Krooninen sairaus

tiivistelmä

tavoite

vaikutusten tutkiminen CCL21 /CCR7- proliferaatioon, muuttoliike , ja hyökkäys T24-solujen ja mahdolliset siihen liittyvät mekanismit: MMP-2 ja MMP-9, ja sääntely BCL-2 ja BAX proteiineja.

Methods

T24 soluja saanut vastaavan hoitoja mukaan lukien ajoneuvon ohjaus, vasta-ainetta (20 ng /ml CCR7-vasta-aineen ja 50 ng /ml CCL21), ja 50, 100, ja 200 ng /ml CCL21. Proliferaatio arvioitiin MTT: llä; Solujen migraation ja invaasion analysoitiin käyttämällä transwell kammioon. Solujen apoptoosin aiheutettiin adriamysiinin (ADM). Nopeus solun apoptoosin tutkittiin virtaussytometrialla käyttämällä anneksiini V-FITC /PI värjäystä. Western-blot käytettiin analysoimaan MMP-2 ja MMP-9 ja BCL-2 ja BAX proteiineja.

Tulokset

CCL21 edistänyt T24 soluproliferaation pitoisuudesta riippuvaisella tavalla, että 200 ng /ml aiheuttama suurin määrä leviämisen. Merkittäviä eroja solumigraation havaittiin välillä CCL21treatment ryhmien ja kontrolliryhmän sekä maahanmuutto- ja invaasiota tutkimukset (P 0,001 kaikissa). Ilmaukset MMP-2 ja MMP-9 proteiinit huomattavasti jälkeen CCL21 hoidon (p 0,05 kaikkiin). Proteiinin ilmentyminen Bcl-21 seuraa nouseva suuntaus, kun taas ekspressio Bax seuraa laskeva trendi kuin pitoisuus CCL21 kasvaa. Eroa ei havaittu välillä kontrolliryhmän ja vasta ryhmän kaikille arviointeja.

Johtopäätös

CCL21 /CCR7- edistänyt T24-solujen lisääntymisen ja tehostetun siirtolaisuuspolitiikkaansa ja invaasion kautta lisääntynyt MMP-2 ja MMP-9. CCL21 /CCR7- oli antiapoptoottisten toimintaa T24-soluissa säätelemällä Bcl-2: n ja Bax proteiineja. CCL21 /CCR7 voi edistää virtsarakon syövän kehitystä ja etäpesäkkeiden.

Citation: Mo M, Zhou M, Wang L, Qi L, Zhou K, Liu L-F, et ai. (2015) CCL21 /CCR7- Parantaa leviämisen, Migration, ja Invasion of Human Virtsarakon syövän T24 Cells. PLoS ONE 10 (3): e0119506. doi: 10,1371 /journal.pone.0119506

Academic Editor: Rajesh Mohanraj, Lääketieteellinen tiedekunta Health Sciences, ARABIEMIIRIKUNNAT

vastaanotettu: 14 lokakuu 2014; Hyväksytty: 13 tammikuu 2015; Julkaistu: 23 maaliskuu 2015

Copyright: © 2015 Mo et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi.

