Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Sekä maha- ja peräsuolen syöpiä (CRC) on yleisimmin esiintyvä maligniteetit maailmanlaajuisesti kanssa eloonjäämisaste näistä potilaista on edelleen tyytymätön. Tunnistaminen tuumorisuppressorigeeneille (APT) vaiennetaan promoottori CpG metylaation paljastaa mekanismeja tumorigeneesin ja tunnistaa uusia epigeneettiset biomarkkereita varhaisen syövän havaitsemiseen ja ennusteen arvioinnissa. Cystathionine-beeta-syntaasi (CBS) toimintoja foolihappometaboliaan reitti, joka on taidokkaasti liittyy metylaatio genomisen DNA: ta. Häiriöstä DNA: n metylaatio edistää merkittävästi syövän kehitystä.

Menetelmät /Principal Havainnot

tunnistamaan mahdolliset APT vaiennetaan poikkeava promoottori metylaation CRC, analysoimme kasvain ja viereisten kudosten CRC tapauksissa käyttää Illumina ihmisen Methylation45 BeadChip. Havaitsimme hypermetylaatiota

CBS

geenin CRC näytteissä, verrattuna viereisiin kudoksiin. Metylointi ja laski mRNA: n ilmentymisen on

CBS

havaittiin useimmissa CRC-solulinjoissa metylaatiospesifinen PCR ja semikvantitatiivinen RT-PCR: ää, samoin kuin syöpään. Hoito 5-atsa-2′-deoksisytidiinin ja /tai trikostatiini käänteinen metylaatio ja palauttaa

CBS

mRNA ilmaisu osoittaa suora vaikutus. Poikkeava metylaatio edelleen havaittiin 31% ensisijaisen CRC (29 96) ja 55% mahalaukun kasvaimet (11 20). Sen sijaan, metylaatio tavataan harvoin normaaleissa kudoksissa vieressä kasvain.

CBS

metylaatio liittyi

KRAS

mutaatioita ensisijainen CRC (

P

= 0.04, jonka χ

2-testi). Ei kuitenkaan assosioitunut

CBS

metylaatio tai

KRAS

mutaatioiden kanssa syövän uusiutumisen /etäpesäke Stage II CRC potilailla.

Johtopäätös

A novel löytäminen tämän tutkimuksen, että foolihappometaboliaan entsyymi

CBS

mRNA usein vaimentua kautta CpG metylaatio

CBS

geenin mahasyövässä ja CRC, mikä viittaa siihen, että

CBS

toimii tuumorisuppressorigeenin. Nämä havainnot takaa lisätutkimuksia

CBS

kuin epigenetic biomarkkerina molekyylitason diagnoosin ruoansulatuskanavan syöpien.

Citation: Zhao H, Li Q, Wang J, Su X, Ng KM, Qiu T, et ai. (2012) Usein Epigeneettiset hiljentäminen folaatin metaboloivia Gene

Cystathionine-Beta-syntaasi

mahasyövän. PLoS ONE 7 (11): e49683. doi: 10,1371 /journal.pone.0049683

Editor: Anthony WI. Lo, Kiinan University of Hong Kong, Hongkong

vastaanotettu: 27 heinäkuu 2012; Hyväksytty: 11 lokakuu 2012; Julkaistu 13 marraskuuta 2012

Copyright: © 2012 Zhao et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat avustuksia National Natural Science Foundation of China (nro 30801344), Beijing Nova Program (nro 2009A70) ja valtion Key Laboratory ohjelma (nro 2060204). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

sekä maha- ja peräsuolen syövät ovat useimmin esiintyvien pahanlaatuisten kasvainten maailmanlaajuisesti joiden esiintyvyys on lisääntynyt viime vuosina [1], [2]. Vaikka monipuolinen romaani hoitomuotoja, kuten kirurgiset, lääketieteelliset, ja radiologisten, on otettu käyttöön, kliinistä kulkua mahalaukun ja peräsuolen syöpä (CRC) on muuttuva ja yleinen ennuste on edelleen epätyydyttävä. Siksi tunnistaminen keskeisten geenien molekyyli- synnyssä mahasyövän ja CRC ovat omiaan aiheuttamaan uusia ja tehokkaampia hoitostrategioita.

