Krooninen sairaus

tiivistelmä

Johdanto

Lukuisat antiangiogeenisiä aineita parhaillaan kehitetään rajoittamiseksi kasvain kasvu ja etäpesäke. Vaikka nämä lääkkeet tarjoavat toivoa syöpäpotilaille, heidän ohimenevä vaikutus kasvaimen verisuonisto on vaikea arvioida hoitopaikassa. Konfokaali laser endomicroscopy (CLE) on uudenlainen endoskooppinen kuvantamisen tekniikkaa, jonka avulla histologinen tutkiminen ruoansulatuskanavan limakalvolla. Tavoitteena tässä tutkimuksessa oli arvioida mahdollisuutta käyttää CLE kuvan verisuonten verkosto tuoreen koepaloja paksu- ja kudosta. Tätä tarkoitusta varten olemme kuvaamisen normaali ja pahanlaatuisia biopsiakudoksesta näytteitä verrattiin verisuonten verkon parametrit saadaan CLE vakiintuneiden histopatologian tekniikoilla.

Materiaalit ja menetelmät

tuore kuin kiinteää biopsianäyttei- sekä normaali- ja pahanlaatuiset peräsuolen limakalvon värjättiin fluoresoivasti leimattua anti-CD31-vasta-aineiden ja kuvattiin Cle käyttämällä siihen endomicroscopy järjestelmä. Vastaavat biopsianäytteissä tehtiin immunohistokemiallisella värjäyksellä CD31, arvioimiseksi mikroverisuonitiheys (MVD) ja verisuonten alueita verrattuna CLE tiedot, joita mitattiin offline eri sovelluksista.

Tulokset

Suonet kuvattavan Cle sekä normaali kasvain näytteissä. Keskimääräinen halkaisija on normaali alusta oli 8,5 ± 0,9 um, kun taas tuumorin näytteissä oli 13,5 ± 0,7 um (p = 0,0049). Verisuonten tiheys oli 188,7 ± 24,9 alusten /mm

2 normaalissa kudoksessa vs. 242,4 ± 16,1 alusten /mm

2, peräsuolen syöpä näytteistä (p = 0,1201). Vuonna immunohistokemia näytteissä MVD oli 211,2 ± 42,9 /mm

2 ja 351,3 ± 39,6 /mm

2 normaalin ja pahanlaatuisen limakalvo, vastaavasti. Verisuonten alue oli 2,9 ± 0,5% koko kudoksen alueen normaalin limakalvon ja 8,5 ± 2,1% primääri peräsuolen syövän kudosta.

Johtopäätös

valikoiva kuvantaminen verisuonten kanssa CLE on toteutettavissa normaali ja kasvain peräsuolen kudokseen käyttämällä fluoresoivasti leimattuja vasta-aineita suunnattu vastaan ​​endoteelimerkkiaineelle. Menetelmää voidaan kääntää kliiniset puitteet seurantaan antiangiogeenistä terapia.

Citation: Cârţână T, Săftoiu A, Gruionu LG, Gheonea DI, Pirici D, Georgescu CV, et al. (2012) konfokaali Laser Endomicroscopy varten morfometrinen Evaluation pienten verisuonten paksu- ja peräsuolisyövän kohdistamalla Anti-CD31 vasta-aineet. PLoS ONE 7 (12): e52815. doi: 10,1371 /journal.pone.0052815

Editor: Anthony W. I. Lo, Kiinan University of Hong Kong, Hongkong

vastaanotettu 10 syyskuuta 2012 mennessä; Hyväksytty: 21 marraskuu 2012; Julkaistu: 28 joulukuu 2012

