Krooninen sairaus

tiivistelmä

Apurinic /apyrimidinic endonukleaasi 1 (APE1), joka on kaksi toimintoa molempien DNA: n korjaukseen ja redox aktiivisuus, on raportoitu olevan erittäin ilmaistaan ​​ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC), ja tämä näyttää olevan liittyvä ominaisuus kemoterapian resistenssin. Tässä tutkimuksessa tunnistimme seerumin APE1 autovasta (APE1-AABS) NSCLC potilaiden ja terveiden verrokkien immunoblottauksella ja tutki ilmentymistä APE1-aABS epäsuoralla ELISA seerumista 292 NSCLC potilaiden ja 300 tervettä verrokkia. Lisäksi seerumin APE1-AABS tason korjauksilla 91 potilasta seurattiin ennen ja jälkeen kemoterapiaa. Tuloksemme osoittivat, että seerumin APE1-aABS voidaan havaita sekä NSCLC potilaiden ja terveiden verrokkien. Seerumin APE1-AABS olivat merkittävästi korkeammat kuin terveiden verrokkien ja läheistä sukua APE1 antigeenin tasot sekä kasvain kudosten ja ääreisverenkierron. Lisäksi muutos seerumin APE1-aABS NSCLC liittyy läheisesti vastaus kemoterapiaa. Nämä tulokset viittaavat siihen, että APE1-AABS on mahdollinen tuumorimarkkeri ja ennustaja terapeuttista tehoa NSCLC.

Citation: Dai N, Cao X-J, Li M-X, Qing Y, Liao L, Lu X-F, et ai. (2013) Serum APE1 Autovasta-aineet A Novel Mahdolliset tuumorimarkkeri ja Predictor kemoterapeuttisten Tehoa ei-pienisoluinen keuhkosyöpä. PLoS ONE 8 (3): e58001. doi: 10,1371 /journal.pone.0058001

Editor: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japani

vastaanotettu 6 marraskuuta, 2012 Hyväksytty: 29 tammikuu 2013; Julkaistu 5 maaliskuuta 2013

Copyright: © 2013 Dai et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään.

Rahoitus: Tämä työ tukivat National Natural Science Foundation of China (nro 30872975 ja nro 81001000). Rahoittajat ollut mitään roolia tutkimuksen suunnittelu, tiedonkeruu ja analyysi, päätös julkaista tai valmistamista käsikirjoituksen.

Kilpailevat edut: Kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

sen lisääntymisen ja kuolleisuuden, keuhkosyöpä on tullut suurin syy syöpäkuolemista ja haastava kliininen ongelma maailmanlaajuisesti [1], [2]. Ei-pienisoluinen keuhkosyöpä (NSCLC) on tärkein keuhkosyövän, joka on usein diagnosoitu edennyt pitkälle, jotta potilaat ei juurikaan ole mahdollisuuksia tehokkaan ja parantava hoito, ja tämä näkyy 5-vuoden eloonjäämisluvut 15 % [3].

Screening varhaisen NSCLC biomarkkereita, kehittäminen terapeuttisen tehon ennustavia, ja uudet lääkkeet ovat elintärkeitä tekijöitä parantaa sekä potilaiden ennusteet ja selviytymisen [4], [5]. Kuitenkin esillä biomarkkereita ja ennustavat NSCLC puuttuu yhä riittävä herkkyys ja [6]. Karsinoembryonisen antigeeni on yksi laajimmin tutkittu tuumorimarkkereina NSCLC, joiden kokonaispituus herkkyys vain noin 40% [7]. Joitakin uusia seerumimarkkerin ehdokkaita kuten endoteelikasvutekijä, kantasolutekijän, angiogeenisen sytokiineja, ja hepatosyyttikasvutekijää /Hajontatekijän voi olla potentiaalisesti tärkeä, mutta useimmat niistä ei ole osoitettu olevan riippumaton kliininen ennustetekijöiden indikaattorit [8]. Siksi enemmän tutkimuksia edellytetään löytää uusien biomarkkereiden avustamaan seulonnan NSCLC, mikä parantaa merkittävästi hoitotulokseen tämän pahanlaatuisen sairauden [9].

