsisäisen B-solujen korkealaatuisesta serous EOC

kudokset värjättiin vasta-aineen CD20, joka ilmaistaan ​​B-soluja naiivi muistiin erilaistumisen vaiheissa [63]. Epiteelinsisäisen CD20 + soluja todettiin 41,9% (83/198) arviointikelpoisista kasvaimia (Fig. 3A). CD20 + infiltraatteja liittyy vahvasti kaikkien kolmen T solualaryhmiä (CD3, CD4, ja CD8); aktivointi markkereita CD45RO ja CD25; erilaistumista markers TIA-1, grantsyymi B ja FoxP3; ja molemmat MHC-luokan I ja II (taulukko 2).

40X tavoite.

epiteelinsisäisen dendriittisolujen, granulosyytit ja makrofagit korkea-asteen serous EOC

kasvaimet analysoitiin läsnäolon epäkypsiä ja kypsiä dendriittisoluja värjäämällä varten CD1a ja CD208, vastaavasti. Vähemmistö kasvaimia (13,4%, 23/172) sisälsi intraepiteliaalisten CD1 a + soluissa (kuvio. 3B). Ei merkittävää yhteyttä johonkin epiteelinsisäisen lymfosyyttien markkereita (CD3, CD8 tai CD20), aktivaatiomarkkereita (CD45RO tai CD25), Differentiaatiomarkkerien (TIA-1, grantsyymi B tai FoxP3) tai MHC-luokan I tai II (taulukko 2) havaittiin mahdollisesti vähäisen määrän CD1 a + soluja. Toisin kuin CD1a, mikään kasvaimia teki positiivinen intraepiteliaalisten CD208 + -solujen. Parallel analyysi nielurisojen kudoksen paljasti, että läsnä monien CD208 + -solujen ja siten validoida IHC menettelyä.

Noin puolet kasvaimia (54,7%, 87/159) sisälsi intraepiteliaalisten ilmentävät solut makrofagimarkkeri CD68 (Fig. 3d) . CD68 positiivisesti liittyy useita lymfosyyttien markkereita (CD3, CD8 ja CD20), aktivaatiomarkkereiden (CD45RO ja CD25), erilaistumisen markkereita (TIA-1, grantsyymi B ja FoxP3) ja MHC-luokan I (taulukko 2). Onko jollakin granulosyyttien, TMA värjättiin myeloperoksidaasia. Kaksikymmentä neljä prosenttia (37/154) kasvainten sisälsi myeloperoksidaasin-ilmentäviä soluja (Fig. 3C), mutta nämä eivät osoittaneet mitään merkittäviä assosiaatioita muiden merkkiaineiden, lukuun ottamatta CD4 (p = 0,034).

COX -2 entsyymi on liittynyt huonompi selviytyminen EOC kun ilmaistaan ​​epiteelin komponentti kasvain [53]. Siksi kasvaimet pisteytettiin ilmentymisen COX-2: n epiteelin komponentti käyttäen neljän pisteen asteikolla (negatiivinen, moniselitteinen [0-1%], hajanaista [1-50%] tai hajanainen [ 50%]) (kuvio . 2E F). Kaksi kolmasosaa kasvaimia (66,5%, 111/167) oli positiivisia COX-2 (eli vaihtelevaa tai diffuusi värjäytyminen). Toisin kuin raportteja munasarjojen, kohdunkaulan, ja muut syövät, [13], [64], [65], ilmentyminen COX-2 ei ole merkittävästi yhteydessä minkään immuunijärjestelmän infiltraattien tutkittu (taulukko 2).

assosiaatioiden immuuni suodattuu ja potilaiden eloonjäämisen korkealaatuisesta serous EOC

Kaplan-Meier-analyysi suoritettiin arvioimaan yhdistyksen eri immuuni suodattuu ja tautikohtaista eloonjäämisen (DSS). Yhdenmukainen ennen raportit [5] – [7], [10] – [17], intraepiteliaalisten CD3 + ja CD8 + solut liittyy lisääntynyt DSS (p = 0,0009 ja 0,0008 vastaavasti) (Fig. 4A B). Epiteelinsisäisen CD4 + solut osoittivat lisääntymässä DSS, mutta tämä ei ollut tilastollisesti merkitsevä (kuvio. 4C). NK solujen markkereita CD56 ja CD57 osoittanut mitään yhdessä DSS (tuloksia ei ole esitetty).

