Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

LIM ja SH3-proteiinia 1 (LASP-1) on tietyn polttovälin Adhesion Protein, jonka tiedetään olevan osallisena lukuisissa biologisissa ja patologisten prosessien. LASP-1 yli-ilmentyminen on kuvattu useita erilaisia ​​syöpiä, mutta sen ilmentyminen ja roolin selkeä solussa munuaissyövän (ccRCC) on edelleen tuntematon.

Methods

Käyttäen Immunohistokemian analysoimme LASP- 1-proteiinin ilmentymistä 216 clinicopathologically tunnettu ccRCC tapauksissa. Tutkimme myös LASP-1 ilmentymisen 20 pariksi ccRCC kudosten ja 2 solulinjoissa reaaliaikaisella PCR ja Western blot. Käyttäen RNA-interferenssi, tutkimme vaikutuksia LASP-1 ehtyminen kasvainsolujen käyttäytymiseen

in vitro

. Tilastolliset analyysit käytettiin määrittämään assosiaatioita LASP-1 tasot, kasvain ominaisuuksia ja hoitotuloksia.

Tulokset

LASP-1 yli-ilmentyminen havaittiin ccRCC kudoksissa (

P

0,0001) verrattuna adjuvanttia nontumorous kudoksiin, ja sen ilmaisun tasot olivat tiiviisti korreloivat kokonaiselossaoloaika ja uusiutumista elinaika (

P

= 0,044 ja 0,006, vastaavasti) potilailla, joilla ccRCC. RNA-interferenssi-välitteisen hiljentäminen LASP-1 -geenin 786-0 ccRCC soluissa esti merkitsevästi solujen vaeltamiseen.

Johtopäätökset

tulokset Tämän tutkimuksen mukaan LASP-1 voi toimia ennustetekijöitä biomarkkeri ccRCC potilaille ja voi olla lupaava kohde hoitoon ccRCC.

Citation: Yang F, Zhou X, Du S, Zhao Y, Ren W, Deng Q, et al. (2014) LIM ja SH3 Domain Protein 1 (LASP-1) yli-ilmentyminen liittyi Aggressiivinen Fenotyyppikuvaus ja huonon ennusteen Clear Cell munuaissyöpä. PLoS ONE 9 (6): e100557. doi: 10,1371 /journal.pone.0100557

Editor: Anthony W. I. Lo, Kiinan University of Hong Kong, Hongkong

vastaanotettu: 21 maaliskuu 2014; Hyväksytty: 23 toukokuu 2014; Julkaistu: 23 kesäkuu 2014

Copyright: © 2014 Yang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Tällä kirjoittajat vahvistavat, että kaikki tiedot taustalla olevat havainnot ovat täysin saatavilla rajoituksetta. Kaikki cel-tiedostot ovat saatavilla GEO.

Rahoitus: Kirjoittajat eivät tuki ja rahoitus raportoida.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Tyhjennä solu munuaissyövän (ccRCC) on yleinen urologiset maligniteetti maailmanlaajuisesti [1]. Vaikka valtava parannus on tehty hoidossa ccRCC viime vuosina, kuolleisuus ccRCC pysyy korkeana, koska 40% ccRCC potilaalla, joille nephrectomy kehittää paikallisen uusiutumisen tai etäpesäkkeitä [2]. Siksi luotettava prognostisia biomarkkerit tarvitaan pikaisesti ennustaa lopputulosta ja tunnistaa terapeuttiset tavoitteet hoitoon ccRCC potilaista.