Kiertävä vasta-aineita kasvaimeen liittyviä antigeenejä (TAA) ovat luokan uusien seerumin biomarkkereita osoittaa erittäin kiinnostavia ominaisuuksia, erityisesti varhaisen diagnoosin syöpiin. Autovasta-aineita on läsnä seerumissa potilailla, joilla on varhaisessa vaiheessa, kun kasvaimia ei voida kliinisesti havaittu, jopa ennen TAA voidaan havaita [10], [11]. Pysyvyys ja vakaus seerumin autovasta ovat ensisijainen etuja muihin nykyisin käytössä seerumin biomarkkerit [12]. Ne osoittavat kestävämpiä (t

1/2 välillä 7 ja 30 päivää) seerumin verrattuna ita, ovat erittäin vakaita veressä, ja eivät kuulu proteolyysin kuten muita polypeptidejä [13], [14]. Lisäksi, kuten biokemiallisesti tunnettu molekyylejä, vasta-aineita voidaan havaita monia saatavilla olevia reagensseja ja tekniikoita sekä yksinkertaisesti ja edullisesti. Viime vuosina yhä artikkeleita ovat osoittaneet, että seuranta henkilöiden lisääntynyt syöpäriski läsnäolo seerumin autovasta voi sallia varhainen havaitseminen ja /tai prognoosi eri syövissä, mukaan lukien NSCLC [15] – [19]. Autovasta-aineita p53, NY-ESO-1, surviviini ja HÄKIN on osoitettu olevan diagnostinen biomarkkereita keuhkosyöpäpotilaita [20] – [22].

Apurinic /apyrimidinic endonukleaasi 1 (APE1), joka on dual-toiminto sekä DNA: n korjaukseen ja vähentäminen-hapetus (redox) aktiivisuus, on merkittävä AP endonukleaasi pohjan Leikkauskorjauksessa kautta. Sillä on tärkeä rooli etenemistä NSCLC, sekä ylläpitää genomin vakautta [23]. Kohonnut ja ektooppinen ilmentyminen APE1 kasvainkudoksissa liittyy läheisesti huonoon ennusteeseen ja kemo- ja radio-resistenssi NSCLC [24] – [26]. Äskettäin Katsumata ym ensimmäinen tunnistettu APE1 autovasta (APE1-AABS) seerumissa SLE potilaita [27], mutta meillä on vähän tietoa APE1-aABS in NSCLC. Oletamme, että poikkeuksellisen runsasta tai kohdunulkoinen APE1 proteiinin kasvainkudoksista voivat tehdä seerumi ja että APE1-aABS voidaan havaita ääreisverenkierron näiden NSCLC potilaiden.

Tässä tutkimuksessa havaitsimme APE1-AABS käyttämällä molempia immunoblottaus ja ELISA-määrityksessä, niin tutki korrelaatiota APE1-aABS, seerumi APE1 antigeenin ja ilmentymistä APE1 proteiinin tuumorikudoksissa. Lisäksi arvioimme APE1-AABS diagnoosiarvo ja korrelaatio terapeuttista tehoa pienisoluista keuhkosyöpää. Tietääksemme tämä on ensimmäinen raportti tunnistaa seerumin APE1-AABS keuhkosyövässä.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat

Tutkimus hyväksyi eettinen ja tutkimuskomitea n Daping lääketieteellisen tiedekunnan kolmas Military Medical University, Kiina ja kirjallinen suostumus saatiin kaikilta potilailta ja terveillä verrokeilla. Seeruminäytteet saatiin 292 pienisoluista keuhkosyöpää ja 300 tervettä verrokkia tammikuusta 2007 kesäkuuhun 2008. demografisia ominaisuuksia ja kliiniset ominaisuudet tutkittiin ryhmien on kuvattu taulukossa 1. Yhdeksänkymmentä potilasta, jotka saivat kaksi sykliä platinaa sisältävä hoito seurattiin ennen ja kemoterapian jälkeen. Histopatologisen arviointi toteutettiin erikseen kaksi patologien, ja sitten yksimielisyys tehtiin ristiriitainen arviointeihin. Lavastus järjestelmä toteutettiin mukaan 2003 AJCC luokitusta. Terapeuttinen tehokkuus määriteltiin Response arviointiperusteet kiinteitä kasvaimia, jotka luokitella vastaus neljään ryhmään: täydellinen hoitovaste (CR), osittainen vaste (PR), vakaa tauti (SD) ja etenevä sairaus (PD). Tietojen analysointiin, CR ja PR yhdistettiin vasteenmuodostajina jotka olivat herkkiä kemoterapiaa, kun SD- ja PD ryhmiteltiin ei-vastetta. Potilaat suljettiin pois, jos heillä oli immunologisia sairauksia, viittaavien oireiden tai hiljattain ( 2 kuukautta) infektio, viimeaikainen suuri trauma, leikkaus, tai hoito immunosuppressiivisilla aineilla.

