Krooninen sairaus

tiivistelmä

Tarkoitus

Colon syövät puuttuu mismatch korjaus (MMR), saattaa esiintyä vähentynyt ilmentyminen DNA korjaava geeni,

MRE11

, seurauksena kutistumisen T

11 mononukleotidi ärsytystä. Tässä tutkimuksessa tutkittiin MRE11 aseman ja sen yhteydessä ennusteeseen, selviytymisen ja lääkevaste potilailla, joilla on vaiheen III paksusuolensyöpä.

Potilaat ja menetelmät

Syöpä ja Leukemia Group B 89803 (Alliance) satunnaistettiin 1264 potilailla, joilla on vaiheen III paksusuolensyöpä leikkauksen jälkeiseen viikoittain adjuvanttia bolus 5-fluorourasiilin /leukovoriinin (FU /LV) tai irinotekaani + FU /LV (IFL), 8 vuoden seurannan. Kasvaimet näistä potilaista analysoitiin vakaus T

11-suolikanavan

MRE11

geeni. Ensisijainen päätepiste oli kokonaiselinaika (OS), ja toissijainen päätetapahtuma oli tautivapaa eloonjääminen (DFS). Non-suhteellisten riskien käsiteltiin käyttäen aikariippuvainen covariates Cox analyyseissä.

Tulokset

625 kasvain tutkituista tapauksista, 70 (11,2%) oli supistuminen klo T

11 suolikanavan toinen tai molemmat

MRE11

alleelit, ja näin ollen ennakoidaan olevan puutteellinen MRE11 (dMRE11). Yhdistetyissä hoito analyysit, dMRE11 potilailla havaittiin aluksi pienentää DFS ja OS mutta parani pitkäaikaisten DFS ja OS verrattuna potilaisiin, joilla on ehjä MRE11 T

11 ärsytystä. Alaryhmässä dMRE11 hoidettujen potilaiden IFL, selittämätön varhainen suurentuneen kuolleisuuden mutta parempi pitkäaikainen DFS kuin IFL saaneilla pMRE11 potilaista havaittiin.

Johtopäätökset

analyysi tämän suhteellisen pieni määrä potilaiden ja tapahtumista osoittivat, että dMRE11 markkeri ennustaa paremmin ennustetta riippumaton hoito pitkällä aikavälillä. Vuonna alaryhmäanalyysien, dMRE11 hoidetuilla potilailla irinotekaanin näytteillä selittämättömiä lyhyen aikavälin kuolleisuutta. MRE11 tila on helposti analysoidaan ja ne voivat siten osoittautua hyödylliseksi prognostinen merkki, edellyttäen että tulokset raportoidaan tässä suhteellisen pieni määrä potilaita voidaan yleistää erillistä määritystä suurempien määriä näytteitä.

Trial Rekisteröinti

ClinicalTrials.gov NCT00003835

Citation: Pavelitz T, Renfro L, Foster NR, Caracol A, Welsch P, Lao VV, et al. (2014) MRE11-puutos paranemiseen liittyvistä pitkäaikaissairaus Free Survival ja Kokonaiselossaoloaika alaryhmässä vaiheen III Colon Cancer potilaat Satunnaistetussa CALGB 89803 Trial. PLoS ONE 9 (10): e108483. doi: 10,1371 /journal.pone.0108483

Editor: Pierlorenzo Pallante, Institute of Experimental Endocrinology ja Oncology G. Salvatore ”(IEOS), Italia

vastaanotettu: 26 maaliskuu 2014; Hyväksytty: 19 elokuu 2014; Julkaistu: 13 lokakuu 2014

Copyright: © 2014 Pavelitz et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperin.

Rahoittajat: Tutkimus raportoi tästä tukivat National Institutes of Health National Cancer Institute P01 CA077852 (WBG, PSR, RJM, NM); ja NIH F31 GM073318 ja HHMI MedIntoGrad Scholar Awards (AC). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

peräsuolen syöpä (CRC) on kolmanneksi yleisin syöpä ja toiseksi yleisin syy syöpään liittyvät kuolemat Yhdysvalloissa, keuhkosyövän jälkeen [1]. Tulee arviolta 143000 uutta tapausta Yhdysvalloissa vuonna 2013, ja yli 51,000 kuolemista johtuu tämä syöpä. On tärkeää tunnistaa merkkiaineiden raportoivat taudin ennusteeseen.

