Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Anacardic happoa (AA) on seos, jossa 2-hydroksi-6-alkylbenzoic hapon homologit. Tietyt kasvainten vastainen toiminta AA on raportoitu erilaisia ​​syöpiä. Kuitenkin toiminta AA munasarjasyöpä, tähän mennessä, on jäänyt tuntemattomaksi.

Methods

munasarjasyöpä solulinjoja altistettiin AA, jonka jälkeen solujen lisääntymistä, apoptoosin, invaasio ja muuttoliike määritykset suoritettiin. Falloidiinia värjäys käytettiin tarkkailla lamellipodioihin muodostumiseen. RT-PCR (RT-PCR) ja western-blottauksella arviointiin käytettiin mRNA: n ja proteiinin ekspressiotasot fosfatidyyli-3-kinaasi (PI3K), verisuonen endoteelin kasvutekijä (VEGF) ja kaspaasi 3.

Tulokset

Tuloksemme osoittivat, että AA edistää munasarjasyövän solujen lisääntymistä, estää myöhään apoptoosin, ja indusoi solujen vaeltamiseen ja invaasio, sekä lamellipodioihin muodostumista. AA altistus merkittävästi ajan PI3K ja VEGF-mRNA ja proteiinin ilmentyminen, mutta toisin, se alassäädetty kaspaasi 3 mRNA ja proteiinin ilmentyminen verrattuna käsittelemättömään kontrolliin soluihin.

Johtopäätös

Taken yhdessä, tuloksemme osoittavat ensimmäistä kertaa, että AA saattaa voimistaa leviämisen, invaasio, etäpesäke ja lamellipodioihin muodostumista munasarjasyövän solulinjoissa kautta PI3K, VEGF ja kaspaasi 3 polkuja.

Citation: Xiu YL, Zhao Y, Gou WF, Chen S, Takano Y, Zheng HC (2014) Anacardic Acid Parantaa leviämisen ihmisen munasarjasyöpäsoluja. PLoS ONE 9 (6): e99361. doi: 10,1371 /journal.pone.0099361

Toimittaja: Javier S. Castresana, Navarran yliopisto, Espanja

vastaanotettu: 18 joulukuu 2013; Hyväksytty: 14 toukokuu 2014; Julkaistu: 12 kesäkuu 2014

Copyright: © 2014 Xiu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Shenyang lahjakkaimmat Foundation of China; Shenyang Science and Technology Grant (F11-264-1-10, F12-277-1-01); tukema hanke Scientific Research Fund of Liaoningin maakunnan opetusviraston (L2010633); Liaoningin Science and Technology Grant (2009225008-+11, 2013021077); ja Natural Tiedesäätiö of China (81172371, 81202049). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Munasarjasyöpä edelleen yleisin kuolinsyy gynekologisista syöpäsairauksia [1], [2]. Ensisijainen munasarjasyövän hoitoon on kirurginen resektio näkyvän taudin seuraa adjuvanttihoitoa, yleensä koostuu yhdistelmästä platinapohjaisen ja taksaania kemoterapiaan. Koska toistuminen ja etäpesäke vakavasti ennustetta munasarjasyöpä, viiden vuoden eloonjäämisaste kaikissa vaiheissa munasarjasyövän on arvioitu olevan 35-38% [3], [4]. Siten tutkimus uusien toisen vaiheen kemoterapia lääkkeitä, jotka estävät metastaattinen ja toistumisen prosessit munasarjasyöpä, on tullut keskittyä viimeaikainen tutkimus edun niiden kehitys voi parantaa viiden vuoden eloonjäämisluvut.

