Krooninen sairaus

tiivistelmä

Huolimatta krooninen tulehdus, psoriläiskät tuskin koskaan edetä ihosyöpä. Poikkeava toiminta CCHCR1 geenin (Coiled-Coil α-hammaspyörä- Rod proteiini 1, HCR) sisällä PSORS1 lokuksen voi edistää psoriaasin puhkeamiseen. Kuten CCHCR1 ilmaistaan ​​tiettyjen syöpien ja säätelee keratinosyyttien (KC) lisääntymistä siirtogeenisen hiiren mallia, tutkimme sen suhteen proliferaation ihon okasolusyöpä (SCC) solulinjojen ilmentyminen paneelit ja kvantitatiivinen RT-PCR ja ihotuumoreissa immunohistokemiallisesti . CCHCR1 proteiini havaittiin työntää rajalla SCC: n ja vuori tyvisolusyöpä saaria. Eroaa psoriasis, Ki67 oli vastaava ilmaisu kaavaa kuin CCHCR1. Voimakkain CCHCR1 värjäytyminen ilmennyt aloilla positiivinen epidermaalisen kasvutekijän reseptori (EGFR). Expression of CCHCR1 mRNA yliaktiivista 30-80% vuonna SCC linjat verrattuna normaaliin KCS ja korreloi positiivisesti Ki67 ilme. Aggressiivinen ja invasiivisia kasvainsolulinjoja (RT3, Fadu) ilmaisi CCHCR1 mRNA vähemmän kuin ei-tuumorigeenisiä HaCaT soluissa. Lisäksi kasvainjouduttimet okadahappo ja menadionia vaimentua CCHCR1 mRNA. Olemme päätellä, että sekä psoriasis ja alkuvaiheessa KC transformaatio, CCHCR1 voi toimia negatiivisena säätelijänä leviämisen, mutta tietyn pisteen yli kasvaimen synnyssä ei voi hallita tätä ilmiötä enää.

Citation: Suomela S, Elomaa O, Skoog T, Ala-aho R, Jeskanen L, Pärssinen J, et al. (2009) CCHCR1 Is Up-säätelemä ihosyöpä ja Associated kanssa EGFR Expression. PLoS ONE 4 (6): e6030. doi: 10,1371 /journal.pone.0006030

Editor: Benjamin Rich, Harvard Institute of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 08 joulukuu 2008; Hyväksytty: 21 toukokuu 2009; Julkaistu: 24 kesäkuu 2009

Copyright: © 2009 Suomela et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat Suomen Akatemian (US-K. myönnä. 115590, SS myönnä. 122236, RA ja VM.K. myönnä. 114409, LL myönnä. 108828), Sigrid Juseliuksen säätiö (US-KJK, VM .K.), Helsingin yliopistollisen sairaalan tutkimusta rahasto (TYH 7113), The suomi Cancer Research Foundation (VM.K.) ja Euroopan unionin puiteohjelman 6 (LSHC-CT-2003-503297) (RA ja VM.K.) Turun yliopistollisen keskussairaalan EVO avustus (hanke 13336), ja Suomen Dermatologiset Society (SS), Suomi, ruotsi Research Council (US-K., JK) ja ruotsalainen Cancer Foundation (US-K., JK), ja Finsen- Welander Foundation (TS), Ruotsi. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Olemme aiemmin osoittaneet, että CCHCR1 geenin sisällä suuria psoriasis alttius lokuksen PSORS1 voi toimia negatiivisena säätelijänä KC leviämisen [1] – [3]. CCHCR1 geeni koodaa 782 aminohapon proteiinia (GenBank AY029160) [4], että on eri ilmaistu Leesioton psoriasisihon verrattuna normaaliin ihoon: vammansi- CCHCR1 etsii tyvi- ja suprabasaalisissa KCS jossa orvaskeden on sen ohuin. Värjäystä solujen lisääntymistä merkki Ki67 näyttää käänteinen korrelaatio CCHCR1 vuonna psoriaasiläiskiisi sopusoinnussa rooli KC leviämisen [1], [4]. Lisäksi meidän hiirimallissa yliekspressoiviin CCHCR1 * WWCC psoriasis Riskimuodon alle keratiini 14 promoottori näyttää heikentyneen leviämisen kyky KCS [3], mikä viittaa vähemmän aktiivinen aktivaattori proteiinia 1 (AP-1) välittämän signaloinnin riskiä hiirillä. AP-1-välitteistä signalointia säätelee geenejä, jotka liittyvät soluproliferaatioon, kuten EGFR joka tunnetaan myös nimellä erbB1 [5].

Psoriasis vaurioita tuskin koskaan edetä ihosyöpä huolimatta krooninen tulehdus, joka usein on syöpäriskin [6] [7]. Sekä psoriasis ja ihosyöpä on ominaista hallitsematon KC leviämisen lisäksi angiogeneesiin ja tulehdusta. Solujen lisääntymistä ja erilaistumista voidaan välittää kautta EGFR signaloinnin [8]. Useita EGFR: n ligandien (TGF-α, amfireguliini, hepariinia sitova EGF: n kaltainen kasvutekijä) on yli-ilmentyy psoriaasiläiskiisi ja siirtogeeninen ekspressio ihmisen amfireguliini geenin indusoi psoriasis kaltainen fenotyyppi [8]. EGFR signalointi on myös patogeneesiin ei-melanoomaihosyöpä [8] – [10]. Mielenkiintoista, sekä parantaminen ja psoriaasin paheneminen on raportoitu liittyneen EGFR tyrosiinikinaasin estäjä syövän hoidossa [11], [12].