inaktivointi monituumorisuppressori geenejä (APT) on keskeinen molekyyli tapahtuma monivaiheinen geneettisen patogeneesi CRC [3]. Lisäksi geneettisiä muutoksia, epigeneettisiä inaktivaatio APT on tärkeä rooli syövän synnyssä [4]. Epigeneettiset hiljentäminen kautta poikkeava metylaatio CpG-saarekkeiden (CGI) in TSG promoottori alueilla esiintyy lähes kaikissa kasvaintyypeissä [4]. Erityisesti kasvava luettelo poikkeavasti metyloitua APT on raportoitu CRC, kuten

APC

,

MGMT

,

MLH1

,

p16

INK4a

,

VHL

,

RASSF1A

,

HIC1

,

CHFR

,

ADAMTS18

,

PCDH10

ja

DLEC1

[5] – [10] sekä mahasyövän [11], [12].

Tässä tutkimuksessa olemme seulottu APT vaiennetaan poikkeava promoottori metylaation CRC ja löysi hypermetylaatiota

cystathionine-beeta-syntaasi

(

CBS

) geeni, joka koodaa avainentsyyminä foolihappometaboliaan [13], [14]. Viimeaikainen työ on keskittynyt liittyviä entsyymejä foolihappometaboliaan, koska metylaatio DNA riippuu näiden reittien [15] – [19]. Geneettinen epävakaus ominaisella kromosomaalisen epätasapainon on ominaista syövän synnyn. Homokysteiini ja foolihappometaboliaan liittyy DNA eheys, ja geneettisiä variantteja, jotka toiminnallisesti vaikuttavat homokysteiinin ja foolihappometaboliaan liittyvät eri syöpien, kuten CRC, non-Hodgkinin lymfooma, jne [20], [21]. Tavoitteena Tämän työn tarkoituksena oli tutkia,

CBS

oli uusi potentiaali TSG ja testata, jos

CBS

-mRNA vaimentua promoottoriaktivoinnilla hypermetylaation CRC sekä mahasyövän. Tutkimme myös mahdollista roolia

CBS

geeni hypermetylaation biomarkkerina ennustaa kasvaimen uusiutumisen tai etäpesäkkeiden II vaiheessa (T

3 N

0 M

0) CRC potilailla.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Tämä tutkimus suoritettiin noudattaen Helsingin suuntaviivojen koehenkilöiden tutkimusten ja hyväksyi Institutional Review Board of Cancer sairaalan, kiina Academy of Medical Sciences (LÄHETYKSET), Peking, Kiina. Allekirjoitettu suostumus saatiin kaikilta TET näytteiden keräämiseen ja analysointiin.

Solulinjat

neljä CRC (HCT116, HT29, LoVo ja SW480) ja 16 mahasyövän (Kato III, YCC1, YCC2, YCC3, YCC6, YCC7, YCC9, YCC10, YCC11, YCC16, SNU719, AGS, MKN28, MKN45, SNU1 ja SNU16) solulinjoja käytettiin [10]. Solulinjoja ylläpidettiin rutiinisti RPMI-1640-väliaineessa, jossa oli 10% FBS: ää. HCT116 solulinja geneettisen tyrmäyksellä DNA metyyli-feraasigeenien

DNMT1

ja

DNMT3B

(double tyrmäys, HCT116

DKO) oli lahja tri Bert Vogelstein, Johns Hopkins University [22] ja viljeltiin 0,4 mg /ml genecitin tai 0,05 mg /ml hygromysiini.