Anacardic happo (AA) on seos, jossa 2-hydroksi-6-alkylbenzoic happo homologit ja esiintyy yleisesti kasveissa Anacardiaceae perheen [5], [6]. Se on ravinnon komponentti löytyy cashew omena (

Anacardium occidentale

) ja neidonhiuspuu (

Neidonhiuspuut

) lehtiä ja hedelmiä. AA toimii mitokondrion erotin oksidatiivisen fosforylaation [7] ja herkistää ihmisen kasvainsoluja säteilylle estämällä histoni asetyylitransferaasivaikutus [8]. AA on lisäksi osoittanut tiettyjä antituumoriaktiivisuuksia eturauhassyövän, keuhkosyövän ja rintasyöpä, sekä joitakin muita syöpiä, ja on ajatus käyttämään sen toiminnan kautta eri mekanismien [9] – [13]. Viime aikoina yhä useammat tutkimukset ovat tutkineet rooli AA syövän, siinä toivossa, että se voidaan myöhemmin soveltaa kliinisen hoidon. Kuitenkin toiminta AA munasarjasyövän on jäänyt tuntemattomaksi. Siten meidän tutkimus osoittaa rooli ja mahdollisuudet mekanismit AA munasarjasyövän ensimmäistä kertaa.

Materiaalit ja menetelmät

Soluviljely

munasarjasyöpäsolulinjoihin, SKOV3 ( serous papillaarinen kystinen adenokarsinooma), HO8910 (serous kystinen adenokarsinooma) ja erittäin invasiivisia HO8910 (HO8910-PM), hankittiin ATCC. Sisplatiini kestävä SKOV3 (SKOV3 /DDP) ostettiin tuumorisolun Bank of Kiinan Academy of Medical Science (Peking, Kiina). Soluja ylläpidettiin RPMI 1640-alustassa (HO8910, HO8910-PM ja SKOV3 /DDP) ja McCoyn 5A-alustassa (SKOV3), jota oli täydennetty 10% naudan sikiön seerumia (FBS), 100 yksikköä ml

-1 penisilliiniä (SKOV3 /DDP oli myös täydennetty 20 ng ml

-1 sisplatiinia, (DDP) ja 100 ug ml

-1 streptomysiiniä. Solulinjat pidettiin kosteutetussa ilmakehässä 5% CO

2 37 ° C: ssa tai ilman AA hoito (Sigma, Saint Louis, America). Kaikki solut otettiin talteen sentrifugoimalla sen jälkeen, kun solut altistettiin trypsiini, huuhdottiin fosfaattipuskuroidulla suolaliuoksella (PBS) ja suoritettiin kokonaisproteiinin uutto sonikoimalla radioimmunologisissa määritys (RIPA-puskuri).

Proliferaatiomääritys

Cell Counting Kit-8 (CCK-8, Xiongben, Japani) käytettiin määrittämään elävien solujen lukumäärän kautta kolorimetristä määritystä. Lyhyesti, 2,5 x 10

3 solua /kuoppa siirrostettiin 96-kuoppaiselle levylle ja annettiin tarttua. eri ajankohtina, 10 ui CCK-8-liuosta lisättiin kuhunkin kuoppaan ja levyä sen jälkeen inkuboitiin 3 tunnin ajan 37 ° C: ssa ennen tallennus optinen tiheys 450 nm: ssä.

Solusyklianalyysiä

Kun oli inkuboitu 48 tuntia 37 ° C: ssa ilmakehässä, jossa 5% CO

2, solut irrotettiin trypsinoimalla, kerättiin, pestiin kahdesti PBS: llä ja kiinnitettiin 10 ml: ssa jääkylmää etanolia (70%), vähintään 2 tuntia. Solut pestiin kahdesti PBS: llä jälleen ja inkuboitiin 500 ui RNaasi (0,25 mg ml

-1) 37 ° C: ssa 30 minuutin ajan. Solut pelletoitiin, suspendoitiin uudelleen propidiumjodidi (PI) pitoisuutena 50 ug ml

-1 ja inkuboitiin pimeässä 4 ° C: ssa 30 minuutin ajan. Solusyklin analyysi suoritettiin analysoimalla PI-värjäyksellä virtaussytometrialla.

apoptoosimäärityksessä

Virtaussytometria suoritettiin seuraavasti värjäyksen PI ja FITC-leimattua anneksiini V (KEYGEN Biotech, Nanjing, Kiina) mukaan valmistajan protokollan havaita fosfatidyyliseriinin ulkoistamisen päätepisteenä indikaattorina varhaisen apoptoosin soluissa. Lyhyesti, sen jälkeen, kun oli inkuboitu 48 tuntia 37 ° C: ssa ilmakehässä, jossa oli 5% CO