Aiemmissa tutkimuksissa CCHCR1 ekspressiota havaittiin nonproliferating solujen rinta- ja keuhkosyöpä adenokarsinoomat: liikakasvuun markkeri Ki67 havaittiin vieressä, mutta ei samoissa soluissa kuin CCHCR1 [1]. Lisäksi EGF sääteli CCHCR1 proteiinin ilmentymistä HaCaT soluissa [2]. Edelleen ymmärtää funktio CCHCR1 KC muutosta ja ihosyöpä, tutkimme sen ilmentymistä syöpää edeltäviin ja pahanlaatuisten squamous vauriot ja tyvisolusyöpä (BCC). Koska EGFR ja sen loppupään kohde sykliini-D1 ovat osallisina syövän kehitykseen ja mahdollisesti vaikuttaa oletetun CCHCR1 polkuja, tarkastelimme niiden ilmentymistä verrattuna CCHCR1. Suhde CCHCR1 KC hyperproliferaatiota korostettiin värjäämällä vieressä näytteitä kanssa Ki67 vasta-aineella. Tutkimme myös korrelaatio CCHCR1 ekspressiotason kuin Ki67 ja EGFR soluviljelmät eri proliferatiivinen ja invasiivisia ominaisuuksia. CCHCR1 mRNA-tasot määritettiin HaCaT viljelmiä inkuboitiin monipuolinen bioaktiivisten aineiden kanssa merkitys kasvaimen edistäminen, oksidatiivisen stressin tai psoriatic tulehdusta. Lopuksi ekspressiotasot CCHCR1, Ki67, ja EGFR-mRNA: t määritettiin oligonukleotidi microarray ihon SCC solulinjojen ja normaalin ihmisen orvaskeden KC solulinjoissa. Tuloksemme viittaavat siihen, että CCHCR1 ilmentyy ei-melanoomaihosyöpien yhdessä EGFR ja Ki67 in vivo. Kuitenkin soluviljelmässä kaikkein Atypic solut ilmentävät CCHCR1 alle kuolemattomaksi HaCaT solujen ja kasvaimen edistäminen ja indusoi HaCaT solujen korreloi vähentynyt CCHCR1 ilme.

Tulokset

CCHCR1 ilmaistaan ​​SCC yhdessä EGFR, sykliini-D1, ja Ki67

roolin tutkimiseksi CCHCR1 KC leviämisen ja transformaatio, tutkimme CCHCR1 proteiinin ilmentymistä immunohistokemiallisesti eri ihokasvaimia suhteessa EGFR, sen loppupään tavoite cyclin- D1, ja hyperlisäkasvu merkki Ki67. CCHCR1 positiiviset solut olivat läsnä 20/22 SCC tutkittu. Proliferative syöpäsolut leviämisrintamassa ilmaisi CCHCR1 (kuvio 1A, D, G, S1, kuva 2A, C, E), kun taas yhtenäinen syöpäsoluja keskellä olivat CCHCR1 negatiivisia. Infiltrative kasvu oli tyypillistä CCHCR1 positiivisia alueita, kuitenkin Atypic solut olivat heterogeenisiä ja CCHCR1 ilmentymistä (kuvio 2A). CCHCR1 ilmentyminen SCC liittyi positiivinen EGFR värjäytymistä kaikissa yksilöt (kuvio 1A, C, D, F). CCHCR1 positiivinen syöpä pesii alemmassa dermis oli sykliini-D1 sekä myönteiset (kuvio 2C-F). Solut positiivinen liikakasvuun merkki Ki67 sijaitsivat pääosin samoilla alueilla kuin CCHCR1 positiivisia soluja (kuvio 1 B, E, 2B). Kuitenkin luokan III SCC Ki67 oli runsaammin läsnä myös yhtenäinen kasvain alueilla, jotka olivat vailla CCHCR1 ilmaisun (tuloksia ei ole esitetty). Vertailun vuoksi normaali iho näyte näytetään pohjapinta KCS positiivinen CCHCR1 ja EGFR, ja hajallaan positiivisuutta Ki67 (kuva 1 H-J).

Serial osa luokan I SCC (A-C) ja normaali iho (H-J) immunovärjättiin vasta-aineita CCHCR1, Ki67, ja EGFR. Suurennettava A-C on myös esitetty (D-F, vastaavasti). CCHCR1 värjäytymistä (G) viereisen osan EGFR värjäytymistä (F). CCHCR1 proteiini (A) on ilmaistu proliferatiivinen syöpäsoluissa leviämisrintamassa ihon syöpäsolun saarilla olevan SCC yhdessä liikakasvuun merkki Ki67 (B) ja EGFR (C). Ki67-positiivisia soluja (E) näihin CCHCR1 (D). EGFR värjäys (F) kumppaniaan CCHCR1 värjäys (G) vierekkäisissä osissa. Normaali iho näytteitä ilmaista CCHCR1 (H) ja EGFR (J) basaali KCS, kun taas Ki67 lauseke (I) on harvempaa. Nuolet klo havainnollistavia kantoja.

