Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Koska mismatch korjaus (MMR) geeni,

hMLH1

tärkeä rooli ylläpidossa kromosomi eheyden. Useat tutkimukset ovat tutkineet yhdistysten

hMLH1

-93G A (rs1800734) ja Ile219Val (rs1799977) erilaisissa kasvaintyypeissä kanssa ristiriitainen tuloksiin, mutta niiden roolit munasarjasyövän Kiinan väestön vielä selvittämättä.

Methods

tapauskohtaisesti tarkastusmääritystä, arvioimme yhdistyksen näiden kahden polymorfismien ja munasarjasyövän riskiä 421 munasarjasyöpä potilasta ja 689 verrokkien Kiinan väestön logistisen regressiomallin.

tulokset

Huomasimme, että muunnos

hMLH1

genotyyppien (-93AA ja AG) liittyvät munasarjasyövän riskiä (oikaistu riskisuhde [OR] = 2,02, 95%: n luottamusväli väli [CI] = 1,42-2,89) verrattuna -93GG genotyyppi. A-alleelin lisää riskiä munasarjasyöpä annoksesta riippuvaisella tavalla (

P

10

-4). Toiminnallinen testi osoitti, että -93A alleeli lisääntynyt

hMLH1

promoottorin transkriptionaalisen aktiivisuuden ja lusiferaasin aktiivisuus. Kuitenkaan mitään merkittävää eroa löytyi genotyyppi taajuudet Ile219Val sivuston välillä tapausten ja kontrollien.

Johtopäätökset

Nämä havainnot osoittavat, että -93G polymorfismi

hMLH1

saattaa vaikuttaa munasarjasyövän alttiuteen Kiinan väestöstä.

Citation: Niu L, Li S, Liang H, Li H (2015)

hMLH1

-93G polymorfismin ja vaara munasarjasyöpä Kiinan Population. PLoS ONE 10 (8): e0135822. doi: 10,1371 /journal.pone.0135822

Editor: Yifeng Zhou, Medical College of Soochow yliopisto, Kiina

vastaanotettu: 20 kesäkuu 2015; Hyväksytty: 27 heinäkuu 2015; Julkaistu: 14 elokuu 2015

Copyright: © 2015 Niu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat National Natural tiedesäätiö Kiinan apurahat (nro 81202040 HL), Peking Municipal Natural Science Foundation (nro 7142167 HL) ja Peking Nova Program (nro 2009B03 HL).

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Munasarjasyöpä on yksi yleisimpiä gynekologinen maligniteetit [1]. Maailmanlaajuisesti vuodesta 2010, noin 160000 ihmistä oli kuollut munasarjasyöpä, ylös 113,000 vuonna 1990 [2]. Epidemiologiset tutkimukset ovat osoittaneet, että jotkut etiologic tekijät, kuten varhaisessa iässä kuukautisten alkaessa, myöhään ikä vaihdevuodet, liikalihavuus, estrogeenin ja hormonikorvaushoidon, ja perinnöllinen alttius, on myönteinen vaikutus munasarjasyöpä [3, 4]. Lisäksi munasarjojen syövän kasvaa iän myötä. Koska tavallinen hoito on olemassa, mutta ei saada ihanteellinen tuloksia, munasarjasyöpä on edelleen terapeuttinen haaste. Viimeaikaiset tutkimukset osoittavat, että on olemassa merkittävä ero kliinisiä tuloksia radikaalin toiminnan ja adjuvanttia platinapohjaisen kemoterapian yksilöiden eri geneettisten polymorfismien, mikä viittaa siihen, että geneettinen alttius on tärkeä rooli yksilön riskiä sairastua munasarjasyöpään [5, 6]