2, solut pestiin kahdesti jääkylmällä PBS: llä, suspendoitiin uudelleen 1 x sitomispuskurissa pitoisuutena 1 x 10

6 solut ml

-1 ja inkuboitiin sitten 200 ui 1 x sitomispuskurissa ja 10 ui FITC-anneksiini V: näytteitä pyörresekoitettiin varovasti ja inkuboitiin 15 minuutin ajan 25 ° C: ssa pimeässä, sitten 300 ui 1 x sitomispuskuria ja 5 ui PI lisättiin kuhunkin putkeen. Näytteitä pyörresekoitettiin varovasti ja inkuboitiin vähemmän kuin 1 tunnin ajan 25 ° C: ssa pimeässä. Virtaussytometria suoritettiin 1 tunnin kuluessa inkuboinnin.

Haavan paranemista määrityksessä

Solut ympättiin tiheydellä 1,0 x 10

6 solua /kuoppa 6-kuoppaisille viljelylevyille. Kun he olivat kasvatettiin yhteen yksisolukerros oli naarmuuntunut pipetillä kärki (200 ui) luoda tyhjästä. Sitten solut pestiin PBS: llä kolme kertaa, ja viljeltiin FBS-alustassa. Solut valokuvattiin 0, 12, 24, 48 ja 72 h (

n

= 9) ja naarmuuntuu alueet mitattiin käyttämällä Image ohjelmistoa. Arpeutumisprosessit laskettiin seuraavalla kaavalla:

haavanparantumis- rate = (pinta-ala alkuperäinen haava – alue varsinaisen haavan eri aikoina) /alue alkuperäisen haavan x 100%.

Cell invasion määrityksiä

invaasiomääritys, 5 x 10

4 solut uudelleensuspendoitiin FBS-vapaa RPMI-1640 ja kylvetään yläosaan kammioihin Matrigel päällystetyn TranswellTM insertit (BD Bioscience, San Jose, CA, USA). Alempi osastoon kammion sisälsi 10%

v /v

FBS kuin kemoattraktantti. Kun oli inkuboitu 48 tuntia 37 ° C: ssa ilmakehässä, jossa oli 5% CO

2, solut yläpinnan kalvon pyyhittiin pois, ja solut alemmalla pinnalla kalvon pestiin PBS: llä, kiinteä 100% metanolia ja värjättiin kristallivioletilla väriaineen määrittää laajuus hyökkäyksen.

reaaliaikainen RT-PCR (reaaliaikainen RT-PCR) B

Kokonais-RNA uutettiin munasarjakarsinoomasekvenssin solulinjoissa käyttämällä TRIzol (Takara, Kioto, Japani). Reaaliaikainen RT-PCR suoritettiin 2 ug kokonais-RNA: sta käyttämällä AMV-käänteistranskriptaasia ja satunnaisia ​​alukkeita (Takara, Kioto, Japani). PCR-alukkeet suunniteltiin sekvenssien mukaisesti GeneBankissa ja ne on lueteltu taulukossa S1. Monistaminen cDNA suoritettiin valmistajan protokollan käyttämällä SYBR Esisekoite Ex Taq II (Takara, Kioto, Japani) ja

GAPDH

sisäisenä kontrollina. Lyhyesti, RT-PCR-monistus cDNA kutakin aluketta suoritettiin lopullisessa tilavuudessa 20 ui, joka sisälsi 10 ui SYBR Esiseos Ex Taq (x 2), 0,08 ui alukkeet, 0,4 ui ROX viite väriainetta ja 1 ui templaatti-cDNA (50 ug ui

-1). Protokollan parametrit olivat seuraavat: aluksi inkuboitu 95 ° C: ssa 30 s, jota seuraa 40 sykliä denaturointi 95 ° C: ssa 5 s ja pariutuminen 60 ° C: ssa 34 s. Kaikki PCR kokeet mukana ei-mallin ohjaus ja

GAPDH

sisäisenä kontrollina. Suhteellisen geeni-ilmentymisen tason (määrän kohde-normalisoitu endogeeninen kontrolli-geeni) laskettiin käyttäen vertailevaa CT-menetelmä: 2

-ΔΔCt. Sekvenssit alukkeiden reaaliaikaista kvantitatiivista PCR: ää toimitetaan taulukossa S1.