Mittaviivat:

(A-C) 50 pm; (D-G) 12,5 um; (H-J) 25 pm.

Serial osat luokan III (A, B) ja luokan II (C, D) SCC värjättiin mainituilla vasta-aineilla. Korkeampi suurennos toisen luokan II SCC (E, F). Palkkaluokkaan III SCC (A, B), ilmaus CCHCR1 on heterogeeninen: monet, mutta eivät kaikki, syöpäsolut ilmentävät sekä CCHCR1 (A) ja Ki67 (B). Sisäkkeet heikompi suurennus samalla alueella, tähti muistuttaa syöpäsolu negatiivisin CCHCR1 ja Ki67 ilme. Palkkaluokan II SCC (C, D), infiltroiva seuraus on CCHCR1 positiivinen (C), ja CCHCR1 positiivinen syöpä pesät ovat myös sykliini-D1 positiivinen (D). Vierekkäisten osioiden luokan II SCC (E, F) osoittavat yhdistyksen CCHCR1 ja sykliini-D1-positiivisia soluja. Nuolet osoittavat vastaavia alueita.

Mittaviivat:

(A, B, E, F) 12,5 um; (C, D, insets) 50 um.

CCHCR1 ilmaistaan ​​palisading syöpäsolujen BCC

BCC, CCHCR1 ilmaistiin erityisesti sytoplasmassa palisading syöpäsolujen on hyvin määritelty karsinooma saaret (kuvio 3A, C). Kolme 15 BCC näytteet olivat sklerosoiva, mutta CCHCR1 ei runsaammin niihin (tietoja ei esitetty). CCHCR1 ilmaistiin rakeinen kuvio seitsemässä näytteissä (kuvio 3A, C) yhteistyössä paikallistamisen EGFR (kuvio 3B, D). Kaikki viisi näytettä tutkittiin oli sykliini-D1-positiivisia: kuitenkin, sen ilmentymistä ei ollut niin vahva kuin CCHCR1 ja konsentroitiin keskelle kasvaimen pesiä (tuloksia ei ole esitetty). Soluliman ilmentyminen CCHCR1 basaali KCS normaalissa näköinen iho vieressä BCC alue vaihteli näytteitä. EGFR oli korkeampi pohjapinta KCS normaalin ihon kuin palisading soluja useimmissa näytteissä.

Serial osien BCC (A, B), värjättiin vasta-aineiden CCHCR1 ja EGFR. Suurennettava A ja B on myös esitetty (C, D, vastaavasti). CCHCR1 proteiini ekspressoituu rakeisen kuvio sytoplasmassa palisading syöpäsoluja nodulaarinen BCC (A, C). CCHCR1 lauseke (C) lokalisoituu EGFR värjäytymistä (D). CCHCR1 ja EGFR ilmaistaan ​​myös pohjapinta KCS (A, B). Nuolet osoittavat vastaavia kantoja.

Mittaviivat:

(A, B) 50 pm; (C, D) 25 pm.

tutkia, CCHCR1 ja EGFR kolokalisoituvat myös solutasolla, me ohimenevästi transfektoituja HaCaT solut CCHCR1 konstruktio ja visualisoida CCHCR1 ja EGFR kanssa immunofluoresenssimenetelmällä. CCHCR1 ekspressio havaittiin kun rengasmainen, sytoplasminen kuvio, kun EGFR oli enemmän tai vähemmän kalvoon sitoutuneen ja ei kolokalisoituvat kanssa CCHCR1 värjäytymistä (kuvio 4A-D). Transfektoidut ja ei-transfektoiduista soluista osoittivat samanlaisia ​​EGFR, viittaa siihen, että CCHCR1 ei vaikuta EGFR tai lokalisointi (kuvio 4B).

CCHCR1 transfektoiduissa HaCaT-soluja (A-D) värjättiin vasta-aineiden CCHCR1 (A) ja EGFR (B). Päällekkäin A ja B on esitetty (C), ja DAPI värjäytyminen osoittaa ytimien (D). Solut, jotka ilmentävät CCHCR1 (vihreä) olivat myös positiivisia EGFR (punainen), mutta nämä kaksi proteiinia eivät co-paikantuvat (C). CCHCR1 positiivinen (nuoli) ja negatiivinen (nuoli pää) soluilla samanlaisia ​​EGFR viittaa siihen, että CCHCR1 yliekspressio ei vaikuta EGFR (B).