kasvainnäytteestä

Kaikki Perusnäytteissä lukien neljä pariksi tuoretta CRC ja normaaleissa kudoksissa, 96 ensisijainen formaliinia kiinteä parafiiniin (FFPE) CRC kudoksiin ja 20 FFPE mahasyövän kudosten, saatiin Patologian osasto, Cancer Hospital, LÄHETYKSET, Peking, Kiina. Lisäksi metylaation tutkimuksessa vastaava kasvaimettomina katteet 20 mahasyövän ja 17 CRC potilasta analysoitiin. Kaikki potilaat eivät läpikäyneet edellinen kemo- tai sädehoitoa, koska ne esitetään kokoisen kasvaimia. Tuoreet näytteet snap-jäädytettiin nestemäisessä N

2 ja sen jälkeen säilytettiin -80 ° C: ssa, kunnes käsitelty. Diagnoosi varmistettiin hematoksyliinillä ja eosiinilla (HE) -staining ja histopatologisia analyysi suoritettiin määrittämään tyypillinen kasvaimen alueilla. Kliiniset tiedot olivat saatavilla kaikista CRC potilaalla, joista sukupuoli, ikä, erilaistumista ja seurantatietoja. Mediaani-ikä CRC potilaista oli 68 vuotta (vaihteluväli 37-93), ja miesten ja naisten suhde oli 1.4:1 (56:40). Määrä hyvin, kohtalainen ja huono-eriyttäminen tapauksissa oli 14, 56 ja 26, tässä järjestyksessä. Cancer lavastus (pTNM) määriteltiin mukaisesti 7

painos American sekakomitean Cancer [23]. Kaikki CRC potilaat ovat vaiheessa II (pT

3 N

0 M

0).

DNA ja RNA

Yhteensä RNA ja DNA uutettiin solulinjoista käyttämällä TRI Reagent (Molecular Research Centre). Tuoreiden tuumorikudoksia, saatiin jäätyneitä osia ja tarkistetaan varmista, että kasvain pitoisuus oli yli 80% poikkipinta-ala. DNA uutettiin tuoreista kudosten ja FFPE näytteitä käyttäen QIAamp® DNA Mini Kit (Qiagen) seuraten valmistajan ohjeita.

Farmakologiset Demetylaatio

kaksi mahasyövän solulinjoissa (YCC10 ja SNU719) ja yksi CRC (HCT116) solulinjan vaiennetaan

CBS

hoidettiin 5 uM 5-atsa-2′-deoksisytidiini (atsa) (Sigma) kolme päivää ja seurasi 100 nM trikostatiini A (TSA, Cayman) yhden päivän kuten aiemmin on kuvattu [24]. Hoidon jälkeen, kokonais-DNA ja RNA uutettiin.

DNA Metylointi Analyysi

Kaikki DNA näytteet altistettiin bisulfiittimodifikaatio käyttäen EZ DNA Metylointi Kit (Zymo Research) mukaisesti valmistajan antamia ohjeita. Yksi ug genomista DNA: ta kustakin näytteestä oli bisulfiitin muunnetaan ja eluoitiin 18 ul: eluutiopuskurissa, ja 5 ui kutakin näytettä analysoitiin Illumina Infinium DNA metylaatiomääritystä käyttäen Human Methylation45 BeadChip (Infinium metylaatio 450 K, Illumina), joka on alleeli-spesifinen määritys, jossa 480000 CpG loci, joka kattaa koko genomin [25]. Protokollat ​​ja koetin ovat osoitteessa www.illumina.com. Tulokset DNA metylaatiomääritystä koottiin kunkin lokuksen Illumina Bead Studio -ohjelmisto (Illumina) ja raportoidaan beta (β) arvoihin, jotka ovat DNA: n metylaatio tulokset vaihtelevat 0-1, mikä murto-DNA: n metylaation tasolla yksi CpG [25].