Western blot-analyysi

Protein määritykset suoritettiin Bradfordin menetelmällä käyttäen Bio-Rad proteiinimäärityksellä kit (Bio -Rad, Hercules, CA, USA). Denaturoitu proteiinit erotettiin natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-PAGE) 12% akryyliamidi geelit, ja sitten siirrettiin Hybond-kalvoja (Amersham, Saksa). Membraanit blokattiin yli yön 5% rasvatonta maitoa Tris-puskuroidussa suolaliuoksessa, jossa Tween 20 (TBST; 10 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl, 0,1% Tween 20). Immunoblottausta, kalvoja inkuboitiin 1 h: n primaarisen vasta-aineen, huuhdeltiin TBST: llä ja inkuboitiin anti-kani-anti-hiiri- tai anti-vuohi-IgG-vasta-aineita konjugoituna piparjuuriperoksidaasiin (HRP; Dako, Carpinteria CA, USA), jonka laimennus 1:1000. Levittämisen jälkeen vahvistettua kemiluminesenssireagenssia (ECL) -Plus detektioreagensseja (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), proteiini bändit olivat visualisoitu käyttäen röntgenfilmin (Fujifilm, Tokio, Japani). Immunoblottauksia pestiin western blotting (WB) strippaus (pH 2-3, Nacalai, Tokio, Japani) ja tutkittiin käyttäen monoklonaalinen vasta-aine on spesifinen β-aktiini (1:1000; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA ).

Immunofluoresenssi

Soluja kasvatettiin lasipeitinlevyille, kiinnitettiin PBS: llä, joka sisälsi 4% formaldehydiä 10 minuutin ajan ja tehtiin läpäiseviksi 0,2% Triton X-100 PBS: ssa 10 minuutin ajan huoneenlämpötilassa. PBS-pesun jälkeen soluja inkuboitiin yön yli 4 ° C: ssa Alexa Fluor 594 falloidiinia (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), jotta lamellipodioihin voidaan visualisoida. Tumat värjättiin 1 ug ml:

-1 (DAPI; Sigma-Aldrich St. Louis, MO, USA) 15 minuutin ajan 37 ° C: ssa. Peitinlasit Sitten asennetaan SlowFade Gold mikroskooppipreparaatin haalistumista estävää Reagent (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ja niitä tarkkailtiin konfokaalisella laser mikroskoopilla (Olympus, Tokio, Japani).

Tilastollinen

Tilastollinen arviointi suoritettiin käyttäen spearmanin järjestyskorrelaatiokerroin analysoida asetetuilla tiedoilla, ja U-testi erottaa keinoja eri ryhmiin.

p

-arvo 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä. SPSS v. 10,0 ohjelmisto (SPSS, Chicago, IL, USA) käytettiin analysoimaan kaikki tiedot.

Tulokset

Vaikutukset anacardic happojen annetun munasarjakarsinoomasolut

kaksi paria solulinjojen, SKOV3- ja SKOV3 /DDP soluja, ja HO8910 ja HO8910-PM-soluja, altistettiin AA (0 uM, 2,5 uM, 5 uM, 10 uM, 15 uM, 20 uM) ja altistettiin CCK-8 proliferaatiomäärityksillä (kuvio 1A,

p 0,05

). SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 ja HO8910-PM solut osoittivat voimakkaampaa leviämisen hoidetuilla AA verrattuna ohjaus solulinjoilla. Huomasimme, että toiminta AA edistämisessä proliferaatiota positiivinen korreloi sen pitoisuus, 10 uM AA voi edistää leviämisen merkittävästi, niin valitsemme 10 uM, 15 uM, 20 uM koeolosuhteet suorittaa seuraava koe. AA indusoi S proliferaatio SKOV3 ja SKOV3- /DDP soluja; päinvastoin, AA aiheuttama G1 pidätys HO8910 ja HO8910-PM soluissa (kuvio 1 B,

p 0,05

). Virtaussytometrinen apoptoosin analyysi osoitti, että AA hoito (15 uM) esti myöhään apoptoosin SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 ja HO8910-PM soluissa (kuvio 2,

p 0,05

), ja haavan paranemista ja invaasio määritykset osoittivat, että AA edistetään solujen vaeltamiseen ja invaasiota in pitoisuudesta riippuvalla tavalla (kuvio 3A ja B,

p 0,05

). Lisäksi AA-altistus indusoi lamellipodioihin muodostumista kaikissa neljässä solulinjoissa, kuten on esitetty F-aktiini rakenne (kuva 4).

