Krooninen sairaus

tiivistelmä

Preoperatiivisen chemoradiation parantaa merkittävästi onkologian tulokseen paikallisesti edenneessä peräsuolen syöpä. Kuitenkaan ole tehokas tapa ennustaa kasvaimen vaste chemoradiation näillä potilailla. Perifeerisen veren mononukleaariset solut ovat nousseet äskettäin patologian markkereita syövän ja muiden sairauksien, mikä mahdollistaa niiden käytön terapiassa ennustajia. Lisäksi on tärkeää, että immuunivasteen radiosensivity kiinteiden elinten johti meidät oletettu, että mikrosiru geeniekspressioprofilointi perifeerisen veren mononukleaaristen solujen voisi tunnistaa potilaat, joilla vaste chemoradiation in peräsuolen syöpä. Kolmekymmentäviisi 35 potilaalla oli paikallisesti edennyt peräsuolen syöpä rekrytoitiin aluksi suorittamaan tutkimukseen. Perifeerisen veren näytteet otettiin ennen neaodjuvant hoitoa. RNA uutettiin ja puhdistettiin, jolloin saatiin cDNA: n ja cRNA hybridisaatiota varten microarray sisältyvät ihmisen WG CodeLink bioarrays. Kvantitatiivinen reaaliaikainen PCR käyttää oikeuttamaan microarray kokeilun tiedot. Tulokset korreloivat patologinen vaste, mukaan Mandard’s kriteerien ja lopullinen UICC Stage (potilailla, joilla on kasvaimen regressio arvosana 1-2 ja downstaging on määritelty vasteen ja potilailla, joilla on luokan 3-5 eikä downstaging ei-vasteen). Kaksikymmentä seitsemän 35 potilasta lopulta mukana tutkimuksessa. Suoritimme useita t-testiä käyttäen merkitys Analyysi mikrosirut, löytää ne geenit eroavat merkittävästi ilmaisun välillä vastanneista (n = 11) ja ei-vastetta (n = 16) ja CRT. Eri tavalla ilmaistuna geenit olivat: BC 035656,1, CIR, PRDM2, CAPG, Falz, HLA-DPB2, NUPL2, ja ZFP36. Mittaus Falz (p = 0,029) geeni-ilmentymisen tason määritetään qRT-PCR: llä, osoitettiin tilastollisesti merkittäviä eroja kahden ryhmän välillä. Geeniekspressioprofilointi paljastaa uusia geenejä ääreisveren näytteistä mononukleaaristen solujen, jotka voivat ennustaa vastanneiden ja vastaamattomien henkilöiden chemoradiation potilailla, joilla on paikallisesti edennyt peräsuolen syöpä. Lisäksi meidän tutkimus lisätään lisätodisteita tärkeyttä mononukleaaristen solujen välittämää vastetta neoadjuvant hoidossa peräsuolen syöpä.

Citation: Palma P, Cuadros M, Conde-Muiño R, Olmedo C, Cano C, Segura -Jiménez I, et ai. (2013) Microarray profilointi Mononuclear ääreisverisoluissa Osoittaa Novel kandidaattigeenit liittyvät chemoradiation Response in peräsuolisyöpä. PLoS ONE 8 (9): e74034. doi: 10,1371 /journal.pone.0074034

Editor: Roberto Amendola, ENEA, Italia

vastaanotettu 15 joulukuuta 2012 Hyväksytty: 01 elokuu 2013; Julkaistu: 05 syyskuu 2013

Copyright: © 2013 Palma et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tutkimus tukivat Fundación Investigación BioMedica mutua Madrileña. MC, CC ja AB tuettiin hankkeita P08-TIC-4299 ja CTS2200 of Andalusian, TIN2009-13489 of DGICT, Madrid, ja GREIB PYR_2010-02 ja 2010_05 yliopiston Granadan. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ilmoittavat, että heillä ei ole kilpailevia intressejä.

Johdanto

Preoperatiivisen kemosädehoito on suositeltava tavanomaista hoitoa potilaille, joilla on paikallisesti edennyt peräsuolen syöpä (LARC). Kuitenkin viime aikoina tutkimukset ehdotti, että ennen leikkausta sädehoitoa (CRT), verrattuna leikkauksen jälkeen sädehoitoa, parantunut paikallinen valvonta ja liittyi alentunut toksisuus [1] – [6]. Sen jälkeen neoadjuvantti- CRT kyky saavuttaa pathologic downstaging, tai täydellinen patologisen vasteen, korreloi parannetun elävän vähentynyt paikallisen uusiutumisen, ja korkeampaa sulkijalihaksen säilyttävää leikkauksia [7] – [9].

