Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

syöpä biomarkkerit haetaan tukea syöpädiagnoosin, ennustaa syöpäpotilaan hoitovastetta ja selviytymistä. Tunnistaminen luotettava biomarkkereita ennustamisessa syövän hoitovasteen tarvitsee käsitys kaikilla syöpäsolun kuoleman ja selviytymisen. Galektiini-3 ja Beclin1 ovat mukana kaksi koordinoitua väyliä ohjelmoidun solukuoleman, apoptoosin ja autophagy ja ne liittyvät necroptosis /kuolion. Tavoitteena oli selvittää määrällisesti galektiini-3 ja Beclin1 mRNA ihmisen syövässä cDNA-paneeleja ja päättää niiden hyödyllisyys biomarkkereina syöpäsolun selviytymisen.

Menetelmät ja tulokset

Paneeli 96 cDNA: t kahdeksasta (8) eri normaalissa ja syöpäkudoksessa tyyppiä käytettiin kvantitatiivista reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (qRT-PCR) käyttäen ABI7900HT. Miner2.0, web-pohjainen 4- ja 3- parametrin logistista regressiota ohjelmistoa käytetään johtamaan yksittäisiä hyvin polymeraasiketjureaktio tehokkuutta (E) ja kierto kynnys (Ct) arvot. Miner ohjelmisto johdettu kaavan avulla laskettiin mRNA-tasojen ja sitten kertamuutoksia. Suhteet syövän normaalia kudosta tasoja galektiini-3 ja Beclin1 laskettiin (käyttämällä keskimääräistä kunkin kudoksen tyyppi). Suhteelliset mRNA lausekkeita galektiini-3 olivat korkeammat kuin Beclin1 kaikissa kudoksissa (normaali ja syöpä) tyypit. Syövän kudoksissa, rinta-, munuais-, kilpirauhasen ja eturauhasen oli korkein galektiini-3 mRNA-tasot verrattuna normaaleihin kudoksiin. Korkea Beclin1 mRNA tasot olivat maksassa ja eturauhassyövissä verrattuna normaaleihin kudoksiin. Rinta-, munuais- ja kilpirauhassyövän oli korkea galektiini-3 tasoa ja alhainen Beclin1 tasolla.

Johtopäätös

galektiini-3 ekspressiomalleja normaaleissa ja syövän kudoksissa tukevat sen raportoitu rooleja ihmisen syövässä. Beclin1 ilme kuvio tukee roolit syöpäsolun selviytymisen ja hoitovastetta. qRT-PCR-analyysi menetelmä saattaa mahdollistaa suurikapasiteettisten tutkimuksia tuottaa molekyyli biomarkkereiden sarjaa diagnosointiin ja ennustamiseen syövän hoitovastetta.

Citation: Idikio HA (2011) galektiini-3 ja Beclin1 /Atg6 Geenit ihmisen syövissä: käyttäminen cDNA Tissue Panel, qRT-PCR, ja logistinen regressiomalli tunnistaa Cancer Cell Biomarkers. PLoS ONE 6 (10): e26150. doi: 10,1371 /journal.pone.0026150

Editor: William C. S. Cho, Queen Elizabeth Hospital, Hong Kong

vastaanotettu: 29 lokakuu 2010; Hyväksytty: 20 syyskuu 2011; Julkaistu: 19 lokakuu 2011

Copyright: © 2011 Halliday A. Idikio. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tekijä ei ole rahoitusta tai tukea julistaa.

kilpailevat edut: tekijä on ilmoittanut, että ei kilpailevia etuja olemassa.

Johdanto

Syöpä biomarkkereiden etsitään auttamaan lopullisen diagnoosin, hoitovasteita, ja ennustamiseen selviytyminen syöpäpotilaiden [1], [2]. Jotta ennustaa syövän hoitovasteen, luotettava merkkiaineiden syöpäsolun kuoleman ja selviytymisreittejä ja miten ne vaikuttavat syövän hoitomuotoja tarvitaan. Käytettävissä olevat menetelmät tunnistaa tällaisia ​​markkereita ovat genomiikka, proteomiikka ja kudoksessa immunohistokemiallisella värjäyksellä [3]. Kvantitointi syövän biomarkkereiden transkriptien käyttäen reaaliaikainen kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio (qRT-PCR) Suurten näytteet voivat auttaa etsinnässä kliinisesti hyödyllinen syövän biomarkkereita, jotka voidaan integroida kliinisen tutkimuksen suunnittelu [4].

