Krooninen sairaus

tiivistelmä

Background

Viimeisten vuosikymmenten aikana, paljon tutkimuksia on antanut mahdollisuuden kiertävän MikroRNA (miRNA) kuin noninvasive biomarkkereita syövän diagnosointiin. Tutkimuksen tarkoituksena oli tutkia havaita Veren miRNA kudoksissa ja plasmat mahasyövän (GC) potilasta ja arvioida niiden diagnostista arvoa.

Methods

Tissue kerättiin 85 GC potilailla. Plasma kerättiin 285 GC potilaista ja 285 verrokkiin. Ilmentyvät eri miRNA suodatettiin kanssa Agilent Human miRNA Microarray ja TaqMan alhaisen tiheyden array (TLDA) kanssa yhdistettyä näytettä, jota seuraa kvantitatiivinen RT-PCR (qRT-PCR) validointi. Vastaanotin toimii (ROC) käyriä strukturoitu diagnoositietoja tarkkuutta miRNA. Plasman taso miR-26a GC potilailla eri kliininen vaiheissa verrattiin.

Tulokset

neljä miRNA (miR-26a, miR-142-3p, miR-148a, ja asennuspalveli- 195) paljasti sattumalta alentuneesta kudoksessa ja plasmassa GC potilaista verrattuna kontrolleihin, ja ROC konstruoitiin osoittamaan, että miR-26a oli korkein ala ROC-käyrän (AUC) 0,882. Lisäksi miR-26a stabiilisti havaita plasmasta GC potilailla, joilla on erilaiset kliiniset ominaisuudet.

Johtopäätös

Plasma miR-26a voi saada aikaan uudenlainen ja vakaa merkkiaine mahasyöpä.

Citation: Qiu X, Zhang J, Shi W, Liu S, Kang M, Chu H, et al. (2016) Circulating MicroRNA-26a Plasma ja sen mahdolliset Diagnostic Arvo mahasyövän. PLoS ONE 11 (3): e0151345. doi: 10,1371 /journal.pone.0151345

Editor: Zheng Li, Pekingin unionin Medical College Hospital, Kiina

vastaanotettu: 29 lokakuu 2015; Hyväksytty: 08 helmikuu 2016; Julkaistu: 24 maaliskuu 2016

Copyright: © 2016 Qiu et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Data Saatavuus: Kaikki asiaankuuluvat tiedot ovat paperi- ja sen tukeminen Information tiedostoja.

Rahoitus: Tämä tutkimus oli osittain tuettu National Natural Science Foundation of China (81230068, 81373091, 81302502, 81302490 ja 81473049), Natural Science Foundation of Jiangsun maakunnassa (BK2012842 ja BK20130641), Key Program for Basic Research Jiangsu Provincial Department of Education (12KJA330002), Specialized Research Fund tohtorikoulutuskeskukseen korkeakoulutuksen Kiinassa (20130092120063), Jiangsun maakunnan Koulutusohjelmat innovaation ja yrittäjyyden undergraduates (201412682004Y ), Jiangsu Provincial Science and Technology Innovation Team, ja Priority Academic ohjelmasuunnitteluosastolle Jiangsun korkeakouluista (terveys- ja ehkäisevän lääketieteen).

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä olemassa.

Johdanto

Mahasyöpää (GC) on yksi yleisimmistä pahanlaatuisten maailmassa. Vaikka yleinen esiintyvyys on vähentynyt viime vuosina, se on neljänneksi yleisin maligniteetti (989000 tapausta) ja toiseksi yleisin syy syövän liittyvät kuolemat (738000 kuolemantapausta) maailmanlaajuisesti [1]. Yli 70% tapauksista tapahtuu kehitysmaissa [2]. Erityisesti myöhäisvaiheen potilaiden silti osoittaa erittäin huono eloonjäämisasteesta [3] .Voit mennessä diagnoosi GC perustuu kliinisiin oireisiin, ja on olemassa joitakin testiä käytettävistä tekniikoista, kuten tähystys, ja barium aterian tutkimus. Kuitenkin kaikki nämä lähestymistavat ovat osoittaneet joitakin puutteita on havaita GC. Lisäksi on olemassa joitakin seerumin kasvainmerkkiaineet esimerkiksi syöpä -antigeeni (CEA), hiilihydraattiantigeeniä 19-9 (CA19-9) ja hiilihydraattiantigeeniä 72-4 (CA72-4), ja on olemassa joitakin rajoituksia herkkyys ja spesifisyys GC seulonta [4]. Siksi kiinnitämme enemmän huomiota löytää uusia, luotettava ja noninvasiivinen biomarkkerit GC.

MikroRNA (miRNA) ovat luokan lyhyt (20 ~ 25 nukleotidia), ei-koodaavaa yksijuosteisen RNA: t [5]. Yleisesti uskotaan, että miRNA voivat osallistua geenin ilmentymisen säätelemiseksi, joka aiheuttaa mRNA hiljentäminen kuten tavoite pilkkominen, translaation esto, ja mRNA rappeutuminen [6]. Kertyvät näyttöä on ilmoittanut, että miRNA olivat mukana useissa patofysiologisissa prosesseja ja johtavat olennaisia ​​muutoksia useisiin sairauksiin. Zhang

et al

. havaitsi, että miR-26a aiheuttama endoteelisolujen apoptoosia ja osoitti terapeuttista potentiaalia miR-26a ateroskleroosiin liittyvän apoptoottisen solukuoleman [7]. Leonov

et al

. kuvattu esto miR-132 johti korkea

AGO2

ilme, joka oli mukana angiogeneesiin ja tulehduksen aikana ensisijainen endoteelisolujen aktivoitumisen [8]. Lukuisat tutkimukset ovat osoittaneet, että miRNA pelata välttämätön roolissa kasvaimen kehittymisen, joka toimii joko onkogeenien tai tuumorisuppressorigeeneille [9]. Useat miRNA ovat raportoineet liittyvän syövän Mirna ekspressioprofiileja [10-12]. Valitettavasti, kudosnäytteet on vaikea saada. Havaitsemiseksi miRNA kudoksissa ei ole realistinen kliinisen sovelluksen.

Lisäksi yhä enemmän todisteita on osoittanut, että kiertävä miRNA ovat vastustuskykyisiä RNaasi ruoansulatusta ja vakaasti havaittavissa plasmassa ja seerumissa helposti mittausten [13-14]. Aiemmat tutkimukset ovat vahvistaneet, että on olemassa miRNA veressä ja ilmaisu liittyy syövän, kuten suuri B-solujen lymfooma, peräsuolen syöpä, virtsarakon syöpä ja rintasyöpä [15-18]. Nämä tutkimukset yhdessä muodostavat perustan verenkierrossa miRNA toimii uusien biomarkkereiden syövän seulontaa.

Useat tutkimukset osoittavat ilmentymistason miRNA plasmassa ei ole täysin sopusoinnussa tämän kasvaimen. miR-378 väheni merkittävästi GC kudosten ja useissa solulinjoissa [19], mutta miR-378 oli mielekkäästi säädellään ylöspäin GC potilaiden seerumista [20]. Koska sama kuin miR-486, miR-486 voi toimia kasvaimen vaimennin miRNA mahalaukun kasvaimen [21], joka oli yli-ilmentynyt GC potilaiden seerumin [22]. Tällä hetkellä monet seerumi /plasma miRNA voi erottaa GC potilaista säätimillä silti tämä ei voi edustaa miRNA ilmentymistä kudoksessa. Jos voimme selvittää miRNA sekä differentiaalisesti ilmaistut mahasyövässä kudosten ja plasma, sen pitäisi olla enemmän kliinistä merkitystä.

Sen varmistamiseksi, että miRNA differentiaalisesti ilmaistaan ​​sekä kudosten ja plasma, käytimme kaksi mikrosiruja seuloa miRNA . Kahdessa validointi vaiheessa, neljä ehdokasta miRNA olivat merkittävästi alassäädetty kasvainkudoksessa ja plasmanäytteiden by qRT-PCR. Tutkimuksemme osoitti, että miR-26a pieneni merkitsevästi stabiilisti plasmassa mahalaukun syöpäpotilaiden ja voisi erottaa mahasyöpäpotilaista kontrolleista, hyvä herkkyys ja spesifisyys. Se oli ennustettu olevan lupaava kiertävä biomarkkereiden mahasyövän rutiini kliininen diagnoosi.

Materiaalit ja menetelmät

Tutkimusasetelma ja aiheita

Tämän tutkimuksen luvan Institutional Review board of Nanjing Medical University, ja jokainen osallistuja kunhan allekirjoittama kirjallinen lupa. Kaikki aiheet rekrytoitiin Yixin Cancer Hospital, Nantong kasvain sairaala, Huai-An First Kansan sairaalan ja toinen Affiliated sairaala Nanjing Medical University maaliskuusta 2006 toukokuuhun 2013 Jiangsun maakunnassa.

Kasvain kudoksia ja normaaleissa kudoksissa (sijaitsee 5 cm: n päässä kasvain) saatiin 55 GC leikkauspotilaiden ja snap-jäädytettiin nestetypessä. Plasma kerättiin 285 GC potilaista, ja 285, sukupuolen ja iän Hyväksytty plasmaa terveiden yksilöiden kerättiin valvontaa. Kaikki potilaat olivat osoittaneet histologisesti diagnosoitu GC alkudiagnoosin, ja yksikään niistä ei ollut saanut hoitotoimenpiteet, esimerkiksi kemoterapiaa tai sädehoitoa. Olemme luokiteltu kasvain vaiheen mukaisesti kasvaimeen solmu-etäpesäke (TNM) lavastus järjestelmä unionin International Cancer ohjaus (UICC). Kliininen ominaisuudet tutkimukseen osallistuneista on esitetty taulukossa 1.

Monivaiheinen tutkimus suunniteltiin tunnistamaan plasma miRNA kuin biomarkkereita GC potilaille (kuvio 1). Löytö vaiheessa, ilmentyvät eri miRNA arvioitiin pariksi kudosnäytteitä 5 GC potilaista (S1 taulukko) Agilent Human miRNA Microarray (V12.0, Agilent Technology, CA, USA). Plasma näytteet 5 GC potilaista (S2 taulukko), joiden sukupuoli, ikä sairaustiloja sovitettu kudosnäytteitä ja 5 terveisiin kontrolleihin alistettiin TLDA (V2.0, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) tunnistaa ilmentyvät eri miRNA . Koulutuksessa vaiheessa merkittävästi muuttunut miRNA ensin arvioitiin qRT-PCR 50 pariksi kudosnäytteistä ja 80 GC seeruminäytteiden ja 80 verrokkiin. Myöhemmin ilmentyvät eri miRNA välillä kudoksen ja seerumi tutkittiin edelleen ylimääräisiä 400 osallistujaa, johon kuului 200 GC potilasta ja 200 valvontaa.

RNA: n eristys plasmasta ja kudoksesta

Veri näytteet erillisessä tyhjiössä kuutiot sentrifugoitiin 3000 rpm: llä 10 minuutin ajan 4 ° C: ssa. Keräsimme supernatantti ja säilytettiin niitä -80 ° C: ssa. Ennen eristäminen menettelyä, lisäsimme lopullinen pitoisuus 10

-4 pmol /ul synteettisen

C

.

elegans

miR-39 (cel-miR-39) (Takara, Japani) jokaiseen näytteeseen, jotta valvontaan biologisen vaihtelevuuden. RNA uutettiin 100 ui plasmaa käyttämällä QIAGEN miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Valencia, CA, USA). Kokonais-RNA kudosten eristettiin käyttäen TRIZOL-reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA).

mikrosirut ja qRT-PCR

Profilointi suoritettiin käyttäen Agilent Human miRNA Microarray (V12.0 , Agilent Technology, CA, USA) ja TaqMan pienitiheyksistä array (V2.0, Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Varten kokonais-RNA eristetään kudoksesta, qRT-PCR suoritettiin käyttäen SYBR (R) PrimeScript ™ RT-PCR Kit (Takara Bio). Yksityiskohtainen kuvaus koemenettelyn on talletettu S1 Data.

Tilastolliset analyysit

pariksi kudosnäytteet verrattiin käyttämällä Wilcoxonin summa testi. Ei-parametriset U-testi suoritettiin sen määrittämiseksi merkitys plasman miRNA tasojen syövän ryhmä ja terve ryhmä. Vastaanotin-operaattori (ROC) käyriä ja alueilla ROC käyrät (AUC) saatiin arvioimaan GC havaitsemista potentiaali miRNA. Tilastolliset analyysit olivat kaksipuolisia testi, ja

P

0,05 pidettiin tilastollisesti merkittävänä. Kaikki tilastolliset analyysit suoritettiin SPSS ohjelmistoversio 16.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).

Tulokset

Discovery ehdokas biomarkkereiden mukaan mikrosiruja

Käytimme kaksi mikrosirun alustat miRNA analysoida ja vertailla miRNA ilmentymiskuviot kahdesta eri olosuhteissa. TLDA analyysi valmistui vahvistamiseksi ehdokas miRNA ekspressiotasoja. Kaikkiaan 142 miRNA todettiin plasmasta. 65 kokonaismäärästä miRNA lisättiin ja 77 määrä väheni GC potilailla verrattuna kontrolleihin.

Tunnistaa ehdokas miRNA, ilmaus miRNA välillä potilaiden ja verrokkien tarvittiin vastaamaan kaksi kriteeriä: (1) ilmaisu sääntelyn kasvainkudoksessa oli yhdenmukainen TLDA lopputulokseen [23]; ja (2) plasman miRNA tasot osoittavat, ≥ 2-kertainen ero potilaiden ja verrokkien. Lopulta neljä alassäädetty plasma miRNA (ts miR-26a, miR-142-3p, miR-148a ja miR-195) valittiin ehdokkaista nyrkki-vaiheen validointi (taulukko 2).

Vahvistus miRNA by qRT-PCR

Ensinnäkin tulokset mikrosiruja analyysit vahvistettiin käyttämällä pariksi kudoksia, GC plasman ja verrokkia näiden neljän miRNA by qRT-PCR. Tuloksemme osoittivat, että taipumus tulosten qRT-PCR oli samanlainen kuin mikrosiruja analyysit, joko kudosten tai plasmassa. Juoni osoitti, että ekspressiotasot neljän miRNA olivat tilastollisesti merkitseviä GC kudoksissa (

P

= 0,001,

P

= 0,002,

P

0,001 ja

P

= 0,003 mir-26a, miR-142-3p, miR-148a ja miR-195, vastaavasti, kuviot 2A-2D). Sillä välin, suoritimme qRT-PCR tarkistaa ilmauksia miRNA olivat alassäädetty toisessa riippumaton joukko 80 GC plasmanäytteistä ja 80 tervettä verrokkia. Ilmaukset neljä miRNA GC plasmassa merkittävästi vähentynyt verrattuna kontrolleissa (kaikki

P

0,001, kuviot 2E-2 H). Ilmaisut tasot neljän miRNA plasmassa oli alentunut tasaisesti vertaamalla kudosnäytteiden.

(AD) Suhteellinen ekspressiotasot miR-26a, miR-142-3p, miR-148a, miR-195, vuonna 50 pariksi mahasyövän kudosten ja vastaavien noncancerous kudoksia (log

10 asteikko Y akseli). (E-H) Plasma ekspressiotasot miR-26a, miR-142-3p, miR-148a, miR-195, 80 GC potilailla ja 80 tervettä verrokkia. Viivat sisällä laatikot merkitsevät keskijanojen (log

10 asteikko Y akseli). Viikset of rasiakuvaajien: Min Max.

Laajamittainen validointi plasman MikroRNA GC potilailla

Jotta vahvistaa vakautta plasma ilmauksia miRNA, suoritimme qRT-PCR suuressa mittakaavassa 200 GC plasmanäytteistä ja 200 sovitetun syöpää vapaa valvontaa. Yhtäpitävä tulosten kanssa koulutuksen vaiheessa ekspressiotasot neljän miRNA osoittivat merkittävää alassäätöä plasmassa GC potilaista (kaikki

P

0,001, kuvio 3), mikä viittaa siihen, että nämä neljä miRNA plasmassa voi toimivat ehdokas biomarkkereita diagnosointiin GC.

Rasiakuvaajat osoitti plasman miR-26a (A), miR-142-3p (B), miR-148a (C) ja miR-195 ( D) 200 mahasyövän potilaiden ja 200 iän ja sukupuolen terveisiin. Y-akseli edustaa suhteellista ilmentymistä miRNA normalisoida ruuttaa-miR-39 (Log

10 suhteellinen taso).

arviointi diagnostisten mahdollisuuksia miRNA GC

tehokkuuden arvioimiseksi yllä neljä miRNA diagnostisina markkereina GC havaitsemiseen, suoritimme ROC käyrä analyysi jokaisen miRNA. Kuvio 4 paljasti, että ROC käyrät neljän ehdokkaan miRNA osoitti plasman miRNA olivat arvon erottaa GC potilaiden normaaleihin kontrolleihin. Kynnysarvo on 0,651 oli sama herkkyys + spesifisyyden-1, joka oli maksimaalinen Mir-26a (suhteellinen ilmentyminen normalisoidaan solu-39). Mir-26a, herkkyys oli 83,6% ja spesifisyys oli 81,5%, jonka AUC 0,882 (95% CI = 0,847-0,916) (kuvio 4A). Tällä raja-arvo on 0,585 Mir-142-3p, herkkyys oli 74,4% ja spesifisyys oli 84,1%, jonka AUC 0,839 (95% CI = ,800-0,879) (kuvio 4B). AUC: t olivat 0,842 (95% CI = 0,803-0,882) ja 0,765 (95% CI = 0,717-0,812) Mir-148a ja miR-195, vastaavasti. Herkkyys ja spesifisyys olivat 75,4% ja 83,1% Mir-148a, 69,2% ja 75,4% Mir-195, tässä järjestyksessä (kuvio 4C ja 4D). Yhdistelmä ROC-käyrä analyysi tuotti AUC-arvo on 0,872 (95% CI = 0,836-0,908) (kuvio 4E).

ROC konstruoitiin osoittaa AUC-arvot miR-26a (A), miR-142- 3p (B), miR-148a (C), miR-195 (D) ja yhdistelmä neljästä miRNA (E).

Voit tarkistaa diagnoosi arvon vastaanottavan miRNA GC, me yhdistellyt plasman miRNA ja suorittaa ROC käyrät esitetyn S1 ja S2 kuviot. Nämä tiedot osoittivat, että miR-26a, jotka osoittivat suurinta kykyä erottaa GC potilaiden valvonta, voisi toimia sopivana biomarkkeri havaitsemiseen GC.

Keskustelu

Huolimatta merkittävä vähentyminen GC kuolleisuus viime vuosikymmenellä, kuolleisuus on edelleen suurempi kuin monet muut yhteiset maligniteettien [24]. Viime vuosina kasvain biomarkkereita esimerkiksi CEA, CA19-9, CA74-2 rajallisten herkkyys ja spesifisyys on laajalti käytetty diagnosointiin, seurantaan ja ennusteen GC [4]. Kaiken kaikkiaan on suuri merkitys diagnosointiin GC etsiä tarkempia ja herkkä biomarkkereiden.

Tissue miRNA kuin biomarkkerit diagnoosi ja prognoosi ensin ehdotettu. Bandres

et al

. paljasti, että miR-451 oli säädellä vähentävästi ensisijainen maha- ja peräsuolen kasvaimia, ja alas-säätely miR-451 oli yhteydessä alhaiseen DFS ja alhainen kokonaiselossaolo [25]. Xiao

et al

. tunnistettu miR-106a kuin dramaattisesti säädelty miRNA GC [26]. He totesivat myös, että ilmaus miR-106a oli merkitsevästi liittyy kasvaimen vaiheessa imusuonten, etäinen etäpesäke ja invaasio. Tästä huolimatta monet syöpätyypit potilaat eivät ole pystyneet leikkaukseen kliinisessä käytännössä, kun ne on diagnosoitu. Riippuvuus kirurginen jakso ja invasiivisia menettely kudoksen näytekokoelmatodistuksen voimakkaasti rajannut miRNA kudoksessa syövän diagnoosi [27]. Diagnostinen laatu näistä menetelmistä ei ole tyydyttävä.

Kehittyvät näyttöä myös siitä, että kiertävä miRNA jotka liittyvät syöpään [28-30]. Äskettäinen tutkimus kertoo, että miRNA olivat havaittavissa plasmassa ja stabiili huoneenlämpötilassa ja /tai useita jäädytys-sulatus prosessien [31]. Lukuisat raportit oli valaistu, että hyödyllisyys kiertävän miRNA uusina noninvasive biomarkkereita syöpien, kuten paksusuolen ja peräsuolen syöpä [32], rintasyövän [33-34] ja munuaissyövän [35].

Tutkimuksessamme me järjestelmällisesti seulotaan mirna profiili pariksi kudoksissa ja plasmassa GC potilaiden ja terveiden verrokkien. Plasma saatiin 5 tapauksissa ja 5 ohjaa sekoitettiin yhteen, jolloin muodostuu kaksi yhdistettyä näytettä ja niitä käytettiin TLDA. Tämä menetelmä yhdistävät näytteet on laajalti käytetty tekniikka, jota on osoitettu olevan luotettavia profilointiin [36-38]. Vertaamalla TLDA analyysi ja tulosta kudoksen microarray, neljä miRNA (miR-26a, miR-142-3p, miR-148a ja miR-195) pienennetään GC valittiin.

Myöhemmin tunnistimme neljä ehdokasta miRNA by qRT-PCR kahdessa vaiheessa, ja löysi ekspressiotasot neljä miRNA romahti plasmassa GC potilasta, jotka olivat yhtä mieltä ilmaisuja kudoksissa. ROC-käyrä, joka tunnetaan myös herkkyys käyrä, on laajalti tunnustettu arviointimenetelmä diagnostista testiä. Se on myös integroitu indikaattori heijastaa herkkyys ja spesifisyys jatkuvia muuttujia. Esillä olevassa tutkimuksessa, ROC-analyysi osoitti, että yhdistelmä neljästä miRNA ei ollut tehokkaampi kuin miR-26a erikseen. MiR-26a yksin voisi saavuttaa hyvä diagnostinen tehokkuus erottavien GC potilaiden terveiden verrokkien kanssa AUC 0,882 (herkkyys = 83,6% ja spesifisyys = 81,5%). Aiemmassa tutkimuksessa on Schneider

et al

. näkyvät seerumin CEA, CA19-9 ja CA72-4 GC selvitetty herkkyys on 45,5% ja CA19-9, 23,8% CEA ja 60,7% for CA72-4 [39]. Nämä olivat paljon vähemmän kuin herkkyys miR-26a. Lisäksi ilmaisu taso miR-26a plasmassa oli merkittävä matalampi GC potilailla, ja eivät osoittaneet mitään merkitystä kanssa etenemistä GC (S3 kuvassa). Siten miR-26a oli suuri potentiaali diagnostinen plasma biomarkkereiden GC.

Viimeisten vuosikymmenten aikana aikaisempia tutkimuksia ei ole varmistanut, että onko miRNA ilmaus plasman tai seerumin voisi edustaa tasojen kudosta. Verrattuna Näiden tutkimusten Tutkimuksemme oli oma ominaisuus johtuen syistä seuraavasti. Ensin valitsimme miRNA joka ilmaistaan ​​eri tavoin sekä kudosten ja plasma, vertaamalla tulokset kahdesta mikrosiruja. Tämä johti paremmat mahdollisuudet tunnistaa mahdollisia diagnostisia markkereita. Lisäksi huomasimme, että miR-26a ilmentyminen merkitsevästi pienempi GC potilaiden ja pidetään vakaana plasmassa (S3 kuvassa).

Tuloksista ilmeni, että plasman ilmentymistä miR-26a oli merkittävä matalampi GC potilaille verrattuna terveisiin kontrolleihin (

P

0,05), mikä osoitti vakauden GC potilailla, joilla on eri kliinisen tilan. Alas-säätely plasma miR-26a ilmentyminen voi osoittaa todennäköisyys diagnosoinnissa GC. Siksi miR-26a voi olla paras vaihtoehto toimia mahdollisina biomarkkerina GC. Deng

et al

. osoittivat, että miR-26a tasoa GC kudoksista enemmän huomattavasti vähentynyt kuin ei-kasvain kudosten qRT-PCR [40]. He osoittivat myös, että miR-26a esti kasvaimen kasvua ja etäpesäkkeiden osittain kohdentamalla

FGF9

in vivo. Ne koostuivat meidän tuloksia. Nämä havainnot vahvistivat, että miRNA-26a plasman voisi olla mahdollinen diagnostinen markkeri GC.

Kuitenkin rajoitukset Tutkimuksemme ovat, että näytteet kudoksen microarray sekä TLDA eivät olleet samasta potilaista, ja meidän otoskoot mikrosiruissa olivat suhteellisen pieniä. Edelleen analyysi mikrosiruja samasta potilaiden ja laajentunutta-näytteen vahvistus vaaditaan soveltaa uutena seulontatyökaluna GC rutiinin kliinisen hyödyntämistä. Lisäksi emme valita sääteli miRNA siksi, että ei ollut ylä- säädelty miRNA joiden kertainen muutokset olivat ≥ 2. valittu ehdokas miRNA jotka ylenpalttisesti ilmaistu plasmassa varmistaa todennäköisyyden tarkastelun kliinisessä käytössä.

Johtopäätökset

Yhteenvetona Tutkimuksemme paljasti neljä alassäädetty miRNA, miR-148a, miR-142-3p, miR-26a, ja miR-195, GC potilailla. Vielä tärkeämpää on, plasman ilmentyminen miR-26a väheni merkittävästi ja vakaa potilailla, joilla on mahalaukun syöpä. Tämän seurauksena miR-26a voi tarjota ei-invasiivisia ja vakaa biomarkkereiden mahasyövän diagnoosia ja seulontaa.

tukeminen Information

S1 Data. Koeprotokollat ​​mikrosirujen ja qRT-PCR.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0151345.s001

(DOC) B S1 Kuva. ROC-käyrä analyysi kahden miRNA joukossa neljä ehdokasta miRNA.

Yhdistelmä miR-26a ja miR-142-3p (A), yhdistelmä miR-26a ja miR-148a (B), yhdistelmä Mir-26a ja miR-195 (C), ja yhdistelmä miR-142-3p ja miR-148a (D), yhdistelmä miR-142-3p ja miR-195 (E) ja yhdistelmä asennuspalveli- 148a ja miR-195 (F) tuotti suurin AUC.

doi: 10,1371 /journal.pone.0151345.s002

(DOC)

S2 Kuva. ROC-käyrä analyysi yhdistelmä kolmesta miRNA joukossa neljä ehdokasta miRNA.

Yhdistelmä miR-26a, miR-142-3p ja miR-148a (A), yhdistelmä miR-26a, miR-142-3p ja miR-195 (B), yhdistelmä miR-26a, miR-148a ja miR-195 (C) ja yhdistelmä miR-142-3p, miR-148a ja miR-195 (D) tuotti suurin AUC-arvo.

doi: 10,1371 /journal.pone.0151345.s003

(DOCX)

S3 Fig. Plasman miR-26a mahalaukun syöpäpotilailla ositettu kliinisen tilan.

Rasiakuvaajat osoitti plasman miR-26a 200 tervettä verrokkia ja 200 mahasyöpäpotilaista eri kliinisen tilan.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0151345.s004

(DOCX) B S1 Taulukko. Kliiniset ominaisuudet kudoksen aiheista seulonta Agilent Human miRNA Microarray.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0151345.s005

(DOC)

S2 Taulukko. Kliiniset ominaisuudet plasman aiheista seulontaa TLDA.

Doi: 10,1371 /journal.pone.0151345.s006

(DOC) B

Kiitokset

Olemme syvästi kiitollisia osallistumisen kaikki aiheet myötävaikuttavat tähän tutkimukseen.