Krooninen sairaus

tiivistelmä

MTDH

(metadherin), tärkeä onkogeenin, joka on laajalti yli-ilmentynyt eri syöpiä, on potentiaalinen biomarkkereiden kasvaimen pahanlaatuisuuden. Variantit

MTDH

on liittynyt alttiuteen rintasyöpä. Kuitenkaan mitään tutkimuksia arvioitaessa

MTDH

geenipolymorfismien ja niiden mahdollinen suhde munasarjasyöpään herkkyys on raportoitu. Siten tutkimme yhdistys

MTDH

(-470G A) polymorfismi munasarjasyövän kehitykseen 145 munasarjasyöpä potilasta ja 254 vastaaviin kontrolleihin käyttämällä sekvenssianalyysillä. Huomasimme, että

MTDH

(-470G A) polymorfismi tilastollisesti korreloi munasarjasyöpä riski (alle lisäaineen geneettinen malli, GG vs. GA vs AA, P = 0,042). Verrattuna genotyyppejä sisälsi G-alleelin (GG ja GA), AA genotyyppi voi pienentää riskiä munasarjasyöpä (P = 0,0198, OR = 0,33, 95% CI [0.12~0.78]). Verrattuna G-alleelin, A-alleelin on suojaava vastaan ​​munasarjasyövän riski (P = 0,01756, OR = 0,66, 95% CI [0.46~0.93]). Lisäksi tilastollisesti merkitsevä assosiaatio GG ja GA + AA genotyyppien ja kliinisessä vaiheessa havaittiin (P = 0,038). Nämä tiedot viittaavat siihen, että

MTDH

(-470G A) voisi olla hyödyllinen molekulaarinen merkkiaine arvioitaessa munasarjasyövän riskiä ja ennustamiseen munasarjasyövän potilasennuste.

Citation: Yuan C, Li X, Yan S, Yang Q, Liu X, Kong B (2012)

MTDH

(-470G A) polymorfismi liittyy munasarjasyöpä Herkkyys. PLoS ONE 7 (12): e51561. doi: 10,1371 /journal.pone.0051561

Editor: Goli samimi, Kinghorn Cancer Centre, Garvan Institute of Medical Research, Australia

vastaanotettu: 05 lokakuu 2012; Hyväksytty: 02 marraskuu 2012; Julkaistu 11 joulukuuta 2012

Copyright: © 2012 Yuan et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat National Natural Science Foundation of China (81001166, 30872738), Natural Science Foundation of Shandong (ZR2010HQ050), Foundation Shandongin Public Health Department (2009Q2012), Kiina Postdoctoral Science Foundation (201104636, 20100471551), Independent innovaatio Foundation of Shandongin yliopistossa (2012TS142). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Munasarjasyöpä on korkein kuolleisuus kaikista naisen sukuelimiin maligniteetteja, ja vuonna 2008 oli arviolta 225500 uutta tapausta ja 140200 kuolemantapausta maailmanlaajuisesti [1]. Samoin kuin monien pahanlaatuisten kasvainten, munasarjasyöpä on monitekijäinen sairaus, ja hormonaaliset tekijät, haavan paranemista ja tulehdus voivat kaikki olla rooli kehityksessä. Välinen vuorovaikutus ympäristön ja geneettiset tekijät osallistuvat merkittävällä [2]. Monet tutkimukset ovat tutkineet geneettisen perustan munasarjasyövän alttiuteen. Esimerkiksi