rahoitus: kirjoittajat saanut mitään erityistä rahoitusta tähän työhön.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Virtsarakon syöpä on yksi yleisimpiä aikuisten syöpää. Pelkästään vuonna 2008 386000 potilailla diagnosoitiin virtsarakon syöpä, joka aiheutti 150200 kuolemantapausta maailmanlaajuisesti perustuu maailmanlaajuiseen tilastoista [1]. Etäpesäkkeiden ei ole vain tunnusmerkki virtsarakon syöpä, mutta myös kuolleisuuden aiheuttaja [1]. Kuitenkin patofysiologiassa virtsarakon syövän etäpesäkkeiden jää epäselväksi. Kemokiinien superperheen pieni erittyvän peptidien ominaista niiden kyky aiheuttaa leukosyyttimigraatio sekä niiden reseptorien on havaittu olevan osallisena migraatio solujen imukudossyöpien, mikä voi vaikuttaa syövän kehittymisen ja etenemisen [2-4]. CCL21, tärkeä kemokiinin ja CCL perheen, on yksi ainoa kahden ligandin (toinen on CCL19) ja CCR7. [5] CCL21 valmistetaan sidekudosta verkkomaisen solujen T-solujen rikas alue ihmisen ja korkea venulit hiirillä. [6] CCR7 ilmaistaan ​​erilaisten lymfosyyttien, kuten naiiveja B- ja T-soluja, semimature ja kypsä dendriittisoluja, ja säätelijä-T-solujen [5]. Lisäksi ilmaisu CCR7- on esitetty edistävän syöpäsolujen metastaasin imusolmukkeisiin nonsmall keuhkosyöpä [7], rintasyöpä [8], levyepiteelisyöpä pään ja kaulan alueen syöpä [9], paksusuolen ja peräsuolen syövän [10] , eturauhassyöpä [11], ruokatorven okasolusyöpä [12] ja mahasyövän [13]. Siksi CCR7- ja sen ligandi (t) voivat osallistua leviämisen, eteneminen, ja etäpesäkkeiden syöpäsolujen erilaisten elimen alkuperää [7-13]. Olemme myös havainneet, että CCR7- oli mukana kehittymistä ja etenemistä virtsarakon syöpä (julkaisemattomia tuloksia).

Fysiologisesti CCL21 /CCR7- pelaa tärkeä rooli ohjautumisen immuunisolujen, imusolmukkeiden itseohjautuva ja paikannus, immuniteetti ja oheislaitteiden toleranssi, kehitystä ja toimintaa säätelijä-T-solujen, ja autoimmuniteetin ja lymfaattisen neogensis [5]. Useat tutkimukset ovat vahvistaneet roolit CCL21 /CCR7- kasvaimen kehittymisessä ja etenemisessä [14-17]. Esimerkiksi, CCL21 /CCR7: edistää G2 /M-vaiheen etenemisen ja estää apoptoosin kautta ERK-reitin ihmisen ei-pienisoluinen keuhkosyöpä [15, 16], helpottaa etenemistä haimasyövän kautta angiogeneesin induktio ja imusuonten [14], säätelee matriksimetalloproteinaasi-9 (MMP-9) ihmisen paksusuolen syövän etäpesäkkeiden [18], ja ylössäätelee MMP-9 krooninen lymfaattinen leukemia solujen vaeltamiseen ja invaasiota [17]. Lisäksi CCL21 /CCR7- havaittiin myös edistää syöpäsolujen kulkeutumista microlymphatic alusten rintasyövän [19], haiman kasvain [20], keuhkon adenokarsinooma [21], ja ruokatorven okasolusyöpä [22]. Kuitenkin mahdollinen rooli CCL21 /CCR7- virtsarakon syövän kehittymistä ja etenemistä jää epäselväksi. T24 solut ovat peräisin siirtymäkauden cell carcinoma ihmisen virtsarakon ja on laajasti käytetty tutkimuksessa virtsarakon syöpään [23].

käsiteltävänä olevassa oli tutkia vaikutukset CCL21 /CCR7 annetun lisääntymisen, migraation ja invaasion T24-solujen ja mahdolliset siihen liittyvät mekanismit: MMP-2 ja MMP-9, ja sääntely BCL-2 ja BAX proteiineja.

Materiaalit ja menetelmät

Tämä tutkimus on saatu eettisen hyväksynnän eettinen komitea on Xiangya sairaala, Keski Etelä yliopisto, Changsha, Hunan, Kiina.

Reagenssit ja solulinjaa

CCL21 rekombinanttia ihmisen proteiini hankittiin Perprotech (Rocky Hill, NJ, USA) ja polyklonaalista kanin anti-ihmisen CCR7- vasta-aine hankittiin Wuhan Boster Biological Engineering Co, Ltd (Wuhan, Kiina). Proteaasinestäjä fenyylimetyylisulfonyylifluoridi (PMSF) ostettiin Roche Diagnostics (Indianapolis, IN, USA). MTT ja Dimetyylisulfoksidi (DMSO) hankittiin Hufeng Chemical Co., Ltd (Shanghai, Kiina). Anneksiini V-FITC apoptoosin havaitseminen pakki ostettiin Beyotime Biotechnology (Shanghai, Kiina).