haluttu loppupiste on ihmisen syöpien hoidossa on tuottaa yhteensä syöpäsolun kuoleman [5], [6]. Syöpäsolun kuolema voi edetä kautta apoptoosia (tyyppi I), kuolion tai autophagy (tyypin II) [7], [8]. Necroptosis (kuolio) on ohjelmoidun solukuoleman polku, joka edellyttää muodostumista necrosome, on luonnollinen estäjä (necrostatin1), ja vaatii toimivaa kompleksi RIP1 ja RIP3 (seriini /treoniini-kinaasi reseptorin vuorovaikutuksessa proteiinien 1/3) [9], [10], [11], [12]; necroptosis voidaan saada aikaan muita reittejä, kuten Toll-kaltainen reseptorit (TLR), Jun-kinaasien, CD40, SPP1 ja glutationi aineenvaihduntaa [13]. Necroptosis ja apoptoosin on joitakin yhteisiä sääntelyviranomaiset. RIP3 voi siirtyä solujen apoptoosin necroptosis [14]. Induktio autophagy voi täydentää lääkkeen aiheuttama syöpäsolun kuoleman [15]. On kasvava yksimielisyys siitä, että kaikki kolme ohjelmoidun solukuoleman polkuja on kytketty toisiinsa [16], [17]. Lisäksi yksi pääasiallinen ominaisuus useimmat syövät on vastustaa solukuolemaa [18]. Monet tekijät ja signalointireittejä johtaa syöpäsolun kuoleman [8]. Inhiboiva autophagy voi edistää nekroottinen solukuolema [19], apoptoosin [20], ja apoptoosin voivat vaihtaa autophagy [21] ja päinvastoin [22].

galektiini-3, jäsen galektiini perhe ( galectins 1-15), on sekä anti- ja pro-apoptoottiset vaikutukset ilmaistuna tumaan ja sytoplasmaan [23], [24], vaikuttaa Ras-signalointi syövissä [25] ja ydinvoiman lokalisointi voivat aiheuttaa resistenssin hoitoon [26] , [27]. Galektiini-3 on läsnä monissa normaaleissa kudoksissa ja solutyypeissä [28], mukaan lukien endoteelisolujen [29]. Galektiini-3 ilmentyminen on liitetty etenemisen etäpesäkkeitä ja potilaiden selviytymiseen monien ihmisen syöpätyyppejä, kuten rinta- ja kilpirauhassyövän [24], [30], [31]. Galektiini-3 säätelee muiden signalointireitteihin [32]. Galektiini-3 signalointia ei ole sidottu autophagy mutta on BH1- domeenin Bcl-2 ja on vuorovaikutuksessa Bcl-2 [33], [34], ja näin ollen voivat olla vuorovaikutuksessa autophagy kautta.

Beclin1 (tunnetaan myös kuten Atg6) on autophagy liittyvä proteiini ja haploinsufficient tuumorisuppressorigeenin ja onkogeenin [35], ja ilmentyy voimakkaasti monissa ihmisen syövissä. Beclin1 yli-ilmentyminen voi edistää syöpäsolujen eloonjäämistä [5]. Beclin1 poistetaan joissakin syövissä [36]. Beclin1 on luokan III fosfatidyyli 3-kinaasi [37], [38]. Autophagy geenejä säädellään solusyklin geenien (E2-F1) [39], onkogeenien [40], [41], [42] ja inositolitrifosfaatin reseptorin [43].

Apoptoosi ja autophagy aktivoidaan samanlaiset signaalit kuten stressi, lääkkeet, säteily ja säätelee vastaavia reittejä kuten Bcl-2, Bax, fosfataasin ja tensin homologi poistettu kromosomissa 10 (PTEN), nisäkkään rapamysiinin kohde (mTOR), Akt, ja p53 [5] [8], [16], [20], [44], [45], [46], [47], [48]. Tämä viittaa siihen, että ilmaukset galektiini-3 voidaan säädellä tai liittyä autophagy syövissä ja toimii ylimääräisenä tila vaikuttaa syövän etenemiseen.