Copyright: © 2012 Cârţână et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat alkaen tutkimuksen apurahan otsikolla ”Clinical ja Biomathematical mallintaminen verisuonten muutokset jälkeen antiangiogeenisestä Therapy in Advanced kolorektaalikarsinoomasta”, rahoittaa National Research Council (CNCS), Romania, sopimuksen numero PN-II-ID-PCE-2011- 3-0664. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Anti-angiogeenisten hoito on viime aikoina esiin kasvavaa kiinnostusta johtuen mahdollisia vaikutuksia liittyviä kohdennettuja hoitoon ja ennusteen ositusta erilaisten kiinteiden kasvainten [1]. Kuitenkin kynnyksellä uuden antiangiogeenistä aineet osaksi onkologian kliininen käytäntö on syntynyt tarvetta tehostaa kuvantamismenetelmät arviointiin microvascular verkon hoidon aikana.

Angiogeneesi on perinteisesti arvioitiin mittaamalla mikroverisuonitiheys (MVD ) kiinteän kudoksen immunovärjättiin erilaisia ​​endoteelisolujen markkereita, mukaan lukien tekijä VIII, CD31, CD34 [2], ja aikaisemmat tutkimukset ovat tunnistaneet mikrovaskulaarinen tiheys (MVD) mahdollisena ennuste tekijä useita kiinteitä kasvaimia. CD31, joka tunnetaan myös verihiutaleiden endoteelisolujen adheesiomolekyyli 1 (PECAM-1) on yleiseurooppalainen endoteelimerkkiaine sekä pienille ja suuria aluksia [2]. Joukossa on monia toimintoja CD31 on myös kasvuun liittyvät ja metastaaseja kasvainten olla mukana prosesseissa angiogeneesin ja verisuonten läpäisevyyttä [3].

Still, käyttäen immunohistokemia ja MVD arvioida angiogeneesin yhteydessä kliinisten tutkimusten on tuonut joitakin eettisiä ja käytännön liittyvät huolenaiheet toistuvat korjuu koepaloja potilailta [4]. Toiminnallinen kuvantaminen kasvain vascularity on lupaava vaihtoehto, mutta useimmat kliinisesti kuvantamislaite tekniikkaa ei ole mikroskooppinen resoluutio tarvitaan kliinisiä sovelluksia [5]. Äskettäin konfokaali laser endomicroscopy (CLE) kehitettiin reaaliaikainen

in vivo

histologista analyysiä suolen limakalvon. Korkean resoluution optinen osiot vaakatasoon kohdekudoksessa näyttö solu- ja subcellular yksityiskohtia aikana käynnissä tähystys [6]. Erilaisia ​​kliinisiä sovelluksia tekniikan on jo kuvattu vauriot sekä ylemmän ja alemman ruoansulatuskanavan, erityisesti korot neoplasia, jossa CLE luo reaaliaikaisen histologisia diagnoosi ja kohdennettua koepaloja asiaankuuluvien alueiden suuremman diagnostista tuotto kuin satunnainen koepaloja [7], [8], [9], [10], [11], [12]. Vuonna peräsuolen vaurioita, CLE on osoittanut erittäin tarkasti havaitsemaan intraepiteliaalisten neoplasia perustuu mallia verisuoniverkoston ja krypta arkkitehtuuri [7].

Hyväksytty varjoaineita kliiniseen endomicroscopy tutkimukset sisältävät väriaineita epäspesifistä värjäytymistä ominaisuudet, kuten fluoreseiini, acriflavine tai kresyylivioletilla [13]. Kuitenkin viimeaikaiset tutkimukset on tehty eläinmalleissa ja ihmisen kudosnäytteitä käyttämällä fluoresoivasti leimattuja vasta-aineita, jotka käytössä erityinen endomicroscopic kuvantaminen epidermaalisen kasvutekijän reseptorin (EGFR) ja verisuonten endoteelin kasvutekijä (VEGF) [14], [15], [16] . Käyttämällä fluoreseiini-isotiosyanaatti-leimattujen vasta-aineiden, CLE pystyi erottamaan ekspressiotasot EGFR hiiren ksenograftikasvaimissa ja annettiin ero ihmisen neoplastisten ja ei-neoplastisten peräsuolen kudokseen, joka perustuu niiden EGFR kaavoja [14]. Sama ryhmä osoitti, että molekyylikuvantaminen VEGF on toteutettavissa eri jyrsijämalleilla ruoansulatuskanavan syöpien. Erot fluoresoiva voimakkuus VEGF-signaalin normaalien ja malignien ihmisen kudosnäytteitä myös osoitettu [15]. Molekyylikuvantaminen EGFR ja surviviinin, apoptoosin estävä proteiini, myös saavuttaa anturi-pohjainen CLE järjestelmä ruokatorven ja mahalaukun limakalvon sian malleja [16].