Ihmisen virtsarakon syöpä T24 solulinja hankittiin Shanghai Institutes for Biological Sciences, Kiinan tiedeakatemia (Shanghai, Kiina ). Soluja viljeltiin 37 ° C: ssa, 5% CO

2, keskipitkällä DMEM (GIBCO, USA), joka sisälsi 10% naudan sikiön seerumia, 100 U /ml penisilliiniä ja 100 U /ml streptomysiiniä.

Soluviljely ja käsittely

T24 soluja käsiteltiin 48 tunnin ajan ennen MTT-määritystä, muuttoliike ja invaasio määritykset, ja Western blot-analyysi ja 24 tuntia ennen virtaussytometria tutkimus. Kutakin koetta varten oli viisi ryhmää, joka koostuu ryhmän 1 (kontrolliryhmä), jotka käsiteltiin seerumitonta DMEM-alustassa, ryhmä 2 (vasta-aine-ryhmä), joka ensimmäinen vastaanotettu esikäsittely 20 ng /ml kanin polyklonaalista anti-ihmis-CCR7 vasta-aineen 4 h, 50 ng /ml CCL21, Ryhmä 3, joka sai 50 ng /ml CCL21, ryhmän 4, joka sai 100 ng /ml CCL21, ja ryhmä 5, joka sai 200 ng /ml CCL21. Kokeet MTT-määritystä, virtaussytometrialla, ja Western blot toistettiin kolme kertaa (n = 3), ja solumigraation ja invaasion toistettiin neljä kertaa (n = 4).

MTT-määritystä varten leviämisen T24 solut

leviämisen T24 soluja arvioitiin MTT: llä. Lyhyesti, solut käsiteltiin vastaavasti kussakin ryhmässä 48 tunnin ajan. Käsittelyn jälkeen väliaine poistettiin ja soluja inkuboitiin 5 mg /ml MTT-liuosta (20 ui). Kun oli inkuboitu 4 tuntia 37 ° C: ssa ja 5% CO2, supernatantti poistettiin ja muodostumista formatsaanin mitattiin 490 nm: ssä Gel Documentation Analysis System setti (Liuyi Factory, Peking, Kiina).

Muuttoliike ja invaasio määritykset

Solun maahanmuutto- ja invaasion analysoitiin käyttämällä transwell kammio (EMD, Millipore, USA). Hyökkäykselle määritystä varten transwell kammio laitettiin 24-kuoppalevylle, ja päällystettiin 30 ul: n kanssa Matrigeliä (Franklin Lakes, USA) ja inkuboitiin yhden tunnin ajan 37 ° C: ssa. Molemmissa transwell määrityksissä solut sen jälkeen, kun 48 tunnin vastaava käsittely, käsiteltiin trypsiinillä ja ympättiin kammioissa tiheydellä 8 x 10

4 solua kuoppaa kohti, ja 500 ui seerumitonta DMEM-elatusainetta lisättiin alempaan kammioon. Siirtyneet solut kiinnitettiin 100% matrigeelin (BD, Franklin Lakes, USA) metanolia 30 minuutin ajan 24 tunnin kuluttua, ja ei-siirretyn Solut poistettiin vanupuikkoja. Lopuksi solut alapinnalle kalvon värjättiin hematoksyliinillä ja eosiinilla 20 min. Optinen mikroskooppi (200X, Olympus, Tokio, Japani) käytettiin laskea solujen lukumäärä viidessä satunnaisesti näkökenttää; tarkoittaa solujen määrä laskettiin kullekin ryhmälle.