Tutkimuksen tavoitteena oli selvittää ekspressiotasoja galektiini-3 ja Beclin1 vuonna sekä normaali ja syövän kudoksissa ja korreloida ilmentymismalleja syövän tyyppejä.

Tässä tutkimuksessa käytetty qRT-PCR määrittää mRNA tasojen galektiini-3 ja Beclin1 ihmisen syövissä. Galektiini-3 mRNA-tasot olivat korkeampia kuin Beclin1 kaikissa kudostyypeissä ja yli-ja ali-ilmentyminen sekä galektiini-3 ja Beclin1 nähtiin normaaleissa ja syövän kudoksissa. Havainnot tukevat tunnettujen vaikutusten galektiini-3 käyttäytymiseen ja etenemistä tiettyjen ihmisen syöpätyyppeihin. Beclin1 ekspressiotasoja ehdotti osuus syövän käyttäytyminen ja ehdotettu rooli syövän hoitovastetta. Menetelmä qRT-PCR tietojen analysointi on apua suurten selvittäviä hyödyllisiä syöpäsolun kuoleman biomarkkereita.

Materiaalit ja menetelmät

TissueScan cDNA paneelin Quantitative Real -Aika Polymeraasiketjureaktio reaktio (qRT-PCR) B

Origene Oncology TissueScan cDNA-paneelin 96 näytteitä ihmisen normaalia (3) ja syövän kudoksissa (9) (rinta-, paksusuoli-, munuais-, maksa-, munasarja-, eturauhas-, keuhko- ja kilpirauhasen) oli saatu Origene Inc (CSRT101; 2-96well pack). Rintakudosten olivat naaraita vain, iät 42-63 vuotta. Colon näytteet olivat peräisin miehillä ja naisilla, ikä 42-91 vuotta. Munuainen näytteet olivat peräisin miehillä ja naisilla, ikä 32-57 vuotta. Lung näytteet olivat peräisin miehillä ja naisilla, ikä 49-79 vuotta. Maksa näytteet olivat peräisin miehillä ja naisilla, ikä 21-86 vuotta. Kilpirauhasen näytteet olivat peräisin naaraita ja uroksia, ikä 15-74 vuotta. Munasarja näytteet olivat peräisin naaraiden vain, iät 31-80 vuotta. Eturauhasen näytteet olivat vain miehille, iältään 53-71 vuotta.

Alukkeet QRT-PCR

Alukkeet galektiini-3 (LGALS3 kromosomin 14q21-q22, NCBI GenBank ID NM-002306), Beclin1 (BECN1, Chromosome17q21: NCBI GenBank ID 003766) ja β-Actin (ACTB; NCBI GenBank ID 001101) ovat taulukossa 1, mukaan lukien amplikonin koko ja pituudet alukkeita. Alukkeet saatiin PrimerBank [49]. Puhdistetut Oligonukleotideille ostettiin IDT (Integrated DNA Technologies Inc.).

kvantitatiivinen RT-PCR (qRT-PCR) B

Quantitative reaaliaikaisia ​​polymeraasiketjureaktioilla (qRT-PCR) tehtiin integroidun biomolekyylitutkimuksesta suunnittelu Laboratories (IBD) on Biokemian, Lääketieteellinen tiedekunta ja hammaslääketieteen University of Alberta Applied Biosystemsin 7900HT Fast Real-Time PCR-järjestelmä (Applied Biosystems Inc CA, USA). Reaktio seos sisälsi 5 ui näytettä sekoitetaan 15microL PCR cocktail (aluke 2,8 uM ja Jump2X (dNTP 160 ui, ROX 400 ui, SYBER GREEN 1/00 ​​DMSO 50 ui, Jumpstartin Taq 240 ui kokonaismäärä 10 ml), jonka suhde 1:02) .Each hyvin ajettiin kahtena testi pohja- ja viite (β-aktiini) ja kaksoisnäyte setti ajettiin jokaista aluketta kohteisiin. Reaktio Kunkin kuopan suoritettiin seuraavasti: 95 ° C 3 minuuttia, jota seurasi 95 ° C 15 sekuntia, 55 ° C 15 sekuntia, 72 ° C: ssa 1 minuutin X 40 sykliä, sitten seuraa 95 ° C: ssa 15 sekunnin ajan, sitten 60 ° C: ssa 15 sekunnin ajan ja lopuksi 95 ° C: ssa 15 sekunnin ajan. ABI7900HT ohjelmisto (SD 2,0) käytettiin, jolloin saatiin raaka-fluoresenssin tietojen (Rn ja DRN) analyysiä varten.

