Krooninen sairaus

tiivistelmä

SnoN on negatiivinen säätelijä TGF-β signaloinnin ja myös aktivaattori kasvaimen p53 vasteena solujen stressiä. Sen merkitys ihmisen syöpä on monimutkainen ja kiistanalainen sekä pro-onkogeenisiä ja anti-onkogeenisen toimintaa raportoitu. Selventää sen merkitys ihmisen syövän ja kliinistä merkitystä sen signalointi toimintaan, tarkastelimme SnoN ilmentymistä normaalissa ja syöpä- ihmisen ruokatorven, munasarja-, haima- ja rintakudosten. Normaaleissa kudoksissa, SnoN ilmentyy sekä epiteelin ja ympäröivän strooman kohtuullisella tasolla ja on pääasiassa sytoplasminen. SnoN tasoa kaikissa kasvain epiteeli tutkinut ovat pienempiä tai samankaltainen kuin sovitetussa normaalissa näytteitä, johdonmukainen sen antituumorigeenistä aktiivisuuden epiteelisolujen. Sen sijaan, SnoN ilmentyminen strooman on erittäin ylössäädelty tunkeutuva tulehdussolujen korkea-asteen ruokatorven ja munasarjojen kasvainnäytteet, viittaa siihen, että SnoN saattavat edistää maligni kehittyminen moduloimalla kasvaimen mikroympäris- näissä kasvaintyypeissä. Yleiseen tasoon SnoN ilmentymisen näissä syöpä kudokset eivät korreloi p53 tila. Kuitenkin ihmisen syöpäsolujen linjat monistamisen

snoN

geeni, vahva korrelaatio lisääntynyt SnoN kopiomäärä ja inaktivaation p53 havaittiin, mikä viittaa siihen, että kasvain vaimennin SnoN-p53-reitin on inaktivoitava, joko downregulation SnoN tai inaktivoida p53, jotta syöpäsolujen lisääntyä ja hengissä. Nämä tiedot viittaavat vahvasti siihen, että SnoN voi toimia tuumorisuppressorina varhaisvaiheissa tumorigeneesin ihmisen syövän kudoksissa.

Citation: Jahchan NS, Ouyang G, Luo K (2013) Expression profiilit SnoN normaalissa ja syöpä- Human kudokset tueksi Kasvain vaimennin Role in Human Cancer. PLoS ONE 8 (2): e55794. doi: 10,1371 /journal.pone.0055794

editori: Christina Lynn Addison, Ottawa Hospital Research Institute, Kanada

vastaanotettu 4 marraskuuta 2012 Hyväksytty: 30 joulukuu 2012; Julkaistu: 13 helmikuu 2013

Copyright: © 2013 Jahchan et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukee NIH RO1 CA101891 ja RO1 DK090347 K. Luo ja DOD BCRP predoctoral apurahan N. Jahchan. Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

SnoN (Ski-proteiini-) oli nyrkki löydettiin kuin onkoproteiinia joka voi aiheuttaa muutos kanaa ja viiriäisen alkion fibroblasteissa, kun yli-ilmentynyt [1] – [4]. Nisäkkäillä, SnoN sisältää sekä pro-onkogeenisiä ja anti-onkogeenisen toimintaa. Pro-onkogeenisiä aktiivisuus SnoN on riippuvainen sen kyvystä sitoutua Smad proteiineja ja antagonisoivat sytostaatit vasteita TGF-β [5], [6]. Suppporting sen pro-onkogeenisen rooli, SnoN ilmentyminen on kohonnut useimmissa ihmisen syöpäsolulinjoissa, ja vähentäminen SnoN ilmentymisen shRNA in invasiivisen rintasyövän ja keuhkosyöpä solulinjat inhiboi kasvaimen kasvua sekä

in vitro

ja

in vivo

[7]. Vielä tärkeämpää on, yliekspressio SnoN hiiren maitorauhasen kiihdyttää rintasyövän kehitykseen ja keuhkojen etäpesäkkeiden aiheuttama polyoomate- keskimmäinen T-antigeeni (PyVmT) [8], joka tarjoaa ensimmäisen

in vivo

tukea pro-kasvaimia synnyttävän aktiivisuuden of SnoN. Viime vuosina on kuitenkin yhä enemmän todisteita on ilmaantunut osoittaa, että SnoN voi toimia myös tuumorisuppressorina. Heterotsygoottinen joilta puuttuu yksi kopio

snoN

geenissä lisääntynyt alttius karsinogeeni aiheuttamaa kasvainten synnyssä, mikä viittaa siihen, että SnoN voivat suojata hiiriä syövän synnyn [9]. Olemme äskettäin osoittaneet, että korkeat SnoN estävät onkogeenin indusoimaa muutosta ensisijainen hiiren alkion fibroblasteissa