Virtaussytometria apoptoosin

Solun apoptoosia indusoitiin Adiamycin (ADM). Nopeus apoptoosin T24 soluja tutkittiin virtaussytometrialla käyttämällä anneksiini V-FITC /PI värjäystä. Lyhyesti, T24 soluja käsiteltiin kuten edellä jokaisessa ryhmässä 24 tuntia; Soluja inkuboitiin sitten ADM: n kanssa (0,1 mg /ml) vielä 48 tunnin ajan. Sitten solut otettiin talteen, pestiin ja suspendoitiin uudelleen PBS: ään. Apoptoottisen solukuoleman mitattiin kaksinkertainen värjäys anneksiini V-FITC ja PI käyttämällä anneksiini V-FITC apoptoosin havaitseminen kit (Beyotime Biotechnology, Shanghai, Kiina) kohti valmistajan ohjeiden. Virtaussytometria-analyysi suoritettiin välittömästi värjäyksen jälkeen. Datan hankinta ja analysointi suoritettiin virtaussytometrialla käyttämällä Cell Quest ohjelmisto.

Western blot-analyysi

T24-soluja pantiin 75 ml: n viljelmä pulloihin ja inkuboitiin 37 ° C: ssa 24 tuntia ja käsitellään sitten vastaavasti kussakin ryhmässä 48 tuntia inkubaation. Suspensiot pestiin kylmällä PBS: llä. Sitten soluja inkuboitiin jääkylmässä RIPA-puskuria [1 M Tris (pH 7,4), 5 M NaCl, 0,5 M EDTA (pH 8,0), 10% SDS, 10% DOS, ja 10% NP40: tä] tuoreita proteaasi-inhibiittorin PMSF jäällä 20 min. Solut raaputettiin, ja lysaattia kerättiin käytettäessä eppendorff putkeen ja sentrifugoitiin 10000 rpm: ssä 4 ° C: ssa 10 minuutin ajan, ja supernatantit kerättiin, jaettiin osiin ja säilytettiin -20 ° C: ssa myöhempää käyttöä varten.

laimennokset BCL-2 /BAX (12%) ja MMP-2 /MMP-9 (7,5%), käytettiin tutkimukseen. Proteiineja (20 ug) ladattiin 5-15% SDS-PAGE-geeleissä ja siirrettiin nitroselluloosakalvolle (Amersham Biosciences, USA). Membraanit upotettiin estopuskurilla (5% rasvaton maito) huoneenlämmössä 2 tuntia. Blotit pestiin PBS: llä (0,1% BSA: ta). Koetin MMP-2, MMP-9, BCL-2, Bax, ja β-aktiini, membraaneja inkuboitiin 2 h huoneenlämmössä asianomaisten vasta-aineiden, jonka jälkeen asianmukaiset HRP-konjugoitu sekundäärisen vasta-aineita ja ECL-tunnistus. Gel Documentation Analysis System set (Liuyi Factory, Peking, Kiina) käytettiin kuvan talteenotto ja analysointi optinen tiheys (OD) arvot (490 nm).

Tilastollinen

Tilastollinen analyysi suoritettiin SPSS 18.0 tilasto-ohjelmalla. Määrällisiä tietoja ilmaistiin keskiarvona ± SD. Yksisuuntainen varianssianalyysi kanssa Fishers LSD testiä käytettiin ryhmää vertailussa. Merkitsevyystasolla asetettiin p-arvo on alle 0,05.

Tulokset

vaikutukset CCL21 /CCR7- proliferaatioon T24-solujen

vaikutukset CCL21 /CCR7 päällä T24 soluja edustaa OD-arvot on esitetty taulukossa 1. OD-arvot olivat 0,211 ± 0,013 kontrolliryhmässä, 0.216 ± 0,011 vasta-ryhmässä (p 0,05 verrattuna kontrolli), 0,248 ± 0,006 50 ng /ml CCRL21 (P 0,05 verrattuna kontrolli), 0,290 ± 0,004 100 ng /ml CCRL21 (P 0,01 verrattuna kontrolli), ja 0,341 ± 0,012 200 ng /ml CCRL21 (P 0,001 kuin verrattuna kontrolli). CCL21 edistänyt T24 soluproliferaation pitoisuudesta riippuvasti, 200 ng /ml indusoi suurimman määrän lisääntymistä.