Kuten monet muut syöpätyypit, CRC on ominaista puutteita DNA: n korjaukseen väyliä, jotka voivat vaikuttaa kehitys kasvain, sen vastaus kemoterapiaa, ja selviytymistä lyhyen ja pitkän aikavälin [2]. Noin 15% satunnaisesti CRC ja useimmat perinnöllinen CRC on ominaista puutteellinen kahdentumisvirheiden korjausmekanismi (MMR-D), joka on yleinen myös muissa syövissä, mukaan lukien kohdun limakalvon ja mahalaukun kasvaimet [3] – [5]. MMR-D CRC kirjataan erillisenä patologinen ja kliininen alaluokka, paremmin pitkäaikainen ennuste mutta mahdollisesti rajoitettu vaste standardin adjuvanttihoitoa koostuu 5-fluorourasiili (FU) ja leukovoriinia (LV) [2], [6], [ ,,,0],7].

puutteellinen MMR nostaa somaattinen mutaatio korko ja horjuttaa yksinkertainen jakso toistuu, tai microsatellites, mikä puolestaan ​​voi vaikuttaa geenin sekvenssin ja geenin toimintojen [8]. Puutteellinen MMR voi vaikuttaa ennusteeseen suoraan tai välillisesti, muuttamalla toiminta toisen geenin tai geenejä. Yksi seuraus puutteellinen MPR on supistuminen T

11-suolikanavan intronissa 4

MRE11

geeni, joka näkyy yli 60% MMR-D CRC [9] – [11]. T

11 polypyrimidiinijuosteen edistää lariat muodostuminen silmukoinnin eksonin 4 eksonin 5 MRE11 transkriptio. Supistuminen että suolikanavan heikentää liittämiseen, jolloin eksonin ohitus ja synteesin mRNA kuljettaa out-of-frame lopetuskodoni. Tämä mRNA koodaa katkaistua MRE11 polypeptidiä, mahdollisesti hallitseva negatiivinen vaikutus toiminto normaalista proteiini [12]. Tila

MRE11

T

11 suolikanavan voidaan helposti määrittää tavanomaisilla kliinisillä määritystä käytetään määrittämään MMR asema perustuu epävakauden neutraalin mikrosatelliittimarkkerin [13].

MRE11- puute voi vaikuttaa sekä klonaalinen kehitys sisällä kasvain sekä hoitovasteen. MRE11 muodostaa yhden komponentin erittäin konservoituneen MRE11 /RAD50 kompleksi, joka on välttämätön DNA double-lohkon murtuma korjaus välittyy molempien homologisella rekombinaatiolla ja ei-homologisen end-liittymällä, sillä telomeerien huoltoa, ja signalointiin vastauksena DNA vaurioita [14 ] – [18]. MRE11 voi erityisesti vaikuttaa vaste topoisomeraasin 1 myrkkyjä, jotka toimivat pyytämällä normaalisti ohimenevä kovalenttisen sidoksen että topoisomeraasin 1 muodostaa DNA: n kanssa, jotta rentoutua ylikeloutumista. Tämän ryhmän lääkkeisiin kuuluvat luonnollisesti esiintyvä kamptotesiiniviiteyhdistettä, ja sen johdannaiset irinotekaani ja topotekaani. MRE11 on erittäin hyvin säilynyt, ja geneettinen analyysi hiiva,

S. cerevisiae

, on osoittanut, että MRE11-puutos aiheuttaa äärimmäistä herkkyyttä kamptotesiiniin [19]. In vitro, puhdistettua rekombinanttista MRE11 /RAD50 voidaan lohkaista kovalenttisen tyrosyyli-DNA sidos topoisomeraasi 1 ja resect DNA loppuun korjattavaksi [20]. Lisäksi rajoitettu tutkimus viisi CRC solulinjojen havaittiin, että ne, jotka olivat MRE11 /RAD50 puutosta olivat herkempiä irinotekaania [21], mutta ei onko irinotekaania kestävyys voitaisiin palauttaa täydentämällä MRE11 /RAD50-puutos /.

havainnot edellä yhteenvetona lukemiin kaksi hypoteesia. Ensinnäkin MRE11-puutos saattaa olla hyödyllinen markkeri kasvain ennustetta; ja toiseksi, että MRE11-puutosta (dMRE11) kasvaimet saattavat vastata paremmin hoidon topoisomeraasi 1 myrkkyjä kuin MRE11 taitava (pMRE11) kasvaimia. Nämä mahdollisuudet ovat erityisen kiinnostava, koska valmius jolla MRE11 asema voidaan määrittää normaalina kliinisten molekyyli- profilointi [13].

hyödyllisyys irinotekaanin on arvioitu adjuvanttihoitona vaiheen III CRC kahden käsivarren syöpä ja Leukemia Group B (CALGB) 89803 kliinisessä tutkimuksessa, jossa verrattiin DFS ja OS hoidetuilla potilailla FU /LV yksin tai yhdessä irinotekaanin. Eroa OS tai DFS ilmoitettiin kaiken kaikkiaan, mutta potilaalla on MMR-D kasvaimet osoittivat jonkin verran parantaa ja laajentaa DFS jos hoito sisältyy irinotekaani [22]. Tämä tutkimus siis säädetty informatiivinen näytteitä käsitellään kysymystä siitä MRE11 asema korreloi DFS, OS, tai vaste irinotekaania. Sen määrittämiseksi, onko MRE11 asema ennustaa DFS, OS tai vastauksena IFL, analysoimme MRE11 tilaansa 625 kasvain näytteitä potilaista CALGB 89803 kliinisessä tutkimuksessa kokonaismäärä ja käsittelemällä FU /LV-hoidon kanssa tai ilman irinotekaanin, kun taas osuus mahdollisista yhteyksistä muihin potilasryhmät kuten MPR.