DNA korjaukseen järjestelmillä on keskeinen rooli ylläpitää genomista eheys ja vakaus. Se tunnettua, että geneettistä vaihtelua on korjaus geenit voivat vaikuttaa koodittama proteiinien ja muuttaa niiden kyky korjata DNA, mikä puolestaan ​​voi johtaa alttiuteen eri syöpätyyppien ja voi myös olla haitallisia ennustetekijöiksi kun syöpä on kehittynyt [7 , 8]. Koska keskeinen osa DNA mismatch korjaus (MMR) järjestelmä,

hMLH1

(ihmisen mutL- homologi 1) fyysisesti vuorovaikutuksessa muiden komponenttien MMR ja keskeinen rooli ylläpitämisessä genomin vakautta vastausten replikaatioin- virheitä ja fyysinen tai kemiallisen DNA-vauriot [9]. Useat havainnot ovat ehdottaneet keskeinen rooli

hMLH1

valvonnassa solusyklin ja apoptoosin [10-12]. Toimintahäiriö

hMLH1

geeni saattaa johtaa suorittaa kaikki toiminnot MMR ja voi liittyä taipumus syöpään [13, 14]. Useita polymorfismien on tunnistettu

hMLH1

geeni [15-17]. Viime aikoina tutkimukset ovat tutkineet yhdistyksen tärkeä ja usein polymorfismi, nimittäin -93G A (rs1800734), joka sijaitsee ytimessä promoottorialueen

hMLH1

, alttiuteen kehittämään erilaisia ​​ihmisen maligniteettien, mukaan lukien tupakka -aiheiset suun karsinooma [18], keuhkosyöpä [19], paksusuolen ja peräsuolen syövän [20] ja papillaarinen kilpirauhassyövän (PTC) [21]. Toinen laajalti tutkittu missense polymorfisen

hMLH1

geeni on Ile219Val, A-G siirtyminen esiintyviä kodonissa 219, joka johtaa aminohappo muutos, joka on tutkittu syöpiä eurooppalaiset populaatiot [22, 23]. Vaikka se, että

hMLH1

geeni on yhdistetty useiden syöpätyyppien, yhdistys nämä vaihtelut munasarjasyövän Kiinan väestö ei ole tutkittu. Oletimme, että

hMLH1

geenipolymorfismien -93G A ja Ile219Val (rs1799977) saattaa aiheuttaa yksilöllinen herkkyytensä munasarjasyöpään vaikuttamalla DNA mismatch korjaus kapasiteetti.

Kun otetaan huomioon tärkeä rooli

hMLH1

karsinogeeniseen prosessissa, toteutimme tapauskontrollitutkimuksessa kiinalaisessa väestöstä tutkimaan mahdollisia suhde näiden kahden polymorfismien ja munasarjasyövän riskiä Kiinan väestöstä.

Materiaalit ja menetelmät

Tutkimuskanta

sopivilla potilailla (421) olivat diagnosoitu munasarjasyöpä peräkkäin palvelukseen maaliskuussa 2003 ja toukokuun 2009 Pekingin yliopiston kolmas sairaala (Peking) ja syövän sairaalan Kiinan Academy of Medical Sciences (Beijing). Potilaat olivat Pekingistä kaupunki ja sen lähialueilla alle 90 vuotta. Kontrollit (689) oli taajuus sovitetaan tapausten iän (± 5 vuotta) asunut Pekingissä alueella ja valittiin satunnaisesti niistä, jotka tehtiin lääkärintarkastus sairaaloissa. Vastausprosentti oli 96,5%. Fysikaalinen tutkimus mukana Rintakehän röntgenkuvaus, vatsan ultraääni, gynekologisia ja kohdunkaulan Sytologisiin. Valinnan kriteereinä olivat ole ollut syöpä tai edellisen toimintansa munasarja. Kasvain histologinen tilan ja kliinisen lavastus perustuivat kriteerien International Federation of Gynecology and Obstetrics (FIGO) [24]. Kliiniset piirteet potilaita tutkimuksemme on esitetty taulukossa 1. rekrytointi, kaikki osallistujat pyydettiin antamaan kirjallinen lupa keräämiseen verta niistä ja valmiiksi strukturoitua kyselylomaketta. Tutkimus menettely hyväksyi Pekingin yliopiston kolmas sairaala ja syövän sairaalan Kiinan Academy of Medical Sciences.