Semikvantitatiivinen Käänteinen transkriptio-PCR (RT-PCR) B

RT-PCR suoritettiin, kuten aikaisemmin on kuvattu [9], käyttäen

GAPDH

kuten ohjaus. Alukkeet

CBS

on lueteltu taulukossa 1. PCR-ohjelma käyttää alustavan denaturoinnin 95 ° C: ssa 10 minuutin ajan, 35 sykliä (94 ° C: ssa 30 s, 55 ° C: ssa 30 s ja 72 ° C 30 s), ja lopullinen laajennus vaihe 72 ° C: ssa 10 minuutin ajan.

KRAS

mutaation havaitseminen Reaaliaikainen PCR

seitsemän hotspot mutaatiot kodonissa 12 ja 13

KRAS

geeniä tutkittiin käyttäen ihmisen

KRAS

mutaatio laadullinen Detection Kit (ACCB Biotech Ltd.). Fluoresoivat koettimet on suunniteltu nimenomaan havaitsemaan 7 eri pistemutaatioiden (G12V /S /R /D /A /C ja G13D). Määritys suoritettiin valmistajan protokollan avulla MX3000P reaaliaikainen PCR-järjestelmää (Stratagene). Läsnäolo tai puuttuminen mutaatioiden arvioitiin laadullisesti fluoresenssin monistuskäyrää.

bisulfiittimutaqeneesi hoito ja Metylaatiospesifinen PCR (MSP) Analyysi

bisulfiittimutaqeneesi muutos DNA suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu käyttäen 2.4M natriummetabisulfiitti [26]. MSP suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [9]. MSP-alukkeet on lueteltu taulukossa 1. MSP-PCR-aluke spesifisyys vahvistettiin, koska ne eivät vahvistavat ei-bisulfiitti-käsitellyn genomisen DNA-templaatteja. MSP tuotteet valitut näytteet varmistettiin suoralla sekvensoinnilla.

Tilastollinen analyysi

χ

2 testejä käytettiin analysoida mahdollisia korrelaatioita kliinisten parametrien,

KRAS

mutaatio ja

CBS

metylaatiostatuksen kasvainnäytteestä. Kaikki analyysit suoritettiin käyttäen SPSS for Windows.

P

0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

tunnistetiedot

CBS

kuin hypermetyloitunut Gene CRC

analysoidaan kasvaimen ja viereisten kudosten neljästä Kiinan CRC tapausta käyttäen Illumina metylaatio array, joka seuloa 480000 CpG

loci

kattavat koko genomin. Kaikista CpG sivustoja, jotka hypermetyloitunut tuumorinäytteessä (tuloksia ei ole esitetty), neljä CpG toimipaikkoja olivat

CBS

geenin (kuvio 1A). Genomisen sekvenssin

CBS

geenin, paljasti, että sen oletetun promoottori, eksoni 1 ja introni 1 oli tyypillinen CGI ja siten altis epigeneettisiä hiljentämisen (kuvio 1A) [27].

, kaavio

CBS

promoottori CpG island (CGI), jossa on eksonin 1 (musta suorakulmio), CpG sivustoja (lyhyt pystyviivat), MSP alue näkyy. Transkription aloituskohdasta on merkitty kaareva nuoli. Neljä CpG toimipaikkoja

CBS

geenialueen tunnistaa Illumina metylaatio array huomattavasti hypermetyloitunut kasvain verrattuna ei-tuumorikudoksista (CT /CN) esitetään.

B

, ilmentäminen

CBS

oli helposti havaittavissa normaaleissa kudoksissa.

C

, Expression ja metylaatio

CBS

syöpäsolulinjoissa tutkittiin RT-PCR ja MSP, jossa

GAPDH

kontrollina. M, metyloitu, U, metyloitumattomia.