CCHCR1 ilmentyminen keratoakantoomissa liittyy lymfosyyttien tunkeutumisen

keratoakantooma (KA), histologisesti pahanlaatuisen kasvaimen, mutta käyttäytyvät hyvänlaatuinen tavalla, pidetään usein ”esiaste” vamman SCC. KA yleensä positiivisesti CCHCR1 värjäytymistä erityisesti KCS työntävän raja alueilla näkyvällä lymfosyyttien infiltraatiota ympäröivät kasvainta (kuvio 5A, C). EGFR-positiivisten solujen olivat läsnä samoilla alueilla tutkituissa näytteissä (kuvio 5B, D). Vuonna CCHCR1 positiivinen alue, Ki67 ilmentyminen oli myös havainnut kaikkien kolmen näytteen, mutta heikompana kuin SCC (kuvio 5E, F).

Serial osien KA (A, B, E, F) oli värjättiin vasta-aineiden CCHCR1 ja EGFR (A, B) tai vastaan ​​CCHCR1 ja Ki67 (E, F). Suurennettava A ja B on esitetty (C, D, vastaavasti). Työntävä rajaa KA on CCHCR1 positiivinen (A) yhdessä paikallistamisen EGFR (B). Toinen näyte näkyy (E), jossa on näkyvä lymfosyyttien infiltraatiota ja sytoplasmista CCHCR1 ilmaus työntää rajan soluja. Niukasti Ki67 lauseke (F) on määritelty samalla aloilla, mutta ei välttämättä samat solut. Nuolet osoittavat vastaavia kantoja.

Mittaviivat:

(A, B, E, F) 50 pm; (C, D) 12,5 um.

Bowenin tauti ja aurinkokeratoosien ilmaista CCHCR1 vuonna spongiotic ja tulehdussairauksien alueilla

spongiosis, tulehduskeräytymää, ja kapillaarinen leviämisen liittyivät CCHCR1 ilmaisua 11 /21 Bowenin tauti (SCC in situ) näytteistä (kuvio 6A, B). Alueet puuttuu tulehdus ja spongiosis ilmaisi vähemmän CCHCR1 (kuvio 6C), eikä ollut CCHCR1 ilmaus liittyy KC atypia. Bowen tauti, sytoplasminen CCHCR1 värjäys havainnut basaalisesti ja suprabasally in ihon pötsinystyt (kuvio 6B), joka muistuttaa CCHCR1 värjäys psoriaattisen leesioihon (kuvio 6E), erityisesti hypertrofinen näytteissä. Myös EGFR ilmentyminen Bowenin tauti muistutti ekspressiokuviota CCHCR1 (kuvio 6D). Psoriasiksen, CCHCR1 ilme oli voimakkain alueilla, joilla on vähemmän Ki67 positiivinen KCS (kuvio 6F). Kahdeksan 11 tutkittu Aurinkokeratoosin (AK) yksilöt olivat CCHCR1 positiivinen pohjapinta tai tyvikalvon yläpuolella KCS (kuvio 6G). CCHCR1 positiiviset solut usein törmännyt alueilla, joilla spongiosis tai tulehdus.

Jaksot Bowenin tauti (A-D) immunovärjättiin vasta-aineiden CCHCR1 ja EGFR kuten. Leikesarjojen psoriasis (E, F) värjättiin vasta-aineiden CCHCR1 ja Ki67. AK näytteitä (G, H) värjättiin CCHCR1 vasta-aineita. Vuonna Bowenin tauti (A, B), spongiosis, tulehduskeräytymää, ja hiussuonten proliferaatio liittyy CCHCR1 ilmaisu, kun taas alueet, josta puuttuu tulehdusta ja spongiosis näihin vähemmän CCHCR1 (C). EGFR (D) pohjapinta ja tyvikalvon yläpuolella KCS ihon pötsinystyt kumppaniaan CCHCR1 ilme (B). Myös psoriasis (E), CCHCR1 ilmaistaan ​​basaalisesti tai suprabasally (nuolet) päällä ihon pötsinystyt (dp), kun taas rete harjanteet (rr), joka työntyy verinahkaan ovat lähes negatiivisia CCHCR1. Sen sijaan, Ki67 lauseke (F) paikantuu alueille, jotka ovat lähes negatiivisia CCHCR1 soluja (nuolenpäät). AK näytettä (G) esittää CCHCR1 basaalisesti ja suprabasally yhdessä KC heterogeenisuus, spongiosis tai tulehduksen mutta lähialueilla vähemmän tulehdusta tai spongiosis (H) tahra vain heikosti.

Mittaviivat:

(A-D) 50 pm; (E, F) 25 um; (G, H) 12,5 um.

Expression of CCHCR1 on säädelty ja korreloi Ki67 ilmaisua ihon SCC solulinjoissa