Genotyyppausanalyysiin

Perimän DNA eristettiin ääreisverenkierron tutkimuksen yksiköllä käyttäen DNA veren Mini kit (QIAGEN, Valencia, CA). MALDI-TOF alustan käytettiin genotyypin

hMLH1

-93G A ja Ile219Val polymorfismien kuten aiemmin on kuvattu [25, 26]. Laadunvalvontaan, 5% näytteistä valittiin satunnaisesti toistaa, ja 50 näytettä otettiin mukaan suorasekvenssisiä vahvistaa genotyyppejä päässä massaspektrometrianalyysissä. Hardy-Weinberg tarkastettiin kaikissa näytteen ryhmissä.

Reporter plasmidit, transfektiot ja Lusiferaasimäärityksiä

93G ja 93A alleeliset toimittaja konstruktit valmistettiin Genewiz Company (Peking, Kiina) vahvistamalla ydin promoottorialueen

hMSH1

, 282 bp: n fragmentti, -299–17, kuten aikaisemmin on kuvattu [27], ja sitten kloonattiin pGL3-basic sivektorissa (Promega, Madison, WI, USA ). 293T-soluissa ja SKOV-3-soluja (munasarjasyövän solulinja) käytettiin transfektoimaan yllä toimittaja plasmidit Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) läpi aikaisemmin julkaistuja menetelmiä [28, 29], tyhjän vektorin käytettiin negatiivinen kontrolli. Renilla lusiferaasiaktiivisuudet mitattiin Dual-Luciferase Reporter koejärjestelmässä (Promega).

Real-Time analyysi

hMLH1

mRNA

Koko RNA kaksikymmentä-kahdeksan munasarjasyöpä kudosnäytteitä saatu biopsialla poistettiin näytteitä yksittäisten potilaiden uutettiin käyttäen TRIzol reagenssia (Invitrogen, Inc.). Suhteellisen geeniekspression kvantifiointiin

hMLH1

suoritettiin käyttäen SYBR Green määritys käyttäen ABI Prism 7500 Sequence Detection järjestelmän (Applied Biosystems). β-aktiini käytettiin endogeenisen ohjauslaitteet

hMLH1

ilmaisuja. Käytetyt alukkeet

hMLH1

olivat 5′-CAGAGGAAGATGGTCCCAAA-3 ’(F) ja 5′-TCTTCGTCCCAATTCACCTC-3′ (R), ja ne, β-aktiini olivat 5’-GGCGGCACCACCATGTACCCT-3 ’(F ) ja 5’-AGGGGCCGGACTCGTCATACT-3 ’(R). Suhteellinen ilmentyminen

hMLH1

suoritettiin käyttäen 2

-ΔΔCT laskentaan.

Tilastollinen

Kaksipuoliset chi-neliö testejä käytettiin arvioimaan eroja ikä ja painoindeksi (BMI) jakaumat sekä alleeli ja genotyyppi taajuuksien välillä tapausten ja valvontaa. Havaittu genotyyppi taajuuksien syövän vapaa ohjaimet testattiin Hardy-Weinberg tasapaino (HWE) by hyvyys fit

x

2 testiä. Liitot Kaikkien genotyypit kanssa munasarjasyövän riskiä laskettiin kertoimet suhdeluvut (OR) ja vastaavat 95% luottamusvälit (CI) ja sen jälkeen kerrostuneisuus analyysi säätö ikä ja painoindeksi. Tilastollinen teho laskettiin soveltamalla PS ohjelmisto (https://biostat.mc.vanderbilt.edu/twiki/bin/view/Main/PowerSampleSize, näytetty 14 joulukuu 2010). Erot lusiferaasireportteri aktiivisuuden ja mRNA tasot

hMLH1

munasarjasyövän kudoksissa eri kunkin alleelin tutkittiin yksisuuntaisella ANOVA ja Studentin t-testiä. LD on kaksi SNP: havaittiin, että 2LD ohjelman ja PROC alleeli tilastollista menetelmää SAS /Genetics (SAS Institute, Inc., Cary, NC, USA) ohjelmiston.