tavoitteena Tämän tutkimuksen tarkoituksena oli arvioida toteutettavuus CLE järjestelmän kuvaamiseksi verisuonten verkostoa ihmisten kolorektaalisen kudoksen näytteitä sekä normaalien että pahanlaatuisten limakalvon käyttämällä fluoresoivasti leimattuja anti-CD31-vasta-aineita. Koska tällä hetkellä ei ole olemassa CD-31 markkereita hyväksytty ihmisten käyttöön, olemme käyttäneet CLE kuvantamismenetelmä tuoreisiin kuin kiinteää ihmisen biopsianäytteissä värjättiin anti-CD31-vasta-aineita testata hypoteesia, että CLE järjestelmä tarjoaa sopivan tarkkuuden kuvaamiseksi kasvain verisuonistoon ja keräämällä verisuonten parametrit samanlainen nykyisin hyväksytty histopatologian tekniikoita.

Materiaalit ja menetelmät

potilaat

Tämän toteutettavuustutkimus tehtiin endoskooppinen koepaloja saadaan neljä potilasta, joilla on edennyt peräsuolen adenokarsinoomat, joka diagnosoitiin rutiinikäytössä kolonoskopia menettelyjä. Potilaat altistettiin tavanomaisiin biopsiapihtien näytteenotto pariksi alueilla on normaalia koolonin limakalvoa (otettu vähintään 10 cm: n kasvain) ja peräsuolen massa. Tutkimuksen hyväksyi eettisen komitean yliopiston lääketieteen ja farmasian Craiova. Kaikki potilaat, jos niiden kirjallinen suostumus saatuaan vakiolomake koepala kokoelma kautta kolonoskopia jossa todettiin, että biopsia näytteet analysoitiin edelleen immunohistokemiallisella tekniikoilla ja käyttää tutkimustarkoituksiin. Koepaloja analysoitiin mukaan yhteiseen värjäys protokolla (alla) tavanomaisen histopatologinen tutkimus ja CLE tutkimukset värjäyksen jälkeen spesifisten vasta-aineiden.

CLE Immunovärjäys Protocol

Yksi pariksi näyte tuoretta ihmisen koepaloja noin 2-3 mm halkaisijaltaan kerättiin aikana pienempi endoskooppisia menettelyjä sekä normaalin ja neoplastisia peräsuolen limakalvon kunkin potilaan ja upotetaan fysiologiseen suolaliuokseen. Tuoretta koepaloja inkuboitiin pimeässä monoklonaalisella hiiren vasta-ainetta (lgG1, klooni MEM-05, 01:10 laimennus) on suunnattu ihmisen CD31 /PECAM-1 (Exbio, Praha, Tsekin tasavalta) ja leimattiin Alexa-Fluor 488 1 tunnin ajan 37 ° C: ssa, ja huuhdeltiin fysiologisella suolaliuoksella poistaa kaiken sitoutumattoman reagenssia. Näytteet asetettiin lasilevyille ja välittömästi kuvantaa CLE verisuonten rakenteita. Optimoimiseksi tekniikka, eri vasta-aineen laimennukset 1% naudan seerumin albumiinia PBS: ssä (BSA, Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri, USA), joka vaihtelee 1:05-01:30, testattiin aiemmin tuoretta, ei- kiinteät kudosnäytteet ja kuvantaa automaattisella fluoresenssimikroskoopilla (Nikon 90i, Tokio, Japani). Aikajänteellä noin 60 minuuttia, jonka avulla sitoutumisen vasta tavoitteensa ja näytteen kuvantamisen ilman kudoshajoamista perustettiin myös.