Seuraavaksi vertasimme mRNA: n ilmentymisen profiilit CCHCR1 , EGFR, Ki67, ja sykliini-D1 eri ihon SCC solulinjoja (viisi ensisijaista ja kolme metastaattinen), suorittamalla Affymetrix kokeita. Oligonukleotidi microarray perustuva ilmaisu profiili osoitti, että CCHCR1 geeni ilmentyy SCC-soluissa (kuvio 7A). Signaalin tasot CCHCR1 koetinsarjojen oli jopa 80% korkeampi ihon SCC solulinjoissa (n = 8) kuin normaalin ihmisen orvaskeden KCS (n = 5), mutta ei ollut merkittäviä eroja CCHCR1 ekspressiotasot välillä ensisijainen ja metastaattinen SCC linjat. Ilmennystasoissa SCC solulinjoissa vaihtelivat, mutta keskimääräiset tasot nousivat hieman (30%; p 0,05) verrattuna normaaliin KCS kvantitatiivisen reaaliaikaisen RT-PCR (TaqMan) (kuvio 7C). Signaalin tasoilla Ki67 koetinsarjojen oli 3-4 kertaa suurempi SCC solulinjoissa kuin normaalissa epidermaalinen KCS (kuvio 7A). Tämä havainto varmistettiin myös TaqMan PCR (kuvio 7D). Tärkeää on, että ekspressiotasot CCHCR1 korreloi tasot Ki67 on microarray data (kuvio 7B). Lievä korrelaatio (R = 0,46) välillä CCHCR1 ja Ki67 mRNA-tasot havaittiin TaqMan tiedot sekä (Kuva 7E). Ilmentymistasojen EGFR mRNA: n SCC solulinjat olivat välillä 80% ja 180% normaalista KC ekspressiotasot 4 8 koetinsarjojen (kuvio 7A). Sekä sykliini-D1 koetinsarjojen olivat läsnä kaikissa solulinjoissa ja keskimääräinen signaalin taso oli jopa 60% suurempi SCC solulinjoissa verrattuna normaaliin KCS. CCHCR1 oli lievä negatiivinen korrelaatio EGFR tasolla, mutta ei ole korrelaatiota CCHCR1 ja sykliini-D1 havaittiin (tuloksia ei ole esitetty).

A) Ki67, EGFR, sykliini-D1 ja CCHCR1 geeniekspression profiilin viisi normaalia orvaskeden KC ja kahdeksan ihon SCC solulinjoja (lämpökartta). Signaalin arvot koetinsarjojen verrattiin keskimääräiseen signaalin arvoja kukin koetin asetettu KCS. Väritys perustuu log2 arvojen muutoksen signaalin arvot. Ylös geenien näkyvät punaisina ja alas geenien näkyvät vihreinä. B) välinen korrelaatio CCHCR1 ja Ki67 koetinsarjojen laskettiin välillä signaalin arvojen yhden CCHCR1 ja yksi Ki67 koetin asetettu HG-U133 Plus 3.0 array. Pearsonin korrelaatiokerroin R = 0,88. C) CCHCR1 ja D) Ki67 mRNA: n ilmentymisen tasoihin normaalilla KCS ja ihon SCC solulinjoja mitattuna qRT-PCR (TaqMan). Ekspressiotasot CCHCR1 ja Ki67 normaalissa KCS: n ja SCC solulinjat analysoitiin qRT-PCR: llä ja korjataan β-aktiinin mRNA-tasot samoissa näytteissä. E) välinen korrelaatio CCHCR1 ja Ki67 koetinsarjojen laskettiin välillä signaalin arvojen CCHCR1 ja Ki67 mRNA-tasoja. Pearsonin korrelaatiokerroin R = 0,46.

okadahappo ja menadionia downregulate CCHCR1 mRNA ilmaisun HaCaT soluissa

Sen määrittämiseksi, onko eri bioaktiivisia aineita muuttaa CCHCR1 mRNA ilmaisun, käsittelimme HaCaT solu kulttuurien kasvainjouduttimet, oksidatiivisen stressin indusoijat, ja agenteille nivelpsoriaasin tulehdus. Okadahapon (OA) ja menadionia, molemmat yhdisteet osoitettu edistävän kasvainten in vivo ja aiheuttaa oksidatiivista stressiä, vaimentua CCHCR1 mRNA tasot HaCaT soluissa jopa 10-kertaiseksi annoksen kasvaessa (OA) ja 3-kertainen (menadionin) (kuvio 8A) . EGFR ja Ki67 mRNA-tasoja OA ja menadionia käsiteltiin HaCaT soluja vaimentua myös (kuvio 8B, C). Menadionin tai OA hoidot eivät olennaisesti muuta ilmentymistä talon pitäminen geeni GAPDH HaCaT soluissa, mikä viittaa siihen, että nämä aineet eivät vaikuttaneet solujen elinkykyisyys. Kasvain promoottorit 12-forboli-13-myristaatti-asetaatilla (PMA) ja staurosporiinia tai antiestrogeenit tamoksifeeni, H

2O

2 tuottaa oksidatiivisen stressin, leptiini, IL-6: n tai stafylokokki endotoksiinin B, aktiviini tai anisomysiini , ei merkittävästi vaikuttanut CCHCR1 mRNA-tasot (tuloksia ei ole esitetty).

