Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Altered ilmaus miRNA ilme vaikuttaa ihmisen syövän synnyn. Tämä tutkimus suunniteltu havaitsemaan poikkeava miRNA ilmaisuja mahdollisena biomarkkeri varhaista havaitsemista ja ennusteen ennustaminen ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC).

Methods

miRNA array käytettiin profiiliin differentiaalisesti ilmaisi miRNA ja Taqman-pohjainen kvantitatiivinen RT-PCR-määrityksissä käytettiin analysoimaan tasojen miR-29c, miR-93, ja miR-429 ilmentymistä NSCLC kudosnäytteistä, vastaavassa normaalissa kudoksessa näytteitä, ja seeruminäytteistä 70 pienisoluista keuhkosyöpää, sekä seeruminäytteistä 48 tervettä verrokkia.

tulokset

tasot miR-29c ja miR-93 ilmentyminen oli yläreguloituja NSCLC kudoksissa, kun taas veren miR-29c myös voimistunut, mutta tasot seerumin miR-429 määrä väheni NSCLC. Lisäksi tasot miR-429 ilmentymisen NSCLC kudoksissa liittyivät ne seeruminäytteistä. Vastaanotin toimii (ROC) käyrä analyysi osoitti, että optimaalinen rajakohta, kuuluvilla alueilla ROC käyrä seerumin miR-29c ja miR-429 olivat 0,723 ja 0,727, tässä järjestyksessä, tasot, jotka ovat korkeampia kuin syöpä alkioantigeeni (0,534) diagnoosissa vaiheen I NSCLC. Lisäksi seerumin miR-429 oli yhteydessä huonoon eloonjäämisaste NSCLC potilaiden. Sekä yhden ja usean analyysit osoittivat, että seerumin miR-429 taso oli itsenäinen ennustetekijöitä ennustaja NSCLC.

Johtopäätökset

tulokset Nykyisen aiheen olettaa, että havaitseminen seerumissa miR-29c ja asennuspalveli- 429 lauseke olisi edelleen arvioitava uutena, ei-invasiivisia biomarkkereiden varhaisen vaiheen NSCLC.

Citation: Zhu W, hän J, Chen D, Zhang B, Xu L, Ma H, et al. (2014) Expression of miR-29c, miR-93, ja miR-429 mahdollisina biomarkkereita havaitseminen alkuvaiheen Non-Small Lung Cancer. PLoS ONE 9 (2): e87780. doi: 10,1371 /journal.pone.0087780

Editor: Song Guo Zheng, Penn State University, Yhdysvallat

vastaanotettu: 12 marraskuu 2013; Hyväksytty lukien: 1. tammikuuta 2014; Julkaistu: 11 helmikuu 2014

Copyright: © 2014 Zhu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä tutkimus tuettiin osittain avustuksia Natural Science Foundation of Zhejiang (Y2110960), tieteen ja teknologian Bureau of Zhoushan (10137 ja 2011C12039), ja lääketieteellisestä Bureau of Zhejiang (2011KYB165). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

MikroRNA (miRNA) ovat luokka pienet ei-koodaavat RNA: t, jotka voivat toimia endogeeninen RNA-interferenssi ekspression säätelemiseksi kohteena geenien [1] – [3]. Tähän mennessä yhteensä 1048 ihmisen miRNA on tunnistettu ja raportoitu RNA tietokantaan, ja tämä määrä kasvaa edelleen. Jotkut näistä miRNA on raportoitu olevan käyttökelpoisia mahdollisina biomarkkereita diagnoosia, prognoosia, ja henkilökohtaisen hoidon ihmisen syövissä [1] – [6], koska muuttunut ilmentyminen näiden miRNA edistää ihmisen karsinogeneesissä. Esimerkiksi poikkeava miRNA ilme on raportoitu keuhkosyöpään. Useat tutkijat, kuten meille, ovat raportoineet mahdollinen kliininen soveltaminen kiertävän miRNA (kuten miR-1254, miR-142-3p, miR-24, miR-183, miR-21, miR-221, miR-29c, miR-486, miR-30d, miR-1, miR-499, ja miR-210) [7], [8]. Siten lisätutkimukset poikkeavasta miRNA ilmaisun voisi johtaa löytö uusien miRNA biomarkkereita keuhkosyöpään.

Keuhkosyöpä on johtava syy syöpään liittyvien kuolemien maailmanlaajuisesti [9]. Edistysaskelista huolimatta varhainen havaitseminen ja parannuksia hoitovaihtoehtoja, joilla on pitkälle edennyt sairaus silti usein kehittyy uusiutuva sairaus jälkeen laajennettu radikaali asemointia, ja 5 vuoden yleinen eloonjäämisaste on edelleen vain 5%. Niinpä uusia lähestymistapoja tehokkaasti hallintaan tämän taudin molekyylitasolla voisi tunnistaa potilaat, joilla on suurempi tai pienempi riski taudin uusiutumisen leikkauksen jälkeen ja antaa biomarkkereita ennustamiseen potilaan selviytymistä. Tässä suhteessa, käyttö seerumin miRNA mahdollisina biomarkkereita diagnosoimiseksi ja ennustamiseksi ennustetta keuhkosyövässä on raportoitu [7], [10]. Todellakin, useat tutkimukset ovat tunnistettu miRNA allekirjoitukset eroavat normaali ja syöpäkudokset luokittelua varten syöpätyyppeihin ja kasvaimen diagnoosia ja ennustetta. Se voi myös olla mahdollista käyttää miRNA ilmaisua biomarkkerina seurata hoidon tehokkuuden tai ennustaa syövän etenemistä [11] – [12]. Tähän mennessä useimmat tutkimukset ovat keskittyneet kasvainkudoksen, ja muutokset verenkierron seerumin miRNA tasoja ja suhde näiden muutosten ja kudoksen taudin puhkeamista pysyvät kiistelty [7]. Lisäksi hyödyllisyyttä monista kiertävän miRNA on osoitettu diagnoosin NSCLC, mutta harvat kiertävä miRNA osoitti diagnostista arvoa alkuvaiheen NSCLC [13], [14]. Kuitenkin lisätarkastusta eri populaatioissa tarvitaan. Näin ollen tässä tutkimuksessa analysoimme tasoja kolme miRNA (miR-29c, miR-93, ja miR-429) ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) kudosten ja verrattiin niitä kuin seeruminäytteistä NSCLC potilaiden ja terveen tarkastuksia erityisesti niiden ekspressiotasot alkuvaiheen pienisoluista keuhkosyöpää. Samalla olemme analysoineet tietojen vertailu karsinooma alkion antigeeni (CEA), joka on laajalti käytetty markkeri diagnoosia NSCLC [15]. Sitten tutkittiin järjestöjen välillä ilmaisun ja kliinis ja eloonjäämisen tietoja pienisoluista keuhkosyöpää.

Materiaalit ja menetelmät

Ethics lausunto

Tutkimus hyväksyi eettinen Review komitean Zhoushan kunnallishallinnon Kiinan, ja kaikki biologiset näytteet saatiin potilaiden kirjallinen lupa.

Potilasnäytteet

tässä tutkimuksessa rekrytoimme 70 potilaalla on kirurgisesti toistoleikattiin NSCLC ja Hyväksytty etäinen noncancerous kudoksia Zhoushan Hospital, Zhejiang, Kiina välillä tammikuussa 2008 ja toukokuun 2009 oli 56 mies- ja 14 naispotilasta NSCLC, mukaan lukien 34 potilasta nuorempia kuin 60 vuotta 36 yli 60 vuotta. Samaan aikaan, seerumit kaikista NSCLC potilaiden ja 48 tervettä vapaaehtoista sovitettu mukaan sukupuolen ja iän kerättiin myös. Kukaan potilaista ei ilmoittautunut tässä tutkimuksessa oli saanut kemoterapiaa tai sädehoitoa ennen leikkausta. Kudoksen näytteenotosta, poistamisen jälkeen kirurgisista näytteistä, kudokset otettiin heti kuljetettiin patologian laboratoriossa, ja näytteet sijoitettiin cryovial, snap-jäädytettiin nestemäisessä typessä 30 min, ja säilytettiin -80 ° C: ssa käyttöön asti . Kaikki kudosnäytteet tarkistaa kaksi patologien, ja diagnoosi tehtiin mukaan National Kattava Cancer Network (NCCN) kriteerit. Oli 34 keuhkon adenokarsinooman ja 36 keuhkon okasolusyöpää, ja 46 kasvaimia kohtalaisen suuria eroja, kun taas 24 oli huonosti eriytetty. Lisäksi 18 NSCLC potilaalla oli kasvain alle 3 cm kokoisia, kun taas 52 potilasta, joiden kasvain yli 3 cm. Imusolmuke etäpesäke todettiin 32 potilaalla, ja 36 potilaalla oli vaihe I NSCLC ja 34 potilaalla oli vaihe II, III, tai IV ei (taulukko 1). Lisäksi seerumin CEA mitattiin kemiluminesenssi osana rutiini kliiniset kokeet ja viitearvo hankittiin kliinisestä tietokannasta Zhoushan sairaalassa.

RNA: n eristys ja kvantitatiivinen RT-PCR

solun kokonais-RNA eristettiin 100 mg keuhkokudoksesta tai 600 ui seerumia näytteitä käyttäen miRNA eristyspakkausta tai Mirvana PARIS RNA: n eristys-kittiä (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) valmistajan protokollan. RNA-pitoisuus määritettiin käyttäen NanoDrop ND-1000 spektrofotometrillä (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, USA), ja RNA: n laatu mitattiin käyttämällä denaturoivalla 15% polyakryyliamidigeelillä. Käänteiskopiointireaktio suoritettiin käyttäen TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems) mukaan valmistajan ohjeiden on reaktion kokonaistilavuus 7,5 ui. qPCR suoritettiin kolminkertaisena käyttäen TaqMan 2 × Universal PCR Master Mix ilman AmpErase UNG (Applied Biosystems) ABI 7500 Real-Time PCR-järjestelmä (Applied Biosystems) seuraavin ehdoin: 95 ° C: ssa 10 minuutin ajan, jota seurasi 40 sykliä 95 ° C 15 s ja 60 ° C 1 min. Sykli kynnys (Ct) arvot laskettiin käyttäen SDS 2.0.1 ohjelmistoa (Applied Biosystems). Template-vapaa säätimet sekä rekisteröinti- PCR Jokaisessa kokeessa varmistaa kohdespesifiset vahvistusta.

Keskimääräiset miRNA ilmentymisen kudokset ja seerumit normalisoituivat suhteessa keskimääräiseen määriä U6 snRNA ja U48 snRNA käyttäen 2

-ΔΔCt menetelmä [16] – [17]. Keskimääräinen Ct-arvot näiden viiden miRNA oli lasketaan ilman harha (eli jäljittelee jossa Ct-arvoja, jotka eroavat toisistaan ​​enemmän kuin yksi sykli mediaani). Lisäksi, jos CtU6, ave ja CtU48, ave jokainen ei esiintyä 32 sykliä, määritys toistettiin. Näytteet, joilla on alhainen U6 tai U48 snRNA tasot eivät kuulu tietoanalyysit.

Tilastollinen

Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin käyttäen GraphPad Prism 5.0 ohjelmisto (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA). Aineisto analysoitiin käyttämällä varianssin homogeenisuudesta. Yksisuuntainen ANOVA tai Wilcoxonin kahden otoksen testeissä käytettiin testaamaan assosiaatioita miRNA ekspressiotasot ja kliinis-potilaista. Parillisten vastausten t-testiä käytettiin vertaamaan erojen miRNA ilmaisun välillä keuhkokudoksen ja seeruminäytteistä. Vastaanotin toimii (ROC) dikäyrät arvioida diagnostinen tarkkuus kunkin parametrin. Potilaan selviytyminen arvioitiin Kaplan-Meier menetelmällä, ja log-rank-testiä käytettiin vertaamaan selviytymisen ryhmien välillä. Coxin vaara regressiomalli käytettiin analysoida riskitekijöitä NSCLC. Kaikki tilastolliset testit olivat kaksipuolisia, ja

P

arvoa 0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä.

Tulokset

Differential ilmentymistä kolme miRNA NSCLC kudosten ja potilaiden seerumit

Koska meillä miRNA array (Agilent) ja validointitiedot, valitsimme kolme miRNA (miR-29c, miR-93, ja miR-429) lisätutkimuksia NSCLC näytteissä. Suoritimme qRT-PCR-analyysiä varten nämä kolme miRNA 70 paria NSCLC ja vastaavien noncancerous keuhkojen kudoksia. Tuloksemme osoittivat, että tasot miR-29c ja miR-93 ilmentyminen oli yläreguloituja NSCLC kudoksissa verrattuna vastaavaan noncancerous keuhkokudokset (

P

= 0,0408 ja

P

= 0,0444, vastaavasti), kun taas miR-429 tasot eivät olleet merkittävästi erilaiset välillä NSCLC ja noncancerous keuhkojen kudoksia (

P

= 0,3903, kuvio 1A).

, qRT-PCR havaitseminen kolmen miRNA 70 NSCLC kasvaimia ja vastaavassa normaalissa keuhkojen kudoksiin.

P

-arvot Mir-29c, miR-93, ja miR-429 oli 0,0408, 0,0444 ja 0,3903 vastaavasti käyttämällä pariksi näyte

t

-testi. B, qRT-PCR-analyysi seerumin miRNA seerumissa näytteitä 70 NSCLC potilaiden vs. 48 tervettä verrokkia.

P

-arvot seerumin miR-29c, miR-93, ja miR-429 oli 0,0012, 0,9291 ja 0,0001 vastaavasti käyttäen paritonta otoksen t-testiä. C, D, E, Association näistä miRNA tasojen välillä NSCLC kudos- ja seeruminäytteistä. Pearsonin korrelaatio testi osoitti, että miR-429 ilmentyminen seerumissa merkitsevästi yhteydessä, että NSCLC kudoksissa (r = 0,3578,

P

= 0,0024), kun taas seerumin miR-29c ja miR-93 ei liittynyt kuin NSCLC kudoksissa (r = -0,07877,

P

= 0,5169 ja r = 0,1515,

P

= 0,2105, vastaavasti). *

P

0,05 ryhmien välillä.

olivatko nämä erot miRNA ilmentyminen oli läsnä seeruminäytteistä näillä potilailla. Huomasimme, että seerumin miR-93 ilmentyminen eivät eronneet NSCLC potilaiden ja terveiden verrokkien (

P

= 0,3530). Kuitenkin miR-29c ilmentyminen lisääntyi merkitsevästi seerumin NSCLC potilaiden (

P

= 0,0012), ja miR-429 ilmentyminen oli merkittävästi vähentynyt (

P

= 0,0001, kuvio 1 B). Seerumin taso miR-429 ilmentyminen korreloi merkitsevästi että NSCLC kudoksissa (r = 0,3578,

P

= 0,0024, kuvio 1 E), kun taas seerumin miR-29c ja miR-93 ilmentyminen ei liittynyt kanssa NSCLC kudoksissa (r = -0,07877,

P

= 0,5169 ja r = 0,1515,

P

= 0,2105, vastaavasti kuvio 1C ja D).

Yhdistykset välillä muuttunut miRNA ilmaisun ja kliinisiä tekijöitä NSCLC

tutkimme seuraavaksi assosiaatioita muuttunut miRNA ekspressiotasot (miR-29c ja miR-93 NSCLC ja miR-29c ja miR-429 seerumissa) kanssa kliinis ominaisuudet n NSCLC potilaiden. Huomasimme, että lisääntynyt miR-93 ilmentyminen oli voimakkaasti yhteydessä NSCLC histologian (

P

= 0,031, taulukko 2), kun taas seerumin miR-29c ilmentyminen liittyi epänormaali CEA tasot (

P

= 0,030, taulukko 2). Sen sijaan ei ole muiden yhdistysten välillä havaittiin ilmentymisen määriä näitä miRNA. Lisäksi me piirretty ilmaisu tietoja miR-29c ja miR-429 käyttäen ROC käyrät tunnistaa raja-arvoon, joka voisi erottaa keuhkosyöpä potilaita terveisiin kontrolleihin. ROC-käyrä analyysi osoitti, että optimaalinen cut-off, seerumin miR-29c herkkyys oli 65,7% ja spesifisyys 74,1% erottamiseksi NSCLC potilaiden terveiden verrokkien kanssa ala käyrän alla (AUC) 0,676 (

P

= 0,0004, 95%: n luottamusväli [CI]: +0,584-0,759, kuvio 2A). Lisäksi seerumin miR-429 herkkyys oli 54,3% ja spesifisyys 81,2% erottamiseksi NSCLC potilaiden terveiden verrokkien kanssa AUC 0,713 (

P

0,0001, 95% CI: 0,623 -0,793, kuvio 2B). Koska veri CEA-testi on laajalti käytetty merkkiaine NSCLC, vertasimme CEA tuloksia kanssa miRNA ekspressiotasot ja totesi, että CEA oli AUC 0,576 (

P

= 0,1493, 95% CI: +0,482-0,666, kuvio 2C). Kuitenkin yhdistelmä miR-29c ilmaisun ja CEA, tiedot osoittivat AUC 0,712 (

P

0,0001, 95% CI: 0,622-0,792); yhdistelmälle miR-429 ilmaisun ja CEA, AUC oli 0,707 (

P

= 0,0007, 95% CI: +0,616-+0,787); ja yhdistelmä miR-29c ilmaisun ja miR-429 CEA, AUC oli 0,797 (

P

0,0001, 95% CI: 0,713-,865).

, miR -29c; B, miR-429; C, CEA osoitti ROC käyrät ja AUC diagnostisia valta erottaa NSCLC potilaiden terveiden verrokkien. D, miR-29c; E, miR-429; F, CEA osoitti ROC käyrät ja AUC diagnostisia valta erottaa vaiheen I NSCLC potilaiden terveiden verrokkien.

Lisäksi olemme myös havainneet, että seerumin miR-29c herkkyys oli 50,0% ja spesifisyys 95,8% erottava vaiheen I NSCLC terveiltä säätimet AUC 0,727 (

P

= 0,0001, 95% CI ,619-,818, kuvio 2D). miR-429 herkkyys oli 94,4% ja spesifisyys 41,7% erottava vaiheen I NSCLC potilaiden terveiden verrokkien kanssa AUC 0,723 (

P

= 0.0001,95% CI +0,615-,815, kuvio 2E) . CEA herkkyys oli 66,7% ja spesifisyys 52,1% erottamaan vaiheen I NSCLC potilaiden terveiden verrokkien kanssa AUC 0,534 (

P

= 0,6040, 95% CI 0,422-,644, kuvio 2F). Lisäksi yhdistelmä miR-29c ilmaisun ja CEA oli AUC 0,757 (

P

0,0001, 95% CI: 0,651-0,844), yhdistelmä miR-429 ilmaisun ja CEA oli AUC of 0,659 (

P

= 0,0128, 95% CI: ,547-+0,759), ja yhdistelmä miR-29c ilme, miR-429 ilmaisua, ja CEA oli AUC 0,833 (

P

0,0001, 95% CI: ,736-0,906).

Association between seerumin miR-429 tason ja eloonjäämisen NSCLC potilaiden

Koska ilmaisua kolmen testattujen miRNA muutettiin vuonna NSCLC kudos- ja seeruminäytteet, me vielä arvioitava, ovatko havaitsee niiden tasojen voisi ennustaa ennusteen pienisoluista keuhkosyöpää. Huomasimme, että seerumin miR-429-ilmentyminen liittyy eloonjäämisaste NSCLC potilaiden (

P

= 0,0030 käyttäen Log-rank testi, kuva 3). Kuitenkin ilmaus miR-29c, miR-93, ja miR-429 NSCLC kudoksissa ja seerumissa miR-29c ja miR-93 eivät liittyneet yleiseen eloonjäämiseen NSCLC potilaiden. Yksiulotteista Coxin vaara regressioanalyysi osoitti, että seerumin miR-429 oli merkittävä prognostinen indikaattori NSCLC (oikaistu riskisuhde = 6,458, 95% CI: +1,409-29,593,

P

= 0,016). Monimuuttujakalibrointi Coxin suhteellinen vaara regressioanalyysi osoitti, että seerumin miR-429 olisi itsenäinen ennustetekijöitä ennustaja pienisoluista keuhkosyöpää (riskisuhde = 12,875, 95% CI: +2,295-72,230,

P

= 0,004, taulukko 3) .

P

-arvo selviytymisen potilaiden, joilla on korkea ja alhainen miRNA ilmaisun laskettiin käyttäen log-rank-testi. *

P

0,05 ryhmien välillä.

Keskustelu

Tässä tutkimuksessa olemme analysoineet ilmaus kolmen miRNA, valitaan perustuen aiempiin miRNA array ja validointitiedot, NSCLC kudoksessa ja seerumin näytteitä yhdessä kliinis ja selviytymisen tietoja potilaista. Huomasimme, että miR-29c ja miR-93 ilmentyminen säädeltiin NSCLC kudoksissa verrattuna vastaavaan noncancerous keuhkojen kudoksia. Lisäksi seerumin miR-29c oli huomattavasti ja seerumin miR-429 oli merkittävästi vähentynyt I vaiheessa NSCLC verrattuna tasolle 48 terveillä verrokeilla. Lisäksi olemme havainneet, että matalampi seerumin miR-429 tasot olivat yhteydessä huonoon eloonjäämisaste NSCLC potilaiden. Yksiulotteista ja monimuuttuja analyysit osoittivat, että seerumin miR-429 oli itsenäinen ennustaja yleisen selviytymisen NSCLC potilaiden. Nykyinen tiedot osoittavat, että havaitseminen seerumissa miR-29c ja miR-429 ilmentymisen pitäisi arvioida tarkemmin uutena ei-invasiivisia biomarkkeri alkuvaiheessa NSCLC.

Itse asiassa tähän mennessä, useita tutkimuksia on osoittivat, että muuttunut spesifisten miRNA on tärkeä rooli ihmisen kasvaimien synnyn, koska toimintoja näiden miRNA geeni- vaimentimia tai onkogeenien [17] – [19]. Näin ollen, havaitseminen poikkeavia miRNA ekspressiotasoja voidaan käyttää varhaisen diagnoosin ihmisen syövissä tai ennustaminen ennusteen koska miRNA ovat vakaampia ja jotka kestävät RNaasi A: ruoansulatusta ja muita kovia olosuhteita kuin perinteiset proteiinimarkkereita [7], [10], [ ,,,0],17], [20]. Esimerkiksi Chen

et al

[10] osoittivat, että miRNA ovat stabiileja verenkierrossa seerumin ja voivat toimia mahdollisina diagnostisia markkereita keuhkosyöpään. Hu

et al

[7] ilmoitti, että neljä miRNA ovat riippumattomia ennustajia kokonaiselinaika keuhkosyöpäpotilaiden. Le ja työtovereiden [20] osoittivat, että seerumin miRNA ovat erilaisia ​​ennen ja jälkeen leikkauksen keuhkosyöpää näytteitä ja että nämä miRNA voidaan mahdollisesti käyttää biomarkkereita taudin uusiutumisen jälkeen leikkauksen. Kuitenkin vain harvat tutkimukset ovat keskittyneet diagnostista roolista miRNA alkuvaiheen NSCLC [13], [14]. Nykyisessä tutkimuksessa olemme analysoineet ilmaus kolmen miRNA NSCLC kudoksissa ja seeruminäytteiden niiden mahdollista arvoa varhaisessa diagnosoinnissa ja ennusteen NSCLC potilaiden. Tuloksemme osoittivat, että tasot miR-29c ja miR-93 ilmentyminen oli yläreguloituja NSCLC kudoksissa verrattuna vastaavaan noncancerous keuhkojen kudoksia. Lisäksi ROC tiedot osoittivat, että AUC Mir-29c ja miR-429 olivat 0,723 ja 0,727, vastaavasti, ja nämä arvot olivat huomattavasti korkeampi kuin CEA (0,534), I vaiheessa pienisoluista keuhkosyöpää, mikä viittaa näiden miRNA voitaisiin käyttää varhainen diagnosointi NSCLC. CEA on laajalti käytetty biomarkkereiden diagnostiikassa NSCLC ja valittiin positiivisena kontrollina [15]. Todellakin, Heegaard

et al

[8] osoitti, että ilmentyminen miR-29c lisääntyi merkitsevästi 220 alkuvaiheessa NSCLC potilaista verrattuna 220 verrokkeihin. Muissa tutkimuksissa, miR-93 ilmentyminen havaittiin edistää kasvaimen angiogeneesiä ja etäpesäkkeiden tukahduttamalla suuri kasvaimia estävä homologia 2: n ilmentymisen [21] – [22]. Kuitenkin miR-429 on jäsen miR-200 perheen, joka oli aiemmin osoitettu estävän epiteelin-to-mesenkymaalitransitioon säätelemällä E-kadheriinin, ZEB1, ja SIP1 ilmaisun [23] – [25]. Ei ole tutkimuksia vielä paljastanut rooliaan diagnoosi ja ennusteen NSCLC. Esillä olevassa tutkimuksessa olemme ensimmäistä kertaa osoitti, että ilmentyminen miR-429 seerumissa vaimentua NSCLC potilailla verrattuna terveisiin kontrolleihin, ja että alemman miR-429-ekspressio liittyy huono eloonjäämisaste pienisoluista keuhkosyöpää, mikä viittaa siihen, miR-429 ilme on itsenäinen prognostinen indikaattori NSCLC. Lisäksi olemme havainneet, että seerumin miR-429 liittyivät merkittävästi miR-429 ilmentymisen NSCLC kudoksissa, mikä johti hypoteesiin, että kasvaimen solut voivat käyttää miRNA kuljettaa geneettistä tietoa ympäröivään tai kaukana soluja ja siten edistää kasvaimen kasvua ja etenemiseen [26]. Aiemmissa tutkimuksessa raportoimme että seerumin ja kasvaimen tasoja miR-96 liittyi [18], joka tukee käsitystä siitä, että jotkut miRNA voitiin erittää kasvainkudoksen ja edistää syövän etenemisen, mikä on sopusoinnussa myös raportteja Mitchell

ym

[17] ja Hu

et al

[7].

Useat tutkimukset ovat osoittaneet, että havaitseminen seerumissa miRNA voisi olla erityisen hyödyllinen aiemman diagnoosin kliinisesti oireettomia syöpiä [ ,,,0],27] – [29]. Esimerkiksi aiemmissa keuhkosyöpä tutkimuksissa tasot miR-1254, miR-574-5p, miR-486, miR-30d, miR-1, ja miR-499 ilmentyminen oli merkitsevästi väärin säädellystä alkuvaiheen keuhkosyöpään [7] , [30]. Chen

et al

[31] osoitettava profiloinnin että 10 seerumi miRNA voivat toimia uusina noninvasive biomarkkereita keuhkosyövän diagnoosi. Keller

et al

[32] ehdotti myös, että sairastua keuhkosyöpään saatetaan havaita vuotta ennen diagnoosia erityisellä miRNA allekirjoitus ja että tämä allekirjoitus muuttuu aikana kasvainten kehittymiseen. Osittain sopusoinnussa näiden tutkimusten tulokset, tulokset nykyiseen tutkimuksen käyttökelpoisuuden osoittamiseksi kolmen testattujen miRNA, jotka olivat herkempiä kuin CEA havaitsemiseksi vaiheessa I NSCLC. Kuitenkin nykyinen data ovat proof-of-periaate, ja edelleen ennakoiva tutkimus käyttäen suurempaa otoskoko tarkastaa, havaitsemista näiden miRNA on käyttökelpoinen varhainen diagnosointi vaiheen I NSCLC ja eloonjäämisen ennuste NSCLC potilailla.

löysimme eroja ilmaisua kolmen miRNA välillä NSCLC kudosten ja vastaavien noncancerous keuhkojen kudoksiin. Mikä tärkeintä, tunnistimme miR-29c ja miR-429 kuten väärin säädellystä verenkierrossa seeruminäytteistä varhaisvaiheen potilaiden NSCLC, ja ilmaisu näiden miRNA oli herkempi kuin seerumin CEA tasot erottamaan NSCLC potilaiden terveiden verrokkien. Lisäksi olemme myös tunnistettu laski seerumin miR-429 ilmaisu itsenäisenä ennustetekijöitä biomarkkeri NSCLC. Kliininen arvo kolmen testattujen miRNA diagnosointiin ja ennusteen NSCLC optio lisätutkimuksia suuremmissa ikäryhmät.