CLE Imaging

Tässä tutkimuksessa käytimme CLE joka integroi pienoiskoossa -konfokaalimikroskoopilla osaksi distaalinen kärki tavanomaisen endoskoopin (EY-3870 CIFK, Pentax, Tokio, Japani). Konfokaalinen linssi distaalisessa kärjessä on hieman edistynyt ulkopuolella endoskoopin, joka mahdollistaa kohdennetun skannaus rakenteiden. Skannauksen aikana, laser tuottaa eksitaatioaallonpituudella 488 nm, joiden suurin laserin teho on ≤1 mW on kudoksen pinnan, joka ohjaa käyttäjän tutkimuksen aikana optimaalisen kuvantamisen kontrastin. Suurin syvyys kuvantaminen on 250 um pinnasta limakalvon. Tuloksena optinen osat on sivusuunnassa resoluutio 0,7 um 7 pm paksu siivu (z-akselin) ja näkökenttä 475 x 475 um.

endomicroscope kiinnitettiin kiinteään kehykseen ja koepaloja asetettiin histologia lasilevyille suorassa ja lempeä kosketus distaalinen kärki konfokaali laser endomicroscope. Kuvat otettiin kiinni painamalla jalka kytkin polkimen ja otettiin digitaalisesti tallennettu järjestelmän kiintolevylle harmaasävykuvia (150-250 kullekin biopsianäytteestä) myöhempää ladata ja käsittely.

Vascular Network Mittaukset

Analysoimme CLE kuvat käyttämällä Image J (National Institutes of Health, Bethesda, Maryland, USA). Viisi kuvaa, jolla on voimakkain fluoresoiva signaali ja hyvä näyttö verisuonten verkon valittiin kunkin kudosnäytteestä analysoimiseksi verisuonten rakenteita. Saat selvä ero alusten, väri overlay lisättiin vastaamaan loisteputki varjoainetta (kuvio 1). Suora viiva työkalua käytettiin manuaalisesti halkaisijan mittaamiseksi kunkin verisuonten segmentin väliin joko kaksi haarakohtiin tai haarautuminen pisteen ja tuuliajolla. Kukin verisuonten segmentti leimattiin ja laskettiin verisuonten tiheyden. Tulokset viedään Excel-tiedoston ja ilmoitetaan keskiarvona ± keskivirhe (SE) kunkin valitun kuvan ja tapauskohtaisesti. Mittaukset halkaisijan ja verisuonten tiheyden tehtiin itsenäisesti kahdella eri toimijoiden sokaisi toistensa havainnot ja patologian raportin. Tulokset raportoidaan keskiarvo kahdesta mittauksesta.

normaali limakalvo, alukset on järjestetty kuusikulmainen verkon (A); vastaavaa aluetta kasvain näyttää enemmän laajentuneet, epäsäännöllisen muotoisia aluksia, halkaisijaltaan vaihtelevien pituussuunnassa (B); samaa optista kohdat näytetään lisätty väriä overlay (C, D). * Asteikkomitta on 50 pm.

Perinteiset immunohistokemiallinen värjäys

Kirjeenvaihtaja otetuissa Kolorektaalituumorien laitettiin 4% neutraaleja puskuroituun formaliiniin kiinnittämistä varten ja parafiiniupotusta. Tavanomaiset patologian diagnoosi perustui H 0,05.