CCHCR1 (A), Ki67 (B), ja EGFR (C) mRNA: n ekspression tasojen (TaqMan) on HaCaT-soluissa hoidon jälkeen kasvaimen promoottorit OA ja menadionia. CCHCR1 (D), Ki67 (E) ja EGFR (F) mRNA: n ekspression HaCaT, A5, II4, RT3, A431, ja Fadu soluja. Invasiivisen solut II4 ja Fadu ja metastaattisen RT3 solut ilmensivät vähemmän CCHCR1 (D) ja Ki67 (E) kuin HaCaT ja A5-soluja. A431-solut (F) esittää EGFR mRNA selvästi enemmän kuin muut solulinjat. RAS-transformoituja klooneja A5, II4 ja RT3 ja Fadu solut ilmentävät EGFR alle HaCaT soluja. Kvantitatiivinen RT-PCR Tulokset esitetään suhteessa mRNA tasot vastaava valvonta soluista (saa arvon 1). Ekspressiotasot CCHCR1, Ki67, ja EGFR HaCaT-soluja normalisoitiin GAPDH mRNA-tasot samoissa näytteissä. * P 0,05, ** p 0,01, *** p 0,001.

CCHCR1 on vaimentua kaikkein aggressiivinen kasvainsolulinjat

lisätutkimuksia roolin CCHCR1 KC muutos, vertasimme CCHCR1 mRNA ilmentyminen solulinjoissa erilaisilla metastaattista ja invasiivisia ominaisuuksia. Perustuen kvantitatiivinen TaqMan RT-PCR, CCHCR1 ja Ki67 ekspressiotasot olivat samanlaiset kuolemattomaksi HaCaT ja tuumorigeenisia A5 ras-transformoiduista solulinjoista (kuvio 8D, E). Kuitenkin nouseva tuumorigeenisuus in ras-transformaation, invasiivisia II4 ja metastaattinen RT3 solut ilmensivät vähemmän CCHCR1 mRNA, ja tämä suuntaus nähtiin, joilla on pahanlaatuinen A431-solut (kuvio 8D). Vastaavasti Fadu solut, jotka ovat enemmän invasiivisia kuin HaCaT ja A431-solut [13] ilmaisivat vähemmän CCHCR1, Ki67, ja EGFR (kuvio 8D-F). Myös Ki67 ja EGFR vähentyneet ras-muunnos (kuvio 8E, F). Mielenkiintoista on, että A431-solut olivat ainoat solut ilmentävät EGFR huomattavasti enemmän kuin HaCaT-soluissa (kuvio 8F), Ki67 ja CCHCR1 ilmaisu jäljellä alemmalla tasolla (kuvio 8D, E).

CCHCR1 mRNA: n ekspressio on vaimentua, kun keratinosyytit ovat nopeasti lisääntyvissä tila

tutkia CCHCR1 mRNA ilmaisun kuolematon, mutta ei-tuumorigeenisiä HaCaT solujen eri proliferatiivisen vaiheissa, suoritimme soluviljelmäkokeita mukaan strategian Pivarcsi et al. [14]. Meidän kokeissa konfluentteja HaCaT-solut (kontrollit) ja konfluentteja soluja sen jälkeen, kun 1-wk nälkää aikana (solut pakotetaan liikkumattomuus) ilmaistuna CCHCR1 enemmän kuin HaCaT-soluja stimuloidaan lisääntymään lisäämällä seerumia, ei-konfluentteja jatkoviljely (kuvio 9A). CCHCR1 ilme pieneni varsinkin ensimmäisten neljän päivän ajan. Lisääntyminen tila solujen (mikä vahvistettiin Ki67 mRNA ilmaisu) korreloivat negatiivisesti CCHCR1 ilme (kuvio 9B): väheneminen CCHCR1 ilmentyminen liittyi kasvuun Ki67 ilme. Kun solut reattained konfluenssiin, ilmaus CCHCR1 kasvoi jälleen alkuperäiselle tasolle (kuvio 9A). Yksi neljästä kokeita tehtiin käyttäen jopa alhaisempi määrä soluja. Tässä olemme osoittaneet voimakkaan leviämisen ensimmäisen ajankohtina (24 h ja 48 h), kuten suhteellisen Ki67 mRNA: n ilmentymisen kasvoi 6-kertainen verrattuna kontrollisoluihin (kaksi kontrollisolujen antaa kaksi arvoa noin arvoon 1). Negatiivinen korrelaatio CCHCR1 ilmentymisen Ki67 ilmentyminen oli vielä syvempi kuin suhteellinen CCHCR1 mRNA samalla laski lähelle nollaa kaksi ohjaus solujen arvot noin arvoon 1 (kuvio 9D). Mielenkiintoista on, että EGFR mRNA-tasot seurasi CCHCR1 ekspressiokuviota sijaan Ki67 ekspressiomalli (kuvio 9C, E). Pakottamalla HaCaT solujen erilaistumisen korkean kalsium välineellä ilmaus CCHCR1 säilynyt muuttumattomana mitattuna TaqMan PCR (tuloksia ei ole esitetty), samaa mieltä aiempien tietojen CCHCR1 mRNA-tasot eivät olleet muuttuneet eriytetty normaalissa KCS [1]. Involucrin käytettiin differentiaatiomarkkeri vahvistaa erilaistumista tilan HaCaT solujen päälle kalsiumin annon [15].