Noin 40-60% LARC hoidetuista potilaista neoadjuvant CRT saavuttaa jonkinasteinen patologisen vasteen. Kuitenkin, ei ole tehokas menetelmä ennustavaa jotka potilaat reagoivat neoadjuvant CRT. Prospective tunnistaminen potilailla, joilla on suurempi todennäköisyys vastata preoperatiivisen CRT voisi olla tärkeä deceasing hoidossa sairastuvuutta ja parantaa selviytymisen ja paikallisen valvonnan LARC. Lisäksi potilailla, jotka eivät todennäköisesti reagoi voitaisiin tarjota vaihtoehtoisia lähestymistapoja terapiaan.

Perifeerisen veren mononukleaariset solut (tasapainotusliivit) käsittävät kiertävän mononukleaarisissa soluissa, mukaan lukien monosyytit, T-solut, B-solut, ja luonnolliset tappaja soluja, ja niistä on tullut viime vuosina sijaismarkkereina useiden sairauksien kuten tulehduksellinen (kuten nivelreuma, ja krooninen haimatulehdus) ja pahanlaatuisten sairauksien, kuten munuaissolukarsinooma [10] – [12]. Toisin kudosten markkereita, niiden roolia ennustaminen sekä varoituksia arviointi kiinteiden kasvainten edelleen vähäistä Viimeaikaisten tutkimusten avulla geenilastut jotka keskittyvät rinta, ruokatorven, haiman ja peräsuolen syöpiä [13] – [16].

Tässä tutkimuksessa testaamme jos geeniekspressioprofiili BCS voisi tunnistaa vastaus CRT ja siten olla ennustaja markkeri monitieteinen potilaiden hoitoon LARC.

Materiaalit ja menetelmät

potilaat ja Kasvainten Ominaisuudet

ryhmä tutkimuksen aluksi muodostui 35 paikallisesti edennyt peräsuolen syöpä (LARC) potilaita Division of Colon Peräsuolen Surgery, HUVN, Granada, Espanja, ylimääräisiä 8 potilasta validointipäivä ryhmään. Saadakseen tämän tutkimuksen, peräsuolen karsinoomat täytyi olla lavalla II tai vaiheen III mukainen kriteerien International Union Against Cancer n (UICC), ilman systeemistä etäpesäkkeitä positroniemissiotomografia skannaus ja ole tiedossa toisen kasvain. Diagnoosi peräsuolen syövän vahvistettiin histopatologista analyysiä endoskoopeille koepaloja. Tutkimuksen hyväksyi Hospital Universitario Virgen de las Nieves – Granada eettinen komitea. Kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta ennen tutkimusta. Kun ensimmäinen lavastus, kaikki potilaat voivat saada tämän tutkimuksen saivat neoadjuvant sädehoitoa (28 jakeet 1,8 Gy, 5 jakeet /viikko) samanaikaiseen kemoterapiaan (kapesitabiini, 825 mg /m

2, kahdesti päivässä yksinään tai yhdessä OKSALIPLATIINI 50 mg /m

2 kerran viikossa). Standardoitu kirurgia, mukaan lukien kokonais-mesorectal leikkaaminen, suoritettiin 8 viikkoa sen jälkeen, kun standardoitu CRT edellä kuvattua protokollaa.

Standard patologinen tuumorin luokitus on resektoitua näytteen suoritettiin UICC ohjeiden ja kasvaimen regressio luokka (TRG). Mandard luokituksia määrättiin vähintään yksi erikoistunut ruoansulatuskanavan patologi. Tätä tutkimusta varten potilaita, joilla TRG 1 ja 2 sekä downstaging pidettiin vasteen taas potilaat luokitellaan regressio laadut 3-5 eikä downstaging käsiteltiin ei-vastetta. Downstaging määriteltiin vähentäminen patologisen pysähdyspaikan (ypStage) suhteessa esikäsittelyvaiheessa (cStage) (eli cII ja ypI, cIII on ypII tai ypI).

