Krooninen sairaus

tiivistelmä

Mahalaukun syöpä on suurin syy syöpään liittyvät kuolemat sekä miehillä että naisilla. Epidermaalisen kasvutekijän reseptoreita ovat EGFR, HER2, HER3 ja HER4. Neljä epidermaalisen kasvutekijän reseptoreita, EGFR ja HER2 ovat tunnettuja onkogeenien osallisena syöpään. Vähän kuitenkin tiedetään roolista HER3 ja HER4 tässä sairaudessa. Olemme saatu pariksi näytteitä kasvain ja viereisen normaalin kudoksen samasta potilaasta leikkauksen mahasyövän. Käyttämällä RT-qPCR, me määrällisesti mRNA ilmaisun neljästä reseptorien lukien HER4 silmukointi-isoformit ja kaikki ligandit aktivoivat näiden reseptorien. Käyttäen immunohistokemia, proteiinin ilmentymistä HER4 myös määrällisesti. Olemme havainneet, että HER2-mRNA: n ekspressio oli voimistunut kasvainkudoksessa verrattuna vastaaviin normaaleihin kudoksiin (p = 0,0520). Kaikki ligandit, joilla affiniteetti EGFR oli voimistunut, kun taas ilmaus EGFR oli ennallaan. Mielenkiintoista on, löysimme mRNA: n ilmentymisen ja HER4 (p = 0,0002), ja sen ligandi NRG4 (p = 0,0009) ja vaimentua kasvainkudoksessa verrattuna vastaaviin normaaleihin kudoksiin. HER4 downregulation osoitettiin kaikille vaihtoehtoisesti liitettyjä isoformeja tämän reseptorin. Nämä tulokset tukevat osallistumista EGFR ja HER2 mahasyövän ja ehdottaa mielenkiintoinen yhdistys vähensi HER4 lausekkeen mahasyövän.

Citation: Nielsen TO, Friis-Hansen L, Poulsen SS, Federspiel B, Sorensen BS (2014) Expression of EGR Family mahasyövän: alassäätely HER4 ja sen aktivointi ligandimallin NRG4. PLoS ONE 9 (4): e94606. doi: 10,1371 /journal.pone.0094606

Editor: Rupesh Chaturvedi, Vanderbilt University School of Medicine, Yhdysvallat

vastaanotettu: 08 heinäkuu 2013; Hyväksytty: 19 maaliskuu 2014; Julkaistu: 11 huhtikuu 2014

Copyright: © 2014 Nielsen et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Danish Cancer Society # R2-A247-09-S2, tanskalainen MRC #FSS 09072153. rahoittajat ei ollut roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Tällä kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Mahasyöpä on kolmanneksi suurin syy syöpään liittyvien kuolemien miesten ja viides johtava syy naisilla. Mahalaukun syöpä oli noin 990000 uusia rekisteröityjä tapauksia ja 738000 kuolemantapausta maailmanlaajuisesti vuonna 2008 [1]. Infektio

Helicobacter pylori

, ruokavalio, tupakointi ja alkoholin kulutus ovat tärkeimpiä tekijöitä, jotka vaikuttavat riski saada mahasyöpä [2], [3].

kasvutekijän (EGF) perhe on monimutkaisen verkoston tyrosiinikinaasin reseptorit ja ligandit vuorovaikutuksessa aiheuttavan erilaisia ​​signalointikaskadien. Perhe sisältää neljä reseptorien EGFR (HER1), HER2 (ErbB2), HER3 (ErbB3), ja HER4 (ErbB4) [4]. Vaihtoehtoisen silmukoinnin, HER4 on ilmaistu useita isoformeja. Vuonna juxtamembraneous alalla HER4, sisällyttäminen joko eksoni 15b tai eksonissa 16 johtaa hallintoviranomaisen tai JMB isoformeja, vastaavasti [5] – [7]. Hallintoviranomainen isoformi eikä JMB isoformi voidaan käsitellä vapauttamaan liukoinen HER4 intrasellulaarisen domeenin (ICD), joka sijoittuu paikallisesti solulimasta, ja mitokondrioiden [8], [9]. Vaihtoehtoinen silmukointi on sytoplasminen alue on HER4 aiheuttaa sen, CYT1 ja CYT2 isoformit. Eksonin 26 johtaa reseptorin (CYT2) puuttuu 16 aminohappoa täyspitkän reseptorin (CYT1) [10].