Serum Collection

Perifeerisen veren näytteitä saatiin terveiden verrokkien ja potilaan diagnoosin jälkeen, mutta ennen mitään toimenpiteitä. Sillä 91 NSCLC hoidetuista potilaista kahden syklin platinaa sisälsi kemoterapiaa, seeruminäytteet saatiin ennen kemoterapiaa ja yhden kuukauden kemoterapian jälkeen. Kokoverinäytteet otettiin nopeasti sentrifugoitiin 3000 rpm: llä 15 minuutin ajan ja supernatantti varastoitiin -80 ° C: ssa käyttöön asti.

Cell Culture

Ihmisen keuhkon adenokarsinooma (A549) hankittiin American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) ja niitä viljeltiin RPMI 1640: ssä (HyClone, Logan, UT, USA), johon oli lisätty 10% naudan sikiön seerumia, 100 yksikköä /ml penisilliiniä ja 100 ug /ml streptomysiiniä. Soluja kasvatettiin 5% CO 2 37 ° C: ssa.

Pistesiirto ja Western Blot analyysit

täyspitkä APE1 fuusioproteiini [kanssa heksahistidiiniliite- (His) tag, rakennettu ja puhdistetaan laboratoriossamme] oli siroteltu päälle NC kalvo. Membraani blokattiin 2 tunnin ajan 37 ° C: ssa estopuskurilla (5% BSA TBST: ssä). Sitten membraania inkuboitiin 4 ° C: ssa yön seerumin kanssa potilaiden ja terveiden verrokkien laimennettiin 1:500 estopuskurissa. Pesun jälkeen TBST: llä, kaivoa inkuboitiin 1 h 37 ° C: HRP-leimattua vuohen anti-ihmis-IgG (1:10000 laimennus, Sigma, USA).

ilmaisuja seerumin APE1-Abbs oli analysoitiin Western blot analyysit [27]. Proteiini uutetaan A549-soluja ja APE1-His-fuusioproteiinin erotettiin 10% SDS-PAGE: lla ja siirrettiin sitten NC kalvo. Membraani blokattiin 2 tunnin ajan 37 ° C: ssa estopuskurilla. Sitten membraania inkuboitiin 4 ° C: ssa yön monoklonaalisella anti-ihmisen APE1-vasta-ainetta (1:5000 laimennos) ja seerumin keuhkosyöpään potilaiden ja terveiden kontrollien (1:500 laimennus). Kaivoa inkuboitiin 1 h 37 ° C: HRP-leimattua vuohen anti-hiiri-IgG (1:10000 laimennos) ja HRP-leimattua vuohen anti-ihmis-IgG (1:10000 laimennus).

entsyymejä immunologinen määritys (ELISA) B

Epäsuora ELISA käytettiin seerumin APE1-aABS ja suoritetaan seuraavasti: (1) Mikrotiitterilevyt (450~500 ng /cm

2, 8 hyvin × 12 nauhat , Costar Biosciences Inc., USA) päällystettiin 100 ul: APE1-His-fuusioproteiinin laimennettiin päällystyspuskuriin (0,1 mol /l karbonaattipuskurissa, pH 9,6) nopeudella 1,0 ug /ml ja inkuboitiin 4 ° C: ssa yön yli; (2) Levyt pestiin kolme kertaa käyttämällä pesupuskuria (0,05% PBST), 300 ul /kaivo, sitten epäspesifinen sivustoja kuopat blokattiin 200 ul: estopuskuria (5% BSA PBS: ssa) inkuboitiin 2 h 37 ° C; (3) Kolmen pesun jälkeen 100 ul /kuoppa seerumia, jotka oli laimennettu 1:300 inkuboitiin 1 tunnin ajan 37 ° C: ssa, PBS: ää käytettiin kalibrointiin valvonta; (4) sitoutumattoman yhdisteet pestiin pois, 100 pl /kuoppa HRP-leimattua vuohen anti-ihmis-IgG (työtä pitoisuus suositella 1:50000 laimennus) inkuboitiin 45 min 37 ° C: ssa; (5) Kun oli pesty kuusi kertaa, 100 ul /kuoppa TMB (Pierce, USA) substraatti liuosta inkuboitiin 10 min 37 ° C: ssa; (6) Entsymaattinen reaktio pysäytettiin 2 mol /l H

2SO

4 (50 ul /kuoppa) ja sen jälkeen optinen tiheys (OD) mitattiin mikrolevyn spektrofotometrillä viite aallonpituudella (450 nm). Kaikki näytteet testattiin kahdesti kahden erillisen levyt.