eristäminen RNA tasapainotusliivit

Yhteensä RNA: t uutettiin 12 ml: lla perifeerisen veren mononukleaaristen solujen (tasapainotusliivit) näytteet ennen hoitoa kunkin tutkimuksen osallistuja käyttäen PAXgene veri RNA System (PreAnalytix, Becton Dickinson, San Diego, CA, USA) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Määrä ja eheyden RNA: t tarkastettiin spektrofotometrisesti on NanoDrop ™ (ND-1000, DE, USA) ja käytettäessä Experion ™ automatisoitu elektroforeesijärjestelmään (Bio-Rad, Richmond, VA, USA), vastaavasti.

Gene Expression Analysis

lyhyesti, seuraavat käänteistranskriptio cRNA leimattiin Cy5 sreptavidiini (Amersham Biosciences, Ruotsi). Hybridisaatio koko genomin ihmisen geenien sisältyvät CodeLink bioarrays (Applied mikrosirut, Tempe, AZ, USA) suoritettiin yön yli 37 ° C: ssa ravisteluinkubaattorissa (Innova 4080, New Brunswick®, NJ, USA). Hybridisaatio Reaktiot kahtena kappaleena. Microrrays luettiin kanssa GenePix 4000B laserskannerin (Axon Instruments, CA, USA), määrällisesti ja normalisoitu käyttämällä CodeLink Software 5.0 (Applied mikrosirut, Tempe, AZ, USA). Microarray data normalisoitiin eri menetelmillä: keskimääräinen normalisoinnin ja cyclicLoess. Laatu tuloksen arvioitiin eri tonttien tuottaa ohjelmistopaketin ArrayQualityMetrics toteutettu R kielellä. Valvottu menetelmä (merkitys analyysi mikrosirujen -SAM-) [17] käytettiin sitten löytää merkittävämpi (oikaistu p 0,05) ilmennetty eri geenien peräsuolisyövän vastanneiden potilaiden hoitoon ja ne, jotka eivät.

Kun päätökseen tämän prosessin raaka-geenin ilmentymisen arvot saatiin kullekin näytteistä. Tämä aineisto on tehty julkisesti saatavilla Gene Expression Omnibus GEO tietokantaan [18] kanssa toimitusnumeron GSE44172.

Korrelaatio Gene allekirjoitukset CRT Response

Näytteet jaettiin kahteen ryhmään sen mukaan, hoitovaste. Ero geenien ilmentymistä arvioitiin sitten ehdotettu luokkien ohjelmiston avulla SAM (merkitys analyysi mikrosirut, Stanford University, CA, USA) [17]. Cut-off merkitsevyys määritettiin virittämällä parametri delta (Δ), joka valittiin perustuu False Discovery Rate (FDR). Geenejä korjattu p-arvot 0,05 katsottiin merkittävästi ilmentyvät eri ryhmien välillä.

validointi Microarray Data by qRT-PCR

Käytimme kvantitatiivinen reaaliaikainen PCR (qRT-PCR) vahvistaa joitakin tuloksia löytyy microarray geeniekspressioprofiili. Me optimoitu herkkä ja erityinen qRT-PCR-määritys käyttäen MX3005P QPCR System (Stratagene, Agilent Technologies, La Jolla, CA, USA). Yksi mikrogramma RNA: ta käytettiin käänteistranskriptioon kanssa QPCR-luokan AffinityScript® Multiple Lämpötila käänteistransskriptaasi (AffinityScript® QPCR cDNA synteesi kit, Stratagene, Agilent Technologies, La Jolla, CA, USA) käyttämällä satunnaisia ​​heksameerejä. PCR-reaktiot sisälsivät 1 ug cDNA, 12,5 ui Brilliant II ® qPCR Master Mix (Stratagene, Agilent Technologies, La Jolla, CA, USA), 1,25 ui Solaris® (Dharmacon, Thermo Scientific, Chicago, IL, USA) pohjamaali /koetin asetetaan kunkin geenin. PCR-olosuhteet olivat 15 min 95 ° C: ssa, 15 s 95 ° C: ssa ja 1 min 60 ° C: ssa 40 sykliä. Suunnittelimme erityisiä Taqman® koettimet ja alukkeet (taulukko 1). Ennen kuin tämän tutkimuksen GAPDH (RT-CKYD-GAPD Yakimassa Yellow® Eclipse Tumma Quencher®), RPL13A (RT-CKYD-RPL13A Yakima Yellow® Eclipse Tumma Quencher®) ja TBP (RT-CKYD-TBP Yakima Yellow® Eclipse Tumma Quencher ®) geenit valittiin ehdokkaaksi taloudenhoito geeni. Huolimatta siitä, että GAPDH on yli-ilmentynyt tasapainotusliivit useiden maligniteettien, kuten kohdunkaulan ja munasarjojen syöpien [19], GAPDH tullut vakain geenin, jolla ei ole täysin vertailukelpoisia housekeeping-geenin joukossa arvioitiin geenien sarjassa kasvaimia.