BRCA1

,

BRCA2

,

MLH1

,

MSH2

,

RAD51C

,

RAD51D

RB1 ​​

,

SMAD6

,

CASP8

, ja

LIN28B

ovat kaikki osallisina munasarjasyöpä [3], [4], [5 ], [6], [7], [8], [9], [10]. Äskettäin genomin laajuinen yhdistys tutkimukset (GWAS) ovat löytäneet vahva yhdistysten välillä munasarjasyöpä ja useita yhteisiä alttiusalleelien neljässä loci [11], [12], [13]. Braem et ai. tarkistetaan 147 kandidaattigeenit, ja 3 GWAS julkaistut tutkimukset vuodesta 1990 lokakuu 2010 tunnistettu noin 1100 geneettisiä variantteja yli 200 kandidaattigeenit ja 20 intergeeniset alueilla [8]. Kuitenkin suhteet toisiinsa tunnettuja geneettisiä variantteja ja munasarjasyövän ovat rajalliset, ja lisää tutkimuksia tarvitse suorittaa valottaa syy geneettisiä variantteja ja tunnistamisen helpottamiseksi suuren riskin alaryhmien sisällä väestön [5].

MTDH

, joka tunnetaan myös astrosyyttien kohonnut geeni-1 (

AEG-1

) ja

Lyric

, tunnistettiin alun perin HIV-geenin, primaarisissa ihmisen sikiön astrosyyttien [14] .

MTDH

sijaitsee 8q22, koostuu 12 eksonista ja 11 intronia ja koodaa 582 aminohapon proteiinia, jonka laskettu molekyylimassa 64 kDa.

MTDH

yli-ilmentyminen on havaittu ruokatorven okasolusyöpä [15], mahasyöpä [16], munuaissyövän [17], eturauhassyöpä [18], ei-pienisoluinen keuhkosyöpä [19], maksasyövän [20], rintasyövän [21] – [22], ja neuroblastooma [23], verrattuna normaaleihin soluihin ja vastaavan ei-neoplastisia alueilla [24]. Taso

MTDH

yli-ilmentyminen on merkittävästi korreloi kasvaimen kehittymisen, invaasio, muuttoliike, eteneminen, angiogeneesi [25], EMT (epiteelin mesenkymaalitransitioon), chemoresistance ja radioresistance eri syöpätyyppejä [17], [26 ], [27], [28], [29], [30], [31]. MTDH overe-Xpression korreloi vatsakalvon levittämiseen, imusolmuke etäpesäke, International Federation of Gynecology and Obstetrics vaiheessa histologinen luokka, läsnäolo jäljellä kasvaimen ja kasvaimen uusiutumisen munasarjasyöpä [32], [33]. Korkea

MTDH

ilmentyminen liittyi etenemisen ja ennusteen munasarjasyövän [32], [33].

Ryhmämme on myös aikaisemmin todennut, että variantit

MTDH

ovat merkitsevästi rintasyöpään liittyvän [34]. Kuitenkin yhdistys

MTDH

variantteja munasarjasyöpä herkkyys ei ole tutkittu.

Tulokset

Suhde

MTDH

(-470G A) Polymorfismi ja munasarjasyöpä Risk

osallistujat tapauksessa ja kontrolliryhmien olivat kaikki Manner-Kiinasta. Ei ollut merkittäviä kliinisiä eroja (eli painoindeksi [BMI], mediaani-ikä, kuukautisten historiaa tai muita parametreja) 2 ryhmän välillä.

Hardy-Weinberg tasapaino osoitti, että Khin neliö arvot tapauksessa ryhmän ja kontrolliryhmän olivat 0,1 ja 3,94, tässä järjestyksessä; molemmat olivat p 0,05. Kuten taulukosta 1,

MTDH

(-470G A) genotyypit ja alleeli jakaumat ollut tilastollisesti merkitsevää eroa tapauksessa ja kontrolliryhmiin. Havaitsimme tilastollisesti merkitsevä korrelaatio munasarjasyövän riski (lisäaineen geneettinen malli, GG vs. GA vs AA, P = 0,042). Käyttäen hallitseva geneettinen malli (GG + GA vs AA), havaitsimme tilastollisesti merkitsevää eroa munasarjasyövän riski (P = 0,0198, OR = 0,33, 95% CI [0.12 ~0. 78]). Nämä tulokset osoittivat, että homotsygoottinen AA genotyyppi voi olla suojaavan munasarjasyöpä kehitykseen ja saattaa vähentää riskiä munasarjasyöpä. A-alleelin näyttää olevan suojaava (P = 0. 01756, OR = 0,66, 95% CI [0.46~0.93]) vastaan ​​munasarjasyöpä. Sequencing kromatogrammit alkaen satunnaisesti valitusta tapauksissa käytetään kuvaamaan variantteja

MTDH

(Fig. 1).