CCK-8 soluproliferaatiomääritykset osoittavat, että AA hoito SKOV3 ja SKOV3 /DDP, ja HO8910 ja HO8910-PM cell-viivaparia indusoi solujen lisääntymistä (A). AA indusoi S proliferaatio SKOV3 ja SKOV3- /DDP soluja, ja G1 pidätys HO8910 ja HO8910-PM-solut (B). *

p 0,05

. Tulokset edustavat kolmea erillistä koetta; Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± keskihajonta.

Virtaussytometrinen apoptoosin analyysi osoittaa, että AA hoito inhiboi myöhään apoptoosin SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 ja HO8910-PM-soluja. *

p 0,05

. Tulokset edustavat kolmea erillistä koetta; Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± keskihajonta.

Haavan paranemista määritykset osoittavat, että AA hoito parantaa kykyä SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 ja HO8910-PM-solut voivat siirtyä konsentraatiosta riippuvalla tavalla (A). Käsitellyt solut osoittavat myös invasiivista potentiaalia (B). *

p 0,05

. Tulokset edustavat kolmea erillistä koetta; Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± keskihajonta.

AA altistus indusoi lamellipodioihin muodostumista kaikissa neljässä solulinjoissa kuten on osoitettu F-aktiini rakenne.

mRNA ja proteiinin ilmentymistä fenotyypin liittyvien molekyylien munasarjakarsinoomasolut altistumisen jälkeen AA

hoidon jälkeen AA, mRNA ilmaisu kaspaasi 3 SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 ja HO8910-PM solulinjat olivat alhaisemmat kuin ne havaitaan kontrolli soluissa. Sitä vastoin mRNA-ekspressiotasot PI3K: n ja VEGF olivat korkeammat kuin kontrollisolut (kuvio 5A,

p 0,05

). Western blot analyysi proteiinin ekspressiotasoja osoitti, että AA altistuminen up-PI3K ja VEGF-proteiinin ilmentymistä, ja alassäädetty kaspaasi 3-proteiinin ilmentymistä sekä solun viivaparia (kuvio 5B,

p 0,05

).

Effects of AA valotuksen mRNA: n ilmentymisen tasoa proliferaation ja apoptoosiin liittyvien molekyylien ja niiden vastaavien proteiinien, että munasarjasyöpäsolulin–line paria käyttäen reaaliaikaista RT-PCR: llä (A) ja western blot-analyysi (B). *

p

0,05. Tulokset edustavat kolmea erillistä koetta; Tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± keskihajonta.

Keskustelu

AA esiintyy yleisesti kasveja Anacardiaceae perheen ja on ravinnon komponentti löytyy cashew omena (

Anacardium occidentale

) ja neidonhiuspuu (

Neidonhiuspuut

) lehtiä ja hedelmiä, ja löytyy useita lääkekasvien joilla on potentiaalia aktiivisuutta syöpää vastaan ​​solulinjoja [14] – [15]. Useissa tutkimuksissa on raportoitu, että AA: lla syövän vastainen rooli, joka voi liittyy alennettu ilmaus surviviinin ja X-kromosomiin liittyvä estäjä apoptoosin proteiinia, jotka ovat anti-apoptoottisia proteiineja liittyy solujen selviytymisen ja radioresistance ja säteilylle herkäksi aivolisäkeadenooma solujen [ ,,,0],16]. AA soittaa myös antibakteerista rooli ja aikaisemmassa tutkimuksessa keskityttiin rakenne-aktiivisuus-suhteita paljasti, että karboksyyliryhmä aromaattisen renkaan ja tyydyttymätön sivuketju anacardic hapon johdannainen ovat tärkeitä liikkuvuuden esto ja lyyttisen aktiivisuuden AA vastaan ​​zoospores [17 ]. Se on myös tärkeä rooli, koska antioksidanttia ja osoittaa liikalihavuuden ja anti-inflammatorinen toiminta [18] – [20].