Expression kvantifioitiin analysoinnin jälkeen kahden eri laimennoksia cDNA (1 ja 1/10) kolmena kappaleena. Kunkin kokeellinen näyte, määrä kunkin geenin ja endogeenisen viite (GAPDH) määritettiin standardin käyriä. Nämä Standardikäyrien koostuivat viisi pistettä saatu viisinkertaiseksi sarjalaimennoksia (1, 1/10, 1/50, 1/100 ja 1/500) cDNA Universal Human Reference RNA (Stratagene, Agilent Technologies, La Jolla , CA, USA). Se muodostuu kokonais-RNA: 10 ihmisen solulinjoja. Olemme huomioon vain kokeissa, joissa lineaarinen suhde Ct (kynnys sykli) ja log määrän standardikäyrän kunkin geenin ja GAPDH oli suurempi kuin 0,99 (korrelaatiokerroin). Ilmaisu arvot kunkin geenin sitten jaettuna määrä GAPDH saamiseksi normalisoidun arvon. GAPDH geeniä käytettiin sisäisenä kontrollina RNA laatu käänteisen transkription ja korjata vaihtelut aste RNA: n hajoamisen. Tilastollinen merkitys transkriptitasojen erot arvioitiin käyttäen epäparametrinen T-testiä (Mann Whiteney). Tiedot analyysit tehtiin SPSS tilasto-ohjelmalla, versio 15,0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Suorittaa määrällisesti geenien ilmentymisen, standardikäyrän oli rakennettu ainakin neljä eri pitoisuutta kolmena kappaleena. GAPDH-geeniä käytettiin kontrollina geenin testata laadun cDNA. Expression arvioitiin sen jälkeen, kun analyysi kahden eri laimennoksia cDNA, jokainen laimennoksia analysoitiin kolmena kappaleena. Erot geenien ilmentymisen välillä Responder ja Non-responder ryhmät arvioitiin käyttäen epäparametrinen T-testi.

Tulokset

Potilaille ja kasvainten ominaisuuksiin

Kahdeksan 35 alkuperäisen potilaiden lopulta ulkopuolelle heikon laadun RNA tai ristiriitaiset tulokset Mandard’s kriteerien ja histopatologisia downstaging. Tilastollinen teho on enemmän kuin 0,8, saatiin näiden 27 potilasta.

Kliiniset tiedot lopullisesta 27 potilasta on esitetty taulukossa 2, joka sisältää lisäksi 8 potilasta validoinnin ryhmän (potilas 28-35). Huomaa, että leikkauksen jälkeisen UICC vaihe edustaa kasvaimen vaiheesta jälkeen neoadjuvant hoidon (YPT). Tilastollisesti merkitseviä eroja (chi neliö) havaittiin suhteen CRT, leikkaus tai sukupuoli verrattaessa näiden kahden ryhmän välillä (vaste ja vastaavasti ei-vastaus) (taulukko 3). Lisäksi ei havaittu merkittäviä eroja (t-opiskelija) havaittiin leukosyyttien kokonaislukumäärän ja hemoglobiini molempien ryhmien (vastanneiden ja vastetta) (taulukko 4).