A-C, jaksottaminen kromatogrammi tulokset genotyypin GG, GA ja AA vastaavasti. Näytteet valitaan sattumanvaraisesti.

välinen suhde

MTDH

(-470G A) polymorfismi ja kliinis muuttujat

Taulukko 2 esittää yhdistys GG ja GA + AA genotyyppien kanssa kliinis ominaisuudet, kuten ikä diagnoosin, aste kasvaimen erilaistumiseen, kliiniseen vaiheeseen, imusolmuke etäpesäke, CA125 ilmentymisen, kasvaimen kokoa ja histologia. Tilastollisesti merkittävää yhteyttä kliinisessä vaiheessa havaittiin (P = 0,038). Ei suhteet polymorfismin ja ikä diagnoosin, aste kasvaimen erilaistumiseen, imusolmuke etäpesäke, CA125 ilmentymisen, kasvaimen koko tai kasvainhistologiaa löytynyt. Siten

MTDH

(-470G A) polymorfismi voi olla merkki kliinisen vaiheen munasarjasyöpään.

Suhde

MTDH

(- 470g A) polymorfismi ja MTDH Protein tasot

lisäksi tutkineet mahdollisia suhdetta

MTDH

(-470G A) polymorfismi ja MTDH ekspressiotaso in vivo. Kuten on esitetty kuviossa. 2, tasot MTDH proteiinin 15 munasarjasyövän kudokset olivat merkittävästi korkeammat kuin 17 normaaleissa kudoksissa (P 0,01). Kuten on esitetty kuviossa. 2B ja 2C MTDH proteiinin ekspressio oli suurempi potilailla, joilla oli GG tai GA genotyyppejä kuin niillä, joilla on AA genotyyppi, mutta nämä erot eivät olleet merkittäviä (P 0,05). Nämä havainnot viittaavat siihen, että SNP -470G ei saa antaa vaikuttaa merkittävästi ilmentymisen

MTDH

geenin.

A, suhteellinen taso MTDH proteiinin ilmentymisen munasarjasyöpä kudoksissa verrattuna normaaliin munasarjakudoksessa . B, suhteellinen taso MTDH proteiinin ilmentymisen munasarjasyöpä potilaiden kudosten eri -470G genotyypit. C, suhteellinen taso MTDH proteiinin ilmentymistä normaaleissa kudoksissa yksilöiden eri -470G genotyypit. Yksi ympyrä edustaa keskiarvoa kolmen itsenäisen mittauksen yhdestä potilaasta. Jakauma kolmen genotyyppien olivat satunnaisia ​​ryhmien välillä. N edustaa näytteiden määrää kunkin ryhmän. Pylväät edustavat keskihajonta. Studentin t-testiä käytettiin arvioimaan eroja ekspressiotasoja eri konstruktien.

Keskustelu

MTDH

on kriittinen rooli kasvaimen biologiaan, ja se on mukana erilaisissa kasvaimen biologista käyttäytymistä. Ryhmämme oli ensimmäinen, joka löytää Merkitsevä yhteys

MTDH

ja kasvaimen herkkyys: eli että 2

MTDH

variantteja liittyy rintasyöpään [34]. Tässä tutkimuksessa olemme edelleen analysoidaan eri SNP