AA estää aktivointi sekä indusoitavissa ja ilmentämällä tumatekijä-kappa B (NF-kB), joka aktivoituu karsinogeenien ja kasvutekijät, ja uskotaan voimistavan apoptoosin kasvainsoluissa pitoisuudessa 25 uM [9]. Samaan aikaan edellinen tutkimus on osoittanut sarjan kautta tutkimusten, kuten havaitseminen sytotoksisuuden, ilmentymisen asiaan proteiinien ja Ca

2+ liikkuvuutta, että AA indusoi ER (endoplasmakalvoston) stressiin ja autophagy keuhkosyövän soluja pitoisuutena 10 uM [10]. Haavan paranemista muuttoliike määrityksiä, TranswellTM muuttoliike määritykset ja hiirimallissa analyysit ovat lisäksi ehdottaneet, että AA voi toimia voimakas kasvaimen angiogeneesinestäjän kohdistamalla Src /FAK /Rho GTPaasi signalointireitistä, mikä johtaa merkittäviin tukahduttaminen eturauhasen kasvaimen kasvua pienillä annoksilla ( 5-50 uM) [11]. AA on esitetty sarjan kokeita, mukaan lukien solusyklin analyysi, RT-PCR: n ja WB, estää LNCaP-solujen lisääntymisen indusoimalla G1 /S solusyklin pysähtymisen ja apoptoosin pitoisuuksina 5, 25, 125 uM [12]. Kuitenkin, AA ei ole sovellettu kliinisissä tilanteissa, vaikka monet ihmiset uskotaan ottaa sen terveydenhuollon täydentää. On huomattava, että toisin kuin joissakin muissa syövissä, nykyisen tutkimus osoittaa, että AA voi edistää proliferaatiota ja estävät apoptoosin munasarjasyöpäsoluja, mikä osoittaa, että toiminta AA munasarjasyövän solulinjoissa on kiistanalainen kysymys.

liittyvä molekyylitason mekanismeja AA munasarjakarsinoomasolut on tähän mennessä jäänyt tuntemattomaksi. Tutkia liittyvien mekanismien munasarjasyöpäsoluja, valitsimme kaksi paria munasarjasyöpäsolulinjoihin perustuu niiden lääkeresistenssin ja invasiivisia kykyjä (SKOV3 ja SKOV3 /DDP sekä HO8910 ja HO8910-PM, vastaavasti). Meidän kokeelliset tutkimukset osoittivat, että AA merkittävästi indusoi solujen elinkelpoisuutta munasarjasyöpäsoluja 15 uM. On huomattava, että vaikka AA indusoi soluproliferaatiota kaikkien solujen pitoisuudesta ja ajasta riippuvaisella tavalla sekä lääkeaineille (SKOV3 /DDP) ja erittäin invasiivinen (HO8910-PM) solut osoittivat suurempaa herkkyyttä AA altistumisen joka voi johtua niiden suuremman osan kantasolujen (kasvaimen aloitetaan solut) tai lisääntynyt kantasolun kaltaisia ​​ominaisuuksia näissä soluissa. AA indusoi S proliferaatio SKOV3 ja SKOV3- /DDP soluja; päinvastoin, se indusoi G1 pidätys HO8910 ja HO8910-PM soluissa. Virtaussytometrinen apoptoosin analyysi osoitti, että hoito AA esti myöhään apoptoosin SKOV3, SKOV3 /DDP, HO8910 ja HO8910-PM soluissa. Oli tapaus raportoitu, rintasyövän solussa, AA voi edullisesti estää ER-α (estrogeenireseptori-α) -positiivinen rintasyöpä solujen lisääntymistä suoralla estrogeenireseptorin DNA: ta sitovan domeenin (ER DBD) vuorovaikutus [13]. Olemme edelleen täydellinen immunofluoresce koe ekspression havaitsemiseksi ER neljä munasarjasyövän solulinjoissa, tulos osoitti, että neljä munasarjasyövän solulinjoissa kaikilla on ER ilmaisua. Sitten ehdotamme, että ER-negatiiviset tai ER-positiivisen ei voi vaikuttaa AA: n toiminto munasarjasyövän solulinjoissa, ero AA: n toiminto rintasyöpäsolulinjoissa ja munasarjasyövän solulinjoissa voi kauttasiirto eri reittejä. Tämän tutkimiseksi löytää tarkemmin, arvioimme apoptoosireitin liittyvä osoitin, kaspaasi 3 [25] – [27], ja totesi, että sen mRNA ja proteiini ekspressiotasot olivat merkittävästi alemmat soluissa altistuvat AA. Eri mieltä joidenkin kokeiluja [28] – [31]. Näin ollen meillä katsotaan, että AA voi olla pro-kasvain toiminto munasarjasyöpäpotilailla.