qRT-PCR Data Analysis

Kaikki raaka-fluoresenssin tiedot (Rn) kustakin kuopasta ( kahtena) on ladattu Miner verkkosivuilla (www.ewindup.info/miner/verson2) analysoitavaksi 4- ja 3-parametrin logistista regressiomallia laskea tehokkuutta (E) ja kierto kynnys (Ct) arvot johdettu toinen derivaatta enintään mallin [50]; kineettinen malli ei vaadi käyttöä standardikäyrän, määrittelee S: n muotoinen käyrä kunkin PCR, tunnistaa eksponentiaalisen vaiheen (EP) PCR-reaktion, arvioi tehokkuus (E) käyttäen iteratiivista epälineaarista regressiota seurasi painotettu keskiarvo sopivaksi asianmukaiset käyrä raakadataa ja Ct johdettu toinen derivaatta maksimi. Miner ohjelmisto tarjoaa tulokset kullekin kuopalle ja keskimääräinen Ct ja tehokkuus kullekin hyvin. Näytteet olivat kahtena kappaleena ja keskimääräinen /keskimääräinen käytettiin laskelmissa tehokkuuden (E) ja Ct. Samanlaisia ​​menetelmiä on käytetty muiden kuten sigmoidisten käyränsovitusmenetelmä malli [51], [52], [53] ja lineaariregressiomallin [54]. Monet seikat MIQE suuntaviivat otettiin huomioon menetelmät ja analyysit [55].

Tilastollinen analyysi

Tilastollinen ohjelmistopaketti R (www.r-project.org) käytettiin laskettaessa suhteellinen pitoisuudet (kertainen muutos) mRNA tasojen galektiini-3 ja Beclin1 näytteissä käyttäen Miner kaavaa 1 /(1 + E) ∧CT. Gretl ohjelmistot (V1.8.0) käytettiin piirtämistä ja tilastollinen analyysi.

Tulokset

Galectin3 mRNA Up-regulation in Human Cancer kudokset

Kaiken galektiini-3 mRNA tasot kaikki 96 näytettä on esitetty kuviossa. 1a. Pienin arvo oli 1.2E-03 ja maksimiarvo oli 937e-02 (keskiarvo = 67.6047e-02 +/- 130.3e-02). Suhteellinen mRNA tasot galektiini-3 normaaleissa kudoksissa ovat kuvassa. 1b ja syövän kudoksissa kuvassa. 1c. Korkein galektiini-3 normaaleissa kudoksissa oli paksusuolen limakalvolla. Normaali ja syöpä kudoksiin maksan ja keuhkojen oli pienin ilmaisuja galektiini-3. Korkea galektiini-3 ilmentävien syöpä kudoksiin olivat rinta-, eturauhas-, munuais- ja kilpirauhasen verrattuna normaaleissa kudoksissa (taulukot 2 ja 3).

(A) Box-käyrä yleistä galektiini-3 ilmentymistä kaikissa kudos tyypit. (B) Rasiakuvaajat of galektiini-3 jakelun suhteellisen mRNA normaaleissa kudoksissa (Na = normaali rinta, Nb = normaali paksusuoli, Nc = normaali munuainen, Nd = normaali maksa, Ne = normaali keuhko, Nf = normaali munasarja, Ng = normaalissa eturauhasessa, Nh = normaali kilpirauhanen). (C) Rasiakuvaajat suhteellisten mRNA tasot galectin3 syövissä kudoksissa. BRCA = Rintasyöpä, Col_Ca = paksusuolensyöpä, Ca_Kid = Munuaissyöpä, Ca_Liv = maksasyöpä, Ca_Lun = keuhkosyöpä, Ca_Ova = munasarjasyöpä, Ca_Pros = Eturauhassyöpä, Ca_Thyr = kilpirauhassyöpä (katso taulukko 2a ja b arvojen kullekin ryhmä).