P

0,05 käytettiin kriteerinä tilastollista merkittävyyttä, ja kaikki testit olivat kaksipuolisia ja suoritettiin SAS-ohjelmiston (versio 9.1; SAS Institute, Cary, NC, USA).

tulokset

genotyypit ja munasarjasyövän riski

yhdistyksen munasarjasyövän kanssa -93G A määritys perustuu 421 tapausta ja 689 valvontaa. Genotyyppaustulokset Tulokset taulukossa 2 osoitti, että

hMLH1

-93G A merkitsevästi yhteydessä munasarjojen syöpäriskiä. Verrattuna terveisiin kontrolleihin, -93AA ja AG kantajia liittyivät merkittävällä tavalla munasarjasyövän riskiä (oikaistu riskisuhde [OR] = 2,02, 95% luottamusväli [CI] = 1,42-2,89). Lisäksi -93A alleelin esiintymistiheys tapauksissa (65,6%) oli myös merkitsevästi suurempi kuin kontrolleissa (52,4%) (

P

10

-4). Kuitenkin, ei ollut merkitsevää eroa eri genotyyppien variantin Ile219Val ja alttiutta munasarjasyöpä. Kytkentäepätasapaino- analyysi osoitti, että sidos -93G A ja Ile219Val oli suhteellisen heikko (r

2 = 0,051), mikä viittaa siihen, että jokainen voi olla itsenäinen vaikutus munasarjasyövän riskiä ja näin ollen sopimaton haplotyyppianalyysissä.

munasarjasyövän riski liittyy

hMLH1

-93G genotyyppien edelleen määritettiin jaottelu iän ja BMI. Mitään merkittävää assosiaatio variantin genotyyppien ja munasarjasyövän riskiä havaittu.

vaikutukset

hMLH1

-93G polymorfismi on transkriptioaktiviteettia

Koska -93G polymorfismi voisi liittyä munasarjasyövän riskiä, ​​kaksi lusiferaasireportterista rakentaa (pGL3-

hMLH1

-G-alleeli pGL3-

hMLH1

-A-alleeli) käytettiin ohimenevästi transfektoimaan 293T solujen suoraan määrittää vaikutukset -93G polymorfismi on transkriptionaalista aktiivisuutta

hMLH1

promoottori. Kuten on esitetty kuviossa 1A, verrattuna konstruktilla, joka sisältää -93G alleelin, konstrukti, joka sisältää -93A alleeli esiintyi merkittävästi korkeampi lusiferaasiaktiivisuutta (

P

0,001). Yhdenmukainen lisääntynyt

hMLH1

promoottorin transkriptionaalinen aktiivisuus varten -93A alleelin 293T-soluissa, lusiferaasiaktiivisuus konstruktin sisältävän -93A alleelin näytti olevan suurempi solulinjoissa SK-OV-3-solut (

P

= 0,002).

(A) Kaavamainen reportterigeenin konstrukteja, jotka sisältävät ytimen promoottorialueen

hMSH1

(282 bp: n fragmentti -299 -17) jossa G tai A-alleelin on -93 polymorfisen (ylempi). Lusiferaasin ilmentyminen kaksi konstruktioita (pGL3-93G ja pGL3-93A) 293T ja SK-OV-3-solut kotransfektoitiin PRL-SV40 yhtenäistää transfektiotehokkuuden näkyy (alempi). Kullakin ryhmällä on kuusi rinnakkaista, ja transfektio kokeet toistettiin kolme kertaa. Tiedot ovat keskiarvoja ± keskivirhe keskiarvon. Tähti osoittaa merkittävä muutos. (B)

hMLH1

ekspressiotaso kaksikymmentäkahdeksan munasarjasyöpä kudosten eri -93G genotyyppien (6 -93GG, 10 -93AG ja 12 -93AA); tiedot ovat keskiarvoja ± keskivirhe keskiarvon. Ilmaisu taso -93GG ja -93AG genotyypit olivat huomattavasti korkeammat kuin AA genotyyppi (

P

0,001).