in vitro

ja lohko kasvainten kehittymiseen

in vivo

in kaksivaiheisessa ihon syövän synnyn hiirimallissa [10 ]. Tämä anti-onkogeenisiä aktiivisuus SnoN on riippumaton sen kyky tukahduttaa TGF-β signalointi ja todennäköisesti johtuu sen kyky aiheuttaa vakauttamiseen p53. Vastauksena solujen stressiä, korkea SnoN rekrytoimista PML nulcear elimiä, joissa se aiheuttaa vakauttaminen p53, mikä lisää solujen vanhenemista ja apoptoosia [10]. Näin ollen, korkea SnoN soluissa voi aktivoida PML-p53-tuumorisuppressorin polku estää kasvaimen kasvua. Lopuksi SnoN voi myös estää kasvaimen etäpesäke koska vähentää SnoN ilme parantaa epiteelin ja mesenkymaalitransitioon (EMT) keuhkosyövän ja rintasyövän solujen

in vitro

ja tuumorietäpesäke

in vivo

[7].

Koska kyseessä on monimutkainen roolit SnoN kasvainten synnyssä, on tärkeää määrittää sen ilmentämiskuviota normaaleissa ihmisen kudoksissa ja seurata miten se muuttuu aikana pahanlaatuinen etenemisen. SnoN ilmentyy kaikkialla kaikissa alkion ja aikuisen kudoksissa. Sen ilmentyminen ylössäädellään aikana eri vaiheiden alkionkehityksen ja elimen morfogeneesiä [11]. Transformoimattomilta solujen ja normaaleissa kudoksissa, SnoN voidaan havaita sekä sytoplasmassa ja tumassa, kun taas syöpäsolulinjoissa, SnoN on pitkälti ydin- [8], [12], [13]. Lisäksi, SnoN ilmentymistä voidaan säädellä tasolla geenin monistamisen, transkriptionaalisen aktivaation ja proteiinin stabiilius. Ihmisen

snoN

geeni sijaitsee kromosomissa 3q26.2, kasvupaikalla usein monistettu monissa syöpätyyppejä, mukaan lukien ruokatorven, munasarjan ja monet muut [5]. Tästä samaa mieltä, SnoN ilmaus ylössäädellään monissa syöpäsolulinjoissa [6]. Kuitenkin, onko SnoN ilmentyminen on myös lisääntynyt ihmisen syövän kudoksissa on edelleen kiistanalainen. Useat tutkimukset ovat tarkastelleet tätä kysymystä [13] – [18], mutta mitään johdonmukaista mallia on syntynyt. Vaikka jotkut tutkimukset raportoitu lisääntyminen SnoN RNA ja proteiini tasoilla joissakin syövän kudoksissa ja että tämä korkeampi SnoN ilmaus korreloi huono erilaistumista syvempi invaasio ja huono potilaan eloonjääminen [13], [14], [16], toiset havaittu lasku SnoN ilmaisu vastaavissa syöpien, erityisesti dysplastisia ja erittäin invasiivisia syöpiä [15], [17], [18]. Mahdollinen suhde lokalisointi SnoN ja pahanlaatuisen tilan syöpä myös vaihteli tutkimuksen tutkimuksesta. Nämä ristiriitaiset tiedot viittaavat siihen monimutkaisempi suhde SnoN ilmaisun ja pahanlaatuisen muutoksen ja perustella tarvitaan laajempaa tarkastelua SnoN ilmaisun normaaleissa ja syövän kudoksissa eri pahanlaatuisten vaiheiden.

Tässä raportissa tarkastelimme SnoN ilmaisun neljänlaisia ​​normaalia ihmisen kudosten ja yhteensopivuuden syövän kudoksissa eri kliinisiä vaiheissa maligniteetti arvioida, onko korjauksilla SnoN ilmaisun korreloi kasvaimen pahanlaatuisuuden ja /tai tilan p53 inaktivaation. Nämä neljä tyyppiä, ruokatorven, munasarja-, rinta- ja haiman kudoksista, valittiin, koska SnoN on liitetty kehittämiseen näiden syöpien ja /tai normaaliin toimintaan näiden kudosten. Ruokatorven ja munasarjojen syöpien liittyy usein monistamisen 3q26 amplikonin, ja kopioluvun

SnoN

geenin sekä SnoN transkriptin tasot on havaittu lisäävän näiden syöpien [14], [16], [19 ], [20]. Kuitenkin ekspressiokuviota SnoN proteiinia normaalissa munasarjassa ja munasarjan adenokarsinooma ei ole määritelty. Haimasyöpä on läheisessä yhteydessä TGF-β /Smad reitin, ja Smad4 inaktivoidaan lähes 60% haimasyövän [21]. Negatiivisena säätelijänä Smad4, SnoN voi myös olla merkitystä kehitettäessä haimasyövän. Lopuksi meidän viimeaikaiset tutkimukset erilaisilla hiiren malleja ovat osoittaneet, että SnoN ilmentymistä dynaamisesti säädellään aikana maitorauhasen kehitykseen [8] ja on osallinen pahanlaatuinen etenemistä rintasyövän [7], [8], [12]. Tutkimalla sijainti ja tasojen SnoN ilmentymisen näissä kudoksissa, toivomme saada parempi käsitys toiminnot SnoN pelata aikana tuumorigeneesiä sekä epiteelin ja strooman ympäristö ja miten tämä voi korreloida p53 inaktivaatioon.