vaikutukset CCL21 /CCR7- maahanmuutto- ja invaasion T24 soluja

tulokset CCL21 /CCR7- maahanmuutto- ja invaasion T24 soluja on esitetty kuvassa. 1. Solulaskennat siirtymiselle ja invaasion tutkimukset ovat seuraavat: 45.5 ± 11.6 ja 28,6 ± 15,0 kontrolliryhmän, 42,5 ± 13,6 ja 30,5 ± 15.2 varten vasta-ryhmän 72,9 ± 22,4 ja 55,5 ± 13,6 CCRL21 100 ng /ml ryhmässä, 115,7 ± 18,8 ja 102,1 ± 18,0 varten CCRL21 150 ng /ml ryhmässä, ja 178,9 ± 8,4 ja 143,7 ± 24,4 varten CCRL21 200 ng /ml ryhmässä. Merkittäviä eroja solumigraation välillä havaittiin joko kolmen CCL21treatment ryhmät ja kontrolliryhmä sekä maahanmuutto- ja invaasiota tutkimukset (P 0,001 kaikissa); mutta mitään eroa välillä todettiin kontrolliryhmässä ja vasta ryhmän joko siirtymistä tutkimusta tai hyökkäyksen tutkimuksen (P 0,05 molemmille). Vaikutus CCL21 /CCR7- hoidon T24 solujen vaeltamiseen on pitoisuudesta riippuva jolla on korkein pitoisuus CCL21 (200 ng /ml) tuotti eniten solujen maahanmuuton /hyökkäystä. Yleensä pienempiä määriä T24-solujen havaittiin hyökkäyksen tutkimuksessa kuin vastaavan maahanmuuton tutkimuksessa.

Määritys suoritettiin käyttäen transwell kammio päällystettiin 30 ul: Matrigel seoksen liuosta, jossa on viisi erilaista, jotka koostuvat ajoneuvon hallinnan, CCR7: vasta-aine 20 ng /ml plus CCL21 50 ng /ml, CCL21 50 ng /ml, CCL21 100 ng /ml, ja CCL21 200 ng /ml. Tiedot Esillä keskiarvo ± SD neljästä itsenäisestä kokeesta.

vaikutukset CCL21 /CCR7- on MMP-2 ja MMP-9 T24-soluissa

Western blot tulokset esitetään kuvassa. 2; kvantitatiivisia mittauksia MMP-2 ja MMP-9 on esitetty taulukossa 2. merkittäviä eroja löydettiin MMP-2 ja MMP-9 joukossa viiteen ryhmään (p 0,05). Verrattuna kontrolliryhmään, ilmaukset MMP-2 ja MMP-9-proteiineja lisättiin merkittävästi kolmen eri pitoisuuksia CCL21 hoidon (p 0,05 kaikkiin). Ei kuitenkaan eroa havaittiin MMP-2 tai MMP-9 välillä kontrolliryhmän ja vasta-aineen (p 0,05 molemmille).

Kaista 1: T24-soluja käsiteltiin ajoneuvon ohjaus; Kaista 2: T24-soluja käsiteltiin CCR7-vasta-aine 20 ng /ml plus CCL21 50 ng /ml; Kaista 3: T24 soluja käsiteltiin 50 ng /ml CCL21; Kaista 4: T24-soluja käsiteltiin 100 ng /ml CCL21; ja kaista 5: T24 soluja käsiteltiin 200 ng /ml CCL21. Solulysaatit valmistettiin ja ajettiin 5-15% SDS-PAGE-geeleillä jälkeen, jonka Western blot-analyysi. Beeta-aktiini käytettiin latauskontrollina. Täplät esitetty edustavat kolmen erillisen kokeen.

vaikutukset CCL21 /CCR7- on apoptoosin T24-soluissa

Effects of CCL21 /CCR7- annetun ilmaisuja Bcl-2 ja Bax Western blot on esitetty kuvassa. 2 ja OD-arvot on esitetty kuviossa. 3. Proteiinin ilmentyminen Bcl-21 seuraa nouseva suuntaus, kun taas ekspressio Bax seuraa laskeva trendi kuin pitoisuus CCL21 kasvaa. Merkittäviä eroja löydettiin ilmauksia Bcl-2: n ja Bax välillä CCL21 50 ng /ml ryhmässä ja CCL21 100 ng /ml (p 0,05 molemmille) ja välillä CCL21 50 ng /ml ryhmässä ja CCL21 200 ng /ml (p 0,05 molemmille).

