Krooninen sairaus

tiivistelmä

Proteiinityrosiinikinaasin 6 (PTK6) on ei-reseptori tyyppi tyrosiinikinaasin, joka voi olla mukana joidenkin syöpien. Kuitenkin biologisen roolin ja ilmaisun asemaa PTK6 haimasyövän ei tunneta. Siksi tässä tutkimuksessa arvioimme toiminnallista roolia PTK6 on haimasyöpä hyökkäystä. Viisi haimasyövän solulinjoissa ilmaisi PTK6 erisuuruisia. PTK6 ilmentyminen havaittiin myös ihmisen haiman adenokarsinooman. PTK6 tukahduttaminen siRNA vähensi merkitsevästi sekä solumigraatiota ja invaasio (0,59 /0,49 kertainen BxPC3, 0,61 /0,62 Panc1, 0,42 /0,39 MIAPaCa2 vastaavasti

p 0,05

kullekin). Sen sijaan pakko yliekspressio PTK6 transfektoimalla on PTK6 ekspressiovektorin Panc1 ja MIAPaCa2 solujen lisääntynyt solumigraatiota ja invaasio (1,57 /1,67 kertainen Panc1, 1,44 /1,57 MIAPaCa2 vastaavasti

p 0,05

) . Hiljentäminen PTK6 vähentää ERK1 /2 aktivaation, mutta ei AKT tai STAT3 aktivointia, kun taas PTK6 yliekspressio lisäsi ERK1 /2 aktivointi. U0126, erityinen estäjä ERK1 /2, poistetaan kokonaan vaikutus PTK6 ilmentymisen vaikutus solumigraatiota ja hyökkäystä. Nämä tulokset viittaavat siihen, että PTK6 säätelee solujen maahanmuuton ja hyökkäyksen haimasyövän kautta ERK signaloinnin. PTK6 voi olla uusi terapeuttinen kohde haimasyövän.

Citation: Ono H, Basson MD, Ito H (2014) PTK6 Edistää Syöpä Muuttoliike ja Invasion haimasyöpäsoluissa Riippuu ERK Signaling. PLoS ONE 9 (5): e96060. doi: 10,1371 /journal.pone.0096060

Editor: Noriko Gotoh, Institute of Medical Science, University of Tokyo, Japan

vastaanotettu: 22 marraskuu 2013; Hyväksytty: 02 huhtikuu 2014; Julkaistu: 01 toukokuu 2014

Copyright: © 2014 Ono et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat kirjoittajien sisäinen osastojen tutkimuksen rahasto. Rahoittaja (Department of Surgery, Michigan State University) ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä olemassa.

Johdanto

Haimasyöpä on neljänneksi suurin syy syövän kuolleisuus Yhdysvalloissa. [1] tulokset potilaiden haimasyöpä on ollut surkea 5% 5 vuotta eloonjäämisaste. [2] kuolettavuus haimasyövän johtuu sen aggressiivinen biologista käyttäytymistä myös hyvät mahdollisuudet invaasio ja etäpesäkkeiden, ja kestävyys olevat syöpälääkkeet. Molekyylimekanismeja vastuussa näistä ominaisuuksista ei juurikaan tunneta, ja on ymmärrettävä parantamiseksi hoitotuloksiin potilaiden haimasyöpä.

proteiini tyrosiinikinaasin 6 (PTK6), tai rintojen kasvain liittyvät kinaasi (BRK) on ei-reseptori tyyppi tyrosiinikinaasin. Se liittyy c-Src perheen, jolla SH2 ja SH3 verkkotunnuksia. [3] PTK6 edistää solujen erilaistumista normaaleissa epiteelisoluissa ja on tuskin ilmaistaan ​​kypsien epiteelisolujen ruoansulatuskanavassa, rinta- tai iholle. [3] – [5] Vaikka poikkeava yliekspressio PTK6 on tunnistettu useissa epiteelisyöpien, kuten rinta-, keuhko-, melanooma, eturauhasen, paksusuolen ja munasarjojen, toiminnot PTK6 syövän biologian ei ole täysin tunnettu. [3], [6] – [12].