LIM ja SH3-proteiinia 1 (LASP-1) on osoitettu olevan tärkeä rooli syövän kehittymisessä ja eteneminen [3], [4]. LASP-1 tunnistettiin alun perin cDNA-kirjastosta rintasyövän etäpesäkkeitä, ja geeni kartoitettiin ihmisen kromosomiin 17q21 [5], [6]. Ihmisen LASP-1-proteiini sisältää 261 aminohappoa, jossa on N-terminaalinen LIM domeenin, jota seuraa kaksi aktiini-sitovat domeenit, että ydin LASP-1-proteiinin, jotka välittävät vuorovaikutusta LASP-1 ja aktiinisytoskeletonin paikalla solukalvon laajennuksia, mutta ei yhdessä aktiini rasitukseen liittyviä säikeitä [7] – [10]. SH3-domeenin C-terminaaliseen päähän on mukana proteiini-proteiini-vuorovaikutuksia sitoutumalla proliini-rikkaat sekvenssit, erityisesti zyxin, pallidin, lipooma-ensisijainen kumppani (LPP) ja verisuonten stimuloiman fosfoproteiini (VASP) [6], [11] . LASP-1 on paikallistettu useita sivustoja dynaamisen aktiini kokoonpanon, kuten paikallisissa kontakteissa, paikallisia tarttumista, lamellipodioihin kalvo röyhelöt ja valejalka [12], [13], mutta tarkka toimintoja LASP-1 vielä ole täysin ymmärretty.

LASP-1: n on raportoitu olevan yli-ilmentynyt useissa syöpien ja metastaattisen syövän solulinjat, kuten rintasyövän [14], munasarjasyöpä [4] ja peräsuolen syövän [15]. Lisäksi LASP-1 hiljentäminen metastaattisessa syöpäsolulinjoissa seurasi voimakas soluproliferaation inhibointi ja muuttoliike, ja johti zyxin alennuksia polttovälin kontaktit [4]. Mielenkiintoista,

in vitro

hiljentäminen LASP-1-geenin vähensi solujen proliferaatio ja migraatio ja suuresti vaikuttanut zyxin lokalisointi [3]. Lisäksi, geenin transfektio-välitteinen LASP-1 yli-ilmentymisen SW480 CRC-soluissa johti aggressiivista syövän solujen ja edistää syövän kasvua ja etäpesäkkeiden [15]. Kuitenkin roolit LASP-1 ccRCC ei ole kuvattu.

Esillä olevassa tutkimuksessa olemme tutkineet ekspressiota LASP-1 ccRCC käyttämällä ihmisen ccRCC kudosnäytteitä ja solulinjoissa, ja arvioidaan välinen assosiaatio LASP-1 ilmentymisen ja ccRCC tuloksen jälkeen resektio. Lisäksi teimme RNA-interferenssi (RNAi) -välitteisen geenien of LASP-1 in ccRCC solujen roolin tutkimiseksi LASP-1 in ccRCC invasion

in vitro

.

Materiaalit ja menetelmät

potilaiden ja kudosnäytteiden

Kaksi satakuusitoista munuaisten kasvain näytteet ja niiden viereisten nontumorous kudokset saatiin potilailta, joilla ccRCC joille tehtiin radikaali tai osittain nephrectomy laitoksella urologian Kirurgian Xijing Hospital, neljäs Military Medical University elokuu 2005 syyskuu 2010. diagnoosi vahvistettiin leikkauksen patologinen analyysi. Potilaat, joilla on aiemmin todettu maligniteetti ja ne, jotka olivat aiemmin saaneet neoadjuvant hoito jätettiin tämän tutkimuksen. Yksikään potilas ei ollut havaittavissa kaukainen etäpesäke leikkauksen. Tutkimus koostui 82 naista ja 134 miestä (keski-ikä 63 vuotta ikäryhmä, 18-82 vuotta). Esillä olevassa tutkimuksessa kliiniset ja patologiset ominaisuudet kirjattiin. Käyttämällä 2010 TNM lavastus järjestelmä ja Fuhrman arvosana luokitusta, kasvaimet luokitella seuraaviin ryhmiin tilastolliset analyysit: alkuvaiheen (TNM1 ja TNM2), myöhään (TNM3 ja TNM4), huono laatu (grade 1 ja 2) ja korkealaatuista (asteen 3 ja 4). Kliinis ominaisuudet potilasta noudetaan potilastietoja yhteenveto taulukossa 1. Follow-up tiedot saatiin puhelimitse, kirjeitse, tai avohoidon kliinisiä tietokantaan. Kaikki potilaat seurattiin alkaen alkuperäisen leikkauksen kunnes joko kuolema tai päättymispäivänä tämän tutkimuksen (30 marraskuu 2013). Toistuminen havaittiin 127 potilaalla (58,7%) viime seurantatutkimuksessa, ja 46 potilasta (31,0%) oli kuollut johtuu ccRCC liittyviä sairauksia. Keskimääräinen seuranta-aika oli 49,3 kuukautta (vaihteluväli 1-67 kuukautta).