Parannettu kerrostamalla ELISA käytettiin seerumin APE1 antigeenin ja suoritetaan seuraavasti: (1) Mikrotiitterilevyt päällystettiin 100 ul: lla hiiren anti-humaani APE1 monoklonaalinen vasta-aine ( 1:40000 laimennos) inkuboitiin 4 ° C: ssa yön yli; (2) kuopat blokattiin 2 tunnin ajan 37 ° C: ssa; (3) 100 ul /kuoppa seerumia näytteitä inkuboitiin 1 h 37 ° C: ssa, PBS: ää käytettiin kalibrointiin valvonta; (4) 100 ui kanin anti-humaani APE1 polyklonaalista vasta-ainetta (1:5000 laimennus) inkuboitiin 1 tunnin ajan 37 ° C: ssa; (5) 100 ul /kuoppa HRP-leimattua vuohen anti-kani-IgG: tä (1:5000 laimennos) inkuboitiin 45 min 37 ° C: ssa; (6) Kun oli pesty kuusi kertaa, 100 ul /kuoppa TMB-substraattia liuosta inkuboitiin 10 min 37 ° C: ssa ja pysäytettiin 2 mol /LH

2SO

4, optinen tiheys (OD) mitattiin mikrolevyn spektrofotometrisesti viite aallonpituudella (450 nm). Kaikki näytteet testattiin kahdesti kahdessa eri levyillä.

APE1 immunohistokemia ja Scoring

ilmentymistä APE1 proteiinin NSCLC potilaat analysoitiin immunohistokemiallisesti. Dioja leikattiin 4 um: n leikkeiksi, ja inkuboitiin hiiren anti-ihmis-APE1 monoklonaalinen vasta-aine (1:2000 laimennus). Kukin näyte n histologisen Diagnoosi vahvistettiin patologi kuten aiemmin tehdyissä APE1 [26]. Tekee prosenttiosuus solujen värjäytymisen ja värjäyksen voimakkuuden kuin aiemmissa tutkimuksissa [28], [29], kudokset luokiteltiin neljään luokkaan: 0, 1, 2 ja 3 vastaavat negatiivinen, heikko, kohtalainen ja vahva ilme. Tilanne 0 ja pisteet 1 pidettiin heikkoa ilmentymistä, kun taas pisteet 2 ja pisteet 3 pidettiin korkealla ilme.

TILASTOANALYYSI

Tiedot ilmaistiin mediaani tai keskiarvo ± keskihajonta (SD) . Associations välillä kliinisiä piirteitä ja APE1 autovasta antigeeni arvioitiin riippumattomat

t

-testi, chi-neliö testi ja yksisuuntainen varianssianalyysi. Yhdistyksen arvioitiin Receiver operating ominaisuus (ROC) käyrä käytettiin arvioimaan herkkyys ja spesifisyys. Korrelaatio lujuus arvioitiin Spearmanin korrelaatiota testin. Associations välisiä APE1-AABS edeltävien ja jälkeisten kemoterapian analysoitiin pariksi

t

-testi. Kaikissa laskelmissa,

p

0,05 pidettiin tilastollisesti merkitsevä. Kaikki tilastolliset menettelyt suoritettiin käyttäen GraphPad Prism-ohjelmiston, versio 5.0 ja SPSS-ohjelmiston, versio 13.0 for Windows.

Tulokset

tunnistaminen Seerumin APE1-AABS myös terveiden ja NSCLC Potilaat

käyttäminen seerumi näytteitä täpläblottauksessa ja Länsi pultti analyysit, huomasimme, että molemmissa NSCLC potilaiden ja terveiden kontrollien, autovasta-aineita seerumista tunnustettu puhdistettua APE1-His-fuusioproteiinin ja APE1 proteiinin A549 kokosolu liuottava (Fig. 1A ja 1B ). Lisäksi immunoreaktiivisia piste ja kaistan signaaleja NSCLC potilaat olivat vahvempia kuin terveillä verrokeilla. Nämä tulokset viittaavat siihen, että APE1-AABS voidaan havaita seerumissa sekä pienisoluista keuhkosyöpää ja terveillä verrokeilla.