Tässä tutkimuksessa arvioimme roolin PTK6 haiman syöpäsoluinvaasiota ja tutkitaan loppupään signaaleja, jotka voisivat välittää tällainen vaikutus. Tulosten perusteella näyttää, että PTK6 säätelee invasiivisuus aktivoimalla ERK ja nostaa esiin mahdollisuuden, että PTK6 voi olla tärkeä uusi molekyyli tavoite parantaa Hoidon tehoa haimasyövän.

Materiaalit ja menetelmät

Materiaalit

Culture media, naudan sikiön seerumia (FBS) ja penisilliiniä /streptomysiiniä (P /S) saatiin Sigma-Aldrich (St. Louis, MO). Anti-PTK6-vasta-aine saatiin Santa Cruz Biochemistry (Santa Cruz, CA), anti-p44 /42 ERK1 /2, anti-fosfo-p44 /42 ERK1 /2 (Thr202 /Tyr204), anti-p38 MAPK, anti-fosfo -p38 MAPK (Thr180 /Tyr182), anti-STAT3, ja anti-fosfo-STAT3 (Tyr705) vasta-aineet saatiin Cell Signaling Technology (Danvers, MA), ja anti-β-aktiini-vasta-aine saatiin Sigma-Aldrich. Valikoiva ERK1 /2-estäjän U0126 saatiin Sigma-Aldrich.

Ihmiskudokset

Haimasyöpä kudoksen diat saatiin patologian osaston Sparrow Hospital, Lansing MI. Käyttö arkistoidut yksilöiden Tämän tutkimuksen hyväksyi Michigan State University (MSU) ja Sparrow Hospital Institutional Review Boards (Sisäiset asiakasriskiluokitukset). Meidän IRB komitea luopua tarvetta suostumusta. Yhdeksän potilasta, joille tehtiin haiman resektio haiman adenokarsinooma 2002 vaikka 2012 valittiin ja otettiin mukaan tähän tutkimukseen. Arkistoitu formaliinilla kiinnitetyt, parafiiniin upotetut näytteet leikattiin pyörivällä mikrotomilla 4 um: n. Entsyymi epitooppisup- haku suoritettiin 0,03% proteaasia E 10 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Anti-PTK6 vasta-aine laimennettiin 1/100, jossa on normaali vasta-aineen liuotinta (NAD) (Scytek – Logan, UT), ja inkuboitiin 1 tunnin ajan huoneenlämpötilassa. Antigeeni-vasta-reaktiot tehtiin näkyviksi avidiini-biotiini-peroksidaasi-kompleksin järjestelmän (R.T.U. Vectastain Elite ABC-reagenssia; Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Levyt tarkistetaan ja PTK6 ilmentymistä mukaan lajitellut sytoplasmista värjäytymisen intensiteettiä seuraavasti; negatiivinen, mitään värjäytymistä tai heikko intensiteetti värjäyksen alle 5% soluista; heikko tai kohtalainen positiivinen, heikko tai kohtalainen intensitiy; vahva positiivinen, voimakas intensiteetti.

Cell Cultures

Ihmisen haimasyövän solulinjoissa BxPC3, Capan1, Hs766T, Panc1, ja MIA PaCa2 saatiin American Type Culture Collection. BxPC3 pidettiin RPMI 1640-väliaineessa, jota oli täydennetty 10% FBS: ää ja 1% P /S kostutettuun (37 ° C, 5% CO

2) kammioon. Muut solulinjat pidettiin DMEM-alustassa, joka sisälsi 10% FBS: ää ja 1% P /S.