Differential Gene Expression ääreisveren näytteistä välillä Treatment responder ja Non-responder Potilaat, joilla peräsuolesta Kasvainten

valvottu menetelmä (merkitys analyysi mikrosirujen -SAM-) käytettiin etsimään geenin allekirjoitus osoittaa merkittäviä eroja ilmaisun profiileja responder ja ei-responder potilasalaryhmissä. Olemme havainneet, että 8-geenit ilmentyvät differentiaalisesti (p 0,05) tasapainotusliivit peräisin responder ja ei-responder näytteitä. Kaikki nämä geenit esitellään merkittävästi korkeammat ekspressiotasot (over-lauseke) in responder LARC potilailla. Taulukko 5 kuvaa näitä 8 geenit (BC035656.1, CIR, PRDM2, CAPG, Falz, HLA-DPB2, NUPL2, ja ZFP36). Genes BC035656.1, CIR ja PRDM2 osoitti suurin ero geeniekspression arvoja näiden kahden ryhmän välillä (Log-suhde: 1,47, 1,34 ja 1,24 vastaavasti).

Kvantitatiivinen RT-PCR Validation

mRNA: n ilmentymisen tasoja kuusi geenien (CIR, PRDM2, CAPG, Falz, NUPL2, ja ZFP36) yli-ilmentynyt hoidossa responder potilailla analysoitiin qRT-PCR: llä. HLA-DPB2 ja BC035656.1 hylättiin johtuen monimutkaisuudesta HLA-DP alue ja sekvenssi lopetetaan vastaavasti.

mittaaminen geeniekspressiotasot määritettiin mikrosiruanalyysillä korreloi positiivisesti qRT-PCR-analyysi. Sekä microarray ja qRT-PCR Tulokset vahvistivat samankaltaista suuntausta geeniekspressioprofiilien valittujen geenien peräsuolen syöpäpotilailla. Kuten tapahtui microarray ilmaisun analyysin löysimme merkittäviä eroja ilmaisua Falz geenin (p = 0,029) hoitoon responder ja ei-responder ryhmiä. CAPG (p = 0,268), CIR (p = 0,058), NUPL2 (p = 0,476), PRDM2 (p = 0,959), ja ZFP36 (p = 0,063) osoitti korkeampia ilmentymistä responder potilailla, eikä ehdi tilastollista merkitystä (kuvio 1 ).

Falz, CAPG, CIR, NUPL2, PRDM2, ja ZFP36 ilmentymistasot onnistuneesti saatu 30, 13, 29, 27, 30, ja 23 LARC potilailla. Laatikot ovat kvartiilien, mediaani edustaa musta viiva laatikon sisällä, ja ympyrät (0) epätyypillisiä arvot (1,5-3 kertaa pituus laatikko). Tähdellä (*) osoittaa, ääriarvot (yli kolme kertaa laatikko). Falz geenien ilmentyminen osoitti tilastollisesti merkitseviä eroja responder ja ei-responder potilailla.

validointi Ennakoiva biomarkkerit

arvioimiseksi ennustetekijöiden merkitystä Falz, CIR ja ZFP36 geenit, haimme qRT -PCR. Saavuttaakseen riittävän tehon analyysissa olemme lisänneet validointi kohortti (n = 8) koko väestön tutkittu (n = 27). Kriteerien mukaisesti käytetty (potilailla, joilla on Mandard’s TRG 1 ja 2 pidettiin vasteen), vain toinen niistä oli luokiteltu responder. Jokaista mRNA (array ja qRT-PCR data) toimivan vastaanottimen (ROC) käyrä luotiin. Alapuolinen alue (AUC) arvo ja 95%: n luottamusväli (CI) laskettiin spesifisyyden määrittämiseksi ja herkkyys hoitovasteen ennustamiseen. ROC käyrät Falz microarray ”data näkyy kohtalainen kyky erottaa vastaaja alakonsernin ja Non-responder alaryhmä, jossa AUC 0,843. Tällä raja-pisteen asetettu 20.72, Falz tuotti herkkyys 80,0% ja spesifisyys 85,7%. ROC käyrät Falz qRT-PCR data oli AUC 0,681.