Materiaalit ja menetelmät

protokolla tälle kokeelle ja tukevat CONSORT tarkistuslista ovat saatavilla olevat tiedot; katso pöytäkirja S1 ja tarkistuslista S1.

Tutkimuskanta

Tämän tutkimuksen potilaiden olivat osallistujat NCI tukema Cancer ja Leukemia Group B (CALGB) adjuvanttihoito oikeudenkäynti vaiheen III paksusuolensyöpä vertaamalla terapia kanssa viikoittain Roswell Park hoito 5-fluorourasiilin (FU) ja leukovoriinia (FU /LV) kanssa viikoittain bolus hoito irinotekaanin, FU, ja leukovoriinia (CALGB 89803; [23]). Kaikkiaan 1264 potilasta rekrytoitiin välillä huhtikuussa 1999 ja huhtikuussa 2001. Kaikki potilaat saivat täydellinen kirurginen resektio ja alkoi kemoterapiaa välillä leikkauksen jälkeiset päivät 21 56. Potilaat satunnaistettiin tietokoneella kahteen hoitoryhmien, 629 potilasta FU plus LV ja 635 potilasta irinotekaani plus FU plus LV (kuvio 1). Tutkimuksen ensisijainen päätepiste oli kokonaiselossaoloaika (OS). Tautivapaa elinaika (DFS) oli toissijainen päätepiste. Seuranta kaapattiin maaliskuun 2008

pääpiirteet CALGB 89803 satunnaistetussa tutkimuksessa, joka tuotti 625 testatussa.

Ethics selvitys

Tutkimus oli hyväksymä Mayo Clinic Institutional Review Board ja North Central Cancer Treatment Group (nyt osa Alliance for Clinical Trials in Oncology). CALGB protokolla 89803 tarkasteli jonka Institutional Review Board kunkin osallistuvan keskustasta. Kaikki potilaat antoivat tietoon suostumus ennen osallistumista.

Trial rakenne ja organisaatio

Tämä tutkimus toteutettiin CALGB kanssa osallistumisen North Central Cancer Treatment Group, National Cancer Institute of Canada Clinical Trials Group, Eastern Cooperative Oncology Group, Southwest Oncology Group, ja National Cancer Institute Cancer Trials Support Unit. Protokolla ja luettelo osallistuvista sivustot ovat saatavilla olevat tiedot. CALGB data turvallisuuden valvonta board tarkistetaan tiedot turvallisuudesta kahdesti vuodessa ja tehosta tietoja protokolla-määrätyin väliajoin mukaisesti CALGB politiikkaa. CALGB Statistical Center Duke University Durham, NC, ylläpidetään kliinisten tutkimusten ja laboratoriotutkimusten tietokantaa.

Hoito

Kun keskitetty rekisteröinti, sopivaa potilasta satunnaistettiin (tietokoneella käyttäen satunnaistettu kiinteä lohko suunnittelu) vastaanottamaan FU /LV tai FU /LV yhdessä irinotekaanin (IFL). Hoito on aiemmin kuvattu yksityiskohtaisesti [24]. Lyhyesti, FU /LV ryhmä sai Roswell Park -hoito, joka koostuu viikoittain LV 500 mg /m

2 laskimoon 2 tuntia, jossa on bolus FU 500 mg /m

2 laskimonsisäisenä injektiona 1 tunnin kuluttua aloittamisesta LV, 6 peräkkäisen viikon ajan 2 viikon lepo, neljän sykliä (32 viikkoa). IFL ryhmä sai viikoittain irinotekaania 125 mg /m

2 90 minuutin aikana heti sen jälkeen laskimoon bolusinjektioina LV 20 mg /m

2, sitten FU 500 mg /m

2, 4 peräkkäisen viikon ajan jonka 2 viikon lepo, viisi sykliä (30 viikkoa).

DNA: n eristämiseksi

DNA uutettiin arkistoitu formaliinilla kiinnitetyt parafinoidut kasvainkudoksen inkuboimalla parafiini uutettu, nesteytyksestä kudoksen 50 mM Tris-HCI (pH 8,5), jossa oli 0,5% Tween 20 ja 20 mg /ml proteinaasi K: ssa 3 tunnin ajan 55 ° C: ssa; tai inkuboimalla kudos Instagene (BioRad, Hercules, CA), ja 30 mg /ml proteinaasi K: ssa 3 tunnin ajan 55 ° C: ssa. Inkuboinnin jälkeen näyte inkuboitiin sitten 95 ° C: ssa 9 minuuttia, vorteksoitiin lyhyesti ja sitten sentrifugoidaan pelletoimiseksi tahansa undigested materiaalia tai Instagene, vastaavasti. Uutettu DNA sitten eriin ja varastoitiin -20 ° C: ssa, kunnes niitä tarvittiin PCR-perustaiset määritykset.