materiaalit ja menetelmät

Normaali ja Syöpä kudosmatriisien

Kaikki paneelit hankittiin Biomax (Cybrdi Inc). Nämä paneelit tulevat tiedot kliinisistä vaiheista, patologian laadut ja TNM. Ruokatorven joukko sisältää paria Tuumorinäytteiden näytteiden ja vastaaviin normaaleihin näytteitä 39 Histologisesti ja kliinisesti luokiteltu adenokarsinooma: 8 potilasta, joilla oli asteen I, 19 potilaalla, luokan II, ja 11 potilasta, joilla oli asteen III kasvaimia.

munasarjakasvain array sisältää Tuumorinäytteiden näytteitä ja 10 normaalia Hyväksytty näytettä 69-vuotiaiden naisten 50 +/- 10. Kasvaimet luokiteltiin olevan munasarjojen adenokarsinooman: 3 Munasarjasyöpäpotilaiden selkeä karsinooma, 12 potilasta, joilla oli asteen I, 29 potilaalla on asteen II, ja 25 potilasta, joilla oli asteen III adenokarsinoomat (kaikki imusolmuke etäpesäke muttei etäpesäkkeiden).

haimakasvain joukko sisältää näytteitä 90 potilaista ja viisi normaalia haiman kudosnäytteitä. Kasvain tyyppejä Tämän array kuuluvat adenokarsinooma, mucinous adenokarsinooma, neuroendokriini karsinooma, adenosquamous karsinooma, karsinoidi, ja kiinteä pseudo-papillaarisen karsinooma. Ne on luokiteltu eri kliininen luokkiin perustuu histologiseen arviointiin: 21 potilasta, joilla oli asteen I, 59 potilasta, joilla oli asteen II, 8 potilaalla on asteen III (monilla on imusolmuke etäpesäke), ja 2 potilasta, joilla oli asteen IV kasvain kaukaisiin etäpesäkkeitä.

rintasyövän array sisältää päällekkäisen Tuumorinäytteiden näytteitä 31 potilasta, kuusi normaalia näytettä kuudesta matching potilaista, ja 9 metastaattisen näytteet 9 vastaavia potilaita. Nämä kasvaimet olivat kliinisesti luokiteltu histologista analyysiä voidaan soluttautua duktaalikarsinooma: 9 potilaalla on asteen II A, 4 potilaalla on asteen IIB, 10 potilasta, joilla oli asteen IIIA, 5 potilasta, joilla oli asteen III C, 9 vastaavia potilaita, joilla imusolmuke metastaattinen, ja 1 potilas, jolla metastaattinen adenokarsinooma on munasarja. Koska eroa SnoN ilmentymistä havaittiin välillä luokan II a ja b välillä tai luokan IIIA ja IIIC kasvaimet, me ryhmitelty nämä näytteet yhdessä luokan II tai luokan III kasvaimet. Lisäksi 24 paria rintojen duktaalikarsinooma in situ (DCIS) näytteet yhteensopivat normaaleissa kudoksissa saatiin UCSF Cancer Center.

paksuus kaikki paneelit on 5 um. Rintasyöpä array sisältää päällekkäisiä näytteitä jokaisen potilaan ja ruokatorven, munasarjan ja haiman paneelit on yksi jakso kunkin potilaan.

immunohistokemia

For SnoN immuostaining.

parafinoidut taulukot poistettiin parafiini ksyleenissä sitten niihin lisätään sarjassa etanolia kaltevuus. Osiot upotettiin 0,85% NaCl: a 5 minuuttia, sitten PBS: ssä 5 minuuttia, ja kiinnitettiin 4% paraformaldehydillä (PFA). Läpäiseväksi dioja toteutettiin 20 ug /ml proteinaasi K: ta 10 minuutin ajan huoneenlämpötilassa (RT), jota seurasi pesu PBS: ssä 5 minuuttia. Näytteet kiinnitettiin toisen kerran 4% PFA, ja blokattiin yön yli 1% BSA /10% vastasyntyneen vasikan seerumia /0,02% Triton X-100 PBS: ssa kosteutetussa kammiossa 4 ° C: ssa. Värjäytyminen suoritettiin anti-SnoN tunnistavan vasta-aineen C-terminaalisen peptidin SnoN [12] pitoisuutena 1 ug /ml 2 tunnin ajan yhdessä peptidin kilpailun valvonnan ja negatiivinen kontrolli ilman primaarista vasta-ainetta. 3 pesun jälkeen IF-puskurilla (10% vastasyntyneen vasikan seerumia /0,02% Triton X-100 PBS: ssä) 15 minuutin ajan kutakin, fluoresoiva konjugoitua sekundaarista vasta-ainetta (Alex488 anti-kani-vasta-aine 1:400 laimennos) lisättiin diat 1 tunti RT pimeässä. Objektilasit pestiin kerran IF-puskurilla 15 minuutin ajan ja kahdesti PBS: lla 10 minuutin ajan kutakin, minkä jälkeen lisättiin yksi tippa Vectashield DAPI kiinnitysväliaine (H-1200, Vector Laboratories, Burlingame, CA).