ligandit EGF-perheen ovat epidermaalinen kasvutekijä (EGF), transformoiva kasvutekijä-α (TGF-α), ja amfireguliini (AR), jotka ovat spesifisiä EGFR; hepariinia sitovat EGF: n kaltainen kasvutekijä (HB-EGF), beetaselluliinin (BTC), ja epiregulin (EPR), jotka sitovat sekä EGFR ja HER4; neureguliini 1 (NRG1) ja NRG2 jotka sitovat sekä HER3 ja HER4; ja lopulta NRG3 ja NRG4 jotka ovat spesifisiä HER4 [11]. Kun sitova aktivoivaa ligandia, reseptorit tehdä homo- ja hetero-dimeerit. Koostumus dimerisaation kumppaneiden ja aktivoimalla ligandien määrittää signaalin transduktoida solun sisällä [12], [13]. EGFR perhe pelaa eri tehtävissä kasvun ja ylläpidon lukuisten kudosten muun muassa säätelemällä solunjakautumisen, apoptoosin, erilaistumista ja muuttoliike. Puretaan signaloinnin tästä järjestelmä on liitetty kehitystä ja kasvua syöpien [14] – [17].

EGFR ja HER2 ovat tunnettuja onkogeenien mahasyövän [18], [19]. HER2 estävä vasta-aine trastutsumabi onnistuneesti parantaa ennustetta kun lisätään solunsalpaajahoito potilailla, joilla on HER2-positiivinen kehittynyt mahasyövistä [20]. Useat kliiniset tutkimukset on tehty myös testata käytettävyyttä EGFR: n estäjien mahasyövän [21], [22]. HER3 ja HER4 saattaa myös olla tärkeä etiologiassa mahasyövän; kuitenkin, tietoa niiden roolit tämä tauti on niukkaa. Todellakin, tiedetään vähän ekspressiokuviota koko EGR-järjestelmä. Koska vuorovaikutteinen luonne EGF-reseptorien ja ligandien selventäminen mekanismeja sääntelyn EGR perheenjäsenten vaatimukset huomioon kaikki ja niiden ligandien yhteen.

tutkimiseksi ekspressiokuviota EGR-reseptorien ja ligandien mahasyövän, saimme kudosta kasvain ja viereisen normaalin kudoksen samasta potilaasta leikkauksen mahasyövän. Käytimme pariksi kudosnäytteitä varmistaa vastaan ​​yksilöiden välinen vaihtelu, joka on olemassa perustason ilmentyminen EGR-järjestelmän. Käyttämällä RT-qPCR, me määrällisesti mRNA ilmaisun neljästä EGF-reseptorien lukien HER4 silmukoinnin isoformit ja ligandit aktivoivat näiden reseptorien.

Materiaalit ja menetelmät

Patient valikoima ja kokoelma koepaloja

tässä kohorttitutkimuksessa, 38 leikkauspotilaiden varten adenokarsinooman mahan, ruokatorven tai ruokatorven risteyksessä otettiin peräkkäin mukana heinäkuusta 2008 marraskuussa 2009. Kaikki yksilöt edellyttäen tietoisen kirjallisen suostumuksensa. Kokoelma koepaloja hyväksyttiin alueellisten tieteen etiikasta komiteoiden Zealand, Tanska (lehden numero H-B-2008-049), ja perustamalla Biopankin hyväksyi Tanskan tietosuojavirasto (lehden numero 2008-41-2138). Koepaloja otettiin sekä kasvainkudoksen ja viereisen normaalia kudosta. Kaikki biopsianäytteissä tarkisti kokenut patologi vahvistaa diagnoosin. Esiohjelmoidut kliiniset tiedot poimittiin lääketieteen kaavioita ja patologian raportteja. Kliininen ominaisuudet potilaille annetaan taulukossa 1.