T24-soluja käsiteltiin ajoneuvon hallinnan, CCR7- vasta-aine 20 ng /ml plus CCL21 50 ng /ml, CCL21 50 ng /ml, CCL21 100 ng /ml, ja CCL21 200 ng /ml. Arvot (OD) läsnä keskiarvo ± SD kolmesta itsenäisestä kokeesta.

varhainen ja myöhäinen apoptoosin hinnat ja yhteensä solukuolemaa hinnat käsittelyjen jälkeen on esitetty taulukossa 3. hinnat varhaisen apoptoosin, myöhään apoptoosin ja yhteensä solukuoleman hinnat kontrolliryhmässä ovat 26,4 ± 5,0%, 37,5 ± 2,4%, ja 63,9 ± 7,1%, tässä järjestyksessä; kun taas vasta-ryhmässä ovat 25,2 ± 3,8%, 35,6 ± 5,5%, ja 60,8 ± 9,3%: lla. Mitään eroa apoptoosin hinnat havaittiin kussakin vaiheessa näiden kahden ryhmän välillä (p 0,05 kaikkiin). Määrien varhaisen apoptoosin, myöhään apoptoosin ja yhteensä solukuolemaa putosi jälkeen CCL21 hoidoista 50, 100, ja 200 ng /ml. Verrattuna kontrolliryhmään, merkittävää vähenemistä kokonais apoptoosia löytyivät CCL21 hoitoryhmissä (p 0,001 kaikissa kolmessa hoitoryhmässä); ei kuitenkaan havaittu merkittävää eroa näiden kolmen CCL21 hoitoryhmässä yhteensä apoptoosia (p 0,05 kaikkiin). Verrattuna kontrolliryhmään, merkitsevää pienenemistä havaittiin myös alussa solussa apoptoosin CCL21 hoitoryhmissä (p = 0,008 200 ng /ml, 0,001 100 ng /ml, ja 0,027 50 ng /ml); kuitenkin jälleen, ei havaittu merkittävää eroa näiden kolmen CCL21 hoitoryhmässä alussa apoptoosin (p 0,05 kaikkiin).

Keskustelu

potentiaalia syöpäsolujen etäispesäkkeitä riippuu sen vuorovaikutusta homeostatic tekijöistä, mukaan lukien kemokiinit, joka ei ainoastaan ​​edistää syöpäsolujen kasvua ja selviytymistä, vaan myös muuttoliikettä ja invaasion tai metastaasin. Aikaisemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että kemokiinien ovat mukana etenemisen ja etäpesäkkeiden eri syöpiä [2, 4, 5]. CCR7- osallistuu syövän etäpesäkkeiden imusolmukkeisiin erilaisten syöpien [7-13]. CCL21 osallistuu leviämisen CD4-T-solujen, munuaisen mesangiaalisten solujen ja erilaisten syöpäsolujen [19, 24-27]. Tutkimuksemme osoitti ensimmäistä että CCL21 /CCR7- voisi lisätä T24 solujen lisääntymistä (taulukko 1), muuttoliikkeen ja invaasiota (Fig. 1).

Kemokiini konsentraatio voi olla ainakin osittain vastuussa syövän kehittymisen ja etäpesäke [ ,,,0],19, 26]. Tämän seurauksena käytimme kolmea eri pitoisuuksia CCL21 esillä olevassa tutkimuksessa ja löysi pitoisuusriippuvaisella tavalla CCL21 vaikutukset T24 solujen lisääntymisen, migraation ja invaasion. CCL21 voi voimakkaasti lisätä T24 solumigraatioon ja invaasiota suurilla pitoisuuksilla ja siten helpottaa virtsarakon syövän etäpesäke. Meidän havainnot ovat yhdenmukaisia ​​näiden aikaisempien raporttien.