kohdat samasta kudoksesta tyypit (normaali ja syöpä) olivat kaikki värjätty samassa kokeessa samoissa olosuhteissa, ja kuvat otettiin konfokaalimikroskoopilla yhden istunnon aikana. Lisäksi saman vasta-aineen paljon ja laimennoksia käytettiin kaikkien värjäykset on kuvattu tässä asiakirjassa. Missään tapauksessa oli vasta käyttää uudelleen missään kokeissa.

For p53 immunohistokemiallisesti.

Parafiini upotettujen leikkeiden poistettiin parafiini ksyleenissä, niihin lisätään etanolia, ja inkuboitiin 3% H

2O

2 10 minuuttia sammuttaa endogeenisen peroksidaasin. Sitten leikkeet mikroaaltouunissa 95 ° C: ssa 30 minuutin ajan natriumsitraattipuskurissa (pH 6) [22] ja blokattiin käyttämällä Tyramide Signal Amplification Biotiini System Kit (Perkin Elmer, Boston, MA) ja 30 minuutin ajan RT: ssä. Objektilasit käsiteltiin 30 minuutin ajan anti-p53 at 1:200 laimennus (DO-7 klooni, Abcam, Cambridge, UK). Pesun jälkeen 3 x 5 min 0,05% Triton X PBS: ssä, kalvot inkuboitiin biotinyloidun sekundaarisen vasta-aineen kanssa 30 minuuttia huoneenlämpötilassa. Kaikki seuraavat vaiheet suoritettiin valmistajan protokollan mukaisesti. Visualisointiin, DAB käytettiin peroksidaasisubstraattia (SK-4105, Vector Laboratories, Burlingame, CA).

Kuvansiirtäjää ja Semi-kvantitatiivinen data-analyysin

Kunkin SnoN-värjätään kasvainnäyte ainakin kolme kuvaa otettiin käyttäen LSM 510 konfokaalimikroskoopin alle 20x tavoitteena varmistaa, että suuret alueet kullekin näytteelle sisältyvät kvantifiointiin. SnoN intensiteetti (pikselien lukumäärä /alue) jokaisen kolmen alueen laskettiin käyttäen kuvan J ohjelmisto, ja koko alue pidettiin vakiona koko määrän prosessissa. Numerot sitten keskiarvo kullekin kasvaimen näytteen. Negatiivinen kontrolli ja peptidi kilpailu tausta signaalit vähennettiin kaikista näytteistä aikana kvantifiointiin. P53 kuvat otetaan kanssa Zeiss AxioImager fluoresenssimikroskooppiin. Nuclear p53 signaalin intensiteetin kvantifioitiin on 0 (negatiivinen) 5 (erittäin voimakas värjäytyminen) mittakaavassa.

selvitys mahdollisista yhdistyksen TP53 mutaation ja SKIL vahvistus, suoritimme data mining Novartis solulinjan tietosanakirja ( CLE), joka sisältää 947 ihmisen syöpäsolulinjoissa [23], jossa kopioida numerot ja mutaatioiden SnoN (SKIL) ja p53-geenit on tunnettu siitä, käyttäen Affymetrix SNP6 mikrosirujen tai RNAseq. Analysoimme 914 solulinjat erottamalla solulinjat perustuu taajuuden SnoN vahvistusta ja tutkii taajuutta TP53 mutaation kussakin ryhmässä.

Tilastollinen analyysi suoritettiin käyttäen Studentin t-testiä toiminto Bioconductor R paketin 2-tailed t-testejä olettaen epätasainen varianssit. Pearsonin korrelaatiokerrointa laskettiin R paketti, ja merkitys havaittu korrelaatiokerroin määritettiin käyttäen yhden otoksen t-testiä väestöä vastaan ​​korrelaatiokertoimet välissä p53 ja kaikkien Entrez geenien ihmisen genomin. Mahdolliset korrelaatio SnoN ilmaisun ja p53 inaktivaatio syövän kudoksissa arvioitiin käyttämällä Kruskal-Wallisin testiä.