RNA

Koepaloista laitettiin RNA

myöhemmin

(Life Technologies, Carlsbad, CA, USA ) välittömästi poiston jälkeen. RNA

myöhemmin

poistettiin ennen RNA: n eristämistä, ja Trizol (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) lisättiin. Kudosnäytteet homogenisoitiin Tissuelyser (Qiagen, Chatsworth, CA, USA). RNA kudoksesta eristettiin mukaan valmistajan protokollaa Trizol RNA: n eristämistä (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). RNA pitoisuudet mitattiin NanoDrop ND-1000 Spektrofotometri. RNA laatu testattiin 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti.

Käänteinen transkriptio kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio (RT-q-PCR) B

cDNA syntetisoitiin 1 ug kokonais-RNA: ta käyttäen High Capacity cDNA Reverse Transcription Kit (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Lopullinen Reaktio laimennettiin kokonaistilavuuteen 200 ui.

1 ui cDNA: ta käytettiin qPCR käyttäen SYBR green Master Mix (Roche, Basel, Sveitsi) on Roche LightCycler-480: 95 ° C, 10 min; 50 sykliä 95 ° C 10 sek, erityisiä hehkutus lämpötilassa 10 sekuntia, 72 ° C 5 sekunnin ajan; 99 ° C 1 sek, 59 ° C 15 sekuntia; 95 ° C 1 sek, Jäähdytyksen 40 ° C: ssa. Alukesekvenssit ja hehkutus lämpötilat on esitetty taulukossa 2.

geeni parhaiten normalisointia määritettiin soveltamalla Normfinder algoritmi [23] ja määrällisesti pitoisuudet GAPDH, β-aktiini, YWHAZ, SDHA ja HMBS. SDHA osoittautui paras viisi. Kaksi näytettä suljettiin pois analyyseistä, koska siihen ei mRNA: n mistä tahansa viittaus geenejä.

Immunovärjäys

Parafiini-upotettu kudokset kiinnitettiin 4% puskuroidussa paraformaldehydissä 13 edustavasta potilaasta tutkittiin immunohistokemia käyttäen c-erbB-4 /HER-4, kanin polyklonaalista vasta-ainetta laimennettuna 1/50 primaarisena vasta-aineena (RB-9045-P1, Thermo Scientific, Wilmington, DE, USA). Sillä antigeeni haku leikkeitä keitettiin mikroaaltouuni 10 mM sitraattipuskurissa, pH 6,0. Immunoreaktion visualisoitiin biotinyloidulla vuohen anti-kani-vasta-ainetta laimennettuna 1/200 (BA-1000, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA), jonka jälkeen esimuotoiltu avidiini ja biotinyloidun piparjuuriperoksidaasi makromolekyylikompleksi (ABC) laimennettuna 1/100 (Code nr. PK-4000, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA). Reaktio kehitettiin käyttämällä 3,3 -diaminobenzidine ja counterstaining suoritettiin Mayerin Hemalum. Negatiivisena kontrollina, sama menettely suoritettiin ilman primaarista vasta-ainetta.

Käyttäen Image Pro Plus (MediaCybernetics) värjäytymisen intensiteetti edustavat kuvat kasvain verrattuna ympäröivän limakalvon kudos arvioitiin. Kaksi kuvaa kasvaimen näyte ja kaksi kuvaa ympäröivän limakalvon kerättiin kustakin kudosnäytteestä ja keskiarvo kahdesta arvosta laskettiin ja käytettiin tilastolliseen analyysiin ja piirtämistä. Muutaman näytteitä, vain kasvainkudoksessa tai vain normaali limakalvo ollut läsnä eikä vertailua HER4 ilmentyminen oli mahdollista, että nämä kudokset. Parillista t-testiä käytettiin sen määrittämiseksi, onko voimakkuus kasvainkudoksessa oli erilainen intensiteetti limakalvon kudoksissa.