Beclin1 /Atg6 mRNA in Human Normal ja Cancer kudokset

Suhteelliset mRNA-tasot Beclin1 kaikissa 96 kudostyypeissä oli vähemmän kuin galektiini -3 (Fig. 2a). Pienin arvo oli 1.27e-05 ja maksimiarvo oli 5.15e-01 (keskiarvo = 3.18056e-02 +/- 6.4003e-02). Jakelu Beclin1 mRNA normaaleissa kudoksissa on esitetty kuviossa. 2b ja syövän kudostyyppien on esitetty kuviossa. 2c ja taulukoissa 4 ja 5. Colon, eturauhas- ja maksasyöpä kudoksissa oli suuri suhteellinen mRNA arvot.

(A). Rasiakuvaaja yleistä ilmaisua kaikissa kudostyypeissä. (B) Rasiakuvaajat of Beclin1 jakelun mRNA normaaleissa kudoksissa (Na = normaali rinta, Nb = normaali paksusuoli, Nc = normaali munuainen, Nd = normaali maksa, Ne = normaali keuhko, Nf = normaali munasarja, Ng = normaalissa eturauhasessa, Nh = normaali kilpirauhanen). (C) Box-whisker tontit suhteellinen Beclin1 mRNA-tasot syövän kudoksissa. BRCA = Rintasyöpä, Col_Ca = paksusuolensyöpä, Ca_Kid = Munuaissyöpä, Ca_Liv = maksasyöpä, Ca_Lun = keuhkosyöpä, Ca_Ova = munasarjasyöpä, Ca_Pros = Eturauhassyöpä, Ca_Thyr = kilpirauhassyöpä (katso taulukko 3a ja b arvoja).

epätasapaino galektiini-3 ja Beclin1 /Atg6 Expression Normal ja syövän kudoksissa

Expression tasot mRNA: iden galektiini-3 ja Beclin1 kaikissa 96 kudoksia kuviossa. 3. Wilcoxonin Signed-sija testit erot galektiini-3 ja Beclin1 osoitti p-arvo 2.22045e-1 (kaksisuuntainen). Rintasyövän kudoksissa, galektiini-3, mutta ei Beclin1 oli hyvin ilmaistu syövän verrattuna normaaliin kudokseen. Paksusuolen syöpä kudoksissa, Beclin1 oli suurempi syövän verrattuna normaaliin, kun taas galektiini-3 oli pienempi kuin normaaleissa kudoksissa. Beclin1 taso oli korkeampi syövän normaalia maksakudoksissa taas galektiini-3 oli alhainen joskin suurempi syöpään kuin normaaleissa kudoksissa. Munuainen ja kilpirauhassyöpä kudokset oli korkea galektiini-3 mutta alentaa Beclin1 syövän verrattuna normaaliin. Munasarjoissa, sekä galektiini-3 ja Beclin1 tasot olivat pienemmät syövissä verrattuna normaaliin munasarjojen kudoksiin. Keuhkokudokset oli alhaisemmat galektiini-3 ja korkeammat Beclin1 syövän verrattuna normaaliin. Eturauhassyöpäkudoksille oli sekä galektiini-3 ja Beclin1 tasoa normaalia kudosta tasoilla (taulukot 2, 3, 4 ja 5, kuvio 4).

(keskiarvo +/- standardipoikkeama) Gal3 = 67.605e-02 + /-1,3030 Beclin1 = 3.1806e-02 +/- 6.4003e-02.

Comparative muutoksia galektiini-3 ja Beclin1 ilmentymisen yksittäisissä syöpätyypeissä esitetään.

keskustelu

tutkimus oli määrällisesti transkriptipitoisuuksissa kaksi solukuoleman merkkiaineita ihmisen normaaleissa ja syövän kudoksissa, vertaa tasoa normaalin ja syövän kudoksissa, ja vertaa ja korreloivat tasoilla eri syöpätyyppejä. Tutkimuksessa havaittiin kohonneet galektiini-3 mRNA ja suhteellisen alhainen Beclin1 mRNA. Jakelu galektiini-3-mRNA: n tasot normaaleissa ja syöpäkudoksissa ovat korkeammat kuin Beclin1 (taulukot 2, 3, 4, ja 5); ei ole mitään viitteitä siitä, että tämä merkitsee sitä, että galektiini-3: n toiminto apoptoosin häiritsee Beclin1 n autophagy toimintoja. Tämä vuorovaikutus, jos tunnistettu, voi vaikuttaa syövän hoitoon vasteen. Sekä galektiini-3 ja Beclin1 voi kuljettaa ytimiä [56], [57], saavuttavat Golgin organelle [58] ja vuorovaikutuksessa Bcl-2 [33] ja estyvät Bcl-2 [44], [59]. Beclin1 on myös terapeuttinen kohde [60], kuten autophagy voi lisätä vastustuskykyä säteilytys; esto Beclin1 lisäävästi herkkyys säteilytys [19].