Keskustelu

Modern syöpäsairauksien hoitoon päätökset ovat yhä enemmän riippuvaisia ​​niin sanottu kliiniset ja laboratorio ennakoivan ja ennustetekijöitä markkereita. Kun taas ennustetekijöitä markkereita selittää vaihtelua riippumatta hoidon Tutkimuksemme aikoo käyttää ennustavaa markkereita selittää tuloksen vaihtelua hoitovasteen.

geeniekspressioprofiili käyttäen sirutekniikalla on johtanut useita lupaavia tuloksia kudoksen läpi geeniekspression profilointi eri maligniteetteja, kuten syövän. Mielenkiintoista on, että geeni allekirjoitukset on käytetty menestyksellisesti prognostisia ennustaja potilailla, joilla on paksusuolen ja peräsuolen karsinoomat [20]. Tässä suhteessa, Ghadimi et ai. pystyivät ennustamaan hoitovaste käyttämällä geeniekspressioprofiilien. Kasvaimen käyttäytyminen oli oikein ennustettu 83%: lla potilaista. Herkkyys (oikea ennustaminen vasteen) oli 78%, ja spesifisyys (oikea ennustaminen kato) oli 86% [21].

Samalla se on toistuvasti osoittanut viime vuosina, että geneettinen ilmentyminen tasapainotusliivit on muuttunut yhteydessä maligniteetti. Tämä havainto muuttuneen tasapainotusliivit geneettinen mentymisprofiili syöpäpotilailla raportoitiin ensimmäisen kerran hematologisissa syöpäsairauksia. Tänään, nykyinen julkaisuista mukaan tasapainotusliivit voisi olla arvokas sijaismarkkerit diagnostista potentiaalia sekä varoituksia sovelluksia eri syövän lokalisoinneista kuten munuaisten, rinta, ruokatorven, haiman ja peräsuolen [12] – [16]. Kuitenkin, tietojemme mukaan ole julkaistu koskaan yrittänyt tutkia geneettinen profiili BCS sijaislajeina ennakoivaa markkereita hoitovasteen kiinteässä elimissä.

Mutta mikä voisi olla perustelut tutkimustemme? Tässä yhteydessä on ehdotettu, että kasvaimen kutistuminen ei ole pelkästään riippuvainen suoranaista vahinkoa säteilytetty kasvainsolujen, mutta se on myös suuresti vaikuttaa isännän immuunivastetta [22]. Itse asiassa, in vivo tutkimukset viittaavat siihen, että syöpäsolut, kuolleiden tai kuolevien vuoksi CRT, voi esittää kasvaimeen liittyviä antigeenejä isännöidä immuunijärjestelmän soluja ja näin herättää anti-kasvain immuunivasteet [23], [24]. Lisäksi asennus kliiniset tiedot viittaavat läsnäolo säteilyn aiheuttamista kasvaimen vastaisen immuniteetin ihmisellä [25], [26].

Koska lymfosyyttien, erityisesti T-solut, on keskeinen rooli kasvaimen vastaisen immuniteetin, Molling et al osoittivat, että korkea kiertävä muuttumattoman luonnon tappaja-T (painoväriä) soluja ennustaa kliinisiä tuloksia potilailla, joilla on pään ja kaulan okasolusyöpä [27]. Lisäksi nimenomaan peräsuolisyövässä, Kitayaman et al. [28] spekuloitu, todettuaan, että prosenttiosuus lymfosyyttien osoitti voimakasta yhdessä vastauksena CRT, että lymfosyyttivälitteinen immuunivasteen vaurioitunut kasvainsoluja on ratkaisevan tärkeää saavuttaa vasteen.

Muut tutkimukset peräsuolen syöpä potilaat, tutkimalla lisääntynyttä apoptoosia lymfosyyttien hyvän vasteen in vitro säteilytys, viittaavat siihen, että radiosensivity pahanlaatuisten solujen voidaan korreloida tavanomaisen solujen peräsuolen syövän ja nostaa sitä mahdollisuutta, että syöpä vaste CRT voidaan ennustaa analysoimalla reuna tasapainotusliivit [29].