MTDH

ja löysi toisen SNP (rs16896059, -470G A) tilastollisesti merkitseviä eroja munasarjasyövän tapauksessa ja kontrolliryhmiin. Lisäksi rs16896059 oli tilastollisesti merkitsevää yhteyttä kliinisessä vaiheessa kasvain. Parhaan tietomme mukaan tämä on ensimmäinen variantti yhdistys tutkimus

MTDH

SNP ja munasarjasyövän riskiä. Odotamme, että

MTDH

tulee olemaan hyödyllinen molekulaarinen merkkiaine arvioitaessa munasarjasyövän riskiä ja ennustamiseen munasarjasyöpä potilaalle ennustetta. Tämä havainto olisi tarkastettava suurempi näyte.

SNP rs16896059 sijaitsee edistäjä

MTDH

ja siten polymorfismien eivät muuta sekvenssi tai proteiinin rakenne. Olemme tutkineet proteiinin ilmentymistason MTDH western blottauksella. Kuten aikaisemmin ilmoitettiin, ilmentymistasojen MTDH munasarjasyövän kudoksissa olivat merkittävästi korkeampia kuin tasot viereisten normaaleissa kudoksissa (P 0,0001) [32], [33]. Kuitenkin, emme löytäneet tilastollisesti merkittävää vaikutusta -470G SNP proteiinin ilmentymistä

MTDH

geenin munasarjasyöpään kudoksissa tai normaaleissa kudoksissa. Siten ei ole vaikutusta SNP on

MTDH

ilme näkyi. Koska -470G SNP sijaitsi promoottorialueen, ja sitten se voi vaikuttaa myös promoottori activeity. Siksi yhdistys

MTDH

(-470G A) polymorfismi, jossa

MTDH

promoottori activeity ja sen vaikutukset munasarjasyöpä kehitystä on tutkittu in vitro tutkia tarkemmin molekyylitason mekanismeja.

Kuten edellä todettiin, useimmat potilaat, jotka osallistuivat tutkimuksessamme elivät Shandongin maakunnassa Kiinassa. Johtuu yleisestä geneettisesti homogeeninen tämän etnisen väestön me spekuloida, että nämä tulokset ovat johdonmukaisesti suurempi otoskoko ympäri Kiinan. Kuitenkin suhde

MTDH

polymorfismi ja munasarjasyövän riski vaatii lisätutkimuksia eri etnisten populaatioissa [34].

Yhteenvetona A-alleelin

MTDH

SNP rs16896059 (-470G A) on suojaava vastaan ​​munasarjasyöpä, ja homotsygoottinen AA genotyyppi voi olla suojaava genotyyppi. Polymorfismin tilastollisesti merkitsevästi liittyy kliinisessä vaiheessa.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat ja näytteet

Tutkimus hyväksynyt eettinen komitea Shandong University. Kaikki osallistujat antoivat kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen osallistumaan tähän tutkimukseen. 145 potilasta (keski-ikä 51,8 ± 13,1 vuotta) Tutkimukseen osallistui, diagnosoitu munasarjasyövän Qilu sairaalan Shandong University välillä syyskuussa 2008 ja heinäkuussa 2011. Kliiniset tiedot tiedot, mukaan luettuna ikä diagnoosin, erottelua kliiniseen vaiheeseen, positiivinen imusolmuke, CA125, koko kasvain ja kasvainhistologiaa saatiin potilasasiakirjamerkinnöistä. 254 samanikäisiin tervettä naista (keski-ikä 49,2 ± 12,8 vuotta) rekrytoitiin kontrollina. Useimmat osallistujat olivat han-kiinalaisten asuvat Shandongin maakunnassa Kiinassa. DNA ääreisverisoluissa s uutettiin TIANamp Genominen DNA Kit (Tiangen, Peking, Kiina), jonka ohjeet. DNA-puhtaus ja pitoisuus mitattiin UV-spektrofotometrillä (GE Healthcare, USA). DNA-näytteet tavanomaisesti säilytettiin -80 ° C: ssa, kuten aiemmin on kuvattu [34], [35].