Kaplan-Meier käyriä tautikohtaisiin potilaiden elinaikaa sai positiivisiksi tai negatiivisiksi (A) CD3, (B) CD8 , (C) CD4, (D) FoxP3, (E) CD20, (F) CD68, (G) TIA-1, (H) Granzyme B, (I) MHC-luokan I ja (J) MHC-luokan II. Tiedot olivat peräisin optimaalisesti rajatusta potilailla, joilla on korkea-asteen vakavasta EOC.

Kiehtovaa, intraepiteliaalisten CD20 + solut liittyy lisääntynyt DSS (p = 0,0033) (Fig. 4E). Lisäksi yhdistelmä CD8 + ja CD20 + infiltraattien liittyy merkittävästi lisääntynyt DSS yli kasvaimia, jotka sisälsivät CD8 + infiltraatteja, mutta ei CD20 + infiltraatit (mediaani 4432 päivä vs. 2279 päivä, p = 0,0115) (tietoja ei esitetty).

toisin Imusolun markkereita, dendritic solumarkkerille CD1 ei osoittanut yhdessä DSS, mahdollisesti vähäisen määrän kasvaimia sisältävien CD1 a + soluja. Samoin markkereita CD68, COX-2 ja myeloperoksidaasin osoittanut mitään yhdessä DSS (Fig. 4F ja tietoja ei näytetty).

Koska yhdistyksen välillä CD8 + T-solujen ja DSS, arvioimme muita kanoninen ominaisuuksia aktiivisen CTL vastauksia. DSS positiivisesti liittyy intraepiteliaalisten TIA-1 + -soluissa (p = 0,0003) sekä MHC-luokan I ja II kasvainsolujen (p = 0,0014 ja 0,0026 vastaavasti) (kuvio. 4G, I, mutta tämä suuntaus ei ollut tilastollisesti merkitsevä (p = 0,052). Siten useiden analyysien, kasvaimen infiltroituneen FoxP3 + solut osoittivat suuntaus tai tilastollisesti merkittävää yhteyttä lisääntynyt DSS.

välinen yhteys immuunijärjestelmän suodattuu ja eloonjääminen on riippuvainen siitä, missä määrin jäljellä taudin

T soluinfiltraat- ovat tiettävästi yleisempiä potilailla, joilla on optimaalinen verrattuna optimaalinen cytoreduction [5], [66]. Sen tutkimiseksi, onko tämä totta muiden lymfosyyttien markkereita, analysoimme ylimääräinen kohortin 220 korkealaatuisesta serous tapauksissa potilaiden tiedetään olevan makroskooppiset jäljellä tautia seuraavat ensisijainen sytoreduktiivisen leikkauksen. Olemme keskittyneet CD8 + suodattuu, sekä kolme uutta prognostisia markkereita edellä esitetyn analyysin (ts FoxP3, TIA-1 ja CD20). Verrattuna optimaalisesti rajatusta potilaan kohortin, potilailla, joilla on makroskooppisia jäljellä tauti oli huomattavasti alhaisempi yleisyys CD8 + (58,5%), FoxP3 + (20,2%), TIA-1 + (39,5%) ja CD20 + (16,3%) infiltraatio (p 0,0001 kaikille markkereita). Kaplan-Meier-analyysi Näiden neljän markkereita, vain CD8 + infiltraatit ollut merkittävää yhteyttä selviytymisen (p = 0,0044) potilailla, joilla makroskooppisten jäljellä tauti (tuloksia ei ole esitetty).

välinen yhteys immuunijärjestelmän suodattuu ja selviytyminen on riippuvainen histologinen alatyyppi

Edellä olevat tulokset perustuvat yksinomaan korkealaatuista vakavasta EOC tapauksissa. Arvioimaan yhdistyksen välillä immuunijärjestelmän suodattuu ja DSS muissa histologisia alatyyppejä EOC teimme samat analyysit käyttämällä ylimääräistä 288 EOC kasvaimia seuraavista histologinen alatyyppi: mucinous (n = 31), endomet- (n = 125) ja selkeä solujen ( n = 132). Nämä ylimääräiset kasvain näytteet olivat aikaisemmin kuvatun kohortin optimaalisesti rajatusta potilaista [12].

yleensä immuuni infiltraatit olivat vähemmän yleisiä muissa histologinen alatyyppi verrattuna korkealaatuinen serous tapauksia ennenkin. Tämä todettiin kaikissa lymfosyyttien markkereita tutkittu (ts CD3, CD8, CD4, CD45RO, CD25, FoxP3, TIA-1, grantsyymi B, ja CD20) (Fig. 5). Ero oli silmiinpistävin varten markkereita FoxP3, CD25 ja CD20. Kun korkea-asteen vakavasta tapauksissa seuraavaksi korkein taajuus immuuni infiltraattien nähtiin endomet- alatyypin (Fig. 5).