Tulokset

SnoN on ilmentyy normaaleissa nisäkäskudoksissa

määrittää normaalia kuvio SnoN erilaisissa ihmisen kudoksissa ja perustason lisäanalyysiä varten syövän kudoksissa, ensin tutkitaan SnoN ilmentymistä 39 normaalissa ruokatorven kudosnäytteitä, 10 normaali rinta näytettä, 6 normaali munasarjojen ja 5 normaali haima näytteitä immunohistokemiallisesti anti-SnoN. Tämä affiniteettipuhdistettua vasta-ainetta nostettiin vastaan ​​C-terminaalisen peptidin ihmisen SnoN ja on aiemmin karakterisoitu imunofluorescence ja immunohistokemia tutkimuksissa [8], [12].

ruokatorven lima- kalvoja ja sisältää kolme kerrosta: ei-keratinisoituneita kerrostunut levyepiteeli, lamina propria, joka koostuu löysä sidekudoksen, ja muscularis limakalvon, joka koostuu sileän lihaksen. Kun ruokatorven kerrostunut levyepiteeli, SnoN on ilmaistu kohtalainen tai suuri solulimassa, jossa on vahvempi värjäytymistä yläpinnan osa litistetty epiteelin kuin alemman kerroksen cuboidal solujen (kuvio 1A). Lamina propria, SnoN oli pääasiassa paikallisia sytoplasmassa solujen sidekudoksen, mutta voidaan myös havaita tumassa noin fibroblasteissa. Verisuonten ilmaistuna SnoN korkealla tasolla, ja luustolihasten muscularis limakalvon oli korkein SnoN värjäytymistä (kuvio 1A). Siten SnoN ilmentyy sekä epiteelisoluissa ja strooman lokero, ja koska siihen liittyy suuri ilmentymistasoissa lihaksia, verisuonia ja fibroblasteissa, se voi olla tärkeä rooli säätelyssä strooman microenvironment.

SnoN ilmaisun normaali ruokatorvi, mukaan lukien suprabasaalisissa eriytetty squamous epiteelisolujen, lamina propria (strooman ja sidekudos), ja muscularis mucosa (sileän lihaksen). E: epiteelisolujen; F: fibroblastit; BV:; verisuoni. Negatiivinen kontrolli: kudoksen värjättiin konjugoidulla sekundaarisella vasta-aineella yksinään ja ilman primaarista vasta-ainetta. Peptidi ohjaus: kudoksen värjätään SnoN peptidin kilpailun valvonnan. Green: SnoN; sininen, DAPI. B, edustaja SnoN ilmentyminen normaalissa munasarjakudoksessa. E: follikkelia epiteelisolujen; S: strooman. Vasemmassa paneelissa on DAPI tahra yksin (sininen), keskimmäinen paneeli on SnoN tahra yksin (vihreä), ja oikea paneeli on SnoN (vihreä) plus DAPI (sininen) tahroja. Sama koskee hahmo paneelit C-D. C, edustaja SnoN ilmentyminen normaalissa haima. E: acinar epiteelisolujen; S: strooman solut lobulaarinen sidekudoksen septaa. D, edustaja SnoN ilmentyminen normaalissa rinnassa. E: epiteelisolujen kaapelikanavien ja lobuli; S: strooman.

Normaalissa munasarjakudoksen, SnoN oli pääasiassa sytoplasmista ja ilmaisi kohtuullisella tasoilla ikiaikaisen ensisijainen epiteelin follicle soluja ja strooman soluja (kuvio 1 B). Normaalissa haima-, SnoN oli läsnä sytoplasmassa epiteelisolujen acini ja intralobular kanavat kohtuullisella tasolla, ja lobulaarinen sidekudoksen rikkoutuminen alemmalla tasolla (kuvio 1C). Lopuksi normaaleissa rinta- kudoksissa, SnoN ilmaistiin sytoplasmassa epiteelisolujen lobuli ja päätelaitteen kanavat (kuvio 1 D), joka on samanlainen kuin mitä on raportoitu aikaisemmin [8], [12]. Se havaittiin myös strooman alemmalla tasolla. Näin ollen, SnoN on läsnä kaikissa epiteeli- ja stromakerroksissa näiden neljän normaalin kudoksen eri erisuuruisia. Epiteelisoluissa kaikki kudostyypit, SnoN on pääasiassa lokalisoitu sytoplasmassa. Tämä on sopusoinnussa meidän aiempia tuloksia [8], [12].

SnoN Expression on Alennettu Ala Grade Ruokatorven Adenokarsinooma mutta verrattavissa WT Kudokset High Grade Kasvaimen Stroma