määritys

MRE11

ja

RAD50

mononukleotidi-suolikanavan pituudet

mononukleotidi suolikanavan pituus määritettiin PCR-monistus ja DNA: n sekvensointi käyttäen vakiintunut lähestymistapa laajalti käytetty kuvaamaan heterogeenisyys mononukleotidi kirjoitusten ominaisuus MMR-puutosta peräsuolen, maha- ja kohdun limakalvon kasvaimia, eikä ilmeinen normaalissa kudoksessa tai MMR -proficient kasvainnäytteet (esim [9] – [11], [25]). Määritys käsittää PCR-monistuksen alueesta kuljettaa mononukleotidi-suolikanavan, minkä jälkeen DNA-sekvenssianalyysillä. Tämä sama yksinkertainen menetelmää käytetään arvioimaan mikrosatelliittien epävakautta diagnostinen epäsuhta korjauksen puute.

yhteensä 625 näytettä tuotettu DNA soveltuvat analysointiin alueella

MRE11

introni 4 sisältävä T

11-suolikanavan, 320 päässä FU /LV tutkimus käsivarren ja 305 päässä IFL varsi (kuva 1).

Perättäiset PCR-alukkeita käytettiin monistamaan alue, joka sisältää mononukleotidi suolikanavan kiinnostusta MRE11 introni 4. MRE11 vahvistus oli kanssa ensimmäinen kierros alukkeita, MRE11 × 1 F, 5′-GTGGTCATATGCCAATGTAGATTATGC-3 ’, ja MRE11 × 1 R, 5′-CCCTGTGGGATCGTCATGATTGCC-3′, tuotti 211 emäsparin tuote; ja toinen kierros alukkeita, MRE11 × 2F, 5’-GGAGGAGAATCTTAGGGAAAACAGC-3 ’, ja MRE11 × 2R, 5′-GATTGCCATGAATACTAAACACTGG-3’, tuotti 139 emäsparin tuotteen. MRE11 sekvensoitiin sekä eteen- että taaksepäin toisen kierroksen PCR-alukkeita.

RAD50 tila määritettiin 34 CRC kanssa supistukset

MRE11

. Monistus oli kanssa ensimmäinen kierros alukkeita R50 × 1 F, 5′-CTCCCAGTTCATTACTCAGC-3 ’, ja R50 × 1 R, 5′-GACAGGGCATACCAGCT-3′, tuotti 326 emäsparin tuote; ja toinen kierros alukkeita R50 × 2F, 5’-GCTAACAGACGAAAACCAG-3 ’, ja R50 × 2R, 5′-CATACCAGCTCAGAGTCC-3′, tuotti 301 emäsparin tuotteen. RAD50 sekvensoitiin käänteisessä orientaatiossa aluke 5’-CATACCAGCTCAGAGTCC-3 ’.

MRE11 tila ja RAD50 tila määritettiin silmämääräisesti tracings automatisoituja sekvensointia sekä eteen- ja vastakkaisessa suunnassa tutkijat sokeita MMR tila , joka oli määritetty riippumattomasti [22], [26]. Tulokset esitetään taulukoissa 1 ja 2.

määrittäminen MMR tila

MMR tilan kasvain näytteet oli aiemmin määritetty IHC täydennettynä joissakin tapauksissa analyysi mikrosatelliittimarkkereita vakaus käyttäen Bethesda paneelin markkereita [22], [26]. MMR asema osajoukko näytteiden itsenäisesti vahvistettiin pidennetyn analyysi PCR-monistus ja sekvensointi 5 mikrosatelliittimarkkerin (Promega, Madison, WI). Näytteet luokiteltiin MMR-D, jos 3 tai enemmän markkereita näytteille epävakautta.

Tilastolliset menetelmät

Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää, onko kasvain MRE11 tila liittyi tuloksia potilaissa, joilla on vaiheen III paksusuolensyöpä hoidettiin joko FU /LV yksin tai yhdessä irinotekaanin. Yhteinen päätetapahtuma oli OS mitattuna merkintä päälle kliinisen tutkimuksen vasta kuolema mistä tahansa syystä; ja DFS mitattuna lähtötilanteessa asti dokumentoitu taudin etenemiseen tai kuolema mistä tahansa syystä. OS ja DFS jakaumat arvioitiin yleisesti sekä luokat määritellään MRE11 ja hoito käyttäen Kaplan-Meier menetelmiä. Erot OS ja DFS ryhmien välillä testattiin käyttäen log-rank-testi. Vaikutukset MRE11 OS ja DFS analysoitiin käyttämällä Coxin suhteellisten riskien mallia. Jossa Coxin suhteellisen vaarat oletus oli merkittävästi rikottu mukaisen menetelmän Grambsch ja Therneau [27], ajallisesti vaihtelevan kertoimet otettiin automaattisella valikoiman yhden tai useamman cutpoints aika-akselilla, joka puolestaan ​​optimaalisesti täyttänyt suhteellisten riskien oletus paloittain muoti [28]. Mahdollinen ennustava kyky MRE11 tutkittiin kautta kaksisuuntainen vuorovaikutus hoitoryhmään, ja osittaisella yhteisvaikutuksia vaikutus MRE11 mallinnettiin ajasta riippuva. Vuorovaikutukset, jotka olivat molemmat tilastollisesti merkitsevä (p 0,01) ja tulkittavissa kliinistä merkitystä vaadittiin tekemään mielekkäitä ennustava kyky MRE11. Monimuuttujalähettimet Cox malleja käytettiin tutkimaan MRE11 vaikutus samalla hallita hoitoon ja ennusteeseen viittaavia tekijöitä kuten ikä, sukupuoli, kasvaimen sijainti, potilaan toimintakyvystä, useita positiivisia imusolmukkeita, kasvain vaiheessa ja kasvaimen. Mahdolliset MRE11 vuorovaikutus ja säätöjä MMR, KRAS ja BRAF tutki myös. Jotta Tässä analyysissä seuranta rajattiin 8 vuotta. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin Alliance tilastotieteilijät.