Bars osoittavat prosenttiosuuden kasvainten pisteytys positiivinen intrapithelial soluja, jotka ilmentävät CD3, CD8, CD4 , CD45RO, CD25, FoxP3, TIA-1, grantsyymi B, CD20 ja CD68. MHC-luokan I ja II kasvaimen epiteelin on myös esitetty. Tiedot olivat peräisin optimaalisesti rajatusta potilaista.

tutkinut yhdistyksen välillä immuunijärjestelmän suodattuu ja DSS että endomet- ja selkeä solualatyyppien; määrä mucinous tapauksissa oli liian pieni suorittamaan vankka tilastollinen analyysi. Sillä endomet- tapauksissa ainoa merkittävä assosiaatio todettiin välillä MHC-luokan II ilmentymisen ja lisääntynyt DSS (p = 0,039) (tuloksia ei ole esitetty). Selkeitä solun tapauksessa ainoa merkittävä yhdistyksen todettiin läsnäolon välillä myeloperoksidaasin-positiivisia suodattuu ja väheni DSS (p = 0,040, tuloksia ei ole esitetty). Siten suhde immuuni suodattuu ja selviytyminen vaihtelee suuresti eri histologisia alatyyppejä EOC.

Keskustelu

systemaattisesti tutkittu suhdetta immuuni suodattuu ja potilaiden eloonjäämisen kolme suurta EOC sarjassa. Sopusoinnussa Clarke et al. [12], huomasimme, että korkea-asteen serous kasvaimet ovat selvä immunologisen profiilin verrattuna endomet-, kirkas solu ja mucinous alatyyppiä. Lisäksi olemme havainneet, että immuunijärjestelmän infiltraatit olivat yleensä yleisempiä kasvaimia sairastavien potilaiden optimaalisen cytoreduction. FoxP3, TIA-1 ja CD20 tullut uusia immunologisia merkkiaineita liittyy lisääntynyt potilaan selviytymistä. Tuloksemme korostavat histologista alatyyppiä immunobiologiaa EOC, joilla voi olla merkittäviä vaikutuksia immunoterapiaa tämän perheen sairauksia.

intraepiteliaalista lymfosyyttejä (eli solut, jotka ilmentävät CD3, CD4, CD8, FoxP3 tai CD20 ) olivat yleisempiä korkealaatuista vakavien tapausten, jonka jälkeen endomet- tapauksissa. Lisäksi intraepiteliaalisten lymfosyytit olivat yleisempiä kasvaimia optimaalisesti rajatusta potilailla verrattuna potilaisiin, joiden makroskooppinen jäljellä sairaus. Useita biologisia ominaisuuksia kasvaimia näyttävät vaikuttavan tiheyden lymfosyyttisen infiltraattien. (A) T-solujen infiltraatio positiivisesti liittyy MHC-luokan I ja II kasvainsolujen (taulukko 2), sekä luokan I MHC-antigeenin prosessointia koneet [15] – [17], [67], viitaten siihen, että antigeenin esittely voi olla tärkeä tekijä T-solujen tunkeutuminen. (B) sopusoinnussa käsitystä, kasvaimista menetys tai mutaatio BRCA1 tai p53-geenien on lisääntynyt tiheys kasvaimen infiltroituneen T-solujen [12], [66]. Tämä viittaa siihen, että viallisen DNA: n korjaukseen ja sitä seurannut genomista epävakautta kasvaimet voivat johtaa sukupolven neo-antigeenejä, jotka laukaisevat isännän T-soluvasteita. (C) molekyylejä myös olla merkitystä, koska tiheys kasvainta infiltroituneen T-solujen on negatiivisesti liittyy VEGF: n ilmentymistä, B7-H1 /PD-L1 ja endoteliini B-reseptori kasvaimia [5], [11], [68 ] ja positiivisessa yhteydessä ilmaus kemokiinien CXCL9, CCL21, CCL22, CCL2 ja CCL5- [5], [28], [69]. (D) Lisäksi, kaksi ryhmää ovat raportoineet geeniekspressioprofiilit jotka korreloivat läsnäolo kasvaimeen infiltroivien T-solujen EOC [12], [70]. Jälkimmäiset tutkimukset vahvistavat joitakin edellä yhdistysten (esim MHC-luokan I ja II, beta 2 mikroglobuliini TAP1- ja 2) ja uudet tekijät, jotka liittyvät T-solujen infiltraatit (esim IL-15, IL-32 ja lukuisia interferoni aiheuttamaa geenejä). Oletettavasti yksi tai useampi edellä mainituista tekijöistä selittää havaitun rikastamiseen kasvaimeen tunkeutuvia lymfosyyttejä in korkealaatuisesta serous ja optimaalisesti cytoreduced tapauksissa.