reaaliaikainen PCR ja Western blot -analyysit, yhteensä 20 pariksi kasvain kudosten ja sovitettu viereisten nontumorous kudokset kerätty ccRCC leikkauspotilaiden hoitoa Department of Urology Surgery, Xijing Hospital, neljäs Military Medical University maaliskuun ja kesäkuun välillä, 2013. 20 potilasta oli 12 miestä ja 8 naista, joiden keski-ikä on 61 vuotta (vaihteluväli, 21-79 vuotta). Resektion jälkeen, tuoreet kudokset jäädytettiin välittömästi nestemäisessä typessä ja säilytettiin -80 ° C: ssa. Sekä kasvain ja nontumourous kudokset varmistettiin histopatologinen tutkimus.

Tutkimus tarkasteli ja hyväksynyt eettinen komitea neljännen Military Medical University, ja kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta ennen leikkausta. Kaikki kokeelliset menettelyt suoritettiin noudattaen Helsingin julistuksen.

immunohistokemia

kudosnäytteet kiinnitettiin 10% formaliinilla ja rutiininomaisesti käsitelty parafiiniupotusta. Kudosleikkeet (5-pm paksu) värjättiin hematoksyliinillä-eosiinilla ja tarkistaa kaksi patologit määritellä syöpä ja vastaavat notumorous kudoksia. Immunohistokemia (IHC) suoritettiin parafiiniin upotetut tuumorisektioiden käyttäen vasta-ainetta vastaan ​​LASP-1 (1:200, Abcam, Cambridge, UK), kun antigeeni haku. Negatiivinen kontrolli ilman primaarista vasta-ainetta valmistettiin kaikissa näytteissä. Keskimääräinen LASP-1 ilmentymisnopeudessa arvioitiin tarkastelemalla vähintään 5 mikroskooppikentäs- 400 x suurennus. LASP-1 ilmentymisen katsottiin olevan negatiivinen, kun 10%: n syöpäsolujen mikroskooppikentäs- osoitti Immuunivärjäystä ja diat tarkistettiin toisen kerran vähentää lukemisen virhe.

Solulinjat

786-0 ihmisen ccRCC solulinja saatiin Cell Bank of Kiinan Academy of Sciences (Shanghai, Kiina) ja viljeltiin RPMI 1640 -alustassa, jota oli täydennetty 10% FBS. A498 ihmisen ccRCC solulinja saatiin Tiancheng Technology Co., Ltd (Shanghai, Kiina) ja viljeltiin DMEM täydennetty 10% FBS: ää. Solut otettiin talteen logaritmisessa kasvuvaiheessa käytettäväksi kokeissa kuvattu alla.

Reaaliaikainen PCR

Kokonais-RNA kasvain ja nontoumorous kudoksissa 20 ccRCC potilaista uutettiin käyttäen TRIzol reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, Kalifornia, USA) valmistajan suosituksen. Käänteistranskriptio suoritettiin 20 ul: n reaktiossa, jossa 2 ug kokonais-RNA: ta, jotka oli käsitelty M-MLV käänteistranskriptaasia (Promega, Madison, Wisconsin, USA) syntetisoimiseksi ensimmäisen juosteen cDNA: n mukaan, valmistajan suositusten, minkä jälkeen cDNA-monistus, kuten aiemmin on kuvattu. Aluke sekvenssejä, jotka käytettiin reaaliaikaista PCR LASP-1 olivat: (F) 5′-ATGAACCCCAACTGCGCC-3 ’ja (R) 5′-TCAGATGGCCTCCACGTAGTT-3’.