Tulokset

määrittäminen MRE11 tila

kasvain DNA sopivia PCR-monistus poimittu kaikkiaan 625 CRC yksilöitä, 320 FU /LV ryhmässä ja 305 päässä ILV ryhmästä (Consort kaavio, kuva 1). 625 yksilöt edustavat 49% 1264 potilaiden ilmoittautunut CALGB 89803 [23]. Alueella

MRE11

introni 4 sisältävä T

11-suolikanavan monistettiin ja sekvensoitiin (kuvio 2A), käyttäen vakiintuneita määritys (esim. [9] – [11], [25]). Esimerkit osoittavat sekvenssit kontrollinäyte yhtenäisillä T

11 kirjoitusten molemmissa alleeleissa, ja näytteiden, joissa molemmissa alleeleissa suorittaa 10 nt kirjoitusten tai kirjoitusten vaihtelevat 10-11 tai 9-11 nt (kuvio 2B). Suolikanavan pituus heterogeenisyys ei ollut PCR: llä tai sekvensointi artefakti, kuten pituus heterogeenisyys ei ollut ilmeistä normaalien solujen DNA, ja identtinen ruoansulatuskanavan pituudet ovat johdettavissa sekvensoimalla yhdestä näytteestä molempiin suuntiin (ei esitetty). Heterogeenisyys voi heijastaa läsnäolo useita osa-klonaalisia populaatiot kasvain.

(A) Kaavio

MRE11

introni 4 /eksoni 5 risteyksessä, jossa näkyy T

11 suolikanavan introni 4, reunustava sekvenssi ja alukkeiden. Supistuminen T

11 suolikanavan heikentää lariat muodostumista askel mRNA ja johtaa eksonin 5. Tuloksena mutantti mRNA koodaa katkaistua MRE11 polypeptidin mahdollisesti hallitseva negatiivista vaikutusta proteiinien toimintaa [12]. MRE11 on välttämätön solujen elinkelpoisuuden, ja

MRE11

mutaatioita, jotka esiintyvät MMR-D CRC ei ole nolla-alleelit, mutta vähentää ilmentymistä ja aktiivisuutta MRE11 proteiinia. (B) sekvenssi jälkiä alueella

MRE11

intronin 4, joka kuljettaa T

11-suolikanavan neljässä kasvain näytteissä. Pituudet yhtymäkohtaan nt näkyy vasemmalla.

Kotelot pisteytettiin lukumäärän perusteella nukleotidien hävisi supistuminen: 11 nt suolikanavan pisteytettiin 0; 10-11 nt suolikanavan kuin 1; kirjoitusten 9-11 nt kuin 2; ja maa-10 nt (menettämisen vuoksi 1 nt jokaisesta alleeli) kuin 2. Kaikkiaan 555 tapausta (89%) teki ehjän T

11-suolikanavan (pisteet 0); kun taas 70 tapauksessa (11%) oli supistukset 1-6 nt (1 nt, n = 36; 2 nt, n = 26; 3 nt, n = 6; 4 nt, n = 1, ja 6 nt, n = 1). Yleinen esiintyvyys

MRE11

T

11 supistukset oli 11%, vertailukelpoinen että raportoitu muissa analyyseissä CRC yksilöiden [9] – [11], [25]. Suurin piirtein saman verran tapauksia näytteillä supistusten 1 nt (36 tapausta, 5,8%) tai 2 tai useamman nt (34 tapausta, 5,8%). Johtuen epätasapaino tapauksissa ilman supistuksia vastaan ​​mitään supistuminen, ja harvoissa tapauksissa kunkin supistuminen luokassa, määrittelimme dikotomisen

MRE11

T

11-suolikanavan muuttuja: ei supistuksia tai MRE11 taitavia (pMRE11 , 555 tapausta) verrattuna mitään supistuminen tai MRE11 puutteellinen (dMRE11, 70 tapausta). Käyttämällä tätä kaksijakoinen luokittelu,

MRE11

T

11-suolikanavan supistuminen tila todettiin olevan merkitsevästi yhteydessä kasvainpaikkaa, histologinen luokka, MMR tila, ja BRAF, KRAS, ja P53-mutaatio tila (taulukko 2).

määrittäminen RAD50 tila

joissakin MMR-D CRC, joka on eksoni

9 suolikanavan

RAD50

geeni horjuttanut aiheuttaen lukukehyksen ja synteesi katkaistun proteiinin [29]. Eksploratiivisessa analyysi, päätimme tämä taajuus keskuudessa kasvain-DNA: t uutetaan 34 CRC kanssa supistukset

MRE11

(18 tapausta, joiden MRE11 tulokset 1, ja 16 pistein 2).