A, edustavat tulokset havaitsemisen seerumista APE1-AABS dot blot -analyysillä. Kaistat väliltä 1-5: seerumissa terveillä henkilöillä. Kaistat 6~10: seerumin NSCLC potilaiden. B, Seerumin APE1-AABS terveiden ja NSCLC potilaiden havaittiin Western blot-analyysi. Kaista M-proteiinin molekyylipainon markkerit; APE1, APE1 fuusioproteiinina His; A549, solun kokonaisproteiinista uutettu A549-soluja; Anti-His, APE1 fuusioproteiini havaitaan Hänen vasta-aineella.

jakelua APE1-aABS in Serum of Healthy Ohjaimet ja NSCLC Potilaat

Mukaan väestörakenteeseen ja kliiniset ominaisuudet NSCLC potilaiden ja terveiden verrokkien (kuvattu taulukossa 1), ei ollut tilastollista eroa jakelu ikä, sukupuoli ja tupakointi näiden kahden ryhmän välillä. Epäsuora ELISA-menetelmällä on rakennettu (kuvattu kuviossa. S1) ja käytetään havaitsemaan esiintyvyys seerumin autovasta-aineiden vastaan ​​APE1. Niistä 292 NSCLC potilaat, keskiarvo SD on APE1-aABS pitoisuus oli 0,79 ± 0,40 (OD

450), joka oli huomattavasti korkeampi kuin 0,47 ± 0,22 (OD

450) myös terveiden (

p

= 0,000,

t

-testi) (Fig. 2). Tasot APE1-aABS osoitti normaalijakaumaa.

Niistä 292 pienisoluista keuhkosyöpää, keskiarvo SD on APE1-aABS pitoisuus oli 0,79 ± 0,40 (OD

450), joka oli huomattavasti korkeampi kuin 0,47 ± 0,22 (OD

450) terveillä vapaaehtoisilla (

p

= 0,000,

t

-testi).

Tutkimme myös suhdetta APE1- aABS ja kliinisiä tekijöitä. Niistä 300 tervettä verrokkia, keskiarvo SD on APE1-aABS pitoisuus terveiden tupakoitsijoiden oli 0,47 ± 0,01 (OD

450), joka ei ollut merkitsevää eroa kanssa tupakoimattomia terveiden valvontaa (0,48 ± 0,003, OD

450) (

p

= 0,679,

t

-testi). Nämä tulokset viittaavat siihen, että seerumin APE1-AABS tasoa ei ilmeisesti vastata tupakoinnista. Lisäksi tulokset osoittivat, että seerumin APE1-AABS NSCLC potilaiden eivät korreloineet kliinisten parametrien, kuten sukupuoli, eri TNM vaiheissa ja histopatologisten tyypit, mukaan lukien tupakointi, kuten taulukosta 2 (

p

0,05) . Vaikka potilaat vaiheessa IV oli korkeampi APE1-AABS positiivisia (71/172, 41.28%) kuin vaiheessa III (27/81, 33,33%), ero ei ollut tilastollisesti merkitsevä ((

p

0,05,

chi-square

testin, on esitetty taulukossa S2), jotka olivat samat kuin edellä arviot [24], [31]. Mielenkiintoista, positiivinen korrelaatio seerumin APE1-AABS ja APE1 proteiinin ilmentymistä NSCLC kudoksissa todettiin, tilastollisesti merkitsevä (

p

0,001, Spearman) sekä korrelaatiokerroin 0,50, kuten taulukosta S1.

edustaja APE1 immuunivärjäystä NSCLC kudoksiin. APE1 värjäytyminen havaittiin kolme subsellulaariset sijainnit kasvainkudoksissa: tumaan, sytoplasmaan ja sekä tumassa ja sytoplasmassa. Näytteet sijoitettiin seuraavasti: 0, ei ole tai positiivinen solu prosenttiosuus on alle 25%; 1, positiivinen solu prosenttiosuus välillä 25% ja 50%; 2, positiivinen solu prosenttiosuus välillä 50% ja 75%; 3, positiivinen solu prosenttiosuus enemmän than75%.

Lisäksi olemme analysoineet seerumin APE1 antigeeni 137 NSCLC-potilailla, joiden testattu APE1-AABS käyttäen parantunut kerrostamalla ELISA-määritystä. Keskimääräinen SD seerumin APE1 antigeenin pitoisuus oli 0,73 ± 0,41 (OD

450), eikä ollut mitään merkittävää eroa seerumin APE1 antigeenin ja kliinisiä tekijöitä (

p

0,05, on esitetty taulukossa S3 ). Kuten odotettua, löysimme APE1 antigeeni ja APE1-aABS perifeerisessä veressä myös korreloi positiivisesti, jossa korrelaatiokerroin on 0,50 ja tilastollisesti merkitsevä (p 0,001, Spearman). Nämä havainnot ehdottivat, että ilmaukset APE1 autovasta läheisesti APE1 antigeenin tasoja.