Western blot -analyysi

Solut hajotettiin solujen hajotuspuskuria (Cell Signaling Technology), 1 mM fenyylimetaanisulfonyylifluoridilla (Cell Signaling Technology). Proteiinipitoisuus Kunkin solun lysaattia arvioitiin BCA-määrityksellä (Pierce Chemical). Solulysaatit, jotka sisältävät yhteensä 20 ug proteiinia pantiin 10% SDS-PAGE: lla ja siirrettiin polyvinylideenidifluoridi (PVDF) (Invitrogen, Grand Island, NY). Sen jälkeen, kun on estetty Tris puskuroidulla suolaliuoksella, jossa oli 0,2% Tween-20 (TBST), joka sisälsi 5% BSA: ta tai rasvaton maito 4 tunnin ajan huoneen lämpötilassa, kalvot inkuboitiin vasta-aineen kanssa sopivan laimennuksen 4 ° C: ssa. Piparjuuriperoksidaasi-konjugoidulla aasin anti-kani-IgG- tai lampaan anti-hiiri-IgG (GE Healthcare, Piscataway, NJ) käytettiin sekundäärisiä vasta-aineita ja inkuboitiin kalvojen kanssa, jonka 1/3000 laimennus 1 tunnin ajan. β-aktiini käytettiin latauskontrollina merkkiaine normalisointia kunkin kaistan.

geenien mukaan Sirna

Loss-of-function analyysi tehtiin käyttämällä siRNA kohdistamista PTK6 (s11487, Ambion , Grand Island, NY: sense 5′-CAUCCAUGGUUAAGUCAUAtt-3 ’, antisense 5′-UAUGACUUAACCAUGGAUGaa-3′) ja negatiivinen kontrolli (Äänenvaimennin Valitse Negative Control # 2 siRNA, Ambion). Toinen pari siRNA: iden kohdistaminen PTK6 ja negatiivisen kontrollin käytettiin (PTK6 ja negatiivinen kontrolli, Invitrogen, St. Louis, MO: Stealth RNAi-PTK6HSS183907 sense 5’-CAGGCUGUGCGGCACUACAAGAUCU-3 ’, antisense- 5′-AGAUCUUGUAGUGCCGCACAGCCUG-3’ ja Stealth RNAi Negative ohjaus Medium GC Duplex, vastaavasti). Jokainen siRNA (10 nmol /l) transfektoitiin haimasyöpä soluihin käyttäen Lipofectamine-RNA: Imax (Invitrogen) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. Knockdown kohdegeenin vahvistettiin 96 tuntia western blottauksella.

yli-ilmentyminen PTK6 mukaan Stable Transfektio

Human PTK6 cDNA (CloneID: 5746034) ostettiin Open Biosystems (Pittsburg, PA ) ja monistettiin PCR: llä käyttäen alukkeita (5′-CCCAAGCTTATGGTGTCCCGGGACCAGGC, ja 3′-CGGGATCCTCAGGTCGGGTTCTCGTAGC). PCR-tuote insertoitiin ekspressiovektoriin pcDNA3.1-myc /His B (Invitrogen) mukaisesti valmistajan protokollaa. Perustettu PTK6 ekspressiovektori tehtiin DNA-sekvenssianalyysi, että oikea insertti koko pituudet PTK6 cDNA. PTK6 ekspressiovektori tai vastaavan tyhjän vektorin transfektoitiin haimasyöpä soluihin käyttämällä Lipofectamine 2000 (Invitrogen) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. 72 tunnin kuluttua transfektiosta solut inkuboitiin elatusaineessa, joka sisälsi asianmukaiset konsentraatiot G418. Viljelemällä selektioelatusaineessa containg G418 yli 2 viikkoa, vakaa transfektanttisoluilla valittiin ulos. Ilmentyminen PTK6 proteiinin vahvistettiin myöhemmin western blottauksella.

TranswellTM Migration ja invaasiomääritys

TranswellTM maahanmuutto- ja invaasion määritykset suoritettiin 24-kuoppaisilla modifioitu Boyden kammiot esipäällystetty (invaasio) tai ilman (siirtymä) matrigeelin (siirtokuoppaan-kammio, BD Biosciences, San Jose, CA,). Haimasyövän soluja (BxPC3 1 x 10

5-solut, Panc1, 5 x 10

4-solut, ja MIAPaCa2, 7,5 x 10

4 solua per kuoppa, vastaavasti) seerumivapaassa väliaineessa ympättiin päälle trans-kalvo ylemmässä kammiossa 10% FBS alemmassa kammiossa kuin kemoattraktantti. Jälkeen 24 tunnin inkubaation jälkeen solut, jotka olivat vaeltaneet kalvon läpi kiinnitettiin ja värjättiin Diff-Quik Stain Set (Siemens, Newark, DE). Sitten ne laskettiin suurennus 5 satunnaisesti valitun HPF. Kukin määritys suoritettiin kolmena rinnakkaisena.