Vaikka yhdistys välillä intraepiteliaalisten CD8 + T-solujen ja elonjäämisetua in EOC on erittäin toistettavissa havainto [10] – [17], suhteellisen vähän tiedetään toiminnallisen fenotyypin näiden CD8 + T-soluja. Useat tekijät osoittavat, klassinen sytolyyttisen vasteen taustalla suotuisat tulokset. Esimerkiksi muut ovat ilmoittaneet positiivinen yhteys selviytymisen ja kasvaimensisäisenä ilmentymistä IFN γ [18], [19], IFN γ reseptori [20], sekä lukuisia interferoni-reagoiva geenejä, kuten MHC luokan I [24] – [26], MHC-luokan I antigeenin koneet [17], MHC-luokan II [15], [16], ja IRF-1 [21]. IL-18 [22] ja TNF-α [23] näyttävät myös olevan tärkeä osa T-soluvasteen, kun molemmat sytokiinit on myönteinen vaikutus eloonjäämiseen. Tutkimme kaksi komponenttia sytolyyttisen rakeita, grantsyymi B ja TIA-1, jotka molemmat osoittivat yhdessä CD8 + T-solujen infiltraatio. Näistä kaksi markkereita, vain TIA-1 osoitti tilastollisesti merkittävää yhteyttä eloonjäämisen korkealaatuisesta vakavien tapausten (Kuva. 4). TIA-1 + -soluissa, on myös kuvattu in medullaarinen rintasyövän [71], [72] ja melanooma [73], jossa ne liittyvät suotuisat prognostisia ominaisuuksia. Sen sijaan kasvaimen infiltroituneen TIA-1 + solut liittyy vähentynyt selviytymisen lymfooman [74] – [78]. Mielenkiintoista on, TIA-1 ei ole vain markkeri sytolyyttisen rakeina; se on RNA sitovan proteiinin mukana transkription jälkeisen mRNA sääntelyä [79]. Vielä on selvitettävä, onko yhdistyksen välillä intraepiteliaalisten TIA-1 + solujen ja eloonjäämisen EOC johtuu rooliin tämän proteiinin sytolyyttisissä rae toiminto tai mRNA sääntelyä.

Treg infiltraatit on aiemmin liittynyt vähentynyt selviytymisen munasarjasyöpää EOC [10], [27], [28]. Kuitenkin tässä tutkimuksessa ja yksi muu tuoreen raportin [14], FoxP3 + infiltraatteja liittyy lisääntynyt selviytymistä. Nämä näennäisesti ristiriitaiset havainnot voi johtua useista tekijöistä. Ensinnäkin, ei kaikki tutkimukset otetaan huomioon histologinen alatyyppejä EOC tai laajuus jäljellä taudin; Esillä olevassa tutkimuksessa, FoxP3 + solut vain liittyy selviytymisen korkealaatuista serous kasvaimia optimaalisesti rajatusta potilaista. Toinen, erilaisia ​​vasta-aineita on käytetty havaitsemaan FoxP3, mikä voi johtaa ristiriitaisia ​​tuloksia [80]. Kolmanneksi eri pisteytys kriteereitä voidaan käyttää. Esimerkiksi tarkka kasvaimeen sijainti Tregs on tärkeä tekijä ennusteen mahasyövän [81]. Neljänneksi molekyylimarkkereiden käytetään määrittelemään Tregs eroa tutkimuksissa. Vaikka FoxP3 pidetään edelleen luotettavin markkeri Tregs ihmisen syövässä [82], [83], se voidaan myös ilmaisseet epiteelikasvainsolut [84] – [86] ja