Seerumin APE1-AABS välillä Pre- ja Post-kemoterapiaan liittyy terapeuttisen tehon

Määritä korrelaatio seerumin APE1-aABS tason ja terapeuttisen vasteen APE1-aABS tasojen ennen ja jälkeen kemoterapiaa analysoitiin 91 NSCLC potilaat, jotka saivat 2 sykliä platinapohjaisen hoito. Yleensä seerumin APE1-AABS tason huomattavasti jälkeen kemoterapian (

p

= 0,008) (Kuva. 5A). Niistä 91 potilasta, 11 (12,09%) potilaista saavutti PD, 38 (41.76%) potilaista saavutti SD, 30 (32.97%) potilaista saavutti PR, ja 12 (13.19%) potilaista saavutti CR. Pre-kemoterapian seerumin APE1-AABS potilaista, jotka olivat herkkiä kemoterapian oli merkittävästi pienempi kuin ei-vastetta (

p

= 0,000) (kuvio. 5B). Seerumin APE1-AABS reagoivien kemoterapian jälkeen lisääntyivät merkitsevästi (

p

= 0,000), kun taas APE1-AABS ei-vastetta ei muuttunut merkittävästi (

p

= 0,393), kuten on esitetty Kuva. 5 ja Taulukko 3.

Seerumin APE1-AABS taso oli paljon suurempi huono kemoterapia-vasteen ryhmässä kuin hyvän vastauksen ryhmän (

p

= 0,000). Oli merkittävä ero ryhmässä hyvän platinapohjaisen kemoterapia-vasteen ennen ja jälkeen kemoterapian (

p

0,001), kun taas ei ollut eroa ryhmässä on huono platinapohjaisen kemoterapia-vasteen ennen ja jälkeen kemoterapian (

p

= 0,393). * Ennen kemoterapiaa vastaan ​​kemoterapian jälkeen (

p

0,001).

p

arvo saatiin sen jälkeen, jossa verrataan APE1-AABS esi- ja post kemoterapiaa, määritettynä pariksi

t

-testissä.

keskustelu

Kokeelliset tutkimukset ovat osoittaneet, että autovasta-aineita ovat mahdollisia biomarkkereita varhaisen syövän diagnosointiin ja ennustavat hoitovasteen. Koska autovasta ovat osa normaalia immuunivasteen, ehdokas autovasta-aineet varhaisen syövän havaitsemiseen ja ennusteen syöpien tulisi vastaan ​​kasvaimia synnyttävän liittyviä antigeenejä. Tältä osin autovasta DNA korjaukseen proteiinit ovat lupaavia ehdokkaita. DNA korjaus proteiineja kriittisiä rooleja paitsi säilyttämään genomista vakauden lisäksi myös etenemistä keuhkosyövän [32], [33]. Sekä antigeenejä ja autovasta-aineiden antigeenejä osallistuvat DNA: n korjaukseen reittejä, kuten p53 [34] – [36] ja Ku [37] – [39], on korostettu tekijöitä kasvainten synnyssä ja biomarkkereina keuhkosyövän, rintasyövän, ja leukemia.

yhtenä DNA korjaus proteiineja, APE1 myös tärkeä rooli solujen selviytymisen, ja sen korkea ilmentyminen korreloi kasvaimen ominaisuuksista [40], [41]. Ottaa dual-toiminto sekä DNA: n korjaukseen ja redox toimintaa, se ei ole vastuussa vain korjaamisesta DNA AP sivustoja aiheuttaman oksidatiivisen ja alkyloimalla vaurioita säilyttämiseksi genomista eheys [42], mutta toimii myös redox säätelee DNA: ta sitovaa aktiivisuutta transkriptiotekijöiden kuten p53, NF-KB ja AP-1, joka toistaa ratkaiseva rooli tukahduttaminen syövän synnyn ja syövän etenemistä [43], [44]. Käyttämällä RT-PCR ja immunohistokemiallisella värjäyksellä, aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet, että muutokset APE1 ekspressiotasot ja /tai kuvioita NSCLC kudoksissa ja ääreisverenkierron tapahtui alkuvaiheessa kasvaimen ja oli läheistä sukua kasvainten kehittymiseen, edistystä, ja epäsuotuisa ennuste [31 ], [45], [46]. Nämä tutkimukset ehdotti, että APE1 antigeeni voi olla ehdokkaana syövän seulontaan, varhainen apu- diagnoosi, sekä varoituksia ja ennakoivan arvioinnin monissa syövän kudoksissa, kuten NSCLC [47], [48]. Tämä tutkimus validoi määritys havaitsemiseksi APE1 autovasta-aineiden sekä ääreisveren NSCLC potilaiden sekä terveiden verrokkien. Käyttämällä immunoblottauksen ja ELISA-analyysiä analyysi, osoitimme, että APE1 on erityinen autoimmuunisairaus antigeeni, joka stimuloi organismit tuottaa anti-APE1 vasta-aineita. Tilastollisesti merkitseviä välillä APE1-AABS ja NSCLC osoitetaan ensimmäistä kertaa.