seuraava tutki SnoN ekspressiotasot ja kuviot 39 ruokatorven adencarcinoma kudosnäytteiden by immunofluoresenssivärjäyksen seurasi konfokaali kuvantaminen sekä 20X ja 40X suurennus ja vertasi niitä, että vastaavat normaalia näytteitä. Nämä ruokatorven adenokarsinooma näytteet on luokiteltu kliinisesti palkkaluokasta I-III. On huomattava, että monikerroksinen kudos rakenne nähdään normaalissa ruokatorven kudos on menettänyt täysin näillä adenokarsinooma näytteissä, ja kasvaimen stroomasolujen lomassa kasvain epiteelin. Meidän semikvantitatiivinen analyysi osoitti, että verrattuna normaaliin levyepiteeli, SnoN ilmentyminen väheni merkittävästi luokalla I (p = 0,00016) ja vähemmässä määrin luokan II kasvaimet (p = 0,142) (kuvio 2A ja 2B). Mielenkiintoista, koska kasvaimet eteni entistä pahanlaatuinen vaiheessa (luokka III), SnoN lauseke talteen vähitellen tasolle verrattavissa tai suurempi kuin normaalissa valvonta (kaksi edustavaa näytettä, yksi lähellä normaalia ja yhden korkeamman esitetään kuviossa 2A). SnoN ilmaisun stroomasoluissa ja sidekudoksen luokalla I ja II kasvaimet myös vähentynyt merkittävästi, että normaaleissa kudoksissa. Grade III kasvain strooman kuitenkin osoitti merkittävää voimistumista SnoN ilmaisun kuin luokan I kasvaimet (p = 0,0068) ja saavutti tason samanlainen ja 55% näytteistä, korkeampi kuin normaaleissa kudoksissa (viimeinen paneeli, kuva 2A) etenkin soluttautumaan fibroblasteissa ja tulehdussolujen (lymfosyyttien, leukosyyttien ja fagosyyttien) (kuvio 2A ja 2C). Kuitenkin, koska suuret vaihtelut joukossa yksittäisen luokan III näytteiden keskimääräinen muutos strooman SnoN tasojen yli, että WT kudoksissa ei ollut tilastollisesti merkitsevä. Erityisesti SnoN pysyneet jokseenkin sytoplasman näissä kasvain näytteissä. Tuloksemme viittaavat siihen, että SnoN ilmentyminen säädeltiin vähentävästi potilailla, joilla on huono laatu ruokatorven adenokarsinooma mutta sen ilmentyminen uudelleen käyttöön vuonna korkealuokkaisesta kasvaimet, vuonna etenkin strooman (tarkemmat luvut, katso taulukko 1). Tämä viittaa siihen, että SnoN ilmaisu voi vaihdella eri vaiheissa maligniteetti ja että SnoN voivat pelata erilaisia ​​rooleja eri vaiheissa tumorigeneesin.

, edustaja SnoN värjäys ruokatorven syöpään eri laatuja klo 20X (ylhäällä) tai 40x ( pohja) suurennuksilla. Kaksi asteen III edustavien näytteiden eri SnoN ilmaisun näytettiin. E: epiteelissä; S: strooman. Green: SnoN; sininen, DAPI. B, SnoN värjäytyminen normaalissa ja kasvaimen epiteelisolujen kvantifioitiin käyttämällä Image J ohjelmisto ja numerot olivat piirretty rasiakuvaaja, joka sisältää normaalia näytteitä (n = 36, keskimääräinen voimakkuus = 1,13) ja ruokatorven kasvain näytteet luokan I (n = 8, keskiarvo = 0,07), II (n = 19, keskiarvo = 0,71), ja III (n = 11, keskiarvo = 1,26). Tilastollinen analyysi verrataan tavanomaista valvontaa kuhunkin kasvaimen osoitti, että epiteelin SnoN tasot ruokatorven adenokarsinooma ovat huomattavasti heikompia (luokka I: p = 0,0002) tai vastaavia (arvosana II: p = 0,1425 ja arvosana III: p = 0,3349) ja että ohjaus normaali näytteitä. Kasvu epiteelin SnoN ilmaisun III asteen verrattuna luokan I oli tilastollisesti merkitsevä (p = 0,0013). C, kvantifiointi SnoN strooman värjäytyminen normaalissa näytteistä (n = 27, keskiarvo = 1,69) ja ruokatorven kasvain näytteet luokan I (n = 5, keskiarvo = 0,23), II (n = 19, keskiarvo = 1,09), ja III ( n = 11, keskiarvo = 1,78). Tilastollinen analyysi vertailemalla tavanomaista valvontaa kuhunkin ruokatorven kasvaimen on seuraava: p = 0,0023-luokan I, p = 0,8565 varten II, ja p = 0,1132-luokan III. Kasvu strooman SnoN ilmentymistä luokan II (p = 0,0287) ja luokan III (p = 0,0068) kasvaimissa verrattuna luokan I kasvaimeen strooman oli tilastollisesti merkitsevä.