Usein hiljentäminen on

CBS

by Promoottori Metylointi Monta CRC ja mahasyövän Solulinjat

Aiemmin

CBS

on osoitettu olevan vahvasti ilmaistaan ​​aivoissa, sekä maksan, haiman, munuaisen ja sikiön kudoksissa [13]. Tutkia edelleen korrelaatio

CBS

metylaatio ja mRNA: n ilmentymisen, ensin tutkittu paneelin normaalin ihmisen kudoksissa semikvantitatiivinen RT-PCR. Tuloksemme osoittivat, että

CBS

ilmentyi kaikissa normaaleissa kudoksissa, kuten paksusuoli, peräsuoli ja vatsa, vaikkakin eri ekspressiotasoja. Korkeimman ilmentymistaso havaittiin haiman ja hengityselimiä kudoksia (kurkunpään, henkitorven ja keuhko), kun taas heikkoa ilmentymistä oli luuydinkudokseen (kuvio 1 B).

kontrasti

CBS

ilmentymistä normaalissa kudosten pahanlaatuisia soluja, analysoimme maha tuumorisolulinjoissa. Semikvantitatiivinen RT-PCR osoitti, että

CBS

ilmentyminen väheni tai vaiennettu 56,3% (9/16) ja mahalaukun syövän 75,0% (3/4) CRC solulinjojen (kuvio 1 C).

CBS

metylaatiostatuksen analysoitiin myös MSP näissä solulinjoissa. Huomasimme, että solulinjat alentunut tai vaimennettu

CBS

ilme oli metyloitu promoottorit, kun taas mitään metylaatio havaittiin normaalissa

CBS

ilmaisun solulinjoissa (kuvio 2B), joka ilmaisee, että

CBS

promoottori metylaatio on merkittävä mekanismi transkription hiljentäminen tämän geenin useimmissa tutki CRC ja mahasyövän solulinjoissa.

, Farmakologiset tai geneettinen demetylaatio käyttämällä Aza TSA indusoi

CBS

ilmaisun denaturoidulla ja vaiennetaan solulinjoissa. A + T: Aza ja TSA hoitoa.

B

, edustaja MSP tulokset

CBS

metylaation ensisijainen mahasyövässä (GC) ja peräsuolen syöpä (CRC). U: MSP metyloitumaton promoottori, M: MSP metyloidulle promoottori.

Palauttaminen

CBS

ilmentymisen Farmakologiset ja Genetic Demetylaatio

Voit selvittää metylaatio suoraan sovittelee väheneminen

CBS

mRNA ilmaisun yksi metyloituja CRC (HCT116) ja kaksi metyloitu mahasyövän (YCC10 ja SNU719) solulinjoja käsiteltiin Aza, DNA metyylitransferaasin estäjä, ja TSA. Hoidon jälkeen

CBS

ilmentyminen palautui metyloituja solulinjoissa sekä selvästi lisääntynyt metyloitumattoman promoottorin alleelit (kuvio 2A). Huomasimme myös, että

CBS

voitaisiin ottaa uudelleen vuonna HCT116

DKO CRC solulinja, joka on geneettisesti demetyloituu kautta kaksinkertainen pudotuspelit sekä DNMT1 ja DNMT3B. Samanaikaisesti metyloitumattomia

CBS

alleelit havaittiin Aza-käsiteltyjen ja HCT116

DKO soluja, mikä osoittaa, että metylaatio

CBS

promoottori suoraan johtaa sen hiljentämisen CRC ja syöpien.

Usein

CBS

metylointi Alkeisyhdistyksessä CRC ja mahalaukun Kasvaimet

Tutkimme lisäksi läsnä

CBS

promoottori metylaatio 96 ensisijaisen CRC ja 20 mahasyövän näytettä käyttäen MSP-analyysi.