vuorovaikutus kemokiinien ja niiden reseptorien ovat pohjana kasvaimen soluliikkuvuus ja muuttoliikkeen kautta käynnistää solunsisäisten aktiini polymerointi luoda valejalka [28, 29]. Muller et al havaitsivat, että CCL21 AT100 nM indusoi ohimenevä 1,6-kertainen solunsisäinen flamentous aktiini (F-aktiini) ihmisen rintasyöpäsoluissa 20 sekunnin kuluessa ja havaittiin selvä valejalka muodostumisen jälkeen 20 min stimuloinnin CCL21 [19]. Tulokset Tämän tutkimuksen kanssa T24 solumigraatioon ja invaasiota ovat consistent0020with nämä aiemmissa raporteissa. Merkittävä lasku T24 solujen lukumäärän havaittiin, kun CCR7-vasta-ainetta yhdessä CCL21, ja se osoittaa, että vaikutus CCL21 riippuu aktiivisuuden CCR7. Toisaalta sana, CCL21 voi aktivoida CCR7- ensin ja sitten vaikuttaa T24 solujen vaeltamiseen ja invaasiota.

Molekyylit, kuten kemokiinin CCL21 osallistuvat etäpesäkkeitä syöpien paitsi kautta välittävä migraation ja invaasion syöpäsolujen kudoksiin mutta myös saada tarvittavaa tukea mikroympäristöihin. In vivo, migraatio syöpäsolut usein hidastunut paljon vastusten, kuten tyvikalvon ja ympäröivä sidekudos [29, 30]. Siksi jäljittelemään todellisia in vivo kunnossa, käytimme siirtokuoppaan kammio päällystetty matrigeelin fyysisenä esteenä esillä olevassa tutkimuksessa. MMP-2 ja MMP-9 on kaksi proteiineja, jotka liittyvät läheisesti virtsarakon syöpä etäpesäkkeitä [31-33]. Syöpäsoluinvaasiota voi vaatia eritystä MMP kuten MMP-2 ja MMP-9 hajottamaan matrigeeliä. Tässä tutkimuksessa havaitsimme, että CCL21 voisi lisätä MMP-2 ja MMP-9 ja parantaa solujen invaasiota (Fig. 2 ja taulukko 2). MMP tärkeitä rooleja syöpäsoluinvaasiota; mutta muut tekijät, kuten interleukiinit ja E-kadheriinin voi myös myötävaikuttaa taudin etenemiseen ja invaasio [34-37]. Kuitenkin, CCL21 /CCR7 voi helpottaa syöpäsoluinvaasiota kautta lisäämällä MMP eritystä ja parantaa solun liikkuvuus.

Käyttämällä radioaktiivisesti tekniikoita, tutkijat ovat havainneet, vain pieni osa radioleimattina syöpäsolujen microcirculations on mahdollista etäispesäkkeitä [38] . Selviytyminen syöpäsolujen riippuu niiden antiapoptoottisten kykyjä. Kun kasvainsolut jättää alkuperäisen kudoksia, ne menettävät jonkin verran, jos ei kaikkia homeostatic tekijät, jotka sisältävät kemokiinien tarttumisen ja tukea; Näin ollen solut ovat alttiita apoptoosin. Esillä olevassa tutkimuksessa antiapoptoottisten kyky CCL21 inT24 soluja tutkittiin käyttämällä virtaussytometriaa anneksiini V-FITC /PI-värjäyksen kautta ADM: n aiheuttamaa apoptoosia. Fosfatidyyliseriini (PS) voi sitoutua spesifisesti anneksiini-V. PI, ydinvoiman väriaine, ei voi ylittää normaalin solukalvon. Alkuvaiheessa apoptoosin, PI tumavärjäystä ei voida havaita, koska solukalvo on ehjä. Koska solu käy läpi apoptoosin keskellä myöhään vaiheissa, solukalvon blebs eikä se ole enää ennallaan; Näin tuma voidaan havaita PI-värjäyksellä.