Tulokset

mRNA: n ilmentymisen EGF-reseptorien mahasyövän

RNA: ta 38 kasvaimista ja Hyväksytty näytteitä viereisestä normaalista kudoksesta peräisin potilaista, joille tehtiin leikkaus mahasyövän käytettiin RT-qPCR määrällisiä arvioita. MRNA: n ilmentyminen neljän EGF-perheen reseptoreihin EGFR, HER2, HER3 ja HER4 on esitetty kuviossa 1. On mielenkiintoista, että HER4-reseptori saatettiin downregulation in syöpäkudoksen verrattuna normaaliin kudokseen (p = 0,0004). HER2, näimme voimistumista tämän reseptorin syöpäkudoksen joka oli hyvin lähellä olevan merkitsevä (p = 0,0520). EGFR ja HER3- mRNA: n ilmentyminen oli un-muuttunut kasvaimissa verrattuna normaaliin kudokseen.

Kaikki mRNA: n ilmentymisen pitoisuudet ovat mielivaltaisia ​​ja edustavat suhde mRNA: n ilmentymisen kohdegeenin jaettuna mRNA: n ekspressio viitteen geenin SDHA. mRNA: n ekspressio on määrällisesti tuumoribiopsioissa mahalaukun syöpäpotilaiden ja pariksi viereisen normaalin kudoksen samasta potilaasta. P-arvot lasketaan käyttäen parillista t-testiä.

HER4 olemassa eri vaihtoehtoisesti liitettyjä isoformeja. Juxtamembranous alue voi koostua joko JMA tai JMB, ja sytoplasminen alue voi koostua joko CYT1 tai CYT2. Vaimennussäätely havaittu yhteensä HER4 mRNA: n ekspression syöpäkudoksen soveltaa kaikkiin neljään variantit reseptorin (kuva 2).

Kaikki mRNA: n ilmentymisen pitoisuudet ovat mielivaltaisia ​​ja edustavat suhde mRNA: n ilmentymisen kohdegeenin jaettuna mRNA: n ilmentymisen viitteen geenin SDHA. mRNA: n ekspressio on määrällisesti tuumoribiopsioissa mahalaukun syöpäpotilaiden ja pariksi viereisen normaalin kudoksen samasta potilaasta. P-arvot lasketaan käyttäen parillista t-testiä.

havainnollistaa paremmin suuruusluokkaa HER4 downregulation tuumorikudokseen, me piirretty HER4 myötä- tai säätelyä kunkin yksittäisen potilaan. HER4 mRNA-ekspressio tuumorikudoksessa miinus HER4 mRNA: n ekspression sovitetun normaalin kudoksen (ΔHER4) on esitetty kuviossa 3. arvo on alle 0 edustaa downregulation. Tämä kuvio osoittaa selvästi, että HER4 downregulation on hyvin yleinen mekanismi, joka tapahtuu suurin osa potilaista ja riippumatta kasvainpaikantumisen.

vesiputous juoni kuvaa eroa koko HER4 mRNA ilmaisun välillä kasvainkudoksen ja normaalin kudos kullekin potilaalle (ΔHER4). Ero lasketaan kasvainkudoksen ilmaisun miinus normaalin kudoksen ilmentymistä, ja siten, negatiivinen arvo edustaa downregulation kasvainkudoksessa verrattuna normaaliin kudokseen. Kasvain paikallistaminen yksittäisten potilaiden on kuvattu kuvassa.