CBS

promoottorin metylaation havaittiin 30%: CRC (29/96) ja 55% mahalaukun kasvaimet (11 20), mutta harvoin löytyy normaaleissa mahan (1/20, 5%) tai paksusuolen kudoksen (0/17, 0%) näytteistä (kuvio 2B). Ei ollut merkittävää yhteyttä on

CBS

metylaatio sukupuoleen, ikään tai kasvaimen erilaistumista CRC potilailla (dataa ei esitetty). Nämä tulokset viittaavat siihen, että hypermetylaatiota

CBS

promoottori on yleinen tapahtuma CRC ja syöpien.

korrelaatio

CBS

Metylointi ja

KRAS

Mutaatio Alkeisyhdistyksessä CRC Kasvaimet

yhteinen mutaatioita kodonien 12 ja 13 vuoden eksonin 2

KRAS

geeni tutkittiin 96 ensisijaisen CRC, jossa

CBS

metylaatiostatus oli aikaisemmin analysoitiin (taulukko 2).

KRAS

mutaatio havaittiin 45% (13/29) ja

CBS

metyloitu ja 24% (16/67) ja

CBS

-unmethylated ensisijainen CRC ilmaisee positiivinen korrelaatio

CBS

metylaatio ja

KRAS

mutaatioita (

P

0,05). Tarkempi analyysi ei osoittanut korrelaatiota

CBS

metylaatio ja

KRAS

mutaatio syövän uusiutumisen /etäpesäke II vaiheessa CRC potilasta (taulukko 2).

Keskustelu

Tietääksemme tämä on ensimmäinen raportti tunnistaa

CBS

kuin metyloitua ehdokas TSG ruoansulatuskanavan syöpiin. Olemme osoittaneet, että

CBS

mRNA: n ilmentymisen puuttui useissa peräsuolen ja mahasyövän solulinjoissa johtuen promoottorin metylaation. Lisäksi

CBS

geeni usein metyloitavaa CRC ja mahasyövän potilaat, mikä viittaa siihen, että

CBS

toimii TSG CRC ja mahasyövän on usein inaktivoituu metylointi.

geeni

CBS

, sijaitsee kromosomissa 21q22.3, koodaa tärkeä entsyymi, joka osallistuu transulfuration homokysteiinin tuotettu metyyli-ryhmä aineenvaihdunnan [27]. Erityisesti

CBS

puutos aiheuttaa kasvavia plasman metioniinitasot ja laskivat kysteiinin tasoja [14], [28], jotka puolestaan ​​tiedetään korreloivan homokystinuria, sydän ja maksasyövän [14], [21]. Transulfuration polku yhdistää metioniinin aineenvaihdunnan biosynteesiä solujen redox määräysvallattomien molekyylit, kuten kysteiini, glutationi, ja tauriini [18]. Kysteiini syntyy läpi transulfuration reitin määrittää solujen redox määräysvallattomille molekyyli tasoilla, kuten glutationin ja tauriini suojella soluja vastaan ​​reaktiivisia lajeja aiheuttamaa vahinkoa [29] DNA läpi pohjan ja sokerimodifikaatioilla, base-ilmaisia ​​sivustoja, DNA-proteiini siltoja, ja lohkon taukoja [30], [31]. Siten vaimentua ilmaus

CBS

saattaa heikentää tuotantoa glutathione helpottaa siten kasvaimen kehittymisen [16]. Lisäksi, hapetus-pelkistys-epätasapainon stimuloi proteiinikinaasi ja poly (ADP-ribosylaatio-osassa) johtavia reittejä apoptoosin estämiseen ja johtaa nekroottisen solukuoleman, jota seuraa tulehdusreaktioita ja kasvainten kehittymiseen [32]. On joitakin tutkimuksia, jotka ovat arvioineet yhdistyksen välillä pahanlaatuinen kasvain alttius ja polymorfismia

CBS

geeni (844ins68) CRC [19], [33] mutta ei ruokatorven tai mahalaukun syöpä [15]. Lisäksi

CBS

844ins68 polymorfismi liittyy pienentynyt eloonjäämisen pään ja kaulan okasolusyöpä [34].