RAD50

9-suolikanavan oli epästabiili 11/34 tapauksessa (3 MRE11 tulokset 1 ja 8 pistein 2) tai 32% ja CRC analysoitu, samanlainen taajuus 40% aiemmin on raportoitu [11].

määrittäminen MMR tila

MMR tilan kaikki CALGB 89803 näytteet oli aiemmin määritetty IHC, genominen sekvensointi Bethesda paneelin markkereita, tai molemmat [26]. Tämä analyysi luokiteltu MMR koskemattomina (MMR-I) 86% näytteistä, ja puutteellinen (MMR-D) 14% (taulukko 1). Epävakaus

MRE11

T

11-suolikanavan oli voimakkaasti yhteydessä MMR puute tavalla määritetyn 79% of dMRE11 CRC olivat MMR-D, ja 21% MMR-I (khiin neliö testi, p 0,0001 ; taulukko 2).

Alustavassa analyysissä MMR tila oli erikseen määrääminä PCR ja sekvensointi yliopistossa Washington (UW) kliininen vianmäärityslaitoksessa, käyttämällä pelkästään kaupallisia alukkeita (Promega), joka kysellä eri neutraali ja ei polymorfisen markkereita kuin Bethesda paneeli markkereita. Kaikkiaan 83 CRC analysoitiin, kuten 63 70 dMRE11 näytteitä. Näistä 50 CRC luokiteltiin MMR-D CALGB ja 56 UW (khiin neliö testi, p 0,0001).

Epävakaus on

MRE11

T

11 suolikanavan ja

RAD50

9 suolikanavan ennustetaan korreloivan MMR-D. Saada tunteen siitä, eri määrityksiä käyttävät CALGB ja UW saattaa yli-count tai alle-count MMR-D kasvaimia, kysyimme 9 CRC luokiteltu MMR-I, jonka CALGB määrityksiä vaan MMR-D UW määrityksessä olivat dMRE11 tai pMRE11. Kaikki nämä olivat dMRE11, ja kaksi niistä oli myös dRAD50. Tämä nostaa esiin mahdollisuuden, että

MRE11

T

11 suolikanavan voisi olla hyödyllistä sisällyttää joukkoon markkereita määrittämisessä MMR aseman.

kasvain MRE11 tila on merkittävästi prognostisia DFS ja OS

suhde MRE11 tila ja DFS ja OS määritettiin käyttäen kerättyä vuodesta 10 maaliskuu 2008, joka edustaa mediaani seuranta 6,0 vuotta. Univariate analyysit OS ja DFS perustuu yksinomaan MRE11 tilasta 625 CRC määritetään riippumatta kemoterapiakäytäntöä, osoitti, että dMRE11 potilaat eivät osoittaneet merkittävää parannusta OS (HR 0,98; 95% CI, 0,64-1,51) tai DFS (HR 0,80; 95% CI, 0,52-1,21) suhteessa pMRE11 potilaille. Kuitenkin Kaplan-Meier tontit OS ja DFS mukaan MRE11 tila (kuva 3) paljasti mahdollinen loukkaus suhteellisten riskien oletuksen kahden käyrät rajan aikana seurantajakson aikana kullekin päätepiste. Non-suhteellisuuden tilastollisesti vahvistetaan, nollahypoteesi suhteellisten riskien hylkäsi sekä DFS (p = 0,0038) ja OS (p = 0,0005).

(A) Tauti elinaika varten dMRE11 (n = 70; tapahtumien = 24); 5-v korko: 67% (95% CI: 56-79%) vs. pMRE11 (n = 555; tapahtumien = 240); 5-v korko: 59% (95% CI: 55-63%). (B) Kokonaiselossaoloaika varten dMRE11 (n = = 70; tapahtumien = 23); 5-v korko: 68% (95% CI: 58-80%) vs. pMRE11 (n = 555; tapahtumien = 194); 5-v korko: 71% (95% CI: 67-75%).

Voit ratkaista vastaisesti Cox oletuksista, paloittain suhteellinen riskin malliin rakennettiin kunkin päätepisteen (DFS ja OS), jolloin aikariippuvainen kertoimien (t) varten MRE11 tilan seuraavasti. Ensinnäkin, automatisoitu etsivät algoritmi yli ruudukon ajankohtina {t

1 = 0,1 vuotta, t

2 = 0,2 vuotta, …, t

79 = 7,9 vuotta} käytettiin tunnistamaan cutpoint t * jota varten suhteellisten riskien oletus oli optimaalisesti tyytyväinen kummallakin puolella cutpoint; Erityisesti, t * määritellään arvo t tuottavat suurimman maksimoitu log osittainen todennäköisyys joukossa Cox malleja, jotka sisältävät erilliset MRE11 vaikutukset (t) kahden aikavälein määritelty t. Paloittain suhteellisuuden sitten testattu ja vahvisti lopullisessa malleja OS ja DFS tuottaen lopulliset (yhden muuttujan) malleja MRE11. Sama cutpoints ja ajasta riippuvat kertoimet käytettiin myöhemmissä vuorovaikutuksessa ja monimuuttuja Cox malleja.