Tilastollinen analyysi

vertailu jatkuvia arvoja suoritettiin käyttäen Studentin t-testiä ja 2-puoleinen

p

-arvot 0,05 katsottiin merkittävä.

tulokset

PTK6 Expression status haimasyöpä

Vertasimme PTK6 tasoilla viisi vakiintunutta ihmisen haimasyövän solulinjoissa (BXPC3, Capan1, Hs766T, MIAPaCa2, ja Panc1 ) ja haimasyövän kudosten otettu suoraan 9 potilasta, joille tehtiin kirurginen resektio. Western blotit osoittivat, että 5 haiman solulinjat ilmensivät PTK6 eri tasoilla; BXPC3 ja Capan1 ilmaisi PTK6 voimakkaasti, kun taas MIAPaCa2 ilmaisivat huomattavasti alempi PTK6 (kuvio 1A). Immunovärjäys PTK6 haimasyövän kudoksissa 9 potilasta, osoitti, että PTK6 oli hyvin ilmaistu 4 potilasta (44%), lievää tai kohtalaista ilmaistaan ​​2 potilaalla (22%), ja ei ekspressoida lainkaan 3 potilaalla (33%). Viereisessä normaalissa haiman kanava epiteelin, immunoreaktiivisia PTK6 ei ollut havaittavissa missään yksilöiden tarkastelimme (kuvio 1 B).

, endogeeninen ilmentyminen PTK6 ihmisen haimasyövän solulinjoissa. PTK6 ilmentyminen vahvistettiin 5 haimasyövän solulinjoissa, BXPC3, Capan1, Hs766T, MIAPaCa2, ja Panc1 eri tasoilla Western-blottauksella.

B

, immunohistokemiallinen staning varten PTK6 viereisissä normaalissa haima- ja haimasyöpä kudosta. Vaikka ei ollut havaittavaa PTK ilmentymistä viereiseen normaaliin haimatiehyen epiteelin (ylhäällä vasemmalla), PTK6 ilmentyi eri tasoilla (negatiivisesta kautta vahvasti positiivinen) in haimasyöpä.

PTK6 Expression Vaikuttaa Cell Migration ja Invasion of Haimasyöpä solulinjojen

Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että PTK6 vaikuttaa solujen koneet välittävien muuttoliikettä ja hyökkäystä. [13] – [15] Siksi arveltu, että PTK6 on keskeinen säätelijä haimasyövän muuttoliikkeen ja hyökkäyksen ja arvioimme vaikutus laski PTK6 ilmentymisen näissä solun käyttäytymistä. Sen jälkeen PTK6 ilmentyminen tukahdutettiin geenien käyttämällä siRNA (Ambion) 3 haimasyövän solulinjoissa (kuvio 2A), muuttavia mahdollisuuksia haimasyöpäsoluissa analysoitiin käyttämällä Boyden kammion. Kuten kuvassa 2B, geenien ja PTK6 vähensi muuttoliikettä kaikkiaan 3 haimasyövän solulinjoissa (0,59-kertainen pieneneminen BXPC3, 0,61 Panc1, 0,42 MIAPaCa2 vastaavasti

p

0,05 kullekin) . Cellular invasiivisia potentiaali samalla määritettiin käyttämällä Matrigel päällystettyjä Boyden kammioita, ja invaasio heikkeni huomattavasti eli geenien on PTK6 kaikissa 3 haimasyövän solulinjoissa, kuten kuviossa 2C (0,49-kertaisesti alentunut BXPC3, 0,62 vuonna Panc1, 0,39 MIAPaCa2 vastaavasti

p

0,05 kullekin). Nämä estovaikutus PTK6 geenien solujen muuttoliikettä ja invaasiota vahvisti samanlainen kokeiluja käyttämällä muita siRNA erilaisille sekvenssi PTK6 (Invitrogen) (kuva S2).