Tulokset

mikrovaskulaarisia CLE Patterns

erityinen fluoresoiva signaali tunnistetaan CLE laajuus kaikissa biopsiat normaalissa ja kasvainkudoksessa näytteitä. Alukset normaalissa koepaloja muodostivat kuusikulmainen kuvio homogeeninen jakautuminen halkaisijat ominaista normaali limakalvo kuvatulla selektiivisellä CD31 värjäyksen (kuvio 1A ja 1C). Tuumorinäytteissä alusten ilmestyi laajentuneet ja epäsäännöllisen muotoisia verrattuna normaaliin limakalvon, vaihtelevalla halkaisijat pituussuunnassa (kuvio 1 B ja 1 D).

morfometrinen analyysi mikrosuonten

alukset laskettiin ja niiden halkaisijat mitataan kahden verisuonten risteyksissä, koko näkökentän (kuva 2). Keskimääräinen suonen halkaisijan Tuumorinäytteissä oli 13,5 ± 0,7 um, huomattavasti korkeampi kuin astian halkaisija normaalissa paksusuolen ja peräsuolen limakalvon (8,5 ± 0,9 um, p = 0,0049). Verisuonten tiheys oli 242,4 ± 16,1 alusten /mm

2 kasvaimen kudosnäytteistä ja 188,7 ± 24,9 alusten /mm

2 normaalissa kudoksessa (p = 0,1201).

Alus laskettiin ja sen halkaisija mitattiin kunkin verisuonten segmentin kahden haarakohtiin tai haarautuminen pisteen ja tuuliajolla. Verisuonten tiheys kerrottiin mm kohden

2. Sekä suonen halkaisijan ja verisuonten tiheys on korotettu kasvainkudoksessa (B) verrattuna normaaliin limakalvoon (A). * Asteikkomitta on 50 pm.

immunohistokemia

Vastaavat koepalat vieruskudos CLE koepaloja valmistettiin immunohistokemiallinen tutkimus anti-CD31-vasta-aineen sekä normaali ja peräsuolen syövän näytteitä . Normaalissa limakalvo, MVD oli 211,2 ± 42,9 ollessaan pahanlaatuinen kudos oli 351,3 ± 39,6 /mm

2 (p = 0,0637). Verisuonten pinta-ala, joka on laskettu prosenttiosuutena ROI koko kuva-alueella, oli suurempi kasvainnäytteet (8,5 ± 2,1%) verrattuna normaaliin peräsuolen kudokseen (2,9 ± 0,5%), p = 0,0735 (kuvio 3). Yhteenvedossa verisuonten parametrien mitataan ensisijaisen peräsuolen syöpä ja vastaavat normaali limakalvo, mistä immunohistokemia ja CLE näytteitä, esitetään taulukossa 1.

Helotaustanäkymä kuvia formaliinilla ja parafiiniin upotettuja koepaloja normaalista ja ensisijainen paksusuolen syöpä värjättiin CD31 ilmenee: verisuonten säännöllisesti jaettu suoliston rauhaset normaalissa paksusuolen limakalvo (A); Useiden epäsäännöllinen alusten kasvaimensisäisiä strooman pahanlaatuisissa näytteistä (B); samat kuvat verisuoni merkityt alueet automaattiseen laskenta (C, D). * Mittakaava on 50 pm.

Keskustelu

Koska alkuperäisen hypoteesin roolin angiogeneesi syövän etenemistä muotoillut Juudan Folk- neljä vuosikymmentä sitten [18], meidän perusteellisen ymmärtämisen tämä prosessi on edennyt ja useita antiangiogeenisestä lääkkeet ovat joko tällä hetkellä kliinisessä käytössä tai kliinisen tutkimuksen [4]. Tästä huolimatta on vielä monia huolenaiheita, jotka liittyvät valintaan optimaalinen annostus ja ajoitus, ennustaminen ja seuranta potilaan vaste, jotka rajoittavat käyttöä angiogeneesin hoitoa syöpäpotilaat. Tässä tutkimuksessa olemme käyttäneet CLE endoskoopin kuvan verisuonten rakenteessa tuoreista koepaloja normaalista ja pahanlaatuisten peräsuolen kudosten ja vertasivat tuloksia perinteisiin histopatologiselle tekniikoilla.