SnoN Expression alennetaan alempi Grade munasarjojen adenokarsinooma kudokset mutta koholla High Grade kasvain Stroma

Samanlaisia ​​mitä on havaittu ruokatorven syöpä, SnoN ilmentyminen säädeltiin vähentävästi palkkaluokkaan I ja vähemmässä määrin luokan II munasarjojen adenokarsinooma näytteitä sekä kasvaimen epiteeli ja strooman (kuva 3 ja taulukko 1), mutta talteen jälleen palkkaluokkaan III kasvaimia. Luokka III munasarjan adenokarsinooma näytteet osoittivat heterogeenisyys SnoN ilmaisu, jossa 60% näytteistä näyttää korkeamman SnoN värjäytymistä (viimeinen paneeli, kuvio 3A) kuin normaaleissa kudoksissa, ja muut, joilla heikompi SnoN värjäytymistä (paneeli # 4, kuvio 3A). Seurauksena tästä heterogeenisyys, tilastollinen analyysi osoitti, ettei yleinen eroa SnoN ilmaisun välillä normaalin munasarjakudoksen ja luokka III kasvain näytteissä. Kuitenkin, kun verrataan alemman luokan kasvainnäytteissä, strooman osaston luokka III kasvaimen näytteet osoittivat paljon vahvempi SnoN värjäytymistä (kuvio 3A ja 3C). Nämä stromasoluja tunnistettiin patologit kuin soluttautua fibroblastien ja tulehdussolujen. Jälleen SnoN pysyneet jokseenkin sytoplasman näissä kasvain näytteissä. Niinpä samanlainen kuin on havaittu ruokatorven syöpä, SnoN ilmentyminen munasarjasyöpää myös vaikuttivat alemmilta alkuvaiheessa pahanlaatuisia etenemisen.

, edustaja SnoN ilmentyminen normaalissa munasarjakudoksen ja munasarjan adenokarsinooman eri kasvain arvosanoja 20X (ylhäällä) tai 40x (alhaalla) suurennuksilla. Kaksi asteen III edustavien näytteiden eri SnoN ilmaisun näytettiin. E: epiteelissä; S: strooman. Green: SnoN; sininen, DAPI. B, SnoN värjäytyminen normaalissa ja munasarjakasvain epiteelisolujen kvantifioitiin käyttäen Image J ohjelmisto ja numerot olivat piirretty rasiakuvaaja, joka sisältää normaalia näytteitä (n = 10, keskiarvo = 1,28) ja munasarjojen kasvain näytteet luokan I (n = 11, keskiarvo = 0,55), vaihe II (n = 29, keskiarvo = 1,05), ja vaiheen III (n = 25, keskiarvo = 2,04). Tilastollinen analyysi verrataan tavanomaista valvontaa kullekin kasvaimen osoitti, että epiteelin SnoN tasot munasarjan adenokarsinooma ovat sama tai heikompi kuin kudosnäytteisiin: p = 0,6139-luokan I, p = 0,7984 ja II, ja p = 0,1461 ja III. Ei havaittu merkittävää eroa välillä munasarjakasvain näytteitä. C, SnoN värjäytyminen stroomasoluissa normaaleissa näytteissä (n = 10, keskiarvo = 1,38) ja munasarjojen kasvain näytteet luokan I (n = 7, keskiarvo = 0,61), II (n = 23, keskiarvo = 0,81), ja III ( n = 20, keskiarvo = 2,00). Tilastollinen analyysi vertailemalla tavanomaista valvontaa kuhunkin munasarjakasvain arvosana on seuraava: p = 0,5997-luokan I, p = 0,3633-luokan II ja p = 0,1833-luokan III. Kasvu strooman SnoN ilmaisun III asteen verrattuna luokan II (p = 0,0258) oli tilastollisesti merkitsevä.

SnoN Expression on vähentynyt haiman adenokarsinooma Näytteitä

haimasyövän kudoksen array sisältää useita erityyppisiä adenokarsinooman kaikkien kolmen kliinisen laadut (I-III), kuten ductal adenocalarcinoma, mucinous adenokarsinooma, neuroendokriini karsinooma, adenosquamous karsinooma, karsinoidi, ja kiinteä pseudo-papillaarisen karsinooma. Kaikissa haimasyövän näytteet kaikissa kolmessa kasvaimen laadut, SnoN oli sytoplasminen ja ilmaistiin alhaisemmalla tasolla kuin normaalissa samanikäisiin näytteet (kuvio 4A-4B ja taulukko 1). Across kasvain laadut, SnoN ilme oli korkein vaiheessa III haiman adenokarsinooma (kuva 4B). Kuitenkin lisäys ei ollut yli normaalin kudoksen valvontaa. Kasvain strooman laatikolla ei ole suurempi SnoN värjäytymistä kuin normaali strooman (kuvio 4A ja 4C). Niinpä yksikään kasvain kudosten oli SnoN ilmaistiin korkeammalla tasolla kuin normaaleissa kudoksissa, sopusoinnussa tuumorisuppressoria roolia SnoN haimasyövän.