Association of

hMLH1

-93G genotyypit kanssa

hMLH1

ilmaisu

edelleen vaikutuksen arvioimiseksi SNP -93G A munasarjasyövän riski, tutkimme

hMLH1

ilmaisun eri genotyyppien SNP on kaksikymmentäkahdeksan yksittäisten munasarjasyöpään kudoksissa (6 -93GG, 10 -93AG ja 12 -93AA) reaaliaikaisella PCR: llä. Kuten kuviossa 1B on kaksikymmentäkahdeksan munasarjasyöpä kudoksiin,

hMLH1

ilme oli huomattavasti korkeampi niille, joilla on -93GG ja -93AG genotyyppien kuin ne, joilla on -93AA genotyyppi (GG, 0,428 ± 0,036 ; AG, 0,287 ± 0,026, AA, 0,192 ± 0,029, ANOVA testi:

P

0,001).

keskustelu

Tässä sairaalan johdolla tapaus-verrokki tutkimuksessa etsittiin tunnistaa geneettiset tekijät, jotka antavat yksilöllinen herkkyytensä munasarjasyöpä. Saadut tulokset analysoimalla 421 potilasta ja 689 tervettä verrokkia osoitti, että

hMLH1

-93G A liittyy riski munasarjasyövän Kiinan väestöstä. Tuloksemme osoittivat, että verrattuna GG genotyypin koehenkilöt kantaen -93AA ja AG genotyypit olivat merkittävästi lisääntynyt riski saada munasarjasyöpä (

P

10

-4).

äskettäin mutaatio DNA korjaavien geenien etiologiassa useiden syöpien on saanut paljon huomiota. On ehdotettu, että geneettisiä variantteja DNA: n korjaukseen geenien mahdollisesti johtavat muuttuneeseen proteiinin ilmentymistä tai toimintaa johtaisi epäonnistumiseen DNA-vaurioiden tunnistaminen ja korjaaminen, mikä puolestaan ​​mahdollistaisi myöhemmin mutaatioita kerääntyä ja saattavat siksi lisätä alttiutta useisiin syöpiin [30 -32]. Ihmisillä on useita DNA: n korjaukseen polkuja, jotka ovat välttämättömiä genomin eheyttä, mukaan lukien pohja Leikkauskorjauksessa (BER), nukleotidi leikkaaminen korjaus (NER), DNA double-säikeen katkoksia (DSB: t) ja MMR [33]. Erittäin konservoituneita joukko MMR proteiinien on pitkään tiedetty olevan pääasiassa vastuussa korjaamisesta emäkset paritonta aikana DNA: n replikaation [34, 35]. Kuitenkin viimeaikaiset tutkimukset ovat yleisesti raportoitu, että

hMLH1

on keskeinen rooli MMR järjestelmän yhteensopimattomuus lohkon poisto ja myöhemmin korjaus [36, 37]. Geneettinen muunnos

MLH1

geeni voi vaikuttaa MMR kapasiteetti koodatun proteiinin ja siksi voisi edistää syöpäriskiä. Tähän mennessä on ollut suurta kiinnostusta yhdistyksen kahden laajalti tutkittu polymorfismien (-93G A ja Ile219Val) ja eri syöpien riskiä; kuitenkin, tulokset ovat ristiriitaisia. Yhteinen polymorfismi

hMLH1

-93G A sijaitsee ytimessä promoottorialueen, 93 nukleotidin ylävirtaan transkription aloituskohdasta, on otaksuttu konsensussekvenssejä transkriptiotekijän sitoutumiskohdista, ja se voi olla tärkeä rooli säätelyssä

hMLH1

promoottorin aktiivisuutta, jolloin ne moduloivat syöpäalttiuteen [38].