galektiini-3 Role in Human Cancer

Viimeaikaiset havainnot syövän ksenograftimallia osoittaa, että inhibitio galektiini-3, käyttäen synteettisiä lactulosyl-1-leusiinin yhdistettynä taksolin, keuhkojen etäpesäkkeet ja lisääntynyt etäpesäkkeitä-eläimissä [61]; toteamus, joka osoittaa kasvavaa merkitystä galektiini-3 toimintaa ihmisen syövässä. Toisessa tutkimuksessa käytetään pienimolekyylisiä inhibitio galektiini-3 kilpirauhassyöpä solulinjoissa ja osoitti, että inhibitio indusoi apoptoosin syöpäsoluissa ja herkkyys doksorubisiinille [62]. Syöpä strooman angiogeneesiä voidaan edistää matriksimetalloproteinaasi pilkkomalla galektiini-3 N-päähän [63] sekä in vitro angiogeneesin mallien ja ihmisen syövän kudoksissa. Lisäksi käyttö galektiini-3-inhibiittoreita in vitro ja gal3 (- /-) eläimet osoittavat, että galektiini-3 sitoutuu intergrin a5-p3: n ja indusoi angiogeneesiä kautta verisuonen endoteelin kasvutekijä (VEGF) ja b-fibroblastien kasvutekijä (bFGF) [64 ]. Vuonna syövät kohonneisiin galektiini-3 ja Beclin1 (maksa ja eturauhasen syöpiä), kohteena sekä voi olla hyötyä.

Tässä tutkimuksessa, galektiini-3 mRNA-tasot olivat korkeimmat rinta-, keuhko-, munuais-, ja kilpirauhassyövän verrattuna normaaleihin kudoksiin. Korkea ilmauksia galektiini-3 joidenkin ihmisen syöpien osoittavat etenemistä ja metastaattisen aktiivisuuden syövän, eli rinta- [65], [66], munuaisen [67], ja kilpirauhasen [68]. Galektiini-3 on kemoattrak- monosyytit ja makrofagit [69] ja ilmaistaan ​​kasvaimen verisuonten endoteelisoluissa ja voisi toimia palautteen stroomamääriin ja syöpäsolujen [70]. Galektiini-3 on vaikutuksia K-ras signalointi rintasyöpäsoluissa [25] ja sen tumaansiirtymiseen paremman suojan kemoterapian [71]. Galektiini-3 edistää etäpesäke koe rintasyövän metastaasi malleja [72]. Galektiini-3 on kohonnut kilpirauhassyövän kanssa p53 Erityisen huonosti eriytetty ja anaplastinen alatyyppejä [73]. Korkea galektiini-3 näissä alatyyppejä ovat kannustaneet käyttö galektiini-3 kuvantamisessa näiden syöpien [68] ja koska terapeuttinen tavoite [31]. Kuten todettiin tässä tutkimuksessa galektiini-3 ilmentyy normaaleissa kilpirauhasen [74] ja ylemmille tasoille kilpirauhassyövän, kuten nähdään tässä tutkimuksessa, voidaan käyttää erottamaan hyvän- ja pahanlaatuiset kilpirauhasen kudosten jos asianmukaisia ​​näyttöön perustuvaa tietoa otettava huomioon [75]. Yhdistämällä pienimolekyylisiä esto galektiini-3 ja doksorubisiinin hoitoon kilpirauhasen papillaarisen syövän ja solulinjoissa lisääntynyt huumeiden vaste ja apoptoosin [62]. Paksusuolen syöpä, tumalokalisaatio ja galektiini-3 liittyy resistenssin 5-fluorourasiilin (5-FU-käsittely) [76]. Esillä olevassa tutkimuksessa, paksusuolen syövät ryhmänä oli matalat galektiini-3 tasoa, vaikka sen osuus etenemistä ei tunneta. Vuonna maksasolukarsinoomat, seerumin tai ydinaseiden galektiini-3 osoitti histologinen ja verisuoni- invaasiota [77]; Tässä tutkimuksessa sekä galektiini-3 ja Beclin1 ovat koholla maksasyövän verrattuna normaaleissa kudoksissa ja mahdollisesti tukee suhteellista vastustuskykyä kemosädehoidon. Kuten on esitetty muissa tutkimuksissa, galektiini-3 ilmentyy suuresti munuaisten syövistä [67]. Korkea galektiini-3 munuaissolukarsinoomissa löydettiin primaarinen ja metastaattinen munuaissolukarsinooman; metastasoitunut karsinoomia oli korkeampi kuin ensisijainen karsinoomien viitaten rooliin etenemisessä [78]. Korkea galektiini-3 tasot eturauhasen syöpiä tässä tutkimuksessa voi tukea havainnot mallissa eläinkokeissa. Eturauhassyövän LNCaP, joka ei ole galektiini-3 (johtuen promoottorin hypermetylaatio), indusoima galektiini-3 johtaa vähentää lääkkeen indusoiman apoptoosin [71]. Samoin, yli-ilmentyminen galektiini-3 eturauhassyövän LNCaP, joka ei ole galektiini-3: n ekspressio johti kasvaimen kasvun inhibitiota [79]. Galektiini-3 voidaan pilkkoa proteaasien aikana eturauhassyövän etenemisen, ja PC3 eturauhassyövän solulinja vähentää galektiini-3 oli vähentynyt tuumorin kasvua ksenografteissa [80]. Korkea galektiini-3 eturauhassyöpänäytteissä voisi osoittaa, matala vaiheessa ja vähemmän etenevä sairaus [81], [82].

Beclin1 n Syöttö Cancer Behavior

Toisin kuin galektiini -3 havaintojen Beclin1 yleisesti alaspäin säännellä kaikissa kudostyypeissä ja monissa syövän alatyyppejä. Vuonna maksasolukarsinoomat, Beclin1 oli lisääntynyt verrattuna normaaliin ja väheneminen Beclin1 ilmoitettiin ennustaja taudista vapaan eloonjäämisen ja aggressiivisia syöpiä oli alhainen Beclin1 [83]; havaintojen maksasyövän voisi ehdottaa vähemmän aggressiivisia syöpiä. Beclin1 todettiin säännellä estradioli toimintaa rintasyövän [84] ja suhteellisen normaalia tasoa löytyi voi osoittaa estrogeenin toimintaa. Beclin1 tasot eturauhasen syöpä voi tukea havainnot mallissa eläinkokeissa. Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että eturauhasen syöpäsolujen sulforafaanin kanssa [85] ja mTOR (rapamysiinin kohde) indusoi autophagy ja lisääntynyt vaste säteilytys [86]. Eturauhasen syöpiä oli Beclin1 normaalia suurempi ehdottamalla mahdollisia säteilyn vastaus. Ei ole suoria tutkimuksia muutoksista Beclin1 munuaisten syöpä, vaikka pieni molekyyli esto VHL (von Hippel Landau) syöpäsoluissa aiheuttama autophagy ja vähensi kasvua [87]. Tässä tutkimuksessa, munuaisten syövät ilmaistuna Beclin1 alla normaaleissa kudoksissa, ja voi ehdottaa puute aktivaation autophagic solukuoleman. Vuonna munasarjasyöpiä, induktio autophagy johtaa kasvaimen lepotilan [88]. Tässä tutkimuksessa, munasarja- syöpiä oli Beclin1 alemmat tasot normaaleissa kudoksissa osoittaa puuttuessa lepokauden, ja mahdollisesti aggressiivinen käytös. Ekspressiotasot Beclin1 on munasarja-, eturauhas- ja rintasyövän syöpiä voidaan vaikuttaa tunnetuilla deleetiot, jotka esiintyvät näiden syöpien [36].

galektiini-3 ja Beclin1 yhdessä ihmisen syövissä

Selvittämisessä asiaa solukuolemareittejä ihmisen syöpä voi tarjota tapa valita tiettyjä hoitoja välttää ei-toivottuja reaktioita. Sovellettavat apoptoosin ja necroptosis tehdä päällekkäisiä mutta myös ainutlaatuinen jokaiselle solukuolemaa malli [9], [10]. Näin ollen, tukahduttaminen galektiini-3 ja sen pro-apoptoosi-toiminnot edistää necroptosis kautta RIP1 ja RIP3 [11], [14]. Ehdotetut mallit viittaavat siihen, että kun autophagy on ehjä ja toimintaa, solut käyvät läpi apoptoosin, kun apoptoosireitin säilyy ja mennä selviytymisen jos apoptoosin on häiriintynyt; toisella puolella, jos autophagy on viallinen, mutta apoptoosi on ehjä, solut käyvät läpi apoptoosin, mutta hengissä, jos apoptoosin on puutteellinen [89]. Ihmisen syövissä korkean galektiini-3 (oletettu pro-apoptoosi) ja Beclin1 käyttö pienimolekyylisiä eston galektiini-3 parantaa hoidon vaste voi olla hyödyllistä. Tuoreessa tutkimuksessa kuvataan käyttöä siRNA ja GSC-100 /MCP (muokattu pektiiniä sitraatti) estävän galektiini-3 eturauhassyöpäsolu- PC3 ja parantaa sisplatiinihoitoon vastausta [90]. Tämä tutkimus ja muut ehdottavat merkitystä edeltä käsin läsnäolo solukuolemareittiin merkkiaineiden syövissä optimoida käytön yhdistetyn lääkkeen ja pienmolekyylisalpaajien.

Tutkimus Rajoitukset

Tässä tutkimuksessa selvitettiin käyttöä qRT-PCR määritettäessä ekspressiotasot kahden syöpäsolun kuoleman markkereita. Vastaavaa proteomiikkaa hyötyvät tällaiset tutkimukset määritellä korreloivat proteiinipitoisuus ja tai lokalisointi ja antaa lisätukea transkriptipitoisuuksissa. Eturauhassyövässä ja LNCaP, promoottori metylaatiostatus vaikuttaa kudosilmentämisen galektiini-3; joten proteomiikka ehkä korrelaatio metylaatiostatuksen [91]. Survival ja hoito vasteet eivät kuulu tämän tutkimuksen kuin jälkikäsittely seurannan ja selviytymistä tietoja ei ollut saatavilla. Joka korreloi selviytymisen ja hoitovaste on olennainen osa suurempia näytteitä ja tutkimuksia (normaali ja syöpä on yli 9 näytettä), jonka tarkoituksena on määritellä hyötyjä ennalta syöpäsolun kuoleman biomarkkereita kliiniseen käyttöön. Kehittyvät menetelmiä seuraavan sukupolven sekvensointi ehkä validointi tiiviimmän menetelmiä qRT-PCR.

Utility of Kinetic /Regressiomallit qRT-PCR

Tässä tutkimuksessa tutkitaan myös käyttöä Miner ohjelmisto ( 2.0) analyysiä varten kaikkien määrällisten polymeraasin ketjureaktion data [50]. Tämä ja muita menetelmiä on raportoitu Muut tutkijat eivät edellytä standardikäyrän ja käyttää lineaarista tai ei-lineaarista regressiota mallintaminen [51], [52], [53], [54], [92], ja se voi parantaa kykyä suorittaa suurikapasiteettisten kvantitatiivinen reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (qRT-PCR) tutkimukset varmennuslaskentaan, ja validointi muut mikrosirujen kokeita.

Johtopäätökset

roolit galektiini-3 ja Beclin1 apoptoosin ja autophagy on kuvattu hyvin. Galektiini-3 ja Beclin1 rooleja syövän etenemiseen ja hoitovaste tukee ekspressiokuvioita tässä tutkimuksessa. Tutkimuksessa käytettiin raaka fluoresenssi qRT-PCR data ja Miner ohjelmistot (Miner 2.0), joka käyttää logistinen regressiomalli laskea yksittäisiä hyvin tehokkuuden ja Ct-arvoja. Menetelmän qRT-PCR-analyysi soveltuu käyttämään suuria määriä kudoksen sarjaa, ja ne voivat olla käyttökelpoisia luotaessa biomarkkerina sarjaa, joka perustuu geenin, verkkoja, joita voidaan käyttää diagnoosissa ja ennustamisessa syövän hoitoon vastetta.

Tiedoksi

kiitollisena tunnustavat apua S. Bolch (Integrated biomolekyylitutkimuksesta suunnittelu Laboratories).