tutkia tätä löytää edelleen, tutkimme useita muita indikaattoreita ja totesi, että ilmaukset PI3K mRNA ja proteiini munasarjasyöpäsoluja käsiteltiin AA olivat suuremmat verrattuna käsittelemättömiin kontrollisoluihin. Tuloksemme ovat sopusoinnussa että Zachary et al. [21], joka ilmoitti, että PI3K /AKT /mTOR-reitti on monipuolinen ja vaikuttaa yhtä moninaiset näkökohdat munasarjakasvain kehityksen etenemiseen ja potilaan eloonjäämiseen. Useita kokeita on suoritettu tutkimaan kohdennettuja syöpähoidon kautta PI3K koulutusjakso. Itse asiassa hiljattain mahdollinen, suuren mittakaavan genominen analyysi osoitti, että PI3K /AKT-reitin usein vapautettiin korkealaatuista serous munasarjakasvaimia [22] – [23]. PI3K voidaan pitää merkittävänä välittäjänä selviytymisen signaaleja, jotka suojaavat munasarjasyövän soluja apoptoosin induktion [24]. Tästä syystä me olettaa, että AA voi edistää leviämisen munasarjasyövän kautta PI3K koulutusjakso. Lisäksi meidän tutkimus on osoittanut, että AA edistää solujen vaeltamiseen ja invaasiota pitoisuudesta riippuvaisella tavalla, ja AA altistus indusoi lamellipodioihin muodostumista kaikissa neljässä solulinjoissa tutkittiin, kuten on esitetty tiiviisti keskittynyt F-aktiini rakenne.

Olemme myös havainneet invaasiota ja etäpesäkkeiden liittyviä indikaattoreita ja totesi, että ekspressiotasot VEGF-mRNA: n ja proteiinin AA-käsitellyissä soluissa lisääntynyt verrattuna kontrollisoluihin. VEGF on hyvin tunnettu yhtenä tärkeimmistä kasvutekijöiden mukana astiassa muodostumiseen [32], [33]. On näyttöä siitä, että epänormaali ilmentyminen VEGF munasarjasyövän liittyy läheisesti kasvaimen invaasio ja etäpesäkkeiden [34], [35]. Kuten olemme edellä, AA: lla on monipuolinen rooli erilaisissa syövissä ja toimii läpi useita reittejä. Esimerkiksi, voimakas inhiboiva aktiivisuus AA VEGF-stimuloimaa muuttoliike, kapillaarirakenteella muodostumista, kiinnitys ja paksilliinin aktivoitumisen endoteelisoluilla on aiemmin raportoitu [11]. Kuitenkin myös tutkimuksessa, AA havaittiin edistää VEGF: n ilmentymistä mRNA: n ja proteiinin munasarjasyöpäsoluja. Siksi me spekuloida, että AA voi edistää muuttoliikettä ja hyökkäyksen munasarjasyövän kautta VEGF-reitin.

Yhteenvetona ehdotamme, että AA voi voimistaa lisääntymistä, invaasiota ja etäpesäkkeiden kautta PI3K ja VEGF reittejä munasarjasyövän solulinjoissa . Kuitenkin poikkeava erityinen molekyylimekanismeihin AA munasarjasyöpäpotilailla on vielä tutkittava ja sen kliinisten manipulointi on myös varovaisesti harkita tulevaisuudessa.

tukeminen Information

Taulukko S1.

Alukesekvenssit valittiin reaaliaikaisen RT-PCR

doi: 10,1371 /journal.pone.0099361.s001

(DOC)