hMLH1

-93G polymorfismi on tutkittu useissa tutkimuksissa, mutta tulokset eivät ole johdonmukaisia. Äskettäin

hMLH1

-93G variantti genotyyppejä (AA, AG) on liitetty suurentunut riski sairastua keuhkosyöpään [39], rintasyövän [40] ja peräsuolen syöpä [41]. Mielenkiintoista, tuore tutkimus Aasian Indians käyttää 242 suun syöpä potilaita ja 205 tervettä verrokkia havaittu, että GG-genotyyppi näytti huomattavasti korkeampi esiintyvyys potilailla verrattuna terveisiin kontrolleihin (P 0,0006) [18]. Tuloksemme osoittivat, että variantti genotyypit (AA, AG) on

hMLH1

-93G A voi liittyä syöpäriskiä.

Toinen yleisesti tutkittu

hMLH1

polymorfismi, Ile219Val , on ei-synonyymi mutaatio, joka muuttaa Ile 219 Val, mahdollisesti muuttamalla toiminta hMLH1 proteiinia. Useat tutkimukset ovat raportoineet, että

hMLH1

Ile219Val polymorfismi liittyy läheisesti puhkeamista erilaisia ​​syöpiä, mukaan lukien keuhkosyöpä [42], rintasyöpä [40] ja mahasyövän [43]. Kuitenkin yhdistyksen välillä

hMLH1

Ile219Val variantti genotyypit ja syöpäriski ei ole sama eri syöpien ja etnisten ryhmien. Esimerkiksi eturauhassyövän, Burmester et ai. todettu, että

hMLH1

Ile219Val polymorfismi liittyy merkittävästi korkeampia eturauhassyövän ihmiset Euroopan syntyperä, kun taas Fredriksson et al. osoittivat, että

hMLH1

ei ollut merkittävä rooli eturauhassyöpää Suomen väestöstä [22]. Tuloksemme ehdotti, että ei ole yhdistyksen välillä tämän polymorfismin ja munasarjasyövän Kiinan väestöstä.

Jotkin rajoitukset voivat esiintyä tässä tutkimuksessa, koska sen sairaalan johdolla suunnittelu rajoitettu Kiinan väestön. Lisäksi luontainen valinta bias, joka esittelee epätasapainoinen sekoittavat tekijät saattavat vaikuttaa päätelmiin nykyisen tulostamme, koska tapaukset ja kontrollit olivat eri keskuksissa. Kuitenkin genotyyppi taajuudet joukossa säätimet sopivat Hardy-Weinberg epätasapainon laki, mikä viittaa siihen, satunnainen aihe valinta, ja olemme saavuttaneet yli 90% tutkimuksessa teho (kaksipuolinen testi, α = 0,05) havaitsemiseksi OR = 2,02 varten

hMLH1

-93 AA + AG genotyyppien (joka esiintyi 78,2% kontrollien) verrattuna -93GG genotyyppi, mikä viittaa siihen, että tämä havainto on huomionarvoista.

Yhteenvetona, esillä tutkimus osoittaa, että Kiinan väestön kantajia -93AA ja AG genotyypit ovat lisänneet munasarjasyövän riski verrattuna GG harjoittajille. Parhaan tietomme mukaan tämän tutkimuksen toimittanut ensimmäiset todisteet siitä, että -93G polymorfismi

hMLH1

liittyy merkittävä riski sairastua munasarjasyöpään Kiinan väestöstä. Edelleen riippumaton väestöpohjainen tapausverrokkitutkimukset perusteltua vahvistamaan tuloksemme suurempi otoskoko sekä eri väestöissä.