genotyypitys analyysi

MTDH

(-470G A)

genotyypitys SNP rs16896059 (-470G A) polymorfismi määritettiin PCR ja sekvensointi menetelmä. Sekvenssi

MTDH

geeni saatiin NCBI (Gene ID: 92140, nukleotidi-: AC_000140.1, GI: 157734173). Alukkeet suunniteltiin Primer Premier 5 mukaisen sekvenssin rs16896059 seuraavasti: forward-aluke 5′-CTGGCAACTGGTAGGCACGC -3 ’ja reverse-aluke 5′-GAGGGACTCGCAGGATGACG -3’. PCR tuotannot koko oli 893 bp. PCR-monistus suoritettiin 50 ul: ssa reaktioseosta, jotka sisältävät 1 ui genomista DNA: ta (100 ng /ul), 4 ui 2,5 mM dNTP: itä, 10 ui puskuria, 2 ui kutakin aluketta (0,4 uM) ja 0,5 U PrimeStar HS-DNA-polymeraasia (TAKARA , DALIAN, Kiina). PCR-monistuksen olosuhteet olivat: 94 ° C 5 min, 35 sykliä 98 ° C: ssa 10 sekunnin ajan, 55 ° C: ssa 15 sekunnin ajan ja 72 ° C: ssa 2 minuutin ajan, ja lopullinen ekstensiovaihe 72 ° C: ssa 5 min . Kaikki PCR tuotannot sekvensoitiin BioSune Biotechnology Co., Ltd (Shanghai, Kiina), ja sekvenssi analysoitiin kanssa täyteläisyyden 2,31 ja MEGALING 7.0 ohjelmiston.

Western Blot

Western blot-analyysi suoritettiin, kuten aiemmin on kuvattu [31], [36], Tissue liuotettiin RIPA-puskuriin (1 x PBS, 0,1% natriumdodekyylisulfaattia, 1% NP40, 5 mM EDTA, 1 mM natriumortovanadaattia, 0,5% natriumdeoksikolaattia ja proteaasinestäjien ). 40 ug proteiineja, ajettiin elektroforeesissa 10% SDS-PAGE: lla ja siirrettiin PVDF (Millipore) käyttäen Mini Trans-Blot Cell (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA). Immunoblottaus suoritettiin käyttämällä primäärisenä vasta-aineena

MTDH

(ab45338, 1:500, Abcam, Cambridge, MA, USA) ja β-aktiini (1:5,000, Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA ). Toissijainen vasta-aineita (1:5,000, KPL, Gaithersburg, MD, USA) leimattiin HRP (piparjuuren peroksidaasi). Membraanit tehdään näkyviksi käyttämällä ECL kit (Merck, Darmstadt, Saksa). Lastaus kontrolli oli β-aktiini.

Tilastollinen analyysi

tilastotiedot analysoitiin aikaisemmin kuvatulla [34]. Hardy-Weinberg tasapaino testi suoritettiin d käyttämällä web-pohjainen tilastollinen työkalu OEGE (https://www.oege.org/software/hwe-mr-calc.shtml). Genotyyppi ja alleeli jakaumat että munasarjasyöpä ryhmien ja kontrolliryhmien analysoitiin käyttäen chi-potenssiin testejä, ja Fisherin testiä käytettiin, kun yksi solumäärä oli alle 5. Riski munasarjasyövän kehitys arvioitiin kuin kerroinsuhde (OR), jossa on 95%: n luottamusväli (CI) käyttämällä ehdoton regressioanalyysimme. Kaikki tilastolliset testit olivat kaksipuolisia kanssa merkitsevyystasolla p≤0.05. Tilastotietojen analysoitiin SPSS 17.0 (SPSS, Chicago, Illinois, USA).

Kiitokset

Arvostamme Ning Yang, Xiao Guan tiedonkeruun tätä tutkimusta.