mRNA: n ilmentymisen EGF-perheen ligandien mahasyövässä

TGF-α, amfireguliini, ja EGF sitoutuvat spesifisesti EGFR. Vain mitätön mRNA ekspressiotaso havaittiin EGF sekä kasvain ja normaali kudos, ja siksi tämä ligandi ei tarkasteltu lisäanalyysiä varten. TGF-α ja amfireguliini molemmat voimistussäädellään syöpäkudoksen verrattuna normaalissa kudoksessa (kuviot 4a ja b). HB-EGF, beetaselluliinilla, ja epiregulin on affiniteettia sekä EGFR ja HER4, ja kaikki nämä ligandit myös voimistussäädellään syöpäkudoksen (kuviot 4 c, d, ja e). Yhdessä tämä osoittaa, että kaikki EGFR-aktivoiva ligandeja voimistunut kasvaimissa.

NRG1 ja NRG2 vaihtoehtoisesti liitetystä variantit a ja β ovat mukana. Kaikki mRNA: n ekspression pitoisuudet ovat mielivaltaisia ​​ja edustavat suhde mRNA: n ilmentymisen kohdegeenin jaettuna mRNA: n ekspressio viitteen geenin SDHA. mRNA: n ekspressio on määrällisesti tuumoribiopsioissa mahalaukun syöpäpotilaiden ja pariksi viereisen normaalin kudoksen samasta potilaasta. P-arvot lasketaan käyttäen parillista t-testiä.

neureguliinit, NRG1 ja NRG2 sitovat sekä HER3 ja HER4. Olemme havainneet muutosta ilmentymistä joko α tai β variantteja NRG1 ja NRG2 (kuviot 4 f, g, h ja i). NRG3 ja NRG4 sitovat vain HER4. NRG3 ei tapahtunut mitään muutosta ilme normaalista syöpä- kudoksen (kuva 4j). Kuitenkin NRG4 säädeltiin vähentävästi on syöpäkudoksen verrattuna normaaliin kudokseen (p = 0,0009) (kuvio 4k). Tämä osoittaa, että sekä HER4 ja sen ligandi NRG4 ovat alaspäin säädeltyjä mahasyövässä.

havainnollistaa paremmin suuruusluokkaa NRG4 downregulation tuumorikudokseen, me piirretty NRG4 myötä- tai säätelyä kunkin yksittäisen potilaan. NRG4 mRNA-ekspressio tuumorikudoksessa miinus NRG4 mRNA: n ekspression sovitetun normaalin kudoksen (ΔNRG4) on esitetty kuviossa 5.

putous käyrä, joka kuvaa eroa NRG4 mRNA: n ilmentymisen välillä kasvainkudoksen ja normaalin kudoksen kullekin potilaalle (ΔNRG4). Ero lasketaan kasvainkudoksen ilmaisun miinus normaalin kudoksen ilmentymistä, ja siten, negatiivinen arvo edustaa downregulation kasvainkudoksessa verrattuna normaaliin kudokseen. Kasvain paikallistaminen yksittäisten potilaiden on kuvattu kuvassa.

Kun otetaan huomioon kaikki potilaat osoittavat downregulation yhteensä HER4 niiden kasvainkudoksessa, 82% näistä NRG4 Myös downregulation ja 86% yhden tai enemmän EGFR-shared ligandien (HB-EGF, epiregulin, beetaselluliini) oli voimistunut. 36%: lla potilaista, joilla koko HER4 downregulation, kaikki kolme EGFR jaetun ligandit voimistunut.