Western Blot

Yhteensä proteiini eristettiin kasvain ja nontoumorous kudosten kuusi ccRCC käyttävän potilaan Total Protein Extraction Kit (KeyGen, Nanjing, Kiina). 30 ug proteiinia per kaista erotettiin käyttämällä 12% natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidi- geelillä ja siirrettiin polyvinylideeni difluoridi kalvo. Membraani blokattiin kuoritun maidon 5% 2 h ja sitten inkuboitiin vasta-aineen kanssa LASP-1 (1:1000, Abcam, Cambridge, UK), tai β-aktiini (1:5000, Abcam, Cambridge, UK) 4 ° C yön yli. Pesun jälkeen neljä kertaa Tris-puskuroidulla suolaliuoksella Tween-20, kalvon koettimena piparjuuren peroksidaasiin (HRP) konjugoitua sekundaarista vasta-ainetta (1:2000, Proteintech Group, Chicago, Illinois, USA).

sirna (siRNA) -välitteisen LASP-1-geenin hiljentäminen

Expression of human LASP-1, joka pudotettiin käyttäen siRNA-dupleksit, kuten seuraava sekvenssi: 5′-AAGGTGAACTGTCTGGATAAG-3 ’, 5′-CUUAUCCAGACAGUUCACCdTdT-3 ”. Negatiivinen kontrolli siRNA (5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3 ’ja 5′-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3’) kohdistaminen tuntematon mRNA-sekvenssien käytettiin verrokkeina. Kaikki siRNA: ita syntetisoitiin GenePharma (Shanghai, Kiina). BLAST-haku ihmisen genomin varmistettu, että valittu sekvenssit olivat spesifisiä kohdegeenien. Solut eksponentiaalisen kasvun vaiheen maljattiin kuuden kuopan levyille tiheydellä 0,5 x 10

5 solua /ml, viljeltiin 24 tuntia ja transfektoitiin 1 ug: n siRNA, kun ne olivat saavuttaneet 30-50% konfluenssiin mukaan valmistajan suosittelemaa menetelmää. Fluoreseiini (FAM) -leimattua negatiivisena kontrollina siRNA käytettiin visualisoimaan transfektion tehokkuutta.

In vitro

maahanmuuton analyysi

Solut seerumivapaassa väliaineessa (1 x 10

5 solua /200 ui) alkuun kammioihin 8-um huokoskoko TranswellTM kammioiden (Corning Star, Cambridge, Massachusetts, USA). Pohja kammiot valmistettiin käyttämällä 10% FBS kuin kemoattraktantti. Solujen annettiin siirtyä läpi huokoisia kalvoja 20 tuntia 37 ° C: ssa. Solut, jotka olivat vaeltaneet kalvon läpi ja kiinni alapinnan kalvon käsiteltiin kiinnitys /värjäys (0,1% kristalliviolettia, 1% formaliinia ja 20% etanolia) visualisointia varten. Kvantifioinnin, solut laskettiin mikroskoopilla viidellä satunnaisesti valitun kenttien Nikon ECLIPS 80i mikroskopia on suurennus 400 x. Vähintään viisi kammiota kolmesta itsenäisestä kokeesta analysoitiin.

Tilastollinen

IBM SPSS Statistics 19.0 ohjelmistoa käytettiin suorittamaan kaikki tilastolliset analyysit. Eroja kategorinen muuttujat analysoitiin tilastollista merkittävyyttä käyttäen chi-squared testissä, kun taas määrälliset muuttujat analysoitiin käyttämällä pariksi Wilcoxonin testiä tai parittoman

t

-testi. Yhden ja usean Coxin suhteellisten riskien analyysit käytettiin vaikutusten arvioimiseksi eri tekijöiden ennusteeseen. Kaplan-Meier-analyysi käytettiin arvioimaan selviytymisen ja log-rank testejä käytettiin verrata potilaan eloonjäämisen välillä alaryhmiä. Kaikki

P

arvot olivat kaksipuolisia, ja

P

0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

LASP-1 yliekspressio RCC kudoksissa havaittiin käyttäen IHC

selkeytettävä taustalla roolia LASP-1 RCC etenemiseen, me ensin tutkinut proteiinin ilmentymistason LASP-1 käyttäen IHC 216 kasvain kudosten ja sovitettu viereisten nontumorous kudoksiin. Olemme havainneet, että LASP-1 ekspressio oli merkittävästi voimistunut kasvainkudoksessa verrattuna sovitettu viereisten nontumorous kudoksissa (

P

0,0001, kuviot 1A, B ja C).