) Suhteellinen ilmentyminen CCHCR1 mRNA (mitattuna TaqMan) eri ajankohtina (24 h 8 d) vapauttamisen jälkeen solut seerumistarvaatio ja korkea tiheys viljelemällä. Expression of CCHCR1 eivät eronneet konfluentteja (kontrolli) soluissa sekä lepotilassa (nälässä) soluja. Ohjaus solut ilmensivät CCHCR1 2,5-kertaisesti enemmän kuin proliferatiivinen HaCaT soluja (24-48 h, 3-4 d). Kuten konfluenssissa oli reattained (8 d), ilmentymistä CCHCR1 nousi tasolle kontrollisoluihin. B) välinen korrelaatio suhteellinen CCHCR1 ja Ki67 ekspressiotasoja. Kun CCHCR1 mRNA: n ilmentymisen tasoja verrattiin kuin Ki67, negatiivinen korrelaatio havaittiin, vahvistaa proliferatiivinen tila HaCaT-soluja. C) EGFR mRNA ilmaisu korreloi CCHCR1 mRNA ilme. D) välinen korrelaatio CCHCR1 ja Ki67 ilmaisun kokeeseen alhaisempi solutiheyden. Negatiivinen korrelaatio CCHCR1 ilmentymisen Ki67 ilmentyminen oli vielä syvempi kuin suhteellinen CCHCR1 mRNA laski lähelle nollaa kahden vertailuryhmän soluihin. E) välinen korrelaatio CCHCR1 ja EGFR kokeiluun alhaisempi solutiheyden. Tässäkin CCHCR1 ilmaisu korreloi EGFR. TaqMan PCR Tulokset on esitetty suhteessa mRNA-tasot vastaavista kontrollisoluja saa arvon 1. Expression tasoilla CCHCR1, Ki67, ja EGFR HaCaT-soluja normalisoitiin GAPDH mRNA-tasot samoissa näytteissä. * P 0,05, ** p 0,01, *** p 0,001.

Keskustelu

Tuloksemme esitetään tässä osoittavat CCHCR1, ehdokas geeni psoriasis, ilmaistiin useimmissa SCC, yhteyskeskukset ja KA tutkittu, mikä viittaa siihen, että CCHCR1 voi olla rooli paitsi KC leviämisen lisäksi myös muutosta. EGFR korreloi CCHCR1 ilme, ja sykliini-D1, alavirran kohde EGFR ja positiivisena säätelijänä solusyklin etenemisen [16], todettiin myös ilmaistu samoilla alueilla. Normaali iho, sekä EGFR ja CCHCR1 ilmaistaan ​​basaalisesti [4], [8] (kuvio 1). Expression of EGFR, ”eloonjäämistekijänä kasvainsolujen”, ei edes katsotaan tarpeelliseksi säilyttää KCS on proliferatiivinen tila [8]. Oletamme, että EGFR voi säädellä CCHCR1 ilmaisu kuten olemme viime aikoina osoittaneet, että EGF stimulaatio ylössäätelee CCHCR1 proteiinin ilmentymisen [2]. Meidän kokeissa täällä transfektoitujen HaCaT solujen ehdotti, että yli-ilmentyminen CCHCR1 ei säännellä EGFR.

mukaan havaintomme, muunnettava KCS on erilainen CCHCR1 asema korrelaation hyperproliferaatiota merkki Ki67 asema verrattuna ei-tuumorigeenisiä KCS. Eroaa hyvänlaatuinen hyperproliferatiivinen häiriö psoriaasi ([1] Kuva 6E-F), ilmaus liikakasvuun markkeri Ki67 osoitettiin tässä samoilla alueilla kuin CCHCR1 ilmaisu leviämisrintamassa okasolusyövistä. Olemme aiemmin osoittaneet, että rinta- ja keuhkojen adenokarsinooman, CCHCR1 positiiviset solut ovat Ki67 negatiivisia [1], mutta tämä ristiriita saattaa johtua eroista adenokarsinooma ja SCC soluja tai sivuston elin syöpää. Positiivinen korrelaatio CCHCR1 ja Ki67 ilmaisun ihosyöpiä tukivat ilmaus profilointi ihon SCC solulinjoissa. Oli kuitenkin negatiivinen korrelaatio CCHCR1 ja EGFR näissä samoissa solulinjoissa sekä invasiivisia Fadu kasvainsoluissa [17], mikä viittaa siihen, että EGFR transkriptio estyi. Tämä saattaa kuitenkin heijastaa eri EGFR varianttien tutkittu, koska spesifinen koetin muunnokseen 2 näytti olevan enemmän vaimentua kuin variantti 1 tai antureista tunnustaa kaikki vaihtoehdot.