, PTK6 geenien. Solut transfektoitiin PTK6-spesifisten siRNA (siRNA-PTK6) tai negatiivinen kontrolli-siRNA (siRNA-NC) 96 tunnin ajan. Knockdovvn PTK6 ilmentyminen oli comfirmed Western-blottauksella. Numerot alareunassa ilmaisevat suhteellista intensiteettiä taajuusalueiden PTK6 vastaaviin kontrolleihin (normalisoitu β-aktiini).

B

,

C

, vaikutus PTK6 geenien solujen liikkuvuuteen (B) ja invaasiota (C). Soluja käsiteltiin PTK6 erityisiä siRNA tai negatiivinen kontrolli-siRNA 48 tunnin ajan, sitten suoritettiin kulkeutumista tai invaasiomääritys käyttämällä Boyden kammiot ilman tai Matrigel. Gene vaiennettu PTK6 vähennetään solumigraatiota kaikkiaan 3 haimasyövän solulinjoissa (0,59-kertainen pieneneminen BXPC3, 0,61 Panc1, 0,42 MIAPaCa2 vastaavasti *

p

0,05 t-testi). Samoin geenien of PTK6 vähensi solujen invaasio kaikkiaan 3 haimasyövän solulinjoissa (0,49-kertaisesti alentunut BXPC3, 0,62-kertaisesti Panc1, 0,39-kertaisesti MIAPaCa2 vastaavasti *

p

0,05 t-testi). Kukin määritys suoritettiin kolmena kappaleena.

Käänteisesti me seuraavaksi arvioitiin vaikutusta PTK6 ilmentymisen vaikutus muuttoliikettä ja hyökkäystä. Ekspressiovektori, joka koodaa täyspitkää PTK6 cDNA transfektoitiin Panc1 ja MIAPaCa2 soluihin ja stabiilit transfektantit, jotka yliekspressoivat PTK6 määritettiin kunkin solulinjan (kuvio 3A). Toisin vaikutus PTK6 geenien, PTK6 yliekspressio lisäsi solumigraatiota ja invaasio kontrolleihin verrattuna. (1,6 /1,7-kertainen Panc1, ja 1,4 /1,6 in MIAPaCa2, muuttavia ja invasiivisia potentiaalia vastaavasti

p

0,05) (kuvio 3B, 3C) Nämä havainnot viittaavat siihen, että PTK6 ilmaisu haiman syöpä liittyy sen solu- vaeltavia ja invasiivisia mahdollisia.

, yliekspressio PTK6. Solut transfektoitiin pcDNA3.1-Mock (tyhjä vektori) tai pcDNA3.1-PTK6. N yli-ilmentyminen PTK6 vakaassa trasfectant vahvistettiin Western-blottauksella vuonna Panc1 ja MIAPaCa2 soluja, tässä järjestyksessä. Numerot alareunassa ilmaisevat suhteellista intensiteettiä yhtyeen PTK6 vastaaviin kontrolleihin (normalisoitu β-aktiini).

B

,

C

, vaikutus PTK6 ilmentymisen vaikutus solumigraatiota (B) ja invaasiota (C). Perustettu transfektanttisoluilla arvioitiin muuttoliikkeeseen ja invaasio määrityksissä. Pakko yliekspressio PTK6 kasvoi solumigraatiota in Panc1 ja MiaPaCa2 haimasyövän soluja (1,6-kertainen lisäys Panc1, ja 1,4-kertainen MIAPaCa2, vastaavasti, *

p

0,05 t-testi). Vastaavasti, pakko yliekspressio PTK6 lisääntynyt solujen invaasiota nämä 2 solulinjoissa (1,7-kertainen lisäys Panc1, ja 1,6-kertainen MiaPaCa2, vastaavasti, *

p

0,05 t-testi). Kukin määritys suoritettiin kolmena kappaleena.