Proteiinin ilmentymistä HER immunohistokemiallisesti

Koska transkription jälkeinen määräyksiä, mRNA ilmentymiskuviot määritetty RT-qPCR ehkä kuvasta proteiinin ilmentymisen kuvio. Sen varmistamiseksi, että havaitut väheneminen HER4 mRNA ilmaisun syöpäkudoksen potilaiden mahalaukun syöpä heijastuu myös proteiinin tasolla, suoritimme immunohistokemiallinen värjäys on formaliinilla kiinnitetyt parafinoidut kudosta kaikkien potilaiden tutkimuksessa mukana.

määrällinen esitys HER4 värjäytymisen intensiteetti edustavalla kasvain- ja ympäröivän kudoksen, löysimme kasvainkudoksen on huomattavasti vähemmän HER4 värjäytymisen intensiteetti verrattuna ympäröivään terveeseen limakalvo (p = 0,0029) (kuvio 6) .

värjäytymisen intensiteetti edustavat kuvat kasvain verrattuna ympäröivän limakalvon kudos arvioitiin. Kaksi kuvaa kasvaimen näyte ja kaksi kuvaa normaalin limakalvon kerättiin kustakin kudosnäytteestä ja keskiarvo kahdesta arvosta laskettiin. P-arvo laskettiin käyttäen parillista t-testiä.

edustaja fotomikrografeissa värjäykset on esitetty kuviossa 7. normaalin mahan limakalvon oli voimakas HER4 immunoreaktiotuote (kuvio 7 a). Erityisesti pohjapinta osa solulimassa ja sivusuunnassa solukalvon pinnan epiteelisolujen olivat vahvasti immunoreaktiivisia HER4 (kuvio 5 b). Myös parietaalisoluihin osoitti erittäin vahva HER4 immunoreaktiivisuus (kuva 7 c ja d). Submukoosassa ja lihaksen kerrokset olivat negatiivisia. Vuonna rauhasrakenteet erityisesti parietaalisoluihin osoitti erittäin vahva HER4 immunoreaktiivisuus (kuviot 7 c ja d). Negatiiviset kontrollit suorittaa ilman mitään ensisijainen vasta-aine ei aiheuttanut värjäystä.

A) Normaali mahalaukun limakalvon kanssa immunoreaktion on HER4 ensisijaisesti pintaepiteelissä mutta myös rauhaset. B) suurempi suurennos mahalaukun epiteelin. Immunorektiosta on lokalisoitu basolaterally pintaan epiteelisolujen – molemmat kuin sytoplasmaattinen ja solukalvojen värjäytymistä. C) Kun rauhaset voimakkain värjäytyminen nähtiin parietaalisoluihin. Nämä (D)) oli helppo tunnistaa näiden solunsisäisten cannaliculi. E) Normaali limakalvo vahvojen immunoreaktioita yläosassa kuvion vastakohtana taustalla negatiivinen kasvain kudosta. Suurennukset a × 40, B, G x 210, C x 130, D x 600; E × 20.

mahasyövistä vain pieniä alueita kasvainsolujen oli positiivinen immunoreaktion on HER4, ja negatiivinen kasvainkudoksen vastakohtana oli värjätty normaali limakalvo vieressä kasvain (kuva 7) . Vuonna keskiosissa kasvainkudoksen lähes kaikki solut olivat täysin negatiivisia lukuun ottamatta pieniä klustereita soluja, jotka ehkä ollut selvä solukalvojen värjäytymistä.

Keskustelu

EGR perhe koostuu yhteisvaikutteinen verkosto reseptoreita ja ligandeja, jotka on pidettävä kokonaisuutena ymmärtää sääntelyn signaloinnin EGF-perheen. Olemme määrittäneet asetuksen kuvio EGF-perheen kasvainkudoksessa potilaiden mahalaukun syövän sekä sovitetun viereiseen normaaliin kudokseen samasta potilaista.

löysimme signalointi potentiaali EGFR voimistuvan tuumorikudokseen läpi säätelyä kaikkien EGFR aktivoivat ligandit, ja löysimme myös säätelyä HER2 kasvainkudoksessa, joka oli hyvin lähellä että merkitsevä (p = 0,0520). Tämä on hyvä sopimus nykyisten tietoja, jotka osoittavat, että sekä EGFR ja HER2 liittyy huonoon ennusteeseen mahasyövän [19]. Tärkeys HER2 mahasyövän on osoituksena se, että HER2 estävä vasta-aine Herceptin on ainoa hyväksytty aine kohdennettua hoitoa mahasyövän [24].