Huolimatta positiivinen CCHCR1 ja Ki67 ilmentymistä in vivo ihosyöpä ja Affymetrix määritys SCC solulinjojen, osoitamme, että CCHCR1 ja Ki67 mRNA: t vaimentua viljellyissä soluissa nouseva muutosta ja myös ei-tuumorigeenisiä HaCaT solut käsiteltiin yhdisteillä, jotka edistävät kasvainten in vivo. Metastaattinen RT3 ja invasiivisia II4 solut ilmensivät CCHCR1 ja Ki67 alle tuumorigeenisemmiksi A5 ja kuolemattomaksi HaCaT soluja, mikä viittaa siihen, että CCHCR1 ja Ki67 ilmentyminen lisää kääntäen tasolle ras-transformaation. Samoin EGFR ilmentyminen säädeltiin vähentävästi kaikissa ras-transformoitujen solujen, myös A5-soluissa. CCHCR1 mRNA oli myös pienentynyt invasiivisia Fadu solujen verrattuna A431 korreloi lisäävä säätely EGFR välillä Fadu A431-soluihin. Korkea EGFR vuonna A431-soluissa verrattuna Fadu solujen yhtyy aiempien tutkimusten [17]. Lisäksi SCC, The CCHCR1 immunovärjäytyminen oli heterogeeninen Atypic soluissa – monet Atypic solut olivat myös vailla Ki67.

kasvaimen promoottorit OA ja menadionia vaimentua ilmentymistä CCHCR1, Ki67, ja EGFR-mRNA HaCaT-soluissa. OA estää seriini /treoniini-spesifistä proteiinia fosfataaseja, mukaan lukien proteiini fosfataasi 1, 2A, ja PP3 [18] ja aktivoi solun Erk1 /2, JNK: n ja p38 MAPK signalointireitteihin ja AP-1 transkriptiotekijöiden [19] – [21] Lisäksi aktivoimista Akt-1, joka on pro-selviytymisen seriini-treoniini-kinaasi [22]. Menadionin estää proteiinisynteesiä tyrosiinifosfataasien aktivoimalla ErbB2 jota yli-ilmennetään BCC ja vaimentua SCC suhteessa normaaliin orvaskeden [23]. Mielenkiintoista on, että EGFR-vaikutus on OA-indusoidun karsinogeneesin ja menadionia aiheuttama ErbB2 aktivointi [24], [25]. Lisäksi EGFR on raportoitu aktivoida Erk1 /2 ja Akt SCC [10].

Ultraviolettisäteily on yksi tärkeimmistä tekijöistä, jotka altistavat ihosyöpä, ja on myös tiedetään aktivoivan EGFR [9]. Emme ole havainneet merkittäviä muutoksia CCHCR1 mRNA tasot HaCaT soluja viljellään eri aikoja jälkeen UVA /UVB-säteilyltä (Suomela, Latonen ja Saarialho-Kere, julkaisematon data). Emme voineet osoittaa mitään vaikutusta H

2O

2 (tuottavat oksidatiivista stressiä) on CCHCR1 mRNA ilmaisun joko, vaikka myös OA sekä menadionia tiedetään indusoivan muodostumista reaktiivisia happiradikaaleja ja lipidiperoksidaatiossa on kuolemattomaksi solu linjat [26], [27], mikä viittaa siihen, että oksidatiivinen stressi ei ollut mukana vuorovaikutus OA ja CCHCR1.

Lopuksi osoitamme, että HaCaT soluissa, CCHCR1 ilmaisu pieneni leviämisen mukaisesti aiemmassa raportit [1], [3], [4]. Sen jälkeen kun provosoi leviämisen HaCaT soluissa kuten aiemmin on kuvattu [14], sitä enemmän proliferatiivinen ei-tuumorigeenisiä HaCaT solut, sitä vähemmän CCHCR1 ilmaistiin. Mielenkiintoista, EGFR mRNA ilmaisu seuraa, että on CCHCR1 mRNA ilmaisun sijasta Ki67 ilmaus, mikä viittaa yhteiseen alkupään efektori in signalointireittejä. Emme voi kuitenkaan tässä tilanteessa sulkea pois vaikutusta solun konfluenttisuuden yksin CCHCR1 ilmaisua kuin se vaikuttaa myös leviämisen HaCaT soluja.

pahanlaatuisiksi psoriatic leesion KCS on hyvin harvinaista, vaikka hallitsemattoman KC leviämisen ja co -existence kroonisen tulehduksen. Syynä suojaa syövän kehittymisessä on edelleen epäselvä. Alennettu AP-1 tasot nivelpsoriaasin KCS on ehdotettu selitys [28], [29]. AP-1-välitteisen reitin on mukana myös EGFR aktivointi johtaa KC hyperproliferaatiota [5]. Kun CCHCR1 siirtogeenisiä riski hiiriä, joilla säädeltiin vähentävästi D-vitamiinin reseptorin [30], haavoittui ja PMA-käsitelty, KC leviämisen vähennettiin [3], mikä viittaa vähemmän aktiivisia AP-1 tai STAT3 signalointi. Lisäksi D-vitamiini, lääke käytetään psoriasiksen hoitoon, downregulates EGFR ja sykliini-D1 [31]. CCHCR1 on myös ehdotettu säädellä migraation RNA-polymeraasi II-alayksikköä 3 (RPB3) [32], joka aktivoi aktivoiva transkriptiotekijä 4 (ATF4 tai CREB2) [31] liittämällä kasvun pysähtymisen [34], [35] ja on kykenevät muodostamaan heterodimeerejä jäsenten kanssa AP-1 -perheen. Esillä oleva tutkimus syytöksiä että CCHCR1, ehdokas geeni psoriasis, on tietty tehtävä KC biologian myös pahanlaatuisiksi. [14].