Optimaalinen cut-pisteen tunnistettu OS 3,4 vuotta. Ennen 3,4 vuotta, dMRE11 potilaat kokevat huomattavasti huonompi OS suhteessa pMRE11 potilaille (HR = 10,95, 95% CI: 6,83-17,55, p 0,0001), kun taas sen jälkeen 3,4 vuotta dMRE11 liittyy parannettu OS (HR = 0,09, 95% CI: 0,02-0,37, p = 0,0008), riippumaton hoitoryhmään. Cut-pisteen tunnistettu DFS oli 3,3 vuotta. Ennen 3,3 vuotta, dMRE11 liittyi pahemmin (HR = 7,02, 95% CI: 4,49-10,99, p 0,0001), kun taas sen jälkeen 3,3 vuotta DFS paranee suhteessa pMRE11 potilaille (HR = 0,07, 95% CI: 0,02 0,30, p = 0,0002). MRE11 säilyi huomattavaan korjattuna kliinisten /kasvaimen (ikä, sukupuoli, määrä positiivisia imusolmukkeita, kasvain vaiheessa laatu, ja sivusto primaarituumorin).

Suhteessa muihin potilaan biomarkkerit, MRE11 on yhteisesti merkittäviä monimuuttujasäädin malleissa kanssa KRAS (OS ja DFS), BRAF (OS ja DFS), ja P53-mutaatio tila (OS vain). Lisäksi MRE11 edelleen merkittävä ennustaja sekä OS (p 0,0001) ja DFS (p 0,0001) korjausten jälkeen MMR, kun MPR ei ole merkittävää näissä malleissa (DFS p = 0,799; OS p = 0,647). Mitään merkittävää vuorovaikutukset MRE11 ja biomarkkereiden havaittiin.

Univariate analyysit RAD50 tila ei osoittanut merkittävää suhdetta OS tai DFS. Kovariaattina-oikaistu malleja RAD50 ei ole tehty, koska rajoitetun otoskoko (n = 34) ja pieni määrä tapahtumia.

Arvio kasvaimen MRE11 asema ennustava hyötyvät IFL ja FU /LV

MRE11 tila arvioitiin mahdollisena ennustaja hyöty IFL osittaisella vuorovaikutus hoitoa piecewise Cox (ei-verrannollinen vaarat) malleja DFS ja käyttöjärjestelmän. Kaplan-Meier käyriä MRE11 vaikutus esittelee hoitoryhmään kuviossa 4A, kun tontteja vastaavan hoidon vaikutus on esittänyt MRE11 asema kuviossa 4B. Vaikka joitakin eroja hoidon vaikutus MRE11 tila ovat silmin havaittavia, hoito-by-MRE11 vuorovaikutus ei ollut merkittävä joko päätepiste. Niistä irinotekaania saaneilla potilailla (kuvio 4A, oikealla), mutta dMRE11 potilaat osoittivat huonompi DFS kuin pMRE11 potilaiden ensimmäisen vuoden seurannan (perustuu osajoukko valitun cut-piste; p 0,0001), mutta parempi tulosten jälkeen (p = 0,004). Samoin dMRE11 potilasta oli suurentunut riski kuolla ensimmäisen 3,5 vuoden seuranta suhteessa pMRE11 potilaille (p 0,0001), ja laski riskiä sen jälkeen (p = 0,011). Nämä suhteet pysyivät merkittävän korjattuna ikä, sukupuoli, imusolmukestatuksesta, kasvain vaiheessa laatu, ja sivusto primaarituumorin, mutta tämä Alaryhmäanalyysissa keskuudessa IFL-hoitoa saaneilla potilailla olisi pidettävä valmisteleva koska vain pieni otoskoko ja ei merkitystä hoito-by-MRE11 vuorovaikutus.