mekanismia, miten APE1 proteiini laukaisee immuunivasteen ei ole vielä täysin selvä. Oletamme mahdollinen mekanismi on: suurin osa kasvain kudosten on APE1 yli-ilmentyminen ja translokaatio. Kasvain solujen jakaantumista on liian nopea. Jossa spontaanisti jatkuvasti apoptoosia ja nekroosia, suuri määrä solun proteiinien vapautuu vereen ja ei voida ajoissa pois. Immuunijärjestelmä tunnistaa solun proteiineja, jotka yli-ilmennetään karsinogeneesissä, sytoplasman translocalization, säätelemätön stabilointi, ja mutaatio tai muuttaa hajoamista ja sen jälkeen tuottaa autovasta-aineita vasteena läsnäoloa poikkeavien antigeenien [49]. Niinpä yritimme tarkistaa, onko eri APE1 ilmaisu sijainti voitaisiin edistää APE1-AABS sukupolvi, mutta tulos osoitti, että seerumin APE1-aABS välillä tumaan ilmaisun ryhmä ja kohdunulkoinen ilmaisun ryhmä ollut eroa (

p

= 0,610). Tämä tulos olisi tutkittava isompi otoskoko tulevaisuudessa. Ottaen huomioon, että kasvain taakka saattaa aiheuttaa korkeaa APE1-aABS, voimme myös tutkia APE1-aABS ennen ja post leikkausta meidän lisätutkimuksia todistaa tämän hypoteesin.

Tutkimuksessamme läsnäolo APE1- aABS osoitti mahdollisuutta käytettäväksi biomarkkeri NSCLC. Toteamisen APE1-aABS ilmaisu seerumissa 38.70% (113/292) NSCLC potilaiden oli tilastollisesti merkitsevästi suurempi kuin terveiden verrokkien (2,67%, 8/300) (

p

= 0,000). Arvo alla oleva alue ROC käyrän APE1-aABS oli 0,745, merkityksellisiä ennakoiva malli, koska ELISA havaitseminen, AUC-arvo 0.7~0.9 (70% ~90%) osoittaa kohtalainen assosiaatio ennusteen ja todellisen tuloksen [ ,,,0],50]. Lisäksi APE1-aABS osoittautunut korreloivan hyvin APE1 antigeenin tasot sekä NSCLC kudoksissa ja ääreisverenkierron esillä olevassa tutkimuksessa. Totesimme, että korrelaatio APE1 mRNA: n ekspression NSCLC kudoksissa, normaaleista kudoksista ja veri oli osoitettu olevan merkittävästi korreloi, joka ehdotti, että mittaus mRNA tasojen APE1 ääreisveren näytteistä voisi sen sijaan kudosnäytteiden määrittämiseksi ennustetekijöitä ja ennakoivan tekijöitä NSCLC [31]. Niinpä voisimme sallia testata yksinkertaisesti APE1-AABS ääreisveren näytteistä sijasta kudosnäytteiden määritellä diagnoosin ja ennustettaessa pienisoluista keuhkosyöpää.

Vaikka lupaavia, nämä uudet löydökset edellyttävät lisätutkimuksia ja huolellista tulkintaa päästäkseen ratkaiseva johtopäätöksiä, sillä eroa seerumin APE1-aABS tasojen NSCLC ja terveillä verrokeilla ei ollut kovin korkea. Vaihtelut APE1-aABS tutkimuksessa väestön ovat erittäin korkeat, vaikka seerumin APE1-AABS osoitti normaalijakaumaa. Syistä nämä ovat epäselviä, mutta se voi liittyä potilaan valinnan, erot epitoopin havaitseminen, tai rajoitukset array ja luonne autovasta vasteita syöpä. On syytä mainita, että APE1-AABS erilaisissa syövissä, mukaan lukien laajempi näytteitä keuhkosyöpään, on tarkastettava, jotta voidaan luoda kliinistä merkitystä anti-APE1 vasta-aineita. Lisätutkimukset onko APE1-AABS on diagnostinen teho tai voidaan hyödyllisesti yhdistää muihin kasvainmerkkiaineet menetelmä tullaan esittämään yhteenvetona seuraavassa tutkimuksessa.