LASP-1 -proteiinin ilmentyminen parafinoidut ccRCC kudokset (A) ja viereisen nontumorous kudoksissa (B) käyttäen immunohistokemia (suurennus 100 x), jossa positiivinen LASP-1 immunovärjäys osoitti ruskea väri. Wilcoxonin analyysi osoitti, että kasvaimen kudokset osoittivat merkittävästi korkeampi LASP-1 ilmentymisen kuin nontumorous kudoksissa (C, n = 216). Western blot (D) ja reaaliaikainen PCR (E, n = 20) analyysit vahvistivat havainnot immuunihistokemiallisessa analyysiin. Western blot-analyysi osoitti myös, ero LASP-1 ilmentymisen ihmisen embrynal munuaissoluja (HEK-293) ja ccRCC solulinjoja (F). T tarkoittaa kasvaimen kudoksiin, kun taas P viittaa peritumor (nontumorous) kudosten paneelissa D.

tarkastaminen ero LASP-1 ilmentymisen käyttäen Western blot ja reaaliaikaisen PCR analyysejä kudoksissa ja solulinjoissa

tarkista tulokset on saatu IHC, havaitsimme LASP-1 ilmentymisen 6 ccRCC kudosten ja niiden yhteensovitettujen viereisten nontumorous kudoksiin (kuvio 1 D). Tulokset paljastivat myös, lisääntynyt LASP-1 ilmentymisen tuumorikudoksissa verrattuna nontumorous kudoksiin. Reaaliaikainen PCR levitettiin sitten 20 ccRCC kudosten ja pariksi nontumorous kudoksissa, ja LASP-1-mRNA: n tasoja havaittiin myös voimistuvan kasvainkudoksissa (kuvio 1E). Lisäksi olemme todenneet, että LASP-1 ilmentyi 2 ccRCC solulinjoissa ja ihmisen alkion munuaissoluja (HEK-293) käyttäen western blot -analyysiä. Yhdenmukainen saatujen tulosten kudosnäytteistä, korkeamman LASP-1 tasot havaittiin aggressiivisempia solulinja (786-0) kuin matalan aggressiivinen solulinja (A498) tai HEK-293-soluissa (kuvio 1 F).

Lisääntynyt LASP-1-ilmentyminen korreloi kasvaimen etenemiseen ja huonon ennusteen ccRCC potilailla

väliset korrelaatiot LASP-1 ilmentymisen ja kliinis ominaisuudet analysoitiin käyttäen chi-neliön testi. Jotka esitetään taulukossa 1, merkittäviä korrelaatioita havaittiin välillä LASP-1 ilmentymisen ja neljä kliinisten parametrien, kuten kasvaimen koko (

P

= 0,002), TNM (

P

= 0,005), toistuminen tila (

P

= 0,006) ja kuoleman tila (

P

= 0,026). Suhde Fuhrman laatu ja LASP-1 ilmentymisen osoitti rajatapaus merkitys (

P

= 0,081). Kuitenkin, ei ollut tilastollista assosiaatioita LASP-1 ilmentymisen ja loput parametrit, kuten ikä ja sukupuoli.

sitten käytetään yhden ja usean Coxin regressioanalyysin avulla arvioida yhdistyksen välillä LASP-1 ilmentymisen ja tulokseen ccRCC potilailla. Vuonna yhden muuttujan analyysissä (taulukko 2), kasvaimen koon, Fuhrman luokalla TNM ja LASP-1 säätelyä merkittävästi korreloivat huono kokonaiselinaikaa (

P

= 0,034, 0,0001, 0,0001 ja = 0,003 , vastaavasti) ja toistuminen elinaika (

P

= 0,005, 0,0001, 0,0001 ja 0,0001, vastaavasti) vuonna ccRCC potilailla. Sitten neljä tekijää, jotka liittyivät merkittävästi lopputulokseen (