Lisäksi menetys

CBS

ilmaus saattaa johtaa kertyminen homokysteiinin, joka kierrättää metioniinin metioniini systhase kautta remetylaatiossa reitin [14]. Koska metioniini toimii lähteenä metyyliryhmän luovuttajana DNA: n metylaatio, sen aiheuttama nousu menetys

CBS

ilmentyminen voi dysregulate DNA: n metylaation. Tuloksemme paljasti usein metyloinnin

CBS

mahasyövän solulinjoissa ja ensisijainen kasvaimia. Siten tukahduttaminen

CBS

promoottoriaktivoinnilla metyloinnin sijasta geneettisiä muutoksia, myös johtaa häiriö metyyli-ryhmän aineenvaihduntaa ja edistää syövän kehitystä lisääntynyt DNA-vaurioita oksidatiivisen stressin, heikentäen antioksidantti kapasiteetti, ja dysregulating DNA: n metylaatio. Kuitenkin

CBS

metylaatio ei liittynyt toistuminen meidän kohortin potilaista vaiheen II CRC. Ehdotamme, että suuremmat ikäluokat potilaista on tarpeen tutkia tätä potentiaalia yhdessä riittävän tilastollinen voima.

ennusteen arvioinnissa on

KRAS

mutaatioita potilaalla on CRC edelleen kiistanalainen. Tutkimus Roth

et al.

Ehdotti, että ennusteen arvioinnissa varten

KRAS

mutaatiostatus PFS ja OS puuttui potilailla vaiheen II ja III resektoitiin paksusuolen syöpä [35]. Kuitenkin on raportoitu, että vaiheen III potilaat, joilla on

KRAS

mutaatiot näkyvät huomattavasti huonompi tautivapaan elinajan verrattuna ottaa villityypin

KRAS

[36]. Vielä tärkeämpää on, harvat tutkimukset ovat erilaistuneet

KRAS

mutaatiot kodonissa 12 niiltä kodonissa 13 suhteen kliinis ja selviytymisen [37] – [40]. Tässä tutkimuksessa emme voineet tunnistaa

KRAS

mutaatio asemaa ennustetekijä uusiutumisen tai etäpesäkkeitä potilailla, joilla on vaiheen II resekoitu CRC. Sen sijaan, huomasimme, että

CBS

metylaatio merkitsevästi yhteydessä

KRAS

mutaatioita. Tämä ominaisuus on yhdenmukainen aiemman raportin osoittaa, että CpG-saarekkeen methylator fenotyyppi (CIMP) liittyy

KRAS

mutaatioita [41].

Yhteenvetona keskeisiä havainto tästä tutkimuksesta on, että

CBS

vaimennetaan promoottori metylaation peräsuolen ja syöpien. Huomasimme, että metylointi välittämää vaiennettu

CBS

voitaisiin kääntää geneettisellä tai farmakologisen demetylaation, mikä viittaa siihen, että

CBS

toimii tuumorisuppressorina näissä syövän tyypit. Vapautuminen

CBS

ja sen yhdessä pahanlaatuinen kasvain fenotyyppi liittyy mahdollisesti ratkaisevaan rooliin CBS metioniinin metaboliassa ja ylläpito solunsisäisen redox homeostaasin. Tutkimuksemme takaa tarkempaa analyysiä

CBS

kuin epigeneettisestä biomarkkerina molekyylitason diagnoosin CRC ja mahasyövän.

Kiitokset

Kiitämme professorit Qian Tao ja Jing Wang hyödyllisiä kommentit ja teknistä tukea, ja tohtorit Sergio Rey ja Yuan Qiao kriittisiin muokkausta varten tämän käsikirjoituksen. Kiitämme myös Dr. Bert Vogelstein varten HCT116

DKO solulinjassa ja tohtori Keith Robertson DNA näytteiden joidenkin CRC solulinjoissa.