in vitro

aktivoidaan CD4 + ja CD8 + T-solujen [87] – [95]. Näistä syistä, jotkut tutkimukset ovat CD25 toisena markkerina Tregs [10], [28]. Kuitenkin, kuten FoxP3, CD25 on mahdollisesti ilmaistaan ​​T-soluja, joten ei ole selvää, että dual värjäytymistä FoxP3 ja CD25 tarkemmin yksilöi Tregs [89], [96]. Muut ominaisuudet Tregs ovat korkea ilmentymä GITR ja CTLA-4 ja alhainen ilmentyminen CD127 ja CD49d ja [97], [98], mutta nämä merkit ovat teknisesti vaikea arvioida on parafinoidut TMA.

Nämä tekniset näkökohdat huolimatta on olemassa yhä enemmän todisteita siitä, että kasvaimeen infiltroituneen FoxP3 + solut liittyy suotuisa ennusteeseen EOC, peräsuolen syöpä, pään ja kaulan alueen syöpä, ja lymfooma [14,33, -36,99-102]. Kuinka voisi FoxP3 + T-solut edistävät suotuisia tuloksia? Esillä olevassa tutkimuksessa, FoxP3 + solut olivat yhteydessä muihin efektori-T-soluja, ja samanlaisia ​​tuloksia on raportoitu melanooma [103]. Näin ollen, FoxP3 + solut voivat yksinkertaisesti olla osoitus vahva CD8 + T-solujen vaste, joka saattaa ovat suuremmat kuin immunosuppressiiviset vaikutukset FoxP3 + soluja. Vaihtoehtoisesti, osajoukot ihmisen FoxP3 + T-solujen on äskettäin osoitettu olevan tulehdusta, IL-17-tuottamiseen fenotyyppi [104] – [106]. Itse asiassa CD4 + T-solut voidaan painottua tämä niin kutsuttu Th17 fenotyyppi altistuminen TGF-β yhdessä IL-6, IL-1 tai IL-23 [107] – [109]. Nämä tekijät ovat läsnä EOC kasvaimen ympäristö [8], ja näin ollen, Th17 solujen on raportoitu EOC [110] – [112]. Siten yhdistyksen välillä FoxP3 + solujen ja elonjäämisetua voi mahdollisesti heijastavat taustalla Th17 kaltainen anti-kasvain vaste. On selvää, enemmän työtä tarvitaan määrittämään missä määrin FoxP3 + T-solujen EOC edustavat Tregs verrattuna Th17 tai muita T-soluja.

Havainto, että intraepiteliaalisten CD20 + infiltraatit liittyy lisääntynyt DSS on uusi löydös EOC . Dong et. al. raportoitu, että B-solujen askites liittyi lyhyempi hengissä EOC [113], mutta niiden tutkimuksessa keskityttiin B-solujen vatsakalvon ja Pleuraeffuusiot kerätään kemoterapian jälkeen, jonka määritelmän mukaan huono tulos kohortti. Itse asiassa tässä tutkimuksessa, intraepiteliaalisten CD20 + B-solujen ei todettu yhdessä selviytymisen potilailla, joilla on suuri riski, suboptimally rajatusta tauti. Kasvain infiltroituneen CD20 + B-solut ovat tunnusmerkki medullaarinen rintasyövän ja on ehdotettu välittävän suotuisan ennusteen [114], [115]. Lisäksi, kun läsnä on B-solun transkription allekirjoitus solmussa rintasyöpä liittyy lisääntynyt eloonjääminen [116]. B soluinfiltraat- rintasyövän edustavat kloonaamalla kasvatettujen populaatioiden, ilmaista somaattisesti hypermutated IgG-molekyylit, ja tunnistavat kohdeantigeenit kuten gangliosidin D3 ja pinta-siirtämisellä aktiini [114], [115], [117] – [120]. On epäselvää, kuinka kasvain infiltroituneen B-solut edistävät suotuisia tuloksia syövän. al.