tässä raportoidut tulokset osoittavat, että vain muutamia geenejä joukossa useita tuhansia testattiin, ekspressoituu differentiaalisesti tilastollisesti merkitsevästi taajuus oheislaitteiden välillä mononukleaarisoluista tasapainotusliivit peräisin vasteen ja ei-vastaaja LARC potilaiden CRT. Ekspressiotasot CIR, PRDM2, CAPG, Falz, NUPL2, ja ZFP36 oli suurempi responder potilailla. Tulokset qRT-PCR osoitti suuntauksia, jotka samaan aikaan mikrosirun, vaikka ainoa tilastollisesti merkittäviä muutoksia ilme olivat varten Falz geenin (CIR ja ZFP36 osoittavat arvot lähellä merkitsevyystaso). Suhde Falz ilmaisun ja vaikutukset neoadjuvant hoidon peräsuolen syöpä ei ole tutkittu. On kuitenkin todisteita, jotka viittaavat siihen, että ne voisivat olla uusien molekyylimarkkereita ennustamiseksi vastauksena neoadjuvancy peräsuolen kautta syöpäpotilailla. Falz lokus koodit eri transkriptiotekijöitä, joiden yli-ilmentyminen johtaa apoptoosin [30], ja tiedetään, että monissa kasvaimissa, apoptoosin on tärkein mekanismi kuoleman syöpäsolujen vastauksena yhteiseen hoito-ohjelmille. ZFP36 aiheuttaa verisuonen endoteelin kasvutekijä (VEGF) mRNA: n hajoamisen [31] ja vähentämällä Ras-riippuvaista VEGF: n ilmentymisen [32]. VEGF vähennys on liittynyt ennustamiseen tehoa setuksimabihoidon plus viikoittain irinotekaanin raskaasti esikäsiteltyjä kehittynyt peräsuolen syövän potilaille, sekä eloonjäämiseen [33]. Kuitenkin tarvitaan lisätutkimuksia päätellä onko Falz, CIR ja ZFP36 osallistuvat hoitovaste.

tutkia, geeniekspressioprofiili in tasapainotusliivit on esitys ekspressoidut geenit itse kudoksessa, me lisäksi etsittiin samankaltaisuutta differentiaalisesti ilmentyvien geenien tunnistettu tutkimuksessamme ja jotka havaittiin microarray-analyysin tuumorikudoksessa LARC potilaista (dataa ei esitetty). Emme löytäneet kahdeksan geenejä, jotka ilmentyvät differentiaalisesti tasapainotusliivit vastaamasta ja ei-reagoivilla potilailla geenin ekspressiomalleja LARC kudosten (julkaisematon data). Näin ollen vaikuttaa siltä, ​​että yleisesti, geeni-ilmentymisen tasapainotusliivit ei jäljitellä että primaarikasvaimen, ja näin ollen ei ole artefakti kiertävien tuumorisolujen.

Toisaalta, kun taas lisäämällä OKSALIPLATIINI on joillakin potilailla saattaa heijastaa haittana tutkimuksen on korostettava, että tärkein hoito vaikutus RCT vetoaa sädehoitoa. Itse asiassa, johtuu vaiheen III tutkimuksessa [34] ääriviivat on tärkeää saada aikaan 50,4 Gy riippumatta kemoterapeuttiset aineen tuotto (kapesitabiinin yksinään tai yhdessä OKSALIPLATIINI).

Johtopäätökset

Tässä Tutkimuksella analysoidaan geeniekspressioprofiilien saadaan koko genomin-pohjainen mikrosirut perifeerisissä tasapainotusliivit näytteissä LARC potilaita, arvioidaan niiden käyttökelpoisuus ennustaja vasteen CRT. Tuloksemme osoittavat merkittäviä eroja geeniekspressioprofilointi verrattaessa vastanneiden ja vastetta. Käyttäen ilmaisua mikrosiruja olemme tunnistaneet kahdeksan geenejä, joiden ilmentyminen vaihteli merkitsevästi vasteen ja ei-vastetta. Yksi heistä, Falz geeni corrobated käyttäen qPCR, itsenäinen määritys ja tarkempi. Mielenkiintoista, Falz on relevantti funktio kasvaimen vastaisen immuniteetin.

Sikäli kuin tiedämme, tässä tutkimuksessa on ensimmäinen analyysi BCS geenin profiilin potilaalla on LARC vasteen CRT. Tällaisia ​​differentiaalikaavojen on potentiaalia tuottaa rikas yhteenvedon mahdollisten geenien myös jatkamaan uusina ennakoivaa markkereita. Lisäksi geenit tunnistettu tutkimuksessamme voisi tarjota uusia oivalluksia immuunijärjestelmän säätelyhäiriötä vuonna LARC.

Kiitokset

Haluamme tunnustusta työn E Coll, P Calderón, MD Galvez, ja minä García keräämiseen näytteiden ja JL Marin histopatologista analyysiä.