P

0,05) yhden muuttujan analyysissä alistettiin monimuuttujamenetelmin. Monimuuttuja-analyysi osoitti, että Fuhrman luokalla, TNM, ja LASP-1 säätelyä olivat riippumattomia ennustavat tekijät kokonaiselinaikaa (

P

= 0,001, 0,0001 ja 0,044, tässä järjestyksessä) ja toistuminen elinaika (

P

= 0,002, 0,010 ja 0,006, vastaavasti) vuonna ccRCC potilailla (taulukko 3). Lisäksi Kaplan-Meierin käyrä osoitti myös, että LASP-1 säätelyä oli merkitsevästi yhteydessä heikompaan tulos ccRCC potilailla (kuvio 2A ja B).

LASP-1 hiljentäminen esti ccRCC solumigraation

in vitro

siRNA transfektio käytettiin pudotus LASP-1 ilmentymisen 786-0 soluissa, mikä näkyy korkea endogeenisiä LASP-1 ilme. Vaikutukset siRNA transfektion on LASP-1 ilmentymisen vahvistettiin käyttäen Western-blot-analyysi. Määrä LASP-1-proteiinin on ilmeisesti pienempi verrattuna, että negatiivisen kontrollin soluissa (kuvio 3A). Edelleen, transwell invaasiomääritys paljasti, että hiljentäminen LASP-1 ilmentymisen laski jyrkästi solujen liikkuvuuden verrattuna kontrollisoluihin (kuvio 3C). Parittoman

t

-testiä käytettiin arvioimaan ero 786-0 ja si786-0 solujen määrä hyökkäsi solua per kenttä (Fig. 3B), joka osoitti, että määrä hyökkäsi solua per kenttä pieneni merkitsevästi jälkeen knockdovvn LASP-1 ilmentymisen (

P

0,0001).

Western blotting käytettiin tarkistaa knock-down of LASP-1 ilmentymisen 786-0 soluissa siRNA transfektio (A). Parittomalla t-testiä käytettiin arvioimaan erojen määrä hyökkäsi solua kentän välillä 786-0 ja si786-0 solulinjoja (B). Transwell tulokset 786-0 ja si786-0 solulinjoja on esitetty (C).

Keskustelu

Esillä olevassa tutkimuksessa olemme tutkineet LASP-1 ilmentymisen sarjassa 216 ccRCC kudokset ja verrattiin näitä tietoja, jotka on saatu kliinisesti vahvistettu ccRCC ensimmäistä kertaa. Tulokset osoittivat, että proteiini ekspressiotasot LASP-1 olivat korkeampia ccRCC kudoksissa kuin pariksi nontumorous kudoksissa, kuten on osoitettu IHC ja validoitu käyttämällä western blot ja reaaliaikaisella PCR: llä. Association analyysit paljastivat, että LASP-1 säätelyä oli merkitsevästi yhteydessä suurempia kasvaimen koon ja huonommin TNM vaiheessa. Yhdessä nämä tulokset osoittivat, että LASP-1 voi olla tärkeä rooli ccRCC etenemiseen. Edelleen ennustetekijöiden analyysit osoittivat, että LASP-1 yliekspressio voi olla itsenäinen ennusteen tekijä ccRCC. Kuitenkin lisätutkimuksia suuret otoskoot tulee vahvistaa nämä päätelmät ja vahvistaa roolia LASP-1 ennustettaessa ennusteen potilaita, joilla ccRCC.

Viimeaikaiset tiedot ovat osoittaneet, että korkeat LASP-1 ilmentymisen syövissä on välttämätön syövän solujen lisääntymisen, etenemisen ja etäpesäkkeiden [16]. Solut korkean LASP-1 ilmentymisen näkyy vahvempi elinvoimaa ja olivat herkempiä muodostaen etäpesäkeleesioita johtuen tehostetusta kyky muodostaa klooneja [17]. Aiemmat tutkimukset ovat raportoineet, että hiljentäminen LASP-1 ilmentymisen rinta-, munasarja- ja peräsuolen syövän solulinjat johtaa alentunut solujen lisääntymisen ja muuttoliike [4], [14], [15]. Yhdenmukainen Näiden tutkimusten tulokset, tulokset nykyisen

in vitro

kokeissa ccRCC solulinjoissa mukaan LASP-1 ilme on välttämätön solujen vaeltamiseen.