tulos virtaussytometrialla voidaan jakaa neljään neljännestä: vasemmalla alhaalla neljännekseen normaalilla elävien solujen [anneksiini-V (-), PI (-)], oikeassa yläkulmassa neljänneksessä [anneksiini-V (+), PI (+)] myöhään apoptoottisten tai nekroottisten solujen, oikeanpuoleiseen alanurkkaan [anneksiini-V (+), PI (-)] kanssa varhain apoptoottisia soluja, ja vasemmassa yläkulmassa neljänneksessä [anneksiini-V (-), PI (+)], jossa pieniä annoksia solujätteiden vuoksi mekaanisia vaurioita ja apoptoosin. Siten analyysi apoptoosin riippuu pääasiassa varhaisen apoptoosin (oikeanpuoleiseen alanurkkaan) ja yhteensä solukuolemaa (ylhäällä oikealla + alhaalla oikealla neljännesten) esillä olevassa tutkimuksessa. Tuloksemme osoittivat merkittävää laskua apoptoosin ja solukuoleman kanssa CCL21 hoidon kontrolliin verrattuna (p 0,01); kuitenkaan mitään eroa CCR7- vasta-plus CCL21 hoidon ja valvonnan havaittiin (p 0,05). Tulokset osoittavat, että CCR7-vasta-aine voi antagonisoinut CCL21 apoptoosiin ja solukuolemaa ja siten vahvistaa antiapoptoottisten toiminto CCL21 /CCR7. Ei kuitenkaan eroa apoptoosin todettiin kesken kolmessa hoitoryhmässä (p 0,05). Mahdollinen syy voisi olla se, että CCL21 50 ng /ml saavutettiin tyydyttyneisyystasojen edellytyksellä siis korkeampia pitoisuuksia ei lisätä sitä vaikutusta.

Bcl-2-perheen on todettu liittyvän läheisesti solun apoptoosin [39-41]. Bcl-2: n ja Bax ovat kaksi tärkeintä proteiineja Bcl-2-perheen Bcl-2 estämällä apoptoosin samalla Bax apoptoosin edistämiseksi. Nämä kaksi proteiinia ovat läsnä dimeerejä, kuten Bcl-2 /Bcl-2: n ja Bax /Bax. Ylössäätely Bcl-2: n ilmentymisen johtaa ylimääräisiä Bcl-2 yhdistää Bax muodostaen Bcl2 /Bax siten estävät solujen apoptoosia; kun taas downregulation ilmentymisen Bcl-2, määrä yhdistetyn muodon Bcl2 /Bax vähenee ja siten edistää solujen apoptoosia. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme tutkineet Bcl-2: n ja Bax proteiinien T24-soluissa kaikissa koeryhmissä, mukaan lukien ohjaus. CCL21 voi lisätä Bcl-2-proteiinin ilmentymisen, mutta vähentää Bax-proteiinin ilmentymisen ja vaikutukset osoitti CCL21 pitoisuus riippuvalla tavalla 50 ng /ml ja 100 ng /ml. Mielenkiintoista on, että mitään merkitsevää eroa ei havaittu Bcl-2: n ja Bax ilmaisujen välillä CCL21 100 ng /ml ja 200 ng /ml CCL21 (Bcl-2: p = 0,545; Bax: p = 0,191); syynä voi olla se, että CCL21 saavuttanut tietyn pitoisuuden ei ole korkeampi kuin 100 ng /ml sen maksimaalinen anti-apoptoottisia vaikutuksia (Fig. 3). Esikäsittely CCR7 vasta-aineen voisi lähes täysin kääntää päinvastaiseksi CCL21 on ilmaisuja Bcl-2: n ja Bax ja apoptoosin (Fig. 3 ja taulukko 3). Tämä vahvistaa entisestään tärkeä rooli CCR7- vaikutuksista CCL21 on T24-soluissa.

Johtopäätös

CCL21 /CCR7- edistänyt T24 soluproliferaatiota pitoisuusriippuvaisella kuvio ja tehostetun siirtolaisuuspolitiikkaansa ja hyökkäys; nämä vaikutukset voivat liittyä lisääntynyt MMP-2 ja MMP-9. CCL21 /CCR7- oli antiapoptoottisten toimintaa T24-soluissa; nämä toiminnot voivat liittyä sääntelyyn Bcl-2: n ja Bax proteiineja. Tuloksemme osoittavat, että CCL21 /CCR7- voi edistää virtsarakon syövän kehitystä ja etäpesäke.