Tietääksemme tämä on ensimmäinen raportti histologinen kuvantaminen alusten saadaan CLE soveltamalla fluoresoivasti leimattuja vasta-aineita vastaan ​​endoteelimerkkiaineelle (CD31). Tämä menetelmä tuottaa samanlaisia ​​tuloksia kuin perinteinen Immunohistokemian mutta tuoreisiin irtoava kudosta. Siten mikä tahansa käsittely artefakti koepaloja vältetään ja kuvantamisen kudoksen suoritetaan sen luonnollisessa tilassa lyhyen ajan jälkeen koepala kokoelma, joka nopeuttaa huomattavasti diagnoosi prosessi. Valitsimme koska molekyylikohteessa yleiseurooppalainen endoteelimerkkiaine merkintöjä sekä normaalin ja kasvaimen verisuonten saamiseksi ero morfometrisiin arviointi. Visuaalisella tarkastelun perusteella konfokaali optinen kohdat osoittivat eroja verisuoni malleja normaalin ja kasvainkudoksen. Pahanlaatuinen verisuonten näytti enemmän laajentuneet ja mutkikkaita verrattuna säännöllinen esiintyminen normaalin aluksia. On tunnettu tosiasia, että kasvaimen verisuonia ovat epänormaaleja niiden rakennetta ja toimintaa. Tämä näkyi myös edellisten CLE luokituksia neoplasian laskimonsisäisen annon fluoreseiini [7], [19]. Kuitenkin tämä epäspesifinen varjoainetta taipumus diffundoitua liikaa osaksi välitilaan kasvaneen läpäisevyyden patologisen aluksia. Tämän seurauksena verisuonten rajat ovat piilossa ja niiden kvantitatiivisia arvioita tulee haaste. Esillä lähestymistapa, selektiivinen värjäys alusta, joiden endoteelimerkkiaineelle on tämän haitan.

Perinteisissä immunohistokemiallisella värjäyksellä protokollia kudos tyypillisesti leikattiin 4 um: n paksuisiksi viipaleiksi jotka vangitsevat vain poikkileikkauksesta verisuonten eri kulmista. Ehdotettu CLE kuvantaminen menetelmä mahdollistaa näytön koko verisuonten segmenttien saman kuvan. Olimme siis voitava suorittaa morfometrisen analyysi optisella konfokaali kohdat, jotka tulivat vahvistaa laatuerot jo todettu näiden kahden valtimoverisuoniverkostoihin. Huomasimme, että kasvaimen verisuonten on huomattavasti suurempi keskimääräinen halkaisija kuin normaali alusta (13,5 um

vs.

8,5 pm, p = 0,0049). Kudoksen näytteitä kolorektaalisyövän alueet, oli 28,5%: n nousu verisuonten tiheyden verrattuna normaaliin limakalvoon (242,4

vs

. 188,7 alusten /mm

2). Vain yksi parametri (alus halkaisija) oli tilastollisesti merkitsevä tutkimuksessamme. Tämä voi selittyä pieni määrä näytteitä mukana meidän analyysi. Jatkotutkimuksissa suuremmassa potilaan näytettä tarvitaan vahvistaa havainnot nykyhetkeä pidemmälle proof of concept tutkimuksessa.