Histologia on perus diagnostinen indikaattori pienisoluista keuhkosyöpää [51]. Koska fenotyyppi, se voi olla toistettavissa ja johdonmukaista verrattuna tietoa tupakoinnista, varsinkin tällaisessa retrospektiivinen tutkimus [23]. Mitsudomi

et ai

raportoitu, että p53-autovasta-aineet olivat merkittävästi yleisempiä potilailla, joilla on okasolusyöpä (27%) kuin ne, adenokarsinooma (15%) (

p

= 0,05), kun taas oli myös tilastollisesti merkitsevä ero ilmaantuvuus p53 autovasta välisen varhaisen taudin ryhmä (vaihe I ja II) (14%) ja kehittyneen taudin ryhmä (vaihe IIIa~IV, 30%) (

p = 0

0,0079) [52]. Villin1 ja CK18 autovasta-aineiden katsotaan olevan hyödyllisiä markkereita keuhkoadenokarsinooma [53]. Siksi tutkimme suhdetta tasojen APE1-aABS ja keuhkosyöpää histotype. Huomasimme, että seerumin APE1-AABS ei korreloinut histopatologisten tyypit (levyepiteelikarsinooma tai adenokarsinooma) ja eri TNM vaiheita tai kliinisten parametrien, kuten sukupuoli ja tupakoinnista. Nämä tiedot olivat edellisiin tutkimuksiin APE1 proteiinin keuhkosyövän kudoksissa [31], [54].

Korkea ilmentymistä APE1 proteiinin on raportoitu tiiviisti mukaan sisplatiiniin vastarintaa munasarjasyöpä [29], pää ja kaulan okasolusyöpä [31], ja NSCLC [26]. Tiedot tässä käsikirjoitus edelleen vahvistaa tätä suhdetta APE1 ja platina-pohjainen chemoresistance. Ennen kemoterapiaa, havaitsimme, että APE1-aABS tasot CR + PR ryhmiä, jotka olivat herkkiä platinapohjaisen hoidon olivat huomattavasti alhaisemmat kuin SD + PD ryhmiä, jotka olivat resistenttejä kemoterapiaa (

p

= 0,000). Lisäksi APE1-AABS tasot lisääntyivät merkitsevästi kemoterapian jälkeen, etenkin myönteisen vastauksen ryhmän (

p

= 0,000). Tähän mennessä mekanismi APE1 osallisena vastustuskyvyn platinapohjaiseen kemoterapiaan on edelleen epäselvä. Chattopadhyay

et ai

osoitti, että asetyloitu APE1 voitaisiin stabiilisti vuorovaikutuksessa Y-box-sitova proteiini 1 ja parantaa sen sitoutumisen Y-box-elementti johtaa aktivoinnin monilääkeresistenttisyyden geenin MDR1 [55]. Wu

et al

raportoitu että soluliman APE1 voisi parantaa keuhkojen kasvain pahanlaatuisuuteen kautta NF-KB: n aktivoitumisen, mikä viittaa siihen, että yhdistelmä sisplatiinin erityisten redox estäjät voivat parantaa kemoterapia-vastaus [56]. Oletamme, että platina reagenssit voivat tappaa keuhko- syöpäsoluja, aiheuttaa solunekroosiin, vapauta APE1 proteiinin kasvaintaakkaa solunulkoiseen ympäristöön ja verenkiertoa, ja sen jälkeen käynnistää immuunivasteen kehittämiseksi APE1-aABS. Teoriassa kemoterapia resistenttien potilaiden on vähemmän kasvainsolujen kuoleman hoidon jälkeen, vapauta vähemmän APE1 antigeenin vereen ja aiheuttaa pienempään nousu seerumin APE1-aABS. Päinvastoin, potilaat, jotka ovat herkkiä platinapohjaiseen kemoterapiaan tulisi sisältää enemmän APE1-AABS niiden ääreisverenkierron hoidon jälkeen. Lisäksi ennen kemoterapiaa, potilaat ovat APE1-AABS niiden ääreisverenkierron osoittaa, että enemmän APE1 proteiini on läsnä kasvain kudoksissa verrattuna normaaliin kudokseen, mikä johtaa vastustuskyvyn platina perustuvaa hoitoa. Tuloksemme juuri vahvistanut näitä kohtia. Siksi uskomme APE1-aABS voidaan käyttää ennustamaan kemoterapiaa vasteen NSCLC ennen ja jälkeen platinapohjaisen hoidon.

Yhteenvetona tunnistimme, että autovasta-aineita vastaan ​​APE1 proteiinia oli läsnä seerumissa niin keuhkosyövän potilaiden ja terveiden verrokkien.