, edustaja SnoN ilmentyminen normaalissa haimassa ja haiman adenokarsinooma vaihtelevan laadut klo 20X (ylhäällä) tai 40x (alhaalla) suurennuksilla. E: epiteelissä; S: strooman. Green: SnoN; sininen, DAPI. B, SnoN värjäytyminen normaalissa ja haiman kasvain epiteelisolujen kvantifioitiin käyttäen Image J, ja numerot olivat piirretty rasiakuvaaja, joka sisältää tavanomaiset näytteet (n = 5, keskiarvo = 3,08) ja haiman kasvain näytteet luokan I (n = 21, keskiarvo = 1,89), luokan II (n = 59, keskiarvo = 1,59), ja luokan III (n = 8, keskiarvo = 2,09). SnoN ilmentyminen Tuumorinäytteissä oli heikompi kuin normaalissa haiman näytteissä (p = 0,0855-luokan I, p = 0,0125 varten II, ja p = 0,0518 varten III). Mitään merkittävää eroa ei havaittu SnoN epiteelin värjäytymisen välillä haiman kasvain näytteissä. C, SnoN värjäys normaalissa (n = 2, keskiarvo = 1,87) ja kasvaimen tukikudosten näytteitä luokan I (n = 20, keskiarvo = 2,10), II (n = 55, keskiarvo = 1,70), ja III (n = 8, keskiarvo = 1,57). Ei ole mitään tilastollisesti merkitsevää eroa kasvain ja normaali strooman näytteitä.

SnoN Expression on vähentynyt merkittävästi Rintojen adenokarsinooma

rintasyöpäkudosnäytteessä array sisältää päällekkäisen biopsianäytteissä potilailta soluttautua rintojen duktaalikarsinooma vaiheiden II ja III sekä metastasoituneen imusolmukkeisiin. Yllätykseksemme SnoN tasot eivät olleet koholla tahansa kasvaimen näytteistä (kuvio 5A-5B ja taulukko 1). Päinvastoin, SnoN tasot olivat merkittävästi alhaisemmat kuin vertailunäytteet sekä ei korreloi sen ekspressiotasot ja läsnäolo imusolmukemetastaaseja (kuvio 5B). SnoN ilmentyi suurina määrinä hyvin vähän näytteitä ja oli pääasiassa sytoplasmista. Useimpien tuumorinäytteet, SnoN ilmentyminen stroomassa oli huomattavasti pienempi kuin normaalissa vertailunäytteet (kuvio 5A ja 5C).

A, edustaja SnoN ilmentyminen normaalissa ja rintojen adenokarsinooma näytteet 20X (ylhäällä) tai 40x (alhaalla) suurennuksilla. E: epiteelissä; S: strooman. Green: SnoN; sininen, DAPI. B, SnoN värjäytyminen normaalissa (n = 6, keskiarvo = 1,59) ja rintojen kasvain epiteelisolut luokan II (n = 9 IIA ja n = 3 IIB, keskiarvo = 0), luokka III (n = 10 IIIA ja n = 5 IIIC, keskiarvo = 0), ja metastaattinen näytteitä (n = 10, keskiarvo = 0). Kavennukset on SnoN ilmaisun Tuumorinäytteissä verrattuna normaaleihin kudoksiin on p-arvo 0,0966 varten luokan II, 0,0430-luokan III, ja 0,0321 varten metastaattisen näytteitä. C, SnoN värjäytyminen stroomasoluissa normaalista (n = 6, keskiarvo = 1,35) ja rintojen kasvain näytteet luokan II (n = 9 IIA ja n = 3 IIB, keskiarvo = 0), luokka III (n = 10 IIIA ja n = 5 IIIC, keskiarvo = 0,38), ja metastaattinen näytteitä (n = 10, keskiarvo = 0). P-arvot kullekin kasvain /normaali vertailusta 0,3340-luokan II, 0,1647-luokan III, ja 0,0695 varten metastaattisen näytteitä. D, edustaja SnoN ilmentyminen normaalissa rinta- osa ja DCIS poikkileikkaus samasta potilaasta. Green: SnoN; sininen, DAPI.

Voit testata sitä mahdollisuutta, että SnoN voidaan koholla aikana alkuvaiheessa tumorigeneesin mutta pienentää myöhäisessä vaiheessa pahanlaatuinen etenemisen, keräsimme ja värjättiin 24 ihmisen DCIS näytteiden ja niiden vastaavat normaaleja kudoksia SnoN ilme. Mielenkiintoista, vaikka yksittäiset solussa DCIS kudoksissa, taso SnoN ilmentyminen oli samankaltainen tai muutamissa tapauksissa alhaisempi kuin soluissa normaaleissa kudoksissa, mikä johtuu selvästi lisääntynyt epiteelin sisältöä DCIS näytteissä, yleinen SnoN tasoa koko kudoksessa oli paljon korkeampi kuin normaaleissa kudoksissa (kuvio 5D). Siten yleinen kasvu SnoN tasolla DCIS näytteissä heijastaa merkittävästi kohonnut epiteelin sisältö näissä kudoksissa, mutta ei voimistumista SnoN ilmentymisen yksittäisissä soluissa.

Yhdessä poiketen aiemmin ehdottanut, SnoN ilmentyminen pienenee alempaan arvosana pahanlaatuisia kasvaimia ruokatorven, rinta, haima ja munasarjojen (taulukko 1). Ruokatorven ja munasarjasyöpä, ja vähemmässä määrin haimasyövän, SnoN ilme vähitellen takaisin palkkaluokkaan III kasvaimia.