verisuonten parametrit saadaan CLE ovat verrattavissa perinteisiin menetelmiin ja julkaistusta kirjallisuudesta [20], [21] , [22]. CLE tulokset todensi klassinen immunohistokemiallisella tekniikalla, joka paljasti myönteinen signaali CD31 sekä ohjaus ja pahanlaatuisten näytteitä. Oli samankaltainen myös lisääntynyt MVD ja verisuonten alueen näytteistä ensisijaisen peräsuolen syöpä verrattuna normaaliin limakalvolle. Aiemmin raportoitu tuloksia paksu- ja verisuonten morfometria vaihtelevat eri tutkimuksissa johtuvat eroista menetelmiä ja käsittelytekniikoita [20], [21], mutta kaiken kaikkiaan samaa mieltä tuloksemme. Tutkimuksessa, normaalin paksusuolen mikroverenkiertoa syöpymistä valu halkaisija on 10 um ilmoitettiin precapillary arterioles limakalvojen plexus [22]. Immunohistokemiallisella värjäyksellä CD34, myös yleiseurooppalainen endoteelimerkkiaineelle keskimääräinen verisuonten halkaisija normaalin paksusuolen limakalvo oli 7,6 ± 1,5 um [21].

proof of concept havainnot osoittavat toteutettavuus tekniikan ja voisi pohjustaa jatkotutkimusta. Vaikka tässä tutkimuksessa käytetty yleiseurooppalainen endoteelimerkkiaineelle tuleva samanlaiset tutkimukset voitaisiin kohdistaa muita merkkiaineita lisääntyvä endoteelin, kuten VEGFR2, jotka ovat merkityksellisiä kasvaimen aiheuttamaa angiogeneesiä. Vain vähän aikaa (yhden tunnin välillä kerätä koepala ja kuvantamisen CD31 merkitty kudoksen CLE) ja käyttämällä standardin värjäytymisen protokolla tuoreen koepaloja näytteiden tekee kohdennettua CLE tekniikka soveltuu hoitopaikassa edellyttäen, että laitteessa on käytettävissä.

Nykyinen tulokset ja ennen raportteja samanlaisia ​​lähestymistapoja mukaan CLE on potentiaalia kuvantamisen uudissuonittumisen

in situ

live menettelyjä. Koska antiangiogeenisiä lääkkeiden taipumus normalisoimaan verisuonien lyhyeksi aikaa useita päiviä muutaman viikon on toivottavaa löytää tapa seurata verisuoniverkoston remontin aikana tilaisuus, kun kasvain tulee myös reagoimaan paremmin kemoterapiaa ja /tai sädehoitoa. [23] CLE, yksin tai yhdessä muiden molekyyli- ja solutason biomarkkereita, voitaisiin käyttää tähän nimenomaiseen tarkoitukseen, vireillä löytö uusien kohdennettujen varjoaineiden. Kuten mainittiin, viimeaikaiset raportit osoittavat hyvää ennakkotieto fluoresoivasti leimattuja vasta-aineita kohdistamista EGFR tai VEGF, mikä viittaa, että tällaisia ​​immunoendoscopy lähestymistapoja. Kuitenkin inhimillisen käytön kohdennettujen yleiseurooppalainen endoteelisolujen markkereita, kuten fluoresoivasti leimattua anti-CD31-vasta-aineita saattaa merkitä voimassa reaaliaikainen vaihtoehto tavanomaiselle MVD analyysi kiinteiden biopsianäytteissä.

Yhteenvetona osoitimme, että valikoiva kuvantaminen verisuonten on mahdollista CLE käyttämällä fluoresoivasti leimattuja vasta-aineita kohdistaminen tiettyyn endoteelimerkkiaine tuoretta koepaloja. Poissa morfometrisiin analyysi konfokaali kuvien ylimääräisiä kuvankäsittelyohjelmisto osoittivat merkitsevästi erilaisia ​​kuvioita välillä normaalin ja pahanlaatuisen verisuoniverkostoja. Tulevaisuudessa tätä lähestymistapaa voitaisiin käyttää paremmin valittaessa potilaita kliinisiin tutkimuksiin ja järkevämpi seurantaa vaikutusta verisuoniin antiangiogeenistä aineina yksilöllisesti räätälöityjä hoitoja.