(A) Top: tauti elinaika varten dMRE11 vs. pMRE11 käsitelty FU /LV [n = 320; dMRE11 n = 31; tapahtumiin = 11; 5-v korko: 67% (95% CI: 52-86%); pMRE11 n = 289; tapahtumiin = 122; 5-v korko: 61% (95% CI: 56-67%)] tai IFL [n = 305; dMRE11 n = 39; tapahtumiin = 13; 5-v korko: 67% (95% CI: 53-83%); pMRE11 n = 266; tapahtumiin = 118; 5-v korko: 57% (95% CI: 51-63%)]. Pohja: Kokonaiselossaoloaika for dMRE11 vs. pMRE11, käsiteltiin FU /LV [n = 320; dMRE11 n = 31; tapahtumiin = 10; 5-v korko: 70% (95% CI: 55-89%); pMRE11 n = 289; tapahtumien = 98); 5-v korko: 73% (95% CI: 68-79%)] tai IFL [n = 305; dMRE11 n = 39; tapahtumiin = 13; 5-v korko: 67% (95% CI: 53-83%); pMRE11 n = 266; tapahtumiin = 96; 5-v korko: 69% (95% CI: 63-75%)]. (B) Top: Tautivapaa elossaolo IFL vs. FU /LV käsitelty dMRE11 [n = 70; IFL N = 39; tapahtumiin = 13; 5-v korko: 67% (95% CI: 53-83%); FU /LV n = 31; tapahtumiin = 11; 5-v korko: 67% (95% CI: 52-86%)] tai pMRE11 (n = 555; IFL n = 266; tapahtumien = 118; 5-v korko: 57% (95% CI: 51-63% ; FU /LV n = 289; tapahtumien = 122; 5-v korko: 61% (95% CI: 56-67%)]. Pohja: Kokonaiselossaoloaika for IFL vs. FU /LV-käsiteltyjen dMRE11 [n = 70; IFL n = 39; tapahtumien = 13; 5-v korko: 67% (95% CI: 53-83%), FU /LV n = 31; tapahtumien = 10; 5-v korko: 70% (95% CI: 55-89%) tai pMRE11 [(n = 555; IFL n = 266; tapahtumien = 96, 5-v korko: 69% (95% CI: 63-75%), FU /LV n = 289; tapahtumien = 98 ; 5-v korko: 73% (95% CI: 68-79%)].

keskustelu

Tämä analyysi käsiteltyjen tulosten kohortin vaiheen III CRC hoidettujen potilaiden FU /LV tai IFL osoitti, että sen jälkeen kontrolloi odottamattomia ei-verrannollinen vaarat, MRE11 tila on merkittävästi ennustetekijöitä sekä DFS ja käyttöjärjestelmän, ja edelleen huomattava korjattuna ennusteeseen viittaavia muuttujia ja julkaistu merkittävä markkereita, kuten MMR, KRAS, BRAF, ja p53. Lisäksi säätämisen jälkeen MMR, MRE11 edelleen merkittävä prognostinen markkeri, kun taas päinvastainen ei ole totta. Eksploratiivisessa Alaryhmäanalyysissä, MRE11 tila liittyi erot OS ja DFS saaneilla potilailla IFL. Jälkimmäinen havainto on kliinisesti mielenkiintoinen, vaan perustuu suhteellisen pieni määrä potilaita, ja voitiin tarkemmin tutkimuksen tutkimuksissa osallistui runsaasti potilaita. Vaikutus vastaus voisi parhaiten arvioida tutkimuksessa vaiheen IV potilaalla on mitattavissa etäpesäkkeitä, vaikka se on osoitettu useissa yhteyksissä, että vaikutukset kasvaimen vastaisen hoitojen vaihtelevat vaiheen III ja vaiheen IV tauti.

MMR asema oli aikaisemmin osoitettu olevan prognostinen markkeri [2], [6], [7] ja ennustava vastaus IFL suhteessa FU /LV [22]. Kun otetaan huomioon voimakas korrelaatio dMRE11 ja MMR-D tila todettava, ei ole yllättävää, että ennustetekijöiden ja ennustavan kaavoja kaksi markkereita rinnakkaista toisiaan. Kuitenkin monimuuttuja ennustemalleja DFS tai OS, joka sisältää sekä markkereita, MRE11 mutta ei MPR säilyi tilastollisesti erittäin merkitsevä aikana sekä varhainen ja myöhäinen ajanjaksoja. Siten merkitys MRE11 tila ei heijasta sen riippuvuus MMR asemasta.

On huomattava, että dMRE11 hoidetuilla potilailla IFL näytteillä paremmin pitkäaikainen DFS kuin pMRE11 potilasta samassa hoitoryhmässä, vaikka dMRE11 potilaat oli selittämätön lisääntynyt kuolleisuus ensimmäisen 2 vuotta jälkikäsittelyä. Ei ollut mitään suhdetta köyhien alustavan vastauksen ja kliiniset tekijät kuten ikä, sukupuoli tai imusolmukestatuksesta. Hoito irinotekaanin ulottui vain 30 viikon ajan, ja ero vastauksena ei tullut ilmi vasta myöhemmin (kuva 4), joten varhainen hoito liittyvä myrkyllisyys yksin ei todennäköisesti selittää tämän eron.

analyysi MRE11 toiminto vastauksessa irinotekaani tehtiin perustuu perustutkimuksen tuloksia mekaaniset tutkimukset osoittavat, että MRE11 /RAD50 edistää korjaamiseen DNA aiheuttaman vaurion topoisomeraasi 1 myrkyt [19], [20]. Topoisomeraasi 1 myrkyt (esimerkiksi irinotekaani) ja topoisomeraasi 2 myrkyt (kuten etoposidin) sekä edistää muodostumista proteiini-DNA addukteja, jotka ovat sytotoksisia, jos ei korjata. Jotkut käsityksen lyhyellä aikavälillä huomattavia kuolleisuus dMRE11 hoidetuilla potilailla irinotekaanin voidaan järjestää tutkimuksia hiirissä, joilta puuttuu entsyymi TDP2, joka korjaa aiheuttaman vaurion topoisomeraasin 2 myrkyt [30].