Mekanismi, jolla LASP- 1 vaikuttaa syöpäsolujen lisääntymistä ja muuttoliike jää epäselväksi. Solujen vaeltamiseen ja valvotun kokoonpanoa ja purkamista paikallisia tarttumista ovat pitkälle integroituja monivaiheisia prosesseja ja keskeinen ominaisuuksia molekyyli patologian syövistä [18]. Tähän mennessä yli 50 erilaista tarttumista proteiineja, jotka säätelevät nopeus ja organisointi aktiini polymerointi ja fokaalisen adheesion liikevaihdon ulokkeet on tunnistettu [19], [20]. LASP-1: n on osoitettu olevan vuorovaikutuksessa lipoma ensisijainen kumppani (LPP) ja zyxin, jotka molemmat voivat vaikuttaa aktiinifilamentin dynamiikka [21]. Sitoutuminen tapahtuu välillä C-terminaalisen SH3-domeenin LASP-1 ja N-terminaalista proliinia runsaasti domeenit zyxin ja luottamuksellisuuden [4]. Zhao

et al

. on ilmoittanut, että geenitransfektion välittämää LASP-1 yli-ilmentyminen in SW480 CRC soluissa johti aggressiivinen fenotyyppejä syöpäsoluissa ja edistänyt syövän kasvua ja etäpesäkkeiden [15]. Tämä havainto korostaa, että on tärkeää LASP-1 syövässä.

Viimeaikaiset tutkimukset ovat osoittaneet, että LASP-1 on transkriptionaalisesti upregulated vastauksena morfogeenipolypeptidi Sonic Hedgehog [22]. Häiriöt Hedgehog signalointiryöpyn johtaa useita kehityshäiriöitä ja sillä on keskeinen rooli muodostumista useiden eri ihmisen syövissä. Tässä yhteydessä on mielenkiintoista huomata, että zyxin on myös todettu differentiaalisesti kopioitu geeni on useita erilaisia ​​syöpiä käyttäen sirutekniikalla [15]. Grunewald

et al

. on ilmoittanut, että LASP-1 yli-ilmentymisen välittää ihmisen munasarjasyövän solujen vaeltamiseen ja lisääntymistä ja vaikutteita zyxin lokalisointi [4]. Zyxin on lokalisoitu ensisijaisesti polttovälin tarttuvuus taulut ja keskeinen rooli aktiinifilamentin polymeroinnissa nisäkässoluissa. Zyxin hiljentäminen HeLa-soluissa johtaa merkittävästi väheneminen aktiini stressisäikeiden muodostumista, kun taas alle syklinen venyttää, zyxin vain dissosioituu paikallisissa kontakteissa ja kerääntyy tumaan, vaikuttamatta vinkuliini tai aktiinisäikeiden [6]. Alentunut solun liikkuvuus sen jälkeen, kun LASP-1 hiljentäminen voidaan selittää funktionaalisen menetys zyxin kuin rakennustelineet proteiini, joka helpottaa muodostumista molekyylirakenteet, mikä edistää site-specific aktiini [8]. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme pudotti LASP-1 ilmentymisen 786-0 solulinjassa ja havaittu huono muuttoliike kykyä in vitro, mikä oli yhdenmukainen tulosten kanssa aiempien tutkimusten.

Johtopäätökset

Yhteenvetona havaittiin ensimmäistä kertaa, että LASP-1 yläreguloituja ccRCC, mikä merkitsee, että sen merkittävä rooli kehityksessä ccRCC. LASP-1 yliekspressio liittyi suurempia kasvaimia ja aggressiivinen fenotyyppejä ccRCC, ja vaimentaminen LASP-1 ilmentymisen esti syövän solujen vaeltamiseen

in vitro

. Siksi LASP-1 voi olla uusi prognoosi- biomarkkereiden ja lupaava terapeuttinen kohde ccRCC.