MAPK /ERK signalointi on kriittinen välittäjänä PTK6 liittyvien soluliikkuvuus

Valaistaan ​​mekanismi, jossa PTK6 säätelee solujen maahanmuuton ja invaasio, me tutkitaan signaalinvälitysreittien loppupään PTK6. Useat signalointimolekyylien on aiemmin raportoitu olevan alavirtaan PTK6, mukaan lukien STAT3 [16], Akt [17], [18], Erk5 [15], [19], p38 MAPK [19], ja ERK1 /2 [20] (tarkistetaan Ostrander 2010). Kun PTK6 ekspressio manipuloida käyttämällä siRNA, fosforylaatiota STAT3, Akt, ja p38 MAPK ei muuttunut jatkuvasti joukossa 3-solulinjat testattiin (kuvio S1). Aktivointi ERK5 ei ollut havaittavissa myös tutkimuksissa (tuloksia ei ole esitetty) sen sijaan, aktivoitu (phospholylated) ERK1 /2 oli merkittävästi vähentynyt kaikissa PTK6-geeni-vaimennettu haimasyövän soluja verrattuna niiden vastaavat kontrollisoluihin, kun taas pakko yliekspressio PTK6 indusoiman aktivoituminen ERK1 /2 sekä Panc1 ja MIAPaCa2 soluja (kuvio 4A.B). ERK1 /2 siis tullut ehdokas välimiehen PTK6-säänneltyjen cellular potevilla haimasyövän ja me sen mukaisesti pyrittiin määrittämään, ovatko vaikutukset PTK6 solu- muuttoliikettä ja invaasio riippuvat ERK1 /2 aktiivisuutta. Käytimme selektiivinen ERK1 /2, U0126 estää ERK1 /2: n aktiivisuutta. Kuten on esitetty kuviossa 5A, PTK6 aiheuttama ERK /puoli aktivointi olivat täysin estetty U0126 10 uM. Kun analysoitiin solumigraatiota ja hyökkäys Panc1 ja MiaPaca 2 solujen läsnäollessa U0126, U0126 alennetaan pohjapinta solumigraatiota ja hyökkäyksen ja poisti kykyä PTK6 yli-ilmentyminen edistää niitä (kuvio 5B). Tämä viittaa siihen, että PTK6 säätelee solujen maahanmuuton ja invaasion kautta ERK1 /2.

, vaikutus PTK6 geenien koko- ERK1 /2 ja aktivoitu (fosforyloituu) ERK1 /2. Gene hiljentäminen PTK6 alensi fosforyloidun ERK1 /2 kaikkiaan 3 haimasyövän solulinjoissa. Numerot alareunassa ilmaisevat suhteellinen bändi intensiteetti pERK1 /2 vastaaviin kontrolleihin (normalisoitu yhteensä ERK1 /2).

B

, vaikutus PTK6 ilmentymisen vaikutus koko ERK1 /2 ja aktivoida ERK1 /2. Pakko PTK6 yliekspressio indusoi aktivaation ERK1 /2 sekä Panc1 ja MiaPaCa2 soluja. Numerot alareunassa ilmaisevat suhteellinen bändi intensiteetti pERK1 /2 vastaaviin kontrolleihin (normalisoitu yhteensä ERK1 /2).

, Soluja käsiteltiin erityisten ERK1 /2-inhibiittori, U0126 10 uM: ssa 24 tuntia. ERK1 /2-fosforylaation estyi ja PTK6-indusoidun aktivaation ERK1 /2: ta ei enää havaittu Panc1 tai MIAPaCa2 soluja.

B

, vaikutus ERK1 /2 estoa solumigraatiota (

jäljellä

) ja invaasio (

oikeus

) ERK1 /2 esto paitsi lyhentää pohjapinta muuttoliikkeen ja hyökkäyksen Panc1 ja MIAPaCa2 soluja, mutta poisti vaikutus PTK6-ilmentymisen vaikutus muuttoliikettä ja hyökkäystä. *

p

0,05 vs. vastaava ohjaus DMSO ajoneuvo (by

t

-testi). **

p

0,05 vs PTK6-yli-ilmennetään solujen DMSO ajoneuvo (by

t

-testi). Kukin määritys suoritettiin kolmena kappaleena.

Keskustelu

Vaikka on olemassa kertyvät näyttöä siitä PTK6 on poikkeuksellisesti ilmaistu eri epiteelisyöpien, seuraus PTK6 ilmaisun ja sen rooli biologisen käyttäytyminen syövistä ovat kiistanalaisia ​​ja huonosti määritelty. Itse asiassa roolia ja tehtävää PTK6 uskotaan suuresti riippuvainen siitä yhteydestä, jossa PTK6 ilmentyy. Esimerkiksi PTK6 on tutkittu laajalti rintasyöpiä sen

pro

-oncogenic tehtävissä, kuten solusykliä [21], angiogeneesi [22], anoikis vastus [23] ja solumigraatiota [13], kun taas PTK6 on osoittautunut toimivaksi

anti

-oncogenically ruokatorven syöpä [24]. Tietääksemme tämä on ensimmäinen tutkimus tutkii ilmaisun ja toiminta PTK6 haiman syöpäsoluja.

Keskeinen havainto tässä tutkimuksessa on, että PTK6 yli-ilmentyminen lisääntyy solumigraatiota ja hyökkäyksen ja että PTK6 geenien, vuonna sijaan vähenee ne haiman syöpäsoluja. Vaikutukset PTK6 solu- muutto voi vaihdella kesken tyyppisiä cacners. Tutkimuksissa rintasyöpäsoluissa, PTK6 on raportoitu parantaa EGF-indusoitu solumigraatiota [13] – [15], [19], kun taas yli-ilmentyminen PTK6 on raportoitu lisäävän solujen invasiivinen mahdollisia indusoimalla epiteelin mesenkymaaliset käännös (EMT) eturauhassyöpäsoluissa [25]. Sen sijaan, Ma et ai raportoitu että PTK6 vähentää kulkeutumista ruokatorven syöpä solujen [24]. Nämä ilmeisesti vastapäätä raportteja vaikutuksesta on PTK6 syövän biologian korostavat tutkimusten vaikutusten tutkiminen Yksittäisten signaalien yksittäisissä syöpiä. On todennäköistä, että vaikutukset PTK6, kuten monet muut signaalit, riippuu yleisesti kinome jossa PTK6 on ilmaistu. Ymmärtäminen kinomic erot syöpien jossa PTK6 edistää muuttoliikkeen ja ne, joissa se estää muutto voi olla hedelmällinen aihe tulevaa tutkimusta. Useat alavirtavaikuttajainhibiittorit molekyylit liittyvät PTK6 on aiemmin tunnistettu muita syöpiä. Näitä ovat p190RhoGAP, Rho, RAS [14], Rac1, paksilliini [13], p38MAPK, ja ERK5 [15], [19] rintasyövän, ja AKT, GSK3p, ja βCatenin [24] ruokatorven syöpään. Esillä olevassa tutkimuksessa useiden haimasyövän solulinjoissa, useimmat molekyylejä, jotka on aiemmin raportoitu liittyvän PTK6 signalointia muissa syövissä ei muuttunut aktiivisuus manipuloimalla PTK6 ilmaisun. Sen vuoksi on vähemmän todennäköistä, että nämä molekyylit osansa välittämisessä vaikutus PTK6 solu- muuttoliikettä /invaasion haimasyövän. Sen sijaan, ERK1 /2 nousi keskeiseksi alavirran välittäjänä PTK6 liittyvän signaalin, joka säätelee haimasyöpä hyökkäystä. ERK1 /2 kuuluu mitogeeniaktivoidut proteiinikinaasi (MAPK) perhe ja sen tiedetään vaikuttavan solujen maahanmuuton ja invaasion eri syöpiä, kuten haimasyövän [26], [27]. Mekanismeja, joilla PTK6 yliekspressio indusoi ERK1 /2 aktivointi on vielä määrittelemättä eikä tiedetä, onko PTK6 suoraan vuorovaikutuksessa ERK1 /2. Castro ja Lange raportoitu, että rintasyövän soluissa PTK6 /ERK5 kompleksi on kriittistä kasvutekijän aiheuttamaa solujen vaeltamiseen, kun taas PTK6 vielä lisää solu- siirtymää ERK1 /2 aktivaation keratinosyyteissä kun ERK5 on tippuu alas [15]. He spekuloivat, että ERK1 /2 voisi olla vaihtoehtona koulutusjakson PTK6 /ERK5 signaaleja joidenkin solujen, joilta puuttuu ERK5. Tämä malli olisi sopusoinnussa havaintojemme koska emme pystyneet havaitsemaan ERK5 aktiivisuutta haimasyöpäsoluissa riippumatta PTK6 ilmentymistilanne. Kuitenkin Xiang et al osoittivat, että PTK6 sitoutuu suoraan Erb B2 ja aktivoi ERK1 /2 rintasyöpäsoluissa. Erb B2 on tunnettu yliekspressoituvan yleisesti haimasyöpä [28], [29], joten tämä voi olla mahdollista mekanismia, joka pakotti PTK6 yliekspressio haiman syöpäsoluissa voisi aktivoi ERK1 /2 ilman ERK5 aktiivisuutta.

oli mielenkiintoista panna merkille, että vaikka PTK6 ilmentyminen oli tasaisesti havaita viereisten histologisesti normaalin haiman kanavaan epiteelisolujen, PTK6 vaihtelivat huomattavasti joukossa haimasyöpä olemme tutkineet. Abberant yliekspressio PTK6 on kuvattu muiden syöpien, ja se on aikaisemmin ehdotettu, että PTK6 voi olla hyödyllinen biomerkkiaine ennustaa tuloksia potilailla, joilla on eri syöpätyyppejä, kuten rinta-, pään ja kaulan alueen, munasarja- ja keuhkosyövistä [6], [12 ], [30] – [33]. Mahdollinen ennusteen arvioinnissa vaihtelun PTK6 haimasyövän odottaa jatkotutkimuksia.

Yhteenvetona osoitimme, että PTK6 ilmentyy poikkeuksellisesti haimasyövän. Lisäksi tuloksemme viittaavat siihen, että PTK6 voi edistää solujen maahanmuuton ja hyökkäyksen haimasyövän aktivoimalla ERK1 /2. Lisätutkimuksia PTK6 riippuvaisen signalointireitin, joka ajaa invaasio haimasyövän voi painottaa näiden ennustetekijöitä ja terapeuttinen merkitys tämän uuden signaalin haimasyövän.

tukeminen Information

Kuva S1.

vaikutus PTK6 geenien aktiivisuuteen erilaisten molekyylien signaalien kulkureiteillä; p38, STAT3, ja AKT testattiin ne olivat aiemmin raportoitu liittyvän PTK6. Aktiivisuus näitä molekyylejä ei niihin vaikutti yhdenmukaisesti geenien ja PTK6 3 haimasyövän solulinjoissa, BXPC3, Panc1 ja MIAPaCa2.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0096060.s001

(TIF)

Kuva S2.

, vaikutukset PTK6 geenien koko- ERK1 /2 ja fosforyloitua ERK1 /2 käyttämällä siRNA. On huomioitava, että siRNA käytettiin tässä kokeessa on eri sekvenssi kohdistaminen PTK6 päässä siRNA käytetty kokeilu Figuer 2 ja 4. Fosforyloidulla ERK1 /2 vähenivät PTK6 geenien sekä Panc1 ja MIAPaCa2 soluja. Numerot alareunassa ilmaisevat suhteellinen bändi intensiteetti PTK6 ja pERK1 /2 vastaaviin valvontaa, vastaavasti (normalisoitu β-aktiini varten PTK6 ja koko ERK1 /2 pERK1 /2).

B

, vaikutus PTK6 geenien solujen muuttoliike (vasemmalla) ja invaasiota (oikealla). Gene vaiennettu PTK6 vähensi solujen muuttoliikkeen Panc1 ja MIAPaCa2 soluja (0,65-kertaisesti alentunut Panc1, 0,72 MIAPaCa2 vastaavasti *

p

0,05 t-testi). Lisäksi geenien ja PTK6 vähensi solujen invaasion Panc1 ja MIAPaCa2 soluja (0,48-kertaisesti alentunut Panc1, 0,78-kertaisesti MIAPaCa2 vastaavasti *

p

0,05 t-testi). Kukin määritys suoritettiin kolmena kappaleena.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0096060.s002

(TIF) B

Kiitokset

Kiitämme William S. Spielman, Amy S. Porter, ja Kathy A. Joseph tekniseen tukeen.

Esitetään osittain, juliste vuosikokouksessa of Society for Surgery ruuansulatuskanavan 18. toukokuuta

th-21

th, 2013, Orlando, FL.