HER3 emme noudata mitään ilmaisulliset asetukseksi mRNA tasolla. Kuitenkin muutamat tutkimuksia HER3- mahasyövän ovat katsoneet rooli HER3- mahasyövän. HER3- on yhteydessä huonoon säilymiseen, ja positiivinen HER3 proteiinin ilmentymistä havaittiin immunohistokemia 18,6% mahasyövän näytteiden verrattuna vain 2,0% nontumorous näytteistä [25] – [27]. Emme löytäneet korkeampaa HER3- ilmaisun mahasyövän verrattuna normaaliin kudokseen tutkimuksessamme. Kuitenkin ero käytettyjen menetelmien tutkimuksissa (immunohistokemia vs RT-qPCR) saattavat selittää joitakin eroja tuloksiin. Lisäksi pystyimme kuvaamaan asetuksen kuvion kunkin potilaan sijaan poolissa syöpäpotilaiden ja poolin ohjaus henkilöiden, ja tämä voisi myös selittää eroa saatujen tulosten kahdessa tutkimuksessa.

Löysimme selvästi downregulation sekä HER4 ja sen aktivoivan ligandin NRG4 kasvainkudoksessa. Tuloksemme vahvistaa se, että olemme löytäneet myös downregulation kun käytimme ylimääräisiä määrityksiä määrällisesti erityisiä isoformit HER4. Käyttämällä immunohistokemia, olemme vahvistaneet, että normaali mahan kudos on positiivinen HER4, kun taas syöpäkudoksen on hyvin vähän tai ei lainkaan HER4 värjäytymistä.

vähentynyt ilmentyminen HER4 mRNA ilmaisun kasvainkudoksessa voidaan lukea vähenemiseen ilmentävien solujen lukumäärä HER4 tai vähenemisestä HER4 ilmentymisen kaikissa HER4 ilmentäviä soluja. Meidän immunohistokemiallinen värjäykset, havaitsemme, että syöpien vain vähäisiä klustereiden kasvainsolujen oli positiivinen immunoreaktion ja HER4, kun taas valtaosa kasvainsoluista olivat täysin negatiivisia. Tämä osoittaa, että se on määrä solun, joka ilmaisee HER4, joka on vähentynyt kasvaimia. Toisin kuin kasvainkudoksen, normaali kudos oli hyvin vahva immunoreaktioita ja HER4. Mielenkiintoista on, että se on erityisen limaa tuottavien solujen ja suolahapon tuottavat parietaalisolujen jotka ilmentävät HER4 proteiinia.

rooli HER4 syöpäsoluissa sairaus on kiistanalainen. Virtsarakon syöpä, RT-qPCR kvantifiointi HER4 ja sen ligandit osoittavat HER4 liittyy parempaan säilymiseen. Erityisesti ilmentäminen rinnakkain HER4 yhdessä ligandin, NRG4, korreloi paremmin selviytymisen [28]. Samoin HER4 liittyy paremmin yleistä ja taudista vapaan eloonjäämisen kohdunkaulan syövän [29]. Vuonna kurkunpään okasolusyöpä, HER4 katoaa myöhäisessä vaiheessa kasvaimissa [30], ja HER4 esiintyy pääasiassa matalan vaiheessa ja ei-metastasoituneen ksenograftikasvaimina haimasyövän [31].

Toisaalta, HER4 proteiinin ilmentyminen määritettynä immunohistokemiallisesti on liittynyt distaalinen etäpesäke ja alentunut eloonjäämisprosentti suun okasolusyöpää [32]. Tutkimuksessa, paksusuolisyövän, jossa proteiini ekspressiokuviota määritettiin myös immunohistokemiallisesti, varhaisvaiheen potilailla oli pienempi osuus HER4 yli-ilmentymisen kuin myöhäisvaiheen potilaiden [33]. Vuonna pahanlaatuisten keskushermostoon, HER4 myös hallussaan kasvain edistävää roolia [34], [35].

Ei tiedetä paljoakaan roolista HER4 mahasyövän. Ei HER4 mRNA: n ekspressio havaittiin kahdessa mahasyövän solulinjat [36]. HER4 proteiinin ilmentyminen havaittuna immunohistokemiallisesti on todettu korreloivan alkuvaiheen, alempi laatu, ja puuttuminen imusolmukemetastaaseja mahasyövän [25]. Tämä on erittäin hyvä kanssa toisessa tutkimuksessa, joka tutkittiin geeniekspressioprofiilien pitkäaikaisten eloonjääneitä metastasoituneen mahalaukun syövän kemoterapiaa, jossa kirjoittajat osoitti mahdollista roolia HER4 säätelyyn ylöspäin näillä potilailla [37]. Yhdessä nykyisen tuloksia, nämä tiedot osoittavat lisäksi, että HER4 signalointi on suojaava tehtävä vastaan ​​syövän syntymistä mahalaukun alueella. Eräässä tutkimuksessa todettiin HER4 geeni usein monistaa mahasyövässä [38]. Kuitenkin tulokset meidän tutkimukset osoittavat, että tämä ei kääntää HER4 ilmentymisen taso sitten löysimme downregulation HER4 mRNA ja proteiinin ilmentyminen sijaan säätelyyn ylöspäin.

Vaikka emme löytäneet ilmaus EGFR säänneltävä, signalointi potentiaali tämän reseptorin kautta kasvaa säätely kaikkien ligandien. Tämä sisältää ligandit jaetaan HER4: HB-EGF, beetaselluliinilla, ja epiregulin. Lisäksi autokriinisten EGFR aktivointia, säätelyä näiden ligandien mahdollisesti johtaa lisääntyneeseen aktiivisuuteen HER4. Aktivointi EGFR reitti on todellakin tapa solujen yhä karsinogeenisia. Kun kuitenkin otetaan huomioon HER4 olevan anti-karsinogeenisia toimintoja, samanaikaista aktivointia tämän reseptorin pysäyttäisi proliferatiivinen etuna EGFR aktivoinnin. Voitaisiin otaksua, että tämä mahdollinen aktivoituminen HER4 vältetään samanaikainen downregulation reseptorin ja sen ligandin NRG4.

Potilailla, joilla on virtsarakon syöpä, yhdistetyn HER4 /NRG4 signalointi yksikkö voi olla kasvua estävän, ja koekspressoimalla HER4 yhdessä NRG4 korreloi paremmin selviytymisen jos kaksi proteiinit toimivat yhdessä kuin erikseen [28].

Olemme myös suorittaa analyysi vertailla HER4 ilmaus potilaan selviytymistä. Teimme tarkkailla suuntauksena korkea HER4 ilmaisun ollessa korreloi paremmin selviytymisen (tuloksia ei esitetä), mutta koska rajoitus potilaiden määrä tutkimuksessa mukana, tämä tulos ei todettu olevan merkittävä ja lisätutkimuksia on selvittämiseksi jos korrelaatio HER4 ilmaisun ja selviytymistä löytyy mahasyövässä. Korrelaatio ilmentymisen tason EGF-reseptorien läsnäolo imusolmukemetastaaseja ja kasvaimen invasiivisuus osoitti vain HER2 korreloivan käänteisesti näiden muuttujien kun taas mitään korrelaatiota ei löydetty jäljellä EGF-perheen (tuloksia ei esitetty).

Yhteenvetona tuloksemme ehdottavat uutta roolia HER4 mahasyövän. Mielenkiintoista, löysimme sekä HER4 ja sen ligandi NRG4 on vaimentua syöpäkudoksessa. Tähän liittyy lisääntynyt signalointi potentiaalia EGFR läpi säätelyä kaiken sen ligandien ja